肝星状细胞的抗原提呈特性

肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC),曾被称为Ito细胞、窦周细胞、脂细胞和贮脂细胞.由德国学者Kupffer在1876年首先用氯化金染色确认,称之为sternzellen,当时曾被误认为是一种肝内吞噬细胞.1951年,Ito用电镜观察将窦周HSC与窦内Kupffer细胞(肝吞噬细胞)予以清楚鉴别.1996年国际上将该细胞统一命名为HSC[1].     

肝星状细胞凋亡调控因素的研究进展

诱导HSC凋亡成为阻止肝纤维化进程的途径之一.生长因子、死亡受体配体(TRAIL、FAS)、细胞外基质(胶原、整合素)、信号转导蛋白和转录因子(NF-κB、IKKJNK)等多种因素参与调控HSC凋亡.     

Fasudil prevents liver fibrosis via activating natural killer cells and suppressing hepatic stellate cells

BACKGROUNDFasudil, as a Ras homology family member A (RhoA) kinase inhibitor, is used to improve brain microcirculation and promote nerve regeneration clinically. Increasing evidence shows that Rho-kinase inhibition could improve liver fibrosis.AIMTo evaluate the anti-fibrotic effects of Fasudil in a mouse model of liver fibrosis induced by thioacetamide (TAA). METHODSC57BL/6 mice were administered TAA once every 3 d for 12 times. At 1 wk after induction with TAA, Fasudil was intraperitoneally injected once a day for 3 wk, followed by hematoxylin and eosin staining, sirius red staining, western blotting, and quantitative polymerase chain reaction (qPCR), and immune cell activation was assayed by fluorescence-activated cell sorting. Furthermore, the effects of Fasudil on hepatic stellate cells and natural killer (NK) cells were assayed in vitro.RESULTSFirst, we found that TAA-induced liver injury was protected, and the positive area of sirius red staining and type I collagen deposition were significantly decreased by Fasudil treatment. Furthermore, western blot and qPCR assays showed that the levels of alpha smooth muscle actin (α-SMA), matrix metalloproteinase 2 (MMP-2), MMP-9, and transforming growth factor beta 1 (TGF-β1) were inhibited by Fasudil. Moreover, flow cytometry analysis revealed that NK cells were activated by Fasudil treatment in vivo and in vitro. Furthermore, Fasudil directly promoted the apoptosis and inhibited the proliferation of hepatic stellate cells by decreasing α-SMA and TGF-β1. CONCLUSIONFasudil inhibits liver fibrosis by activating NK cells and blocking hepatic stellate cell activation, thereby providing a feasible solution for the clinical treatment of liver fibrosis.     

肝星状细胞的去活化机制与抗肝纤维化治疗

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肝星状细胞活化相关信号通路在肝纤维化中的研究进展

肝纤维化是多种慢性肝损伤造成的细胞外基质(extracellular matrix, ECM)过度累积及降解不足的病理结果,如不加以干预会逐渐进展为肝硬化,甚至肝细胞癌。肝星状细胞(hepatic stellate cell, HSC)是ECM的主要来源,并且HSC在肝纤维化的起始、发展和消退过程中发挥关键作用。近年来,HSC活化涉及的信号传导通路成为研究热点,本文总结了HSC活化过程中的重要信号通路。     

MicroRNA-194 inactivates hepatic stellate cells and alleviates liver fibrosis by inhibiting AKT2

