GM—CSF基因转染瘤苗对小鼠T淋巴细胞亚群及生存期的影响

将携带有人粒细胞－巨噬细胞落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）基因的重要病毒载体的转染ＢＡＬＢ／ｃ小鼠肝癌细胞株（Ｈ２２）体我经＾６０Ｃｏγ射线灭活后制成瘤苗，用以治疗荷瘤小鼠，应用流式细胞仪（ＦＣＭ）测定荷瘤小鼠外周血Ｔ淋巴细胞亚群的变化，并观察荷瘤小鼠生存期。结果表明，ＧＭ－ＣＳＦ基因转染瘤苗能量显著提高小鼠外周血ＣＤ＾＋８Ｔ淋巴细胞亚群的含量，荷瘤小鼠生存期显著延长，结果表明，ＧＭ－ＣＳＦ基因转染瘤苗     

微波组织凝固对荷瘤小鼠肿瘤浸润淋巴细胞表型的影响

目的 观察微波固化（ＭＴＣ）肿瘤留置对残存肿瘤局部淋巴细胞表型的影响。方法 采用双侧小鼠荷Ｈ２２移植型肝癌模型，将３０只双侧荷瘤小鼠分为３组，ＭＴＣ组，切除组，对照组。微波固化一侧肿瘤后，定量观察了残存肿瘤和脾脏内ＣＤ４和ＣＤ８细胞的变化，使用了免疫组织化学及图像分析技术。结果 在原位肿瘤内，有极少量的ＣＤ４细胞，在残存肿瘤内，未见ＣＤ４细胞，ＣＤ８细胞呈明显的带状分化，在微波固化组，ＣＤ８细胞的     

微波热凝固对肿瘤杀伤及免疫效应的实验研究

目的：观察微波热凝固对肿瘤的杀伤及其作用后荷瘤体免疫机能的动态变化。方法：用袖珍插入式针形辐射器为无线，对荷ＳＣＣ－８９１乳腺癌小鼠进行微波热凝固处理（ＭｉｃｒｏｗａｖｅＴｉｓｓｕｅＣｏａｇ－ｕｌａｔｉｏｎ，ＭＴＣ），病理切片观察微波对肿瘤的杀伤，ＭＴＣ作用后０、５、１０、１５天检测脾细胞ＩＬ－２，ＩＬ。２Ｒ，ＳＩ变化，观察细胞免疫反应。结果：ＭＴＣ能直接杀伤肿瘤细胞，在ＭＴＣ作用后第１５天，各免疫指标均显著高出阳性对照，结论：ＭＴＣ对荷瘤鼠细胞免疫功能的进行性下降有抑制，具有类似免疫活性剂的作用。     

热处理小鼠H22肝癌细胞的抗肿瘤作用

目的：比较肿瘤细胞体外经不同温度时间热处理后的抗肿瘤效应。方法：采用普通水浴加热方法将小鼠Ｈ２２肝癌细胞经一定温度时间处理后制成瘤苗，免疫ＩＣＲ小鼠，然后腹腔移植Ｈ２２细胞，观察小鼠的平均存活天数，免疫小鼠脾细胞体外对Ｈ２２肝癌细胞的杀伤作用。结果：６５℃／３０分钟水浴加热处理能完全杀灭Ｈ２２细胞；６５℃／３０分钟热处理制备的瘤苗能显著延长荷瘤小鼠的存活时间（Ｐ＜０．０１）；并且该瘤苗免疫小鼠的脾细胞杀伤Ｈ２２细胞作用显著高于荷瘤小鼠及正常小鼠（Ｐ＜０．０１）。结论：采用水浴加热方法制备的肿瘤瘤苗能增强机体的抗肿瘤作用，６５℃／３０分钟为水浴方法制备瘤苗的适宜条件。     

