银杏内酯B抑制中性粒细胞活化的研究

目的 研究银杏内酯B(GB,抗血小板聚集)抑制血小板活化因子(PAF)介导的中性粒细胞活化.方法 将银杏内酯B加入抗凝全血中,阻断PAF对中性粒细胞活化;用PAF及二磷酸腺苷(ADP)活化下述各组的中性粒细胞,包括对照组、PAF组、PAF+GB组、ADP组和ADP+GB组,用流式细胞术检测中性粒细胞整和素(CD11b)平均荧光强度.结果 PAF及ADP均可明显增加中性粒细胞CD11b的平均荧光强度,银杏内酯B可明显抑制PAF及ADP诱导的CD11b的平均荧光浓度.结论 银杏内酯B可明显抑制PAF介导的中性粒细胞活化.     

银杏内酯B对内皮细胞的保护作用及分子机制研究

目的探讨银杏内酯B对氧化型低密度脂蛋白刺激脐静脉内皮细胞保护作用的分子机制。方法分别用银杏内酯B 0.2、0.4、0.6 g.L-1预孵育内皮细胞1 h,再加入ox-LDL(0.1 g.L-1)刺激细胞。用Western blot检测Lectin-likeoxidized LDL receptor-1(LOX-1)、PI3K、Nrf2、SIRT1表达及Akt磷酸化。结果 1.ox-LDL刺激内皮细胞LOX-1表达增加,银杏内酯B以剂量依赖方式抑制了LOX-1表达。2.银杏内酯B有效地抑制了ox-LDL刺激的Akt磷酸化,但对PI3K的表达无影响。3.ox-LDL刺激内皮细胞SIRT1表达降低,银杏内酯B有意义地增加了细胞SIRT1表达。4.ox-LDL刺激细胞抗氧化应激蛋白Nrf2表达明显增加,银杏内酯B下调了Nrf2的表达。结论银杏内酯B对内皮细胞保护作用与抑制LOX-1表达、Akt磷酸化,启动细胞内源性保护机制相关。     

HPLC-ELSD法测定白果中银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C

目的建立HPLC-ELSD法同时测定白果药材中银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C 3个萜杏内酯成分。方法采用Agilent 5TC C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇–四氢呋喃–水(25∶10∶65)为流动相,体积流量1 m L/min,柱温30℃,蒸发光散射检测器检测,对照品进样量为10、20μL,供试品溶液进样量为5~20μL。结果银杏内酯A在0.37~5.92μg、银杏内酯B在2.8~44.8μg、银杏内酯C在0.65~10.4μg时线性关系良好。银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C平均回收率分别为92.40%、95.03%、91.29%,RSD值分别为2.75%、2.06%、2.88%。结论本法操作简单,重复性好,为白果药材的质量控制提供了依据。     

血小板激活因子和银杏内酯B对洗涤兔血小板中cAMP含量的影响

研究了血小板激活因子(PAF)和PAF拮抗剂银杏内酯B对洗涤兔血小板中cAMP含量的作用. 结果表明PAF(0.1-1.0 μmol·L^-1)对血小板的基础cAMP水平无影响, 但对前列腺素E₁(PGE₁) 2 μmol·L^-1及4,5-二氢-6-［4-(1H-咪唑-1)苯基］-5-甲基-3-(2H)-哒嗪酮(CI-930) 20 μmol·L^-1引起的cAMP升高有显著的抑制作用. 银杏内酯B能完全拮抗PAF抑制PGE₁和CI-930升高cAMP的作用, IC₅₀分别为4.7和12.5 μmol·L^-1. 合用磷酸肌酸/磷酸肌酸激酶和阿司匹林对PAF和银杏内酯B的作用均无影响. 提示PAF对磷酸二酯酶的激活作用及腺苷酸环化酶的抑制作用是PAF的直接作用，与其同PAF受体结合有关.     

HPLC-ELSD法测定注射用银杏二萜内酯中银杏内酯A、B、C、K

目的建立测定注射用银杏二萜内酯中银杏内酯A、B、C、K的HPLC-ELSD法。方法采用HPLC-ELSD法,Phenomenex Luna C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为四氢呋喃–甲醇–水,梯度洗脱;体积流量为1.0 mL/min;柱温为30℃;漂移管温度为105℃,氮气体积流量为3.0 L/min。结果注射用银杏二萜内酯中银杏内酯A、B、C、K分别在1.70~8.50μg(r=0.999 7)、2.45~12.5μg(r=0.999 8)、0.30~1.50μg(r=0.999 7)、0.25~1.25μg(r=0.999 7)呈良好的线性关系;平均回收率分别为101.03%、100.86%、100.78%、101.02%,RSD值分别为0.87%、0.29%、1.30%、1.34%。结论该方法简便准确,重复性好,可用于注射用银杏二萜内酯中银杏内酯A、B、C、K的测定。     