BACKGROUND Activation of hepatic stellate cells(HSCs)is a pivotal event in the onset and progression of liver fibrosis.Loss of microRNA-194(miR-194)has been reported in activated HSCs,but the actual role of miR-194 in liver fibrosis remains uncertain.AIM To explore the role and potential mechanism of miR-194-mediated regulation of liver fibrosis in vitro and in vivo.METHODS The expression of miR-194 was examined in human fibrotic liver tissues,activated HSCs,and a carbon tetrachloride(CCl4)mouse model by qPCR.The effects of AKT2 regulation by miR-194 on the activation and proliferation of HSCs were assessed in vitro.For in vivo experiments,we reintroduced miR-194 in mice using a miR-194 agomir to investigate the functions of miR-194 in liver fibrosis.RESULTS MiR-194 expression was notably lacking in activated HSCs from both humans and mice.Overexpression of miR-194(OV-miR-194)inhibitedα-smooth muscle actin(α-SMA)and type I collagen(Col I)expression and suppressed cell proliferation in HSCs by causing cell cycle arrest in G0/G1 phase.AKT2 was predicted to be a target of miR-194.Notably,the effects of miR-194 knockdown in HSCs were almost blocked by AKT2 deletion,indicating that miR-194 plays a role in HSCs via regulation of AKT2.Finally,miR-194 agomir treatment dramatically ameliorated liver fibrosis in CCl4-treated mice.CONCLUSION We revealed that miR-194 plays a protective role by inhibiting the activation and proliferation of HSCs via AKT2 suppression.Our results further propose miR-194 as a potential therapeutic target for liver fibrosis.     

特异性靶向肝星状细胞治疗肝纤维化研究进展

肝纤维化是慢性肝病进展过程必经的一种病理组织学改变,而肝星状细胞的激活和增生是肝纤维化发生进展的中心环节.目前研究通过基因调控治疗及受体介导药物靶向肝星状细胞,可提高肝纤维化治疗的特异性,为临床应用开辟了新方向.     

MicroRNAs在肝星状细胞活化过程中表达差异谱的研究

目的 应用MicroRNAs基因芯片技术筛选静止和活化肝星状细胞差异表达的MicroRNAs.方法 用链酶蛋白酶和胶原酶原位灌流,Nycodenz密度梯度离心分离大鼠HSCs,并进行体外培养,借助荧光倒置显微镜观察细胞形态,MicroRNAs基因芯片技术和荧光定量PCR检验MicroRNAs在HSCs静止期(2天)和活化期(14天)的表达.结果 HSCs的miRNAs表达谱中差异表达miRNAs共21个,其中上调12个,下调9个(P＜0.01);荧光定量RT-PCR证实其表达水平在静止和活化期肝星状细胞中均有差异(P＜0.01).结论 MicroRNAs基因芯片筛选差异表达miRNAs可望为肝纤维化的基因治疗提供全新的靶标和策略,为肝纤维化的发病机制和诊断治疗研究提供了新的思路.     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ与肝星状细胞在肝纤维化中的关系

肝纤维化是慢性肝损伤后常见的形态学表现，大多数是由慢性肝脏疾病发展而来。而肝损伤（肝实质炎症、坏死）激活肝星状细胞（HSC）引起大量细胞外基质沉积，是肝纤维化发生机制的中心环节。在正常肝脏中，HSC处于静息状态，细胞质中脂滴丰富，具有合成和分泌少量细胞外基质和胶原酶的能力。在肝损伤及各种慢性肝病时，HSC被激活转化为肌成纤维母样细胞，发生明显的形态和结构变化：细胞质中脂滴减少或消失，增殖迁移活性明显增强，分泌多种细胞因子和黏附分子，合成各种细胞外基质（ECM）的能力明显增强，抑制基质金属蛋白酶（MMPs）的合成和分泌，而上调基质金属蛋白酶抑制剂（TIMPs）的表达，同时发生多种基因表达的改变。     

肝纤维化进程中细胞外基质对肝星状细胞的作用及机制研究进展*

肝纤维化是一种肝内弥漫性细胞外基质（ECM）过度沉积的病理过程,且肝星状细胞（HSC）的激活是肝纤维化发生发展的中心环节。本文主要介绍了在肝纤维化进程中ECM各种成分比例、分子结构的改变及其ECM分子空间结构改变对HSC的激活、增殖和凋亡的作用和机制。     

