大鼠海马神经元癫痫样放电模型的构建

目的探讨“无镁细胞外液”诱导体外培养大鼠海马神经元产生癫痫样放电的可行性,以期建立难治性癫痫离体细胞模型。方法选取24h内新生Wistar大鼠,分离海马神经元后进行原代培养,体外培养至第12天时,用“无镁细胞外液”处理3h,应用全细胞膜片钳技术记录海马神经元的放电情况。结果在培养第12天时,神经元突起间彼此接触形成神经网络。在“无镁细胞外液”处理3h后神经元产生稳定的放电,恢复正常细胞培养液培养24h,神经元仍可检测到自发的“癫痫样放电”。结论体外培养第12天海马神经元,在“无钱细胞外液”处理后可形成稳定的自发性癫痫样放电,为今后在细胞分子水平研究癫痫发病机制提供了一种理想模型。     

人参皂苷Rb_1对癫痫大鼠海马神经元的影响

目的：探讨人参皂苷Rb1对青霉素所致癫痫大鼠作用。方法：将大鼠随机分为正常（A）组、模型（B）组及人参皂苷Rb1（C）组。采用青霉素制作癫痫模型制作方法,观察B组及C组大鼠癫痫发作潜伏期及发作持续时间,并测定各组大鼠海马组织（SOD）、（MDA）含量。结果：C组大鼠发作潜伏期较B组明显延长（P〈0.01）,发作时间显著缩短（P〈0.05）。C组大鼠SOD活性与B组相比显著升高（P〈0.01）,与A组比较明显降低（P〈0.05）。C组MDA含量与B组比较显著降低（P〈0.01）,与A组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：人参皂苷Rb1可通过抗氧化机制发挥抗癫痫作用。     

谷氨酸及其受体拮抗剂对大鼠海马CA3区诱发电位的影响

目的　探讨谷氨酸及其受体拮抗剂对正常和脑缺血大鼠海马CA3区神经元突触传递功能的影响。方法　在体记录正常大鼠海马CA3区诱发的群峰电位 (populationspike,PS) ;结扎大鼠双侧颈总动脉 ,造成急性不完全性全脑缺血 ,观察PS幅度的变化 ;采用局部微量给药 ,观察药物对PS幅度的影响。结果　①Glu 5、1 0、2 0nmol注入后 ,PS的幅度均升高 ;当给予Glu 5 0nmol时PS的幅度则显著降低。②急性不完全性全脑缺血 (结扎双侧颈总动脉 )后 ,PS的幅度亦显著降低。③谷氨酸受体拮抗剂MK 80 1 5 0nmol能降低正常大鼠的PS幅度 ,能部分改善脑缺血引起的PS幅度降低 ,并能减弱 1 0nmolGlu升高PS幅度的作用和 5 0nmolGlu降低PS幅度的作用。结论　谷氨酸在一定浓度范围内可增强大鼠海马CA3区的突触传递功能 ,其受体拮抗剂MK 80 1对高浓度谷氨酸和急性脑缺血所致CA3区突触传递功能减弱有明显的改善作用。     

脑缺血海马CA1区突触可塑性及白藜芦醇苷对缺血性脑损伤的保护机制

海马CA1区神经元与人类、哺乳动物的学习记忆密切相关,同时海马是脑缺血后选择性易损的脑区之一.现就脑缺血大鼠海马CA1区突触可塑性及白藜芦醇苷对缺血性脑损伤的保护机制作一综述.     

依托咪酯对大鼠海马CA1区兴奋性突触后电流的影响

目的 探讨依托咪酯对大鼠海马CA1区兴奋性突触后电流的影响.方法 将32只Wistar大鼠海马脑片均分为四组:脂肪乳剂组;10μM依托咪酯组;荷包牡丹碱+10μM依托咪酯组;士的宁+10μM 依托咪酯组.记录用药前和40 min后膜钳制电压为-70 mV时的兴奋性突触后电流(EPSC)幅值.结果 在膜钳制电压为-70 mV时,脂肪乳剂对CA1区锥体神经元细胞EPSC幅值无明显影响,而10μM依托咪酯可明显降低EPSC幅值(P＜0.05).应用荷包牡丹碱预孵脑片可完全消除10μM依托咪酯对大鼠海马CA1区EPSC值的抑制作用(P＜0.05).在应用士的宁预孵脑片后,10μM依托咪酯可使EPSC值下降约16.2％;但与依托咪酯组相比,该抑制作用被明显削弱(P＜0.05).结论 依托咪酯可能主要通过增强突触 γ-氨基丁酸A受体功能而抑制兴奋性突触活动.甘氨酸受体在其中亦起到一定的调节作用.     