银杏二萜内酯葡胺注射液基于CD40/CD40L信号通路对急性脑梗死患者预后的影响

目的 探究银杏二萜内酯葡胺注射液基于CD40/CD40L信号通路对急性脑梗死(ACI)患者预后的影响。方法 选取医院2018年2月至2022年2月收治的110例急性脑梗死患者,随机分为对照组(n=56)和观察组(n=54),对照组予基础西药治疗,观察组在对照组基础上联合银杏二萜内酯葡胺注射液治疗,对比2组临床疗效、治疗前后CD40/CD40L信号通路分子、血清学指标[丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)]、血液流变学指标变化,治疗前后采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评估患者的神经缺损程度,Barthel指数(BI)评定量表评估生活能力,中风病患者生存质量量表(QOLISP)评估生存质量,对2组不良反应进行观察。结果 观察组总有效率高于对照组(P<0.05)。治疗后2组CD40L、sCD40L、MDA、hs-CRP、红细胞压积、血浆黏度、红细胞变形指数及血小板黏附率和NIHSS评分较治疗前明显降低,且治疗后观察组较对照组明降显低(P<0.05)。治疗后2组SOD、BI评分、QOLISP评分较治疗前明显升高,观察组高于对照组(...     

银杏内酯B抑制高糖诱导内皮细胞TLR4及炎症蛋白表达

目的评价银杏内酯B对高糖诱导内皮细胞TLR4表达的影响以及分子机制。方法使用人原代脐静脉内皮细胞,用高糖刺激内皮细胞,用Western blot分析TLR4、炎症蛋白表达以及Akt磷酸化。免疫荧光检测NF-κB核转位。结果高糖(30 mmol·L-1)刺激内皮细胞TLR4和PAF受体表达明显增加,PAF受体抑制剂银杏内酯B(0.6 g·L-1)和CV3988(30μmol·L-1)分别抑制了TLR4及PAF受体表达。银杏内酯B有效地抑制了高糖刺激内皮细胞ICAM-1、VCAM-1表达。分子机制的研究表明,银杏内酯B明显抑制了高糖诱导的Akt磷酸化,以及NF-κB p65的核转位。结论高糖刺激内皮细胞TLR4和PAF受体表达增高,银杏内酯B能够抑制高糖刺激TLR4、PAF受体和炎症蛋白表达,分子机制与抑制Akt磷酸化以及NF-κB活化相关。     

HPLC-ELSD法测定银杏内酯B滴丸中银杏内酯B的含量

目的：建立银杏内酯B滴丸中银杏内酯B的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为E ZORBAX Eclipse Plus C18（5μm,4.6mm×150mm,Agilent）,流动相为正丙醇-四氢呋喃-水（1∶33∶66）,流速为1.0ml/min,柱温为30℃,采用蒸发光散射检测器（ELSD）检测,外标法测定。结果：银杏内酯B滴丸中银杏内酯B的进样量在1.071～21.42μg（r=0.9996）范围内与各自峰面积对数值呈良好的线性关系;平均加样回收率为98.049%,RSD为0.872%,样品在10小时内稳定。结论：所建立的方法可行,准确、重复性好,适用于银杏内酯B滴丸中银杏内酯B的质量控制。     

银杏苦内酯B的药理学研究概述

银杏苦内酯为“国宝”银杏叶提取物中的萜类化合物，分为银杏苦内酯A、B、C、M、J和白果内酯，编号分别为BN5加20、BN52021、BN52022、BN52023、BN52024，共约占银杏提取物的6％。银杏提取物中仅含有微量银杏苦内酯B（BN52021），但近年来国内外的研究显示该化合物具有抗炎、抗休克、保护心脑血管、治疗急性胰腺炎等作用。本文对银杏苦内酯B的药理作用进行了概述，为临床应用提供参考。     

