LPS诱导HUVEC细胞凋亡最适浓度与时间选择

目的：探讨脂多糖诱导HUVEC细胞凋亡的最适浓度和时间。方法：体外培养人脐静脉血管内皮细胞株（HU—VEC）,将脂多糖（LPS）分为100、10、1、10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5μg·ml^-18个浓度,分别刺激0．5、1、2、6、12、24h后,采用CCK-8法观察细胞活力,荧光显微镜观察Hochest33342／PI双染后细胞形态。结果：同阴性对照组比较,药物浓度≥10^-2μg·ml^-1刺激24h均可引起细胞活力明显下降（P〈0．05）。100μg·ml^-1刺激1h,10μg·ml^-1与1μg·ml^-1刺激6h可引起HUVEC细胞活力下降,但12h与24hHUVEC细胞活力下降更明显（P〈O．05）,10^-1μg·ml^-1刺激12h可引起HUVEC细胞活力下降（P〈0．05）。Hochest33342／PI双染可见明显核浓缩和凋亡小体的产生,甚至出现死亡现象。结论：LPS刺激后引起HUVEC细胞活力下降呈时间与剂量依赖性,综合时间与剂量考虑,10^-1μg·ml^-1刺激12h或24h与10^-2μg·ml^-1刺激24h可致理想的HUVEC细胞凋亡模型。     

白藜芦醇对LPS诱导HUVEC细胞线粒体跨膜电位影响研究

目的:探讨白藜芦醇对LPS刺激HUVEC细胞活性及线粒体跨膜电位影响。方法:体外培养HUVEC,随机分为LPS组、阴性组、白藜芦醇160、80、40、20μg·l-1剂量组。其中,LPS组与白藜芦醇各组分别以1μg·ml-1 LPS刺激细胞24h后,采用CCK-8法检测细胞活力,荧光显微镜下观察罗丹明染色后细胞线粒体跨膜电位。结果:白藜芦醇各组均能提高LPS诱导的HUVEC细胞存活率,提高细胞线粒体跨膜电位,与模型组比较有统计学差异(P0.05)。结论:白藜芦醇能提高LPS刺激HUVEC细胞活性,提高细胞线粒体跨膜电位。     

中药饮片鹿血晶对巨噬细胞的免疫调节作用研究

目的:探讨鹿血晶(DBC)对小鼠巨噬细胞系RAW 264.7的免疫调节作用及其可能机制。方法:CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术及免疫荧光法检测巨噬细胞对大肠杆菌的吞噬能力;qRT-PCR法检测炎症因子iNOS、IL-1β、IL-6的mRNA表达水平;ELISA法检测培养基上清中iNOS、IL-1β、IL-6含量;Western blot法检测转染NF-κB信号通路蛋白表达。结果:鹿血晶能够提高LPS刺激下的RAW 264.7细胞活力(P0.05);鹿血晶能抑制LPS刺激下RAW 264.7细胞的炎症因子表达和释放(P0.05);鹿血晶能够抑制LPS刺激下RAW 264.7细胞内磷酸化IKK-α/β和磷酸化P65蛋白的表达;鹿血晶促进RAW 264.7细胞对大肠杆菌的吞噬能力(P0.05)。结论:鹿血晶能够增强巨噬细胞吞噬大肠杆菌的能力,并且在不影响细胞活力的同时作用于NF-κB信号通路,抑制炎症状态下巨噬细胞炎症因子的表达与释放。     

姜黄素对LPS刺激RAW264.7细胞PGE_2和IL-10影响

目的:观察姜黄素对脂多糖刺激小鼠RAW264.7细胞炎症因子的影响。方法:体外培养小鼠RAW264.7细胞,脂多糖刺激小鼠RAW264.7细胞分泌细胞因子,用不同浓度姜黄素进行干预,ELISA法检测培养上清液中抗炎细胞因子IL-10和炎症因子PGE2含量。结果:姜黄素可抑制脂多糖刺激小鼠RAW264.7细胞释放PGE2,促进抗炎因子IL-10表达,并呈一定量效关系,其影响细胞因子释放作用与细胞毒作用无关。结论:姜黄素呈浓度依赖性地抑制脂多糖刺激小鼠RAW264.7细胞释放PGE2,促进IL-10表达。     