供鼠的活化自然杀伤细胞对小鼠异基因骨髓移植的影响

目的　研究供鼠的活化自然杀伤细胞（ Ｎ Ｋ 细胞） 对小鼠异基因骨髓移植的影响。方法　将荷瘤鼠照射后,于输注骨髓细胞（ 含 Ｔ细胞） 之前４ 小时或之后７２ 小时,注射供鼠的活化 Ｎ Ｋ 细胞,观察荷瘤鼠 Ｃ Ｆ Ｕ Ｓ、 Ｃ Ｆ Ｕ Ｇ Ｍ、生存期、体重、病理组织学和双肺瘤结节等指标。结果　输注供鼠的活化 Ｎ Ｋ细胞能显著促进荷瘤鼠 Ｃ Ｆ Ｕ Ｓ和 Ｃ Ｆ Ｕ Ｇ Ｍ 增殖。输注骨髓细胞前４ 小时输注供鼠的活化 Ｎ Ｋ 细胞能显著提高荷瘤鼠生存率,减轻移植物抗宿主病（ Ｇ Ｖ Ｈ Ｄ） 的病理损伤程度,并使肺瘤结节数量减少;而输注骨髓细胞后７２ 小时输注供鼠的活化 Ｎ Ｋ 细胞能显著加重 Ｇ Ｖ Ｈ Ｄ 病理损伤程度。结论　①在小鼠异基因骨髓移植的初始阶段,输注供鼠的活化 Ｎ Ｋ 细胞能促进造血重建,预防 Ｇ Ｖ Ｈ Ｄ 并同时增强移植物抗肿瘤（ Ｇ Ｖ Ｔ） 效应;输注骨髓细胞之后,输注供鼠的活化 Ｎ Ｋ 细胞则起到加重 Ｇ Ｖ Ｈ Ｄ 的不良作用;② Ｇ Ｖ Ｔ和 Ｇ Ｖ Ｈ Ｄ 是能够被分开的。     

微波热凝固地肿瘤杀伤及免疫效应的实验研究

目的：观察微波热凝固对肿瘤的杀伤及其作用后本免疫机能的动态变化。方法；用袖珍插入式针形辐射照器为天线，对荷ＳＣＣ－８９１乳腺癌小鼠进行微波热凝固处理，病理切片观察同波对肿瘤的杀伤，ＭＴＣ作用后０、５、１０、１５天检测脾细胞ＩＬ－２，ＩＬ０２Ｒ，ＳＩ变化，观察细胞免疫反应。结果：ＭＴＣ能直接杀伤肿瘤细胞，在ＭＴＣ作用后第１５天，各免疫指标均显著高出阳性对照，结论：ＭＴＣ对荷瘤鼠细胞免疫功能的进行性下     

TCR独特型DNA疫苗诱导抗淋巴系统肿瘤免疫反应的实验研究

本研究观察ＴＣＲ独特型ＤＮＡ疫苗诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠抗肿瘤免疫反应的情况。用ＣＥＭ淋巴瘤细胞系和ＢＡＬＢ／ｃ小鼠作模型,ＲＴ－ＰＣＲ扩增ＣＥＭ系特异性重排的ＴＣＲ Ｖβ基因,克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３中作为ＤＮＡ疫苗。用肌内注射法免疫小鼠,间接免疫荧光法检测小鼠抗体生成和用ＭＴＴ法测定ＣＴＬ活性以检测抗独特型的细胞免疫。结果发现,接种ＤＮＡ疫苗后第４周开始小鼠血清中即可检测到特异性抗独特型抗体     

大肠杆菌CD自杀基因与GM-CSF基因联合转移对小鼠红白血病的治疗作用

目的：观察自杀基因与细胞因子基因联合转移的抗肿瘤作用与免疫机制。方法：将表达大肠杆菌胞嘧啶脱胺酶（ＣＤ）的重组腺病毒（ＡｄＣＤ）及表达小鼠粒巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭＣＳＦ）基因的重组腺病毒（ＡｄＧＭＣＳＦ）直接进行体内注射，合并应用５氟胞嘧啶（５ＦＣ）对红白血病皮下荷瘤小鼠模型进行治疗。结果：联合基因治疗能显著抑制荷瘤小鼠皮下肿瘤的生长，并明显延长其生存期（Ｐ＜０．０５）；免疫功能检测表明，联合基因治疗组小鼠ＣＴＬ杀伤活性明显高于单用ＡｄＣＤ／５ＦＣ、ＡｄＧＭＣＳＦ、对照病毒ＡｄＬａｃＺ／５ＦＣ或ＰＢＳ治疗组；病理分析显示，联合基因治疗组肿瘤细胞发生明显坏死，瘤内及瘤周有大量的炎性细胞浸润。结论：应用自杀基因与细胞因子基因联合转染可更有效地抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长，且可诱导抗肿瘤免疫应答     