银杏内酯B及银杏内酯提取物大鼠体内药动学比较

目的:研究银杏内酯B、银杏内酯提取物在大鼠体内的药动学。方法:LC-MS测定血浆中银杏内酯B的血药浓度,采用3p87药动学处理软件,计算药动学参数,Cmax、tmax采用实测值。结果:银杏内酯B单体、银杏内酯提取物大鼠口服后的t1/2α分别为(0.18±0.09)、(0.17±0.07)h;t1/2β分别为(2.3±2.0)、(2.3±1.5)h;AUC0-12h分别为(2701±655)、(2889±836)μg.L-1.h;AUC0-∞分别为(2778±680)、(2966±854)μg.L-1.h,银杏内酯提取物中银杏内酯B的生物利用度是单体的1.07倍。结论:银杏内酯B单体、银杏内酯提取物大鼠口服后的药动学参数差异均无统计学意义,银杏内酯提取物中共存成分对银杏内酯B的大鼠体内药动学行为影响无统计学意义。     

体外循环对血小板CD40L表达的影响

目的研究体外循环（CPB）过程中血小板膜表达CD40L的变化,及其与血小板激活、全身炎症反应及凝血变化的联系。方法CPB心内直视手术患者40例,分别于麻醉诱导后10min（T1）、CPB后30min（T2）、CPB停机即刻（T3）、CPB后2h（T4）、4h（T5）、8h（T6）,抽取外周动脉血,测定血浆TNF-α浓度、血小板表面CD40L和CD62P表达,计算术后24h纵隔引流量。结果T2时CD40L较CPB前明显升高（P〈0.01）,T3时达到峰值,T6时恢复到T1水平。血小板CD62P表达、血浆肿瘤坏死因子-α的峰值、术后24h引流量均和CD40L表达呈正相关（r=0.610,P〈0.01）。结论CD40L是随着CPB对血小板的激活而表达的,CD40L可能是联系炎性反应和凝血异常这两个导致CPB术后主要并发症的一个重要环节。     

阿托伐他汀对急性冠脉综合征患者血小板及单核细胞表达CD40L、血小板CD62P的影响

目的 观察阿托伐他汀(降血脂药)对急性冠脉综合征患者血小板及单核细胞表达CD40L、血小板CD62P的影响.方法 将80例急性冠脉综合征患者随机分成阿托伐他汀组(40例)及常规治疗组(加例),比较观测治疗前及治疗8周后血小板CD62P、血小板及单核细胞表达CD40L.结果 治疗后2组血小板及单核细胞表达CD40L、血小板CD62P较治疗前明显降低(P<0.05、P<0.01);治疗后阿托伐他汀组血小板及单核细胞表达CD40L、血小板CD62P较常规组明显降低(P<0.05).结论 在治疗8周后,阿托伐他汀可改善急性冠脉综合征患者的血小板活化功能并显示其有抗炎作用.     

细胞因子对人脐静脉内皮细胞表达CD40和CD40L的影响

ＣＤ40 ＣＤ40Ｌ是一对互补的跨膜糖蛋白 ,在机体免疫应答中起重要作用 ,近年来的研究表明这一对配体 -受体参与了ＡＳ的发生和发展[1] 。ＡＳ的形成与发展过程中可有多种细胞因子参与和合成多种细胞因子。本文研究细胞因子γ干扰素 (ＩＦＮ γ)、肿瘤坏死因子 (ＴＮＦ)、白介素 6(ＩＬ 6)和白介素 1(ＩＬ 1)对人脐静脉内皮细胞表达ＣＤ40及ＣＤ40Ｌ的影响 ,以期揭示ＣＤ40 ＣＤ40Ｌ在ＡＳ发生中的作用地位。1　材料和方法1.1　材料　ＩＦＮ γ、ＴＮＦ、ＩＬ 6、ＩＬ 1、ＣＤ40和ＣＤ40Ｌ单抗购自Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ公司 ,鼠ＩｇＧＰＥ…     

通心络对动脉粥样硬化模型兔内皮功能、CD40及CD40L表达的影响

目的 观察通心络对动脉粥样硬化家免模型的预防治疗作用,并探讨其对内皮功能、CD40及CD40L mRNA表达的影响.方法 选取60只雄性健康家兔,随机分为对照组、模型组、通心络组三组,每组20只,后两组家兔分别通过高脂饮食制备动脉粥样硬化模型.给药处理前及12周后分别测定以下指标：血浆总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）和高密度酯蛋白胆固醇（HDL-C）的浓度;主动脉内膜/中膜厚度比值及粥样斑块面积;测定血清内皮素（ET）水平和血清一氧化氮（NO）水平;运用定量逆转尿PCR技术（RT-PCR）测定外周血单核细胞中CD40及CD40L mRNA的表达水平.结果 模型组和通心络组家免的TC水平均显著高于对照组（P〈0.01）,通心络组又低于模型组（P〈0.05）;通心络组血清ET水平和ET/NO显著降低（P〈0.05,P〈0.01）,血清NO水平显著升高（P〈0.01）;通心络组中,家兔的主动脉内膜/中膜厚度比值及斑块面积占血管总面积百分率均明显低于模型组[（0.56±0.07）与（1.16±0.08）,P〈0.01;（36.88±2.38）%与（76.58±2.86）%,P〈0.01];与模型组（0.798±0.115）、（0.592±0.132）比较,通心络组家兔外周血单-核细胞中的CD40及CD40L mRNA表达量明显降低[（0.686±0.132）、（0.498±0.108）]（P〈0.01）.结论 通心络可抑制动脉粥样硬化斑块的形成,其机制可能下调CD40及CD40L表达及有效地改善内皮功能有关.     