基于 Caspase-1 细胞焦亡信号通路探讨栀子苷对脂多糖诱导 RAW264.7 细胞炎症的抑制作用

目的：探讨栀子苷对脂多糖（LPS）诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7 Caspase-1细胞焦亡经典信号通路的干预作用。方法：LPS诱导RAW264.7细胞构建炎症模型,以地塞米松为阳性对照,20、40、80μmol/L栀子苷干预细胞24 h。乳酸脱氢酶（LDH）细胞释放法检测细胞LDH释放;碘化丙啶（PI）荧光染色观察细胞存活情况;检测细胞上清中炎症因子IL-18、IL-1β、TNF-α和IL-6分泌水平;Western blot检测NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-18和IL-1β表达。结果：与正常对照组相比,模型组RAW264.7细胞中LDH释放量明显升高（P<0.01）,细胞形态学观察到有大量细胞被PI染色,细胞上清中IL-1β、IL-18、TNF-α和IL-6分泌水平显著升高（P<0.01）;NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-18和IL-1β蛋白表达显著升高（P<0.01）。与模型组相比,栀子苷各组和地塞米松组LDH释放减少（P<0.01）,有效抑制PI染色,细胞上清中炎症因子IL-1β、IL-18、TNF-α和IL-6...     

LPS和IL-13影响系膜细胞表达IL-12的研究

目的：探讨脂多糖（LPS）及IL-13对系膜细胞表达IL-12的影响作用。方法：用酶联免疫吸附（ELISA）法检测LPS对系膜细胞分泌IL-12的影响，实验分组：①LPS（20μg／ml）对系膜细胞刺激不同时间；②不同剂量LPS刺激系膜细胞24小时。用ELISA法和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法分别检测IL-13对系膜细胞IL-12蛋白和IL-12p40 mRNA表达的影响，分空白对照组，LPS（10μg／ml）刺激组及实验组（LPS 10μg／ml＋不同浓度的IL-13）。结果：未受LPS刺激的系膜细胞几乎不分泌IL-12，在一定的剂量范围内，LPS诱导系膜细胞显著表达IL-12，但随着LPS刺激时间及浓度的增加，IL-12的表达量反而减少。IL-13在1。100μg／ml浓度范围内呈剂量依赖性抑制LPS诱导的系膜细胞IL-12分泌及其mRNA表达（P〈0．01）。结论：LPS可诱导系膜细胞表达IL-12，但系膜细胞在表达IL-12时对LPS的长期及高浓度刺激产生耐受性。IL-13可能通过抑制LPS诱导系膜细胞分泌IL-12，作为抗炎性细胞因子在肾小球肾炎发病机制中发挥一定作用。 12；系膜细胞     

内皮高表达脂多糖相关因子1抑制巨噬细胞炎症反应

目的 本实验旨在观察内皮高表达脂多糖相关因子1(endothelial overexpressed lipopolysaccharide-associated factor1,EOLA1)对巨噬细胞炎症反应的影响及可能机制。方法 培养小鼠巨噬细胞,脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）刺激激活炎症信号通路,检测肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素6(IL-6)和EOLA1转录水平变化,采用化学阻断剂在不同位点阻断炎症反应信号通路,再检测TNF-α、IL-6和EOLA1转录变化。巨噬细胞过表达mEOLA1,RT-qPCR检测细胞M1、M2极化类型标志基因mRNA水平,以流式细胞术检测巨噬细胞表型改变,Western blot检测M1型巨噬细胞标记物iNOS表达。结果 LPS刺激后巨噬细胞释放炎症因子TNF-α、IL-6增加,而EOLA1表达下调;不同位点阻断炎症反应信号通路后炎症介质的表达明显受抑制,而EOLA1的表达上升;在巨噬细胞中高表达EOLA1,再行LPS刺激,检测到TNF-α、IL-6增加并不明显,流式细胞检测显示高表达EOLA1的巨噬细胞在LPS刺激后仍保持非...     