中药复合多糖对荷瘤小鼠免疫与抑瘤协同效应研究

本文选用具有抗癌作用的中药多糖：猪苓多糖与云芝多糖组成复合多糖，进一步探讨其对Ｓ１８０荷瘤小鼠免疫增强与抗肿瘤协同效应。本文之前，尚未以有关中药复合多糖对荷瘤动物免疫功能与抗癌作用的协效应的研究报道，本实验将荷瘤小鼠分为三个实验组，一个对照组，实验组：Ｔ１组（猪苓多糖组），Ｔ２组（猪苓多糖＋云芝多糖组），Ｔ３组（云芝多糖组），实验通过以荷瘤小鼠ＭΦ吞噬功能的测定，ＭΦ－ＡＣＰ（酸性磷酸酶）活性以及     

脉冲强磁场对H22肝癌小鼠抗肿瘤及免疫调节作用

目的探讨交变脉冲磁场（ＡＩＭＦ）对肿瘤组织杀伤作用及免疫效应的机理。方法应用ＡＩＭＦ对６０只接种Ｈ２２肝癌的昆明小鼠作杀伤实验,对组织形态学、抑瘤率及免疫学指标进行检测。结果ＡＩＭＦ对肿瘤细胞具有选择性杀伤和抑制肿瘤组织生长的作用,曝磁１５天与对照组瘤重分别为（０．７６０±０．６１３）ｇ,（１．９５１±０．８２２）ｇ;肿瘤体积为（１．６４８±０．６８３）ｃｍ３,（３．９７６±０．８４７）ｃｍ３,ｔ＝５．８５６,８．９７３,Ｐ＜０．０１,两组差异有非常显著性。对正常组织无副损伤。各免疫指标与对照组差异有显著性。结论ＡＩＭＦ具有直接杀伤癌细胞、抑制肿瘤组织生长的作用,并且对荷瘤小鼠的免疫功能有调节作用。     

水泡口炎病毒基质蛋白质粒脂质体复合物对癌性腹水抑制效应的实验研究

目的：水泡口炎病毒（Vesicular Stomatitis Virus,VSV）基质蛋白（Matrix protein,M蛋白）具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用,本研究探讨水泡口炎病毒基质蛋白对癌性腹水形成的抑制和治疗作用。方法：采用旋转蒸发仪法制备纳米脂质体,检测其体外转染效率;采用脂质体转染技术将已构建的水泡口炎病毒基质蛋白（VSV-M）重组真核表达质粒pcDNA3.1-M转入MethA肿瘤细胞,转染后6小时将细胞接种于小鼠腹腔,观察小鼠腹水的形成情况;腹水治疗组,则先将MethA肿瘤细胞接种于小鼠腹腔,将小鼠随机分成4组,于接种后第二天分别用脂质体包裹的pcD-NA3.1-M、pcDNA3.1空载体、单纯脂质体及生理盐水治疗,观察腹水的形成情况。结果：自制的DOTAP：DOPE脂质体与Sigma公司购买的Lipofectamine 2000的转染效率相似,pcDNA3.1-M明显抑制MethA腹水的形成,对已经形成的腹水也有明显的治疗作用,与对照组比较有统计学意义（P〈0.05）,同时明显延长了小鼠的存活期。结论：VSV-M蛋白真核表达质粒pcDNA3.1-M对小鼠腹水的形成有抑制作用,能延长小鼠的存活期,对于恶性腹水的治疗具有一定的意义,值得进一步研究。     

Experimental study of specific immunotherapy induced by H22 autologous tumor as whole tumor cell vaccine