2型糖尿病患者血小板膜表面CD40L及sCD40L的表达及其意义

目的 探讨2型糖尿病患者药物干预前后血浆可溶性共信号分子(CD40L)、血小板膜表面CD40L表达的变化以及与代谢指标、血管并发症之间的关系.方法 采用ELISA法、免疫荧光及流式细胞术检测24例单纯2型糖尿病(单纯糖尿病组)、26例糖尿病合并颈动脉病变患者(合并大血管病变组)及28例正常人(对照组)血浆可溶性CD40L (sCD40L)、血小板膜表面CD40L分子,同时检测血糖、糖化血红蛋(HbA1c)、胰岛素(Ins)及颈动脉中内膜厚度(IMT),采用胰岛素增敏剂噻唑烷二酮类(马来酸罗格列酮)进行药物干预,并对部分指标进行相关性分析.结果 单纯糖尿病组尤其是合并大血管病变组,血浆sCD40L、血小板膜表面CD40L分子较对照组明显增高(P＜0.01),且与餐后2-h血糖、HbA1c、INS及IMT呈正相关.药物干预后,sCD40L、血小板膜表面CD40L分子较治疗前明显下降(P＜0.01).结论 高血糖及高胰岛素可能通过激活CD40L参与介导炎症反应和血小板的异常活化,从而参与动脉粥样硬化的发生、发展;噻唑烷二酮类药物具有潜在的抗炎、抗动脉粥样硬化和免疫调节作用.     

Ginsenoside-Rp1 inhibits platelet activation and thrombus formation via impaired glycoprotein VI signalling pathway, tyrosine phosphorylation and MAPK activation

BACKGROUND AND PURPOSE

Ginsenosides are the main constituents for the pharmacological effects of Panax ginseng. Such effects of ginsenosides including cardioprotective and anti-platelet activities have shown stability and bioavailability limitations. However, information on the anti-platelet activity of ginsenoside-Rp1 (G-Rp1), a stable derivative of ginsenoside-Rg3, is scarce. We examined the ability of G-Rp1 to modulate agonist-induced platelet activation.

EXPERIMENTAL APPROACH

G-Rp1 in vitro and ex vivo effects on agonist-induced platelet-aggregation, granule-secretion, [Ca²⁺]_i mobilization, integrin-α_IIbβ₃ activation were examined. Vasodilator-stimulated phosphoprotein (VASP) and MAPK expressions and levels of tyrosine phosphorylation of the glycoprotein VI (GPVI) signalling pathway components were also studied. G-Rp1 effects on arteriovenous shunt thrombus formation in rats or tail bleeding time and ex vivo coagulation time in mice were determined.

KEY RESULT

G-Rp1 markedly inhibited platelet aggregation induced by collagen, thrombin or ADP. While G-Rp1 elevated cAMP levels, it dose-dependently suppressed collagen-induced ATP-release, thromboxane secretion, p-selectin expression, [Ca²⁺]_i mobilization and α_IIbβ₃ activation and attenuated p38^MAPK and ERK2 activation. Furthermore, G-Rp1 inhibited tyrosine phosphorylation of multiple components (Fyn, Lyn, Syk, LAT, PI3K and PLCγ2) of the GPVI signalling pathway. G-Rp1 inhibited in vivo thrombus formation and ex vivo platelet aggregation and ATP secretion without affecting tail bleeding time and coagulation time, respectively.

CONCLUSION AND IMPLICATIONS

G-Rp1 inhibits collagen-induced platelet activation and thrombus formation through modulation of early GPVI signalling events, and this effect involves VASP stimulation, and ERK2 and p38^-MAPK inhibition. These data suggest that G-Rp1 may have therapeutic potential for the treatment of cardiovascular diseases involving aberrant platelet activation.     