腺苷抑制脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

目的 探讨腺苷抑制脂多糖（LPS）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的凋亡。方法 将培养的HUVEC分成6组：对照组,二甲基亚砜（DMSO）组,LPS组,低、中和高剂量腺苷组,用荧光显微镜动态观察细胞形态结构,用ELISA检测上清液中TNF-α表达量,用流式细胞技术检测各组细胞凋亡。结果 LPS组细胞凋亡率显著升高,TNF-α的表达量也显著升高（p＜0.05）;不同剂量腺苷能显著抑制LPS诱导的TNF-α的表达,显著抑制细胞的凋亡率（p＜0.05）。结论 一定浓度的腺苷能抑制LPS 诱导的HUVEC释放炎症介质、抑制细胞发生凋亡。     

槲皮素对LPS诱导的中性粒细胞产生白介素6的影响

目的 研究离体培养的人中性粒细胞在被LPS激活的情况下，槲皮素对中性粒细胞产生IL-6的影响。方法 运用ELISA法检测槲皮素对LPS诱导的中性粒细胞分泌IL-6的影响；运用流式细胞术检测槲皮素对LPS活化的中性粒细胞内IL-6的蛋白水平的影响；运用逆转录PCR（RT-PCR）技术检测槲皮素对LPS活化的中性粒细胞表达IL-6 mRNA的影响。结果 在无刺激的情况下中性粒细胞不产生IL-6，LPS（1μg／mL）以时间依赖性的方式诱导中性粒细胞表达IL-6 mRNA，合成并分泌IL-6，并在16h达到高峰。然而，预先用槲皮素（40μmol／L）处理中性粒细胞30min后，LPS诱导的中性粒细胞表达IL-6 mRNA，合成并分泌IL-6则受到了抑制。结论IL-6是炎症早期重要的促炎症因子。因此，槲皮素抑制LPS诱导中性粒细胞产生IL-6，提示槲皮素可能通过对炎症因子负性调控而发挥其抗炎作用。     

PYNOD对LPS活化的BV2小胶质细胞炎症因子释放的影响

 目的:观察PYNOD对LPS活化的BV2小胶质细胞炎症因子释放的影响。方法: 将表达PYNOD的重组质粒pEGFP-C2-PYNOD瞬时转染BV2细胞后,加入LPS作用24 h,Griess 法检测一氧化氮（nitric oxide, NO）的释放,实时荧光定量PCR（real-time PCR）检测诱导型一氧化氮合酶（inducible NO synthase, iNOS）和白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）mRNA的表达,此外Western blotting和ELISA法检测iNOS和IL-1β的蛋白表达。结果: 转染PYNOD重组质粒能显著抑制LPS诱导的BV2小胶质细胞炎症因子NO的释放（P＜0.05）。Real-time PCR证实PYNOD可抑制iNOS和 IL-1β 的mRNA表达,差异有统计学意义（P＜0.05）。ELISA和Western blotting证实PYNOD可下调iNOS和 IL-1β 蛋白的表达（P＜0.05）。结论: PYNOD蛋白可以在转录水平和翻译水平显著抑制LPS刺激的BV2小胶质细胞活化产生的炎症反应。     

肾上腺素对内毒素致大鼠炎症性肝损害的保护作用

目的 探讨肾上腺素（Epi）对内毒素（脂多糖，LPS）致大鼠炎症性肝损害的保护作用及其作用机制。方法 50只SD大鼠随机分为5组（每组各10只）：对照组：静脉滴注生理盐水2．4mL·kg^-1·h^-1；LPS组：静脉注射LPS6mg·kg^-1后，静脉滴注生理盐水2．4mL·kg^-1·h^-1；低、中和高剂量Epi组：静脉注射LPS6mg·kg^-1后，分别静脉滴注Epi0．12、0．3和0．6μg·kg^-1·min^-1。在LPS注射前、注射后2和6h3个时点取血，检测血清ALT、AST、TNF-α、IL-1β和IL-10水平，并在6h时点观察肝脏的组织病理学改变。结果 LPS组注射LPS后2、6h血清AST和ALT水平较对照组显著升高。同时血清TNF-α、IL-1β和IL-10水平亦较对照组显著升高（P〈0．05）。病理检查结果示：LPS组肝窦扩张、充血，局灶性肝细胞坏死。高剂量Epi可显著降低血清AST和ALT水平，减轻肝脏病理损伤，并显著可降低TNF-α水平和升高IL-10水平（1）8LPS组，P均〈0．05），但对IL-1β水平无影响。中、低剂量Epi对LPS致炎症性肝损害无明显保护作用。结论 Epi可通过抗炎作用减轻LPS诱导的炎症性肝损害。     

