不同地区日本血吸虫生物特异性的比较研究

日本血吸虫分布在我国的台湾省和大陆,60年代以来经各学者的研究结果,认为台湾和大陆两地日本血吸虫肯定有地域株的区别,但大陆日本血吸虫是否再有地域株之分,尚不能肯定。鉴于中国幅员广大,各流行地区血吸虫有无种以下生物特异性差异,值得进一步研究。本文就不同水系分布和专区划分,选用四川的天全、肩山、西昌、德阳四地区血吸虫株     

龙江血居吸虫和日本血吸虫的RAPD分析

龙江血居吸虫 ( Sangunicola lungensis)和日本血吸虫 ( Schistosoma japonicum)依次为冷血动物和温血动物血吸虫的重要代表种类。分别对日本血吸虫与龙江血居吸虫成虫和尾蚴全基因组进行 RAPD标记研究 ,筛选出 1 4种随机引物对 4种材料扩增得到 1 50条多态片段 ,其中日本血吸虫成虫和尾蚴之间的同源性为0 .60 9;龙江血居吸虫成虫和尾蚴之间的同源性为 0 .61 7,两种血吸虫成虫之间的同源性为 0 .1 4 8,尾蚴之间为 0 .1 4 5。说明了冷血和温血动物血吸虫 ,它们具有相近的遗传背景 ,同时揭示了同一种血吸虫 ,其成虫和尾蚴阶段存在一定的多态性 ,反映出在虫体发育过程中 ,基因组的结构可能发生变化。根据 2 8S r RNA特定基因片段的 RAPD分析 ,筛选出对两种血吸虫不同发育阶段具有特异性的扩增引物 ,进一步说明同一种血吸虫在不同发育阶段 2 8S r RNA基因片段存在的差异。     

日本血吸虫（中国大陆株）表达基因的大规模随机测序体系的建立

目的：建立日本血吸虫(中国大陆株)表达基因的大规模随机测序体系。方法：应用EST方法,从Sj cDNA库中随机挑选出单个重组克隆进行PCR直接序列分析,通过互联网将获得的EST序列送入WHO血吸虫基因库进行同源性检索。筛选出血吸虫未知基因EST,并克隆其全长cDNA。结果：完成了140个Sj表达基因EST序列测定,获得了100个可用于分析的EST序列,并在Genbank登录。其中已知血吸虫编码基因或EST序列46个,未知基因54个。结论：成功地建立日本血吸虫(中国大陆抹)表达基因的大规模随机测序体系,为进一步开最日本血吸虫(中国大陆株)表达基因的研究奠定了基础。     

湖南省日本血吸虫线粒体cox1基因部分序列多态性的研究

目的研究湖南省日本血吸虫不同自然隔离群的线粒体细胞色素c氧化酶亚基1基因（coxl）部分序列（pcoxl）的变异，为阐明我国日本血吸虫的种群遗传结构奠定基础。方法采用聚合酶链反应（PCR）技术对湖南省岳阳君山、汨罗的日本血吸虫的pcoxl片段进行扩增、克隆及序列分析。结果获得480bp的pcoxl序列。经DNAstar软件分析，pcoxl序列有一定的种内差异（0～1．2％）。结论本研究为阐明我国日本血吸虫的种群遗传结构提供了数据。     

家蝇二氯苯醚菊酯抗性株分化的研究

本研究采用随机扩增多态DNA(RAPD)技术,探索了家蝇二氯苯醚菊酯抗性株(2000倍)在DNA分子水平上的分化。实验数据采用两种分析方法:1)用RAPDPLOT计算出个体间的遗传距离,进一步用PHYLIP软件包的NEIGHBOR程序进行UPGMA(非加权对组算术平均值聚类)聚类分析;2)经bootstrip方法随机取样100次,然后再进行UPGMA分析,在PHYLIP软件包的CONSENSE中形成合意树。两种分析方法结果极为类似,在聚类树中首先是抗性与非抗性个体分成两群,然后雌、雄个体分成两群,说明抗性株在DNA分子水平上已有明显的分化。OPD-02引物在全部抗性株个体中扩增出了非抗性株所没有的特异性同一片段(100bp左右),提示此片段有可能作为家蝇二氯苯醚菊酯抗性株的分子标记,但需进一步研究确定。     