普伐他汀和阿司匹林对CD40-CD40L表达及斑块稳定性的影响

目的：研究普伐他汀和阿司匹林对兔腹主动脉粥样硬化斑块CD40-CD40L表达及斑块稳定性的影响。方法：新西兰大白兔32只予高脂饲养16wk及腹主动脉球囊损伤术建立腹主动脉粥样硬化模型,分4组：P组（普伐他汀）、A组（阿司匹林）、A＋P组（联合用药）与N组（不用药）,分别予相应药物灌胃8wk。通过免疫组化检测比较各组兔腹主动脉粥样硬化斑块内CD40-CD40L表达、MMP-1、胶原及脂质含量变化,超声检测腹主动脉内膜-中膜厚度（IMT）改变,ELISA法测定血清C反应蛋白（CRP）变化,分析2药干预动脉粥样硬化斑块稳定性的机制。结果：用药各组兔腹主动脉斑块内CD40-CD40L表达较N组显著受抑,普伐他汀作用更显著（P组和A＋P组均P＜0．01）；同时各用药组MMP-1的表达、IMT增厚及CRP增高较N组均得到明显抑制（P＜0．01）,P组和A＋P组较N组斑块内脂质显著减少（P＜0．01）,胶原含量明显增加（P＜0．01）。结论：普伐他汀和阿司匹林都可抑制斑块CD40-CD40L系统的表达,促进斑块的稳定性。普伐他汀促进斑块稳定的机制可能是多方面的。     

弥漫性大B细胞淋巴瘤中CD40L的表达及意义

目的探讨弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）组织中CD40L表达与DLBCL预后间的关系及意义。方法免疫组织化学法检测27例弥漫性大B细胞淋巴瘤、20例淋巴结反应性增生组织中CD40L的表达。结果（1）DLBCL中CD40L过度阳性率（25．93％）显著低于淋巴结反应性增生（63．64％），P〈0．05。（2）CD40L在Ⅲ、Ⅳ期DLBCL过度阳性率（14．29％）低于Ⅰ、Ⅱ期（38．46％），P〈0．05。CD40L过度阳性率在有结外浸润DLBCL（11．76％）低于无有结外浸润DLBCL（40％），P〈0．05。（3）DLBCL患者CD40L的过度阳性率与远处转移、临床分期均显著相关，P〈0．05。结论（1）CD40L过度阳性率与结外器官浸润及临床分期密切相关，其可能作为判断DLBCL侵袭性及预后的指标。（2）DLBCL中CD40L表达的减少可能是影响其发病的因素之一。     

CD40-CD40L在儿童过敏性紫癜发病机制中的作用研究

目的探讨CD40-CD40L在儿童过敏性紫癜发病机制中的作用。方法研究对象为30例HSP患儿,正常对照组30例,应用流式细胞术检测其外周血单个核细胞中CD40-CD40L的表达情况,并观察实验组治疗前后CD40-CD40L的表达有无差异。结果与对照组比较,CD40L表达明显增高,且治疗前表达高于治疗后(P<0.05),CD40表达增高,但与对照组及治疗前后比较差异均无显著性(P>0.05)。结论 HSP患儿外周血单个核细胞CD40L表达增高,且治疗前高于治疗后,表明其在HSP患儿免疫紊乱发病机制中可能起着重要作用。     

Muscarinic cholinoceptor activation modulates DNA synthesis and CD40 expression in fibroblast cells

1 The aim of the present work was to examine the role of muscarinic acetylcholine receptors (mAChR) on DNA synthesis and CD40 expression in human fibroblast cells. Neonatal human skin fibroblast cultures were stimulated with carbachol in presence or absence of specific antagonists and the following parameters were measured: identification of mAChR subtypes, DNA synthesis, inositol phosphates (InsP) production and CD40 expression. 2 Human fibroblasts express mAChR with Kd 0.47 +/- 0.11 nm and Bmax 236 +/- 22 fmol mg protein(-1). Carbachol stimulates DNA synthesis, InsP and the expression of CD40. All these effects were inhibited by atropine, mustard hydrochloride (4-DAMP) and pirenzepine but not by AF-DX 116 and tropicamide, indicating that M3 and M1 mAChR are implicated in carbachol action. The relative Ki of the antagonists obtained by competition binding assay was in parallel to the relative potency for blocking both carbachol-stimulated InsP accumulation and DNA synthesis. 3 The intracellular pathway leading to carbachol-induced biological effects involved phospholipase C and calcium/calmodulin, as U-73122 and trifluoroperazine blocked carbachol effects, respectively. Calphostin C, a protein kinase C inhibitor, had no effect, indicating that this enzyme does not participate in the system. 4 These results may contribute to a better understanding of the modulatory role of the parasympathetic muscarinic system on normal human fibroblast function.