三黄泻心汤对LPS诱导的RAW264.7细胞释放炎性细胞因子影响的研究

目的:观察三黄泻心汤对LPS刺激小鼠RAW264.7细胞释放炎性细胞因子的影响。方法:体外培养小鼠RAW264.7细胞,LPS刺激小鼠RAW264.7细胞分泌细胞因子,用不同浓度三黄泻心汤及三黄泻心汤有效组分进行干预,ELISA法检测细胞培养上清液中TNF-α含量。结果:三黄泻心汤及三黄泻心汤有效组分可抑制LPS刺激小鼠RAW264.7细胞释放TNF-α,并且其影响细胞因子释放作用与细胞毒作用无关。结论:三黄泻心汤及其有效组分B2、B3可抑制LPS刺激小鼠RAW264.7细胞释放TNF-α。     

促红细胞生成素对同型半胱氨酸导致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的观察促红细胞生成素（EPO）对同型半胱氨酸（Hcy）导致的血管内皮细胞损伤是否具有保护作用。方法采用不同浓度（1.25、2.5、5、10、20mmol/L）的Hcy处理人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,观察细胞的损伤情况,建立Hcy诱导的内皮细胞损伤模型,然后采用不同浓度（0.1、1、10、100U/ml）的EPO进行预处理,观察细胞的损伤情况。通过MTT法测定细胞存活率,ELISA法检测细胞上清IL-6含量,Hoechst33258染色检测细胞凋亡来评价细胞损伤情况。结果 Hcy对HUVEC有损伤作用,并且随浓度增加损伤作用更明显。EPO可增加细胞存活率,抑制Hcy诱导HUVECIL-6的产生,抑制细胞凋亡。结论 EPO对Hcy导致的内皮细胞损伤具有一定的保护作用。     

早期胰岛素泵注对脓毒症大鼠肝损害的影响

目的探讨早期胰岛素泵注对脂多糖（LPS）致大鼠脓毒症模型肝损害的保护作用。方法24只SD大鼠随机分为LPS＋生理盐水组、LPS＋胰岛素组和生理盐水对照组,各组均为8只。各组大鼠在实验前1d行右颈外静脉置管术。LPS＋生理盐水组腹腔注射LPS10mg·kg^-1,同时持续静脉泵注生理盐水1mL·h^-1;LPS＋胰岛素组腹腔注射LPS10mg·kg^-1,同时持续静脉泵注胰岛素生理盐水溶液1mL·h^-1（胰岛素用量为0．25U·kg^-1·h^-1）。生理盐水对照组腹腔注射生理盐水10mg·kg^-1,同时持续静脉泵注生理盐水1mL·h^-1。测定各组腹腔注射LPS或生理盐水前和注射后2、6、12、24h的血糖水平,检测各组腹腔注射LPS或生理盐水后2、6h的血清TNF-α、IL-6水平及24h的血清ALT和AST水平,并观察各组腹腔注射LPS或生理盐水后24h的肝脏组织病理学改变。结果LPS＋生理盐水组在腹腔注射LPS后各采样时间点,血糖水平较生理盐水对照组均显著升高（P〈0．05）。注射LPS或生理盐水后2和6h,LPS＋生理盐水组血清TNF-α和IL-6水平显著高于生理盐水对照组（P〈0．05）。注射LPS或生理盐水后24h,LPS＋生理盐水组血清ALT和AST水平均较生理盐水对照组显著升高（P〈0．05）。LPS＋胰岛素组注射LPS后各采样时间点血糖、TNF-α、IL-6、ALT及AST水平均显著低于LPS＋生理盐水组（P〈0．05）,LPS＋生理盐水组肝脏病理学检查示局灶性肝细胞坏死,炎性细胞浸润,小叶间静脉充血扩张;LPS＋胰岛素组肝脏病理学改变较LPS＋生理盐水组明显减轻。结论早期胰岛素静脉泵注可通过抗炎和降低应激性高血糖作用减轻LPS诱导的肝损害。     