日本血吸虫钙连蛋白(Canx)基因克隆与表达

<正>目的:钙连蛋白(Canx)在蛋白质合成中起重要作用,存在于内质网中需Ca2+的凝集素样分子伴侣蛋白,可与新合成的尚未折叠完全的蛋白质的寡糖链结合,防止蛋白质彼此聚集和泛素化,避免折叠不完全的蛋白质离开内质网;同时也可促进其它伴侣蛋白与这些蛋白质结合,使其折叠完全。无论是曼氏血吸虫还是日本血吸虫,仅有与Canx相似的钙结合蛋白的研究报道。本文报道与宿主相关的日本血吸虫Canx基因的克隆、表达,为研究其功能奠定基础。方法:提取日本血吸虫成虫总RNA,逆转录得到cDNA。设计引物用常规PCR法扩增出Canx编码基因,在设计引物时,切除了含21个氨基酸的信号肽,     

日本血吸虫卵壳蛋白基因的克隆及真核表达载体的构建

血吸虫卵壳蛋白基因是探讨血吸虫病免疫预防的重要靶标。本研究根据已发表的多个血吸虫卵壳蛋白基因的核苷酸序列,设计合成了特异引物,体外扩增和克隆了编码日本血吸虫中国大陆株卵壳蛋白基因SjESG的cDNA,测序结果表明与已发表的卵壳蛋白基因序列有较高同源性。为进一步研究该基因的功能,将其克隆入pcDNA3中,成功构建了真核表达载体,为SjESGDNA疫苗的研究打下了基础。     

三峡库区上、下游血吸虫病流行区钉螺线粒体cox1基因遗传变异研究

目的研究三峡库区上、下游血吸虫病流行区钉螺线粒体DNA细胞色素C氧化酶亚单位t（c毗1）基因的遗传变异。方法采集三峡库区上游四川、云南及下游安徽、湖北4省共7个地、市的钉螺样本,提取基因组DNA,PCR特异性扩增线粒体cox1基因并测序,用ClustalX（1．81）软件进行多序列比对,MEGA（4．0）软件Kimura2-parameter法计算遗传距离,邻接法（NJ）和最大简约法（MP）构建系统发生树。结果上游与下游不同地域株钉螺间cox1基因差异约为16％．下游地区的肋壳与光壳钉螺cox1基因差异约为3．7％,上游不同地域株钉螺碱基差异约为5．4％。遗传距离显示,上游四川与云南地域株的遗传距离为0．022～0．050,下游安徽与湖北地域株的遗传距离为0．014～0．027,而上游与下游各地区螺群间的遗传距离在0．127～0．138之间,明显大于上游或下游各地区螺群内的遗传距离。进化树结果表明,下游湖北的荆州、石首和安徽的芜湖、宁国钉螺形成一支系,上游四川的绵竹、新都钉螺同属一支系。但两种方法构建的进化树在云南大理钉螺的归属上存在差异,MP法提示大理钉螺从上游的分支中独立出来,单独形成一类。结论上游与下游不同地域株钉螺cox1基因遗传差异较显著,下游肋壳和光壳钉螺种群内遗传变异较小,而上游光壳钉螺种群内遗传变异较大。     

微卫星DNA标记技术及其在蚊虫生物学研究中的应用

遗传标记是指用来区分不同的个体或群体,能够稳定遗传的物质或性状,是研究生物遗传学、发育生物学及分类学的重要工具。遗传标记经历了不同的发展阶段,2 0世纪70年代以来,随着限制性内切酶的发现和DNA重组技术的创立,遗传标记的研究重点转向遗传信息的载体———DNA分子,出现了多种分子遗传标记。常用的DNA分子标记技术有:DNA限制性酶切长度多态性(RFLP) ;数量可变的串联重复序列(VNTR) (主要包括微卫星和小卫星)分析;DNA序列分析以及基于PCR的随机扩增DNA多态性(RAPD)、扩增片段长度多态性(AFLP)和单链构象多态性(SSCP)等…     

中国大陆4地日本血吸虫蛋白质及同工酶的多态性研究

本文通过对中国大陆境内安徽、湖南、湖北和云南４地日本血吸虫的蛋白质组分、同工酶多态性进行分析表明：１梯度ＳＤＳ、ＩＥＦ电泳结果均显示４地日本血吸虫雌雄虫的蛋白条带相同，说明在蛋白质组分上可能是相同的。２同工酶电泳显示４地血吸虫雌雄虫在ＣＯ酶谱上无差别，即没有多态性表现。在ＧＰＩ、ＡＣＰ和Ｇ６ＰＤＨ上显示了雌雄虫间的酶谱略有差异，但不同地理株同性虫体间未显示差异，说明在雌雄虫间可能存在基因位点的多态性，在ＰＧＭ和ＭＤＨ的同工酶谱上则表现出既有雌雄虫间的不同，也有不同地理株间的差异，表现４地日本血吸虫雌雄虫和不同地理株间有基因位点的多态性表现。