脂联素对LX-2细胞COL-Ⅰ表达的调节及其机制

目的:研究全长脂联素真核表达质粒对体外培养人类肝星状细胞株(LX-2)细胞,Ⅰ型胶原(collagenⅠ,COL-Ⅰ)基因及蛋白的影响,探讨全长脂联素对细胞凋亡的作用及其调节COL-Ⅰ表达的作用机制.方法:实验分为对照组、空质粒组、全长脂联素真核表达质粒组,各组转染48h后Real-timePCR方法检测COL-ⅠmRNA的表达,ELISA法检测COL-Ⅰ蛋白水平的表达,MTT检测细胞存活率变化,Annexin V-FITC检测细胞凋亡率变化,Western blot检测细胞凋亡蛋白caspase-3的变化.结果:与空质粒组及对照组相比,全长脂联素真核表达质粒组COL-ⅠmRNA及蛋白的表达下降(179.00ng/L±16.83ng/Lvs532.30ng/L±27.52ng/L,570.00ng/L±16.12ng/L,均P<0.01),细胞存活率下降(65.70%±1.56%vs93.15%±1.90%,95.82%±2.52%,均P<0.01),凋亡率增加(14.70%±2.34%vs1.60%±0.23%,1.80%±0.15%,均P<0.01),caspase-3活性蛋白的表达增加(0.62±0.0...     

活化肝星状细胞的信号传导

肝纤维化是肝脏对各种急慢性肝损伤的疤痕修复反应的结果,是各种慢性肝病向肝硬化进展的共同环节,其最主要的特征是以胶原为主的细胞外基质(ECM)的生成与降解失衡,在肝脏中的过度沉积.活化的肝星状细胞(HSC)是肝纤维化发生时ECM的主要来源.HSC持续激活后增殖、迁移和表型转化,成为肌成纤维样细胞,是肝纤维化发生和发展的核心环节.活化HSC具有如下特点:(1)合成和分泌间质胶原等各种ECM;(2)自分泌产生致纤维化细胞因子如转化生长因子(TGF)β I;(3)释放胶原酶抑制物组织金属蛋白酶抑制剂(TIMP);(4)分泌趋化因子及其他炎症性细胞因子;(5)具有细胞收缩特性;(6)合成基质金属蛋白酶(MMP),使ECM降解异常;(7)对凋亡刺激的耐受性等.     

PPARγ对肝纤维化中肝星状细胞相关信号通路的影响

肝星状细胞（HSC）是肝纤维化发展的核心,其激活和增殖受到多种细胞因子网络调控。过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）是配体激活的核转录因子超家族成员。PPARγ是其一亚型,通过干扰调节HSC增殖与凋亡的信号途径参与肝纤维化的发生发展,可能为肝纤维化的治疗提供新方向。     

肝纤维化中肝星状细胞内主要信号转导通路

肝纤维化是肝脏对各种慢性刺激进行损伤修复反应时,以胶原为主的细胞外基质(ECM)在肝内大量沉积的病理过程.活化的肝星状细胞(HSC)是肝纤维化时产生ECM的主要细胞.细胞因子、氧化应激以及ECM的改变等外部因素通过一定的细胞内信号转导通路激活HSC.了解HSC活化的信号转导通路能从根本上为治疗肝纤维化提供更多更有效的思路和方法.目前研究较多的信号途径有TGF-β/Smad通路、MAPK通路、PI3K通路、JAK/STAT通路、NF-κB通路、过氧化物酶体增殖物激活受体通路等.本文简要综述了肝纤维化时HSC中主要的细胞内信号转导通路.     