This study explores the novel H22 whole-cell vaccine of active specific immunotherapy in the treatment of hepatocellular carcinoma. H22 hepatoma tumor vaccine modified by human interleukin-2 (hIL-2) and mouse granulocyte-monocyte colony-stimulating factor (mGM-CSF) fusion gene was prepared to study its specific anti-tumor immunity. Mice were inoculated by these vaccines. Then tumor cells were injected into mouse models. The ⁵¹Cr release assay was used to examine the cytotoxicities of the splenocytes to H22 hepatoma cells in immunized mice, tumor-bearing mice and control mice. The blood was needed to test the level of IL-10 and interferon (IFN)-γ in serum. Survival time of mice was calculated. Specific cytotoxicity rate of splenocytes from the immunized mice to H22 cancer cell was 38%, significantly higher than 13.6% in the tumor-bearing group, 7.5% in the control group, and 9.1% in S180 cells (p < 0.05). Serum IFN-γ in the immunized group was significantly increased compared with other groups (p < 0.01), and serum IL-10 in the immunized group was significantly decreased compared with other groups(p < 0.01). The survival time of the transgenic vaccinated group was significantly longer.     

超声靶向辐照载药微泡治疗小鼠H22肝癌的实验研究

目的 制备载10-羟基喜树碱(10-HCPT)脂质超声微泡(10-hydroxycamptothecine-loaded liposome microbubbles,HLM),并研究超声定位辐照载药微泡对H22移植瘤的生长抑制效应.方法 制备载10-HCPT的脂质微泡及空白脂质微泡,建立小鼠肝癌H22实体瘤模型,将荷瘤鼠随机分为A、B两大组,每组又分为HLM组、10-HCPT注射液组、空白脂质微泡组和生理盐水对照组,经小鼠尾静脉输入药物或微泡后立即以治疗超声辐照瘤体部位,连续治疗7 d.A组小鼠治疗结束后剥取瘤块称重.计算抑瘤率,并作病理切片分析肿瘤微血管密度(MVD)变化;从治疗当天起,描绘B组小鼠肿瘤生长曲线,并观察生存期.结果 HLM组抑瘤率明显高于其他各组,MVD较其他组低(P<0.05),该组小鼠生存天数较对照组明显延长(P<0.01),但与10-HCPT注射液组比较差异无统计学意义(P>0.05);空白微泡组各检测指标与对照组差异无统计学意义(P>0.05).结论 超声靶向破坏载药微泡可显著提高10-HCPT对H22移植瘤的生长抑制效应,并可增强10-HCPT对肿瘤血管生成的抑制作用,有望成为一种新的靶向抗肿瘤治疗手段.     

超声靶向辐照载药微泡治疗小鼠H22肝癌的实验研究

目的 制备载10-羟基喜树碱(10-HCPT)脂质超声微泡(10-hydroxycamptothecine-loaded liposome microbubbles,HLM),并研究超声定位辐照载药微泡对H22移植瘤的生长抑制效应.方法 制备载10-HCPT的脂质微泡及空白脂质微泡,建立小鼠肝癌H22实体瘤模型,将荷瘤鼠随机分为A、B两大组,每组又分为HLM组、10-HCPT注射液组、空白脂质微泡组和生理盐水对照组,经小鼠尾静脉输入药物或微泡后立即以治疗超声辐照瘤体部位,连续治疗7 d.A组小鼠治疗结束后剥取瘤块称重.计算抑瘤率,并作病理切片分析肿瘤微血管密度(MVD)变化;从治疗当天起,描绘B组小鼠肿瘤生长曲线,并观察生存期.结果 HLM组抑瘤率明显高于其他各组,MVD较其他组低(P<0.05),该组小鼠生存天数较对照组明显延长(P<0.01),但与10-HCPT注射液组比较差异无统计学意义(P>0.05);空白微泡组各检测指标与对照组差异无统计学意义(P>0.05).结论 超声靶向破坏载药微泡可显著提高10-HCPT对H22移植瘤的生长抑制效应,并可增强10-HCPT对肿瘤血管生成的抑制作用,有望成为一种新的靶向抗肿瘤治疗手段.     