Aβ25-35致PC12细胞凋亡和线粒体跨膜电位损伤关系研究

目的:探讨不同浓度Aβ25-35致PC12细胞凋亡和线粒体跨膜电位相关性。方法:体外培养大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞,Aβ25-35160、80、40、20、10、5、2.5μmol.L-17个浓度刺激PC-12细胞,CCK-8法观察细胞活力,Annexin-V/FITC双染后流式细胞仪检测细胞凋亡率,荧光显微镜观察hochest33342/PI双染后细胞形态,罗丹明染色后荧光显微镜检测细胞线粒体跨膜电位变化。结果:同正常组比较,Aβ25-35刺激PC-12细胞后,细胞活力逐渐下降,并呈时间和剂量依赖性,20μmol.L-1以上浓度Aβ25-35刺激12 h后PC-12细胞的细胞活力呈明显下降(P<0.05),凋亡率明显增加(P<0.05)。PC-12细胞有核浓缩和凋亡小体的产生,甚至出现死亡现象,线粒体跨膜电位下降。20μmol.L-1以下各浓度组对PC12细胞活力、细胞凋亡率、线粒体跨膜电位无明显影响(P>0.05)。结论:Aβ25-35刺激PC-12后致细胞凋亡与线粒体跨膜电位下降呈正相关,20μmol.L-1刺激12 h即可致理想的PC12细胞凋亡模型。     

白藜芦醇对β淀粉样蛋白诱导星形胶质细胞氧化损伤的保护作用

目的研究白藜芦醇对β淀粉样蛋白诱导星形胶质细胞氧化损伤的保护作用,从而探索其对中枢神经保护作用的可能机制。方法采用不同浓度的白藜芦醇预处理星形胶质细胞12h,继之用25μmol/L浓度的β淀粉样蛋白进行损伤,然后检测细胞存活率、乳酸脱氢酶（LDH）以及采用DHE探针测定荧光强度间接反映胞内活性氧（ROS）含量,以评价白藜芦醇对细胞氧化损伤的保护作用。结果受β淀粉样损伤的细胞存活率明显下降（P〈0.05）,而用10、100μmol/L白藜芦醇预处理则能提高该细胞的存活率（P〈0.05）,但1μmol/L白藜芦醇预处理的细胞存活率并无明显变化;荧光检测显示,蛋白损伤使得荧光强度增高（P〈0.05）,1μmol/L白藜芦醇处理组荧光强度大于阳性对照组,其余各组荧光强度均小于阳性对照组（P〈0.05）;蛋白损伤可导致细胞LDH漏出量增加（P〈0.05）,1μmol/L白藜芦醇使得LDH漏出增加（P〈0.05）,而10、100μmol/L白藜芦醇处理组,细胞LDH漏出量明显减少（P〈0.05）。结论星形胶质细胞受到β淀粉样蛋白损伤后,白藜芦醇能减少LDH的漏出及有效降低胞内ROS水平,从而显示对星形胶质细胞具有保护作用。     

Therapeutic Effects of Resveratrol in a Mouse Model of LPS and Cigarette Smoke-Induced COPD

This study was designed to examine whether resveratrol exerts the protective effects on LPS and cigarette smoke (LC)-induced COPD in a murine model. In lung histopathological studies, H&E, Masson’s trichrome, and AB-PAS staining were performed. The cytokines (IL-6, IL-17, TGF-β, and TNF-α) and inflammatory cells in BALF were determined. The Beclin1 level in the lungs of mouse was analyzed. Compared with the LC-induced mouse, the level of inflammatory cytokines (IL-17, IL-6, TNF-α, and TGF-β) of the BALF in the resveratrol?+?cigarette smoke-treated mouse had obviously decreased. Histological examination of the lung tissue revealed that the resveratrol treatment attenuated the fibrotic response and mucus hypersecretion. In addition, resveratrol inhibited the expression of the Beclin1 protein in mouse lungs. The presented findings collectively suggest that resveratrol has a therapeutic effect on mouse LC-induced COPD, and its mechanism of action might be related to reducing the production of the Beclin1 protein.     

甲基萘醌-4对少突胶质细胞缺氧性损伤的保护作用*

目的：探索甲基萘醌-4 （ MK-4）在少突胶质细胞缺氧环境中的作用。方法：建立少突胶质细胞缺氧模 型,并给予MK-4,CCK-8 检测细胞活性变化;二氢乙锭染色检测细胞活性氧（ ROS）释放情况;qRT-PCR 检测 炎症因子白介素-1β（ IL-1β）、白介素-6（ IL-6）、肿瘤坏死因子-α（ TNF-α）及生长停滞特异性蛋白6（ Gas6） mRNA表达变化。结果：MK-4可显著提高缺氧少突胶质细胞的活性,减少ROS的释放,下调IL-1β、IL-6、 TNF-α 等炎症因子的表达,促进Gas6 的表达。结论：MK-4对少突胶质细胞缺氧性损伤具有保护作用。