Hedgehog通路与肝纤维化及肝星状细胞活化的关系研究

目的:探讨Hedgehog通路与肝纤维化及肝星状细胞(HSC)活化的关系.方法:清洁级SD雄性大鼠20只,均分为模型组和对照组.模型组采用腹腔注射四氯化碳(CCl4)和高脂饮食诱导肝纤维化,对照组予以正常饮食.第8周末取模型组存活大鼠与对照组中大鼠各5只处死,取左叶肝脏组织.HE、Masson染色观察两组肝组织病理变化;逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测纤维化大鼠肝脏中表达Hedgehog通路成员超音速Hedgehog信号通路(Shh)、膜受体patched(Ptc)、smoothened(Smo)和核转录因子Gli表达;实时荧光定量PCR法检测Hedgehog通路成员及HSC活化标志基因α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA在两组大鼠肝脏中的表达差异.体外培养HSC-T6细胞,RT-PCR检测HSC-T6细胞株中Hedgehog通路成员的表达;四甲基偶氮唑盐比色分析(MTT)法检测不同浓度环耙明(Cyclopamine,Cyc)对HSC-T6增殖的影响;分别用0、100/μmol/L的Cye干预HSC-T6,实时荧光定量PCR法检测Shh、Smo、Ptc、Gli-1及αSMA mRNA表达差异.结果:模型组大鼠肝脏有大量脂质及胶原沉积,且肝脏组织中均有Shh、Smo、Ptc、Gli-1表达.荧光定量PCR结果示模型组大鼠Shh、Smo、Gli-1及αSMA mRNA表达均较对照大鼠升高(20.45±3.31、12.78±0.53、10.88±2.41、4.91±2.59比1;P值均<0.05).Cyc在体外对HSC-T6有明显的抑制作用,且抑制作用呈剂量依赖性(F=636.81,P<0.01).荧光定量PCR结果示,用Cyc 100 μmol/L干预的HSC-T6中,Ptc、Smo、Gli-1和αSMA表达量分别为0.20±0.11、0.21±0.08、0.28±0.05和0.27±0.10,与Cyc 0μmol/L干预比较差异均有统计学意义(P值均<0.01).结论:肝纤维化过程中Hedgehog通路成员表达增高,抑制Hedgehog通路可抑制HSC活化,推测Hedgehog通路通过活化HSC促进肝纤维化的发生.     

肝星状细胞SSeCKS的表达及其在肝纤维化中的作用

目的 了解src抑制的蛋白激酶C底物(SSeCKS)在肝星状细胞(HSC)活化中的变化和作用.方法 (1)分离正常大鼠的HSC,以实时定量PCR检测其在体外培养过程中SSeCKS mRNA的表达变化,以蛋白质印迹法和细胞免疫荧光法检测HSC中SSeCKS蛋白的表达变化.(2)制作肝纤维化的大鼠模型,以免疫荧光法检测肝组织内SSeCKS和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达变化及定位.结果 初分离的HSC表达低水平的SSeCKS mRNA,经培养活化后SSeCKS的表达增强.在纤维化肝组织中,SSeCKS阳性细胞增多,阳性细胞多分布于肝窦周围,与α-SMA阳性细胞的分布一致.结论 在体外活化过程中HSC中SSeCKS表达增强.SSeCKS可能参与HSC在肝脏炎症和纤维化中的作用.     

甘草次酸靶向肝星状细胞治疗肝纤维化的体内研究

目的观察以6-磷酸甘露糖修饰的白蛋白(M6P26-HSA)作为特异性载体,将甘草次酸(GA) 靶向释放到肝星状细胞治疗肝纤维化的效果。方法用125I记由M6P26-HSA和GA在体外合成新的偶合物GA-HSA-M6P26,观察其在体内的器官分布情况,用双重免疫组织化学的方法观察星状细胞对GA- HSA-M6P26的选择性摄取;选用Sirius红染色观察GA-HSA-M6P26对肝纤维化时胶原沉积的影响,用定量聚合酶链反应检测GA-HSA-M6P26对Ⅰ型前胶原mRNA表达的影响。结果静脉注射后10min,GA-HSA- M6P26选择性地分布于肝脏,摄取高峰可达(5 5.093±5.404)%。双重免疫组织化学染色证实GA-HSA- M6P26主要被星状细胞选择性摄取,GA-HSA-M6P26治疗后肝脏胶原沉积明显减少,Ⅰ型前胶原和α-平滑肌肌动蛋白mRNA表达明显降低。结论GA-HSA-M6P26可以选择性地分布于肝脏星状细胞,有显著的抗肝纤维化作用。     

sp600125对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞增殖及bcl-2、c-myc蛋白表达的影响

肝星状细胞（HSC）的活化与增殖是肝纤维化发生的关键环节。乙醛刺激HSC活化与增殖，是导致酒精性肝纤维化发生的关键因素。研究表明，丝裂原活化蛋白激酶（MAPK），包括细胞外信号调节激酶（ERK）、JNK、P38是HSC活化与增殖导致肝纤维化发生的主要信号传导通路之一。乙醛刺激HSC中JNK磷酸化水平随sp600125（JNK信号传导通路特异性阻断剂）浓度增加而减少。本实验用sp600125处理乙醛刺激的HSC，观察sp600125对HSC增殖以及bcl-2、c-myc蛋白表达的影响，以探讨酒精性肝纤维化的发生机制。