竹叶黄酮对小鼠H22肿瘤抑制作用的研究

目的:探讨竹叶黄酮对荷瘤小鼠的抑瘤作用。方法:观察不同剂量竹叶黄酮对荷瘤小鼠肿瘤的抑瘤率、生命延长率、胸腺指数、脾脏指数以及用药前后体重变化等指标的影响。结果:竹叶黄酮具有一定的体内抗肿瘤作用,大、小剂量组的抑瘤率分别为31.6%、9.4%。竹叶黄酮组对荷瘤小鼠虽然没有环磷酰胺那么明显的抗肿瘤作用,但其毒副作用较少,还能延长腹水瘤小鼠的生存时间,增强小鼠免疫能力。结论:竹叶黄酮对小鼠恶性腹腔积液的形成具有抑制作用,还能抑制实体瘤的生长并增强小鼠机体的免疫能力,这为临床应用提供了实验依据。     

中国红树科植物角果木中Dolabrane型二萜的抗肿瘤作用

目的探讨中国红树植物角果木中Dolabrane型二萜Tagalsins A的抗肿瘤作用及其初步作用机制。方法建立小鼠H22肝癌实体瘤及H22肝癌腹水瘤模型,随机分为Tagalsins A高、中、低剂量组（20、10、5 mg.kg-1）、生理盐水组（空白对照）、环磷酰胺组（CTX 10 mg.kg-1）,每组小鼠各10只。建模24 h后开始给药,Tagalsins A各剂量组给予Tagalsins A连续灌胃7 d,对照组灌胃给予同体积生理盐水,CTX组连续腹腔给予CTX7 d。末次给药24 h后处死动物,计算抑瘤率、生命延长率、脏器指数;流式细胞术测细胞凋亡率。结果 TagalsinsA各剂量组小鼠H22实体瘤生长较空白对照组明显减慢（F=8.90,q=3.31~6.52,P〈0.01）。Tagalsins A低、中、高剂量组的抑瘤率分别为24.49%、35.37%、48.30%,其中Tagalsins A中、高剂量组抑瘤作用与CTX组比较差异无显著性（q=2.85、1.01,P〉0.05）。Tagalsins A明显延长H22腹水瘤小鼠生存时间（F=17.06,q=5.45~11.26,P〈0.01）;降低小鼠的胸腺指数（F=21.82,P〈0.01）,而升高肝脏指数（F=121.84,P〈0.01）。Tagalsins A各组肿瘤细胞的凋亡率较空白对照组明显升高（F=127 7.68,q=51.11~82.02,P〈0.01）。结论 Dolabrane型二萜Tagalsins A对小鼠H22移植瘤的生长具有明显的抑制作用,其机制可能与诱导细胞凋亡有关。     

三白草提取物抑瘤作用初步研究

目的 研究三白草提取物的抑瘤作用.方法 以不同剂量三白草提取物处理肝癌H22、肉瘤S180实体瘤小鼠模型,通过检测瘤组织质量的改变计算抑瘤率;处理小鼠肝癌H22腹水瘤小鼠模型,考察提取物对腹水瘤小鼠的生命延长率,并观察其对胸腺和脾脏免疫器官质量的影响.结果 三白草提取物可抑制H22、S180实体瘤的生长(P<0.05),并具有一定的免疫促进作用;可延长H22腹水瘤小鼠的生存时间(P<0.05),提高生命延长率.结论 三白草提取物对移植性肝癌H22、肉瘤S180有抑制作用.     

Augmentation of local antitumor immunity in the liver by tumor vaccine modified to secrete murine interleukin 12.

Minimal residual lesions have been a major problem in surgical management of cancer. We transfected M5076 with murine IL-12 gene by a retroviral vector, established a stable transfectant secreting IL-12 and investigated its antitumor effects on a spontaneous liver metastasis murine model of M5076 reticulum cell sarcoma. Subcutaneous vaccination of the irradiated transfectant into the remote skin following the amputation of the tumor-bearing limb improved survival when compared with the vaccination of irradiated parental cells (control). Cytotoxic activities against parental M5076 were significantly stronger in the hepatic lymphocytes from the mice vaccinated with the IL-12 transfectant than those from the control. IFN-gamma production of hepatic lymphocytes when they were cocultured with the parental cells was significantly augmented in mice vaccinated with the IL-12 transfectant compared with the control. On the other hand, both cytotoxic activity and IFN-gamma production of spleen cells in the M5076-vaccinated and transfectant-vaccinated mice were at similar levels. Immunophenotypic analysis revealed the selective increase of CD3+NK1+ population in the liver from the transfectant-vaccinated mice. These results suggest that tumor vaccines genetically modified to secrete IL-12 continuously at a relatively low level preferentially augment local antitumor activity in the liver rather than systemic immune responses. This strategy warrants further investigation as an adjuvant modality in the management of postoperative residual tumors.     

载5-氟尿嘧啶纳米微球治疗荷H22腹水瘤小鼠的实验研究

目的 观察自制载5-氟尿嘧啶(5-FU)纳米微粒对荷H22小鼠恶性腹水的治疗作用以及对小鼠生存期、小鼠体重、H22细胞周期、小鼠肝脏毒性的影响.方法 168只荷H22腹水瘤昆明小鼠随机分为7组,即空白对照组、溶剂对照组、辅料对照组、5-FU阳性药组(5 d共3 mg),低(5 d共0.12 mg)、中(5 d共0.6 mg)、高(5 d共3 mg)剂量微粒缓释组.药物经腹腔注入,微粒缓释组只给药一次,其他组均为连续给药5 d,每天一次.观察各组小鼠生存情况,比较各组小鼠平均生存时间、小鼠体重、细胞增殖指数(PI)以及肝脏毒性.结果 与对照组比较,微粒缓释组能明显提高小鼠的生存时间(P<0.05)、减小小鼠体重(P<0.05)和增殖指数(PI)、减小肝毒性.与阳性药物组比较,中、高剂量微粒缓释组对小鼠H22腹水瘤的抑制作用增加,表现为明显延长生存时间(P<0.05)、减缓小鼠体重增长(P<0.05)和减小增殖指数(PI),药物对肝脏毒性影响也有减小,表现为中剂量组肝脏毒性明显降低,高剂量组肝脏毒性与阳性药物组相当.结论 5-FU载药缓释纳米微球在治疗荷H22腹水瘤小鼠时可以在小鼠体内持续释放,与阳性药物组相比减少了给药次数,增加了药物对H22肿瘤细胞的抑制作用,并减小对肝脏的毒性.     

Clofibric acid, a peroxisome proliferator-activated receptor alpha ligand, inhibits growth of human ovarian cancer

Recent reports have shown that peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR)alpha ligands reduce growth of some types of malignant tumors and prevent carcinogenesis. In this study, we investigated the inhibitory effect of clofibric acid (CA), a ligand for PPARalpha on growth of ovarian malignancy, in in vivo and in vitro experiments using OVCAR-3 and DISS cells derived from human ovarian cancer and aimed to elucidate the molecular mechanism of its antitumor effect. CA treatment significantly suppressed the growth of OVCAR-3 tumors xenotransplanted s.c. and significantly prolonged the survival of mice with malignant ascites derived from DISS cells as compared with control. CA also dose-dependently inhibited cell proliferation of cultured cell lines. CA treatment increased the expression of carbonyl reductase (CR), which promotes the conversion of prostaglandin E(2) (PGE(2)) to PGF(2alpha), in implanted OVCAR-3 tumors as well as cultured cells. CA treatment decreased PGE(2) level as well as vascular endothelial growth factor (VEGF) amount in both of OVCAR-3-tumor and DISS-derived ascites. Reduced microvessel density and induced apoptosis were found in solid OVCAR-3 tumors treated by CA. Transfection of CR expression vector into mouse ovarian cancer cells showed significant reduction of PGE(2) level as well as VEGF expression. These results indicate that CA produces potent antitumor effects against ovarian cancer in conjunction with a reduction of angiogenesis and induction of apoptosis. We conclude that CA could be an effective agent in ovarian cancer and should be tested alone and in combination with other anticancer drugs.