皮质酮对大鼠海马CA1区长时程抑制的影响

目的 观察皮质酮对大鼠海马CA1区锥体神经元产生的长时程抑制(LTD)的影响.方法 断头法分离Wistar大鼠海马半脑,切片机切出400μm厚度的海马脑片.对照组不加任何药品,皮质酮组、D-APV组和D-APV 皮质酮组的脑片分别以10μmol/L皮质酮、50μmol/L D-APV和50μmol/L D-APV 10μmol/L皮质酮预孵60min.记录基础兴奋性突触后电流(EPSC)10min,然后给予低频刺激(LFS),记录LTD的表达情况.结果 对照组给予LFS后,产生LTD,LFS后EPSC值为基础值的58.2 %(P＜0.05);皮质酮组给予LFS后EPSC值为基础值的45.4 %(P＜0.05),明显低于对照组(P＜0.05);给予NMDA受体特异性拮抗剂D-APV后,D-APV组和D-APV 皮质酮组大鼠海马CA1区LFS不能诱发LTD.结论 该实验条件诱发的LTD是NMDA受体依赖型的,10 μmol/L皮质酮使大鼠海马CA1区锥体神经元LTD表达增强.     

丙泊酚对大鼠海马CA1区长时程增强的影响

目的：研究丙泊酚对大鼠海马CA1区长时程增强（LTP）表达的影响,并探讨其机制。方法：63只戊巴比妥钠麻醉大鼠分多组,分别观察腹腔注射丙泊酚20mg/kg对海马CA1区树突层兴奋性突触后膜电位（EPSP）、LTP表达的影响以及与D-2-氨基-5-磷酸戊酸（APV）和6-氰基-7-硝基喹啉-2,3-二酮（CNQX）合用时对LTP表达的影响。结果：各组基础EPSP幅值稳定;高频刺激（HFS）前应用丙泊酚引出的LTP与对照组相当（P〉0.05）,HFS后LTP幅值明显低于对照组（P〈0.01）;丙泊酚合用APV后不能引出LTP,合用CNQX后幅值一过性升高后,迅速下降并低于基线（P〈0.05）。结论：丙泊酚20mg/kg腹腔注射不影响戊巴比妥钠麻醉大鼠海马CA1区N-甲基-D-门冬氨酸（NMDA）受体依赖型LTP诱导,但可影响其维持;其机制与阻滞α-氨基-3-羟基-5-甲基恶唑-4-丙酸（AMPA）受体有关,与NMDA受体功能状态无关。     

硫化氢对老龄急性脑梗死大鼠海马CA3区突触结构的影响

目的评价硫化氢(H2S)对老龄急性脑梗死大鼠海马CA3区突触结构的影响。方法健康雄性SD大鼠60只,18~20月龄,体重500~700 g,采用随机数字表法分为4组,每组15只:对照组(C组)、模型组(M组)、Na HS组(N组)、生理盐水组(S组)。N组于制作模型前25 min给予大鼠腹腔注射H2S外源性供体Na HS(28μmol/kg);S组于制作模型前25 min给予大鼠腹腔注射等量生理盐水;C组不行任何处理。采用线栓法致大鼠大脑中动脉阻塞致急性脑梗死模型。于急性脑梗死后第1~5天每组随机取5只大鼠,进行Morris水迷宫进行测试,记录逃避潜伏期和穿越平台次数;于急性脑梗死后1、3、5 d(T1~T3)每组随机取5只大鼠处死,取海马组织,电镜下定量测定海马CA3区突触结构各项指标。结果与C组比较,M组、N组和S组大鼠急性脑梗死后逃避潜伏期延长,穿越平台次数减少,海马CA3区突触数减少,间隙增宽,突触后膜致密物厚度变薄,突触活性区长度缩短,突触界面曲率减小(P<0.05);与M组比较,N组急性脑梗死后逃避潜伏期缩短,穿越平台次数增多,海马CA3区突触数增加,间隙变窄,突触后膜致密物厚度变厚,突触活性区长度延长,突触界面曲率增大(P<0.05);与N组比较,S组急性脑梗死后逃避潜伏期延长,穿越平台次数减少,海马CA3区突触数减少,间隙增宽,突触后膜致密物厚度变薄,突触活性区长度缩短,突触界面曲率减小(P<0.05)。结论 H2S可改善老龄急性脑梗死大鼠认知功能,其机制可能与海马组织CA3区突触结构改变有关。     

加巴喷丁对癫痫持续状态大鼠海马区神经元凋亡的影响

目的研究加巴喷丁(GBP)对癫痫持续状态(SE)大鼠海马区神经元凋亡的影响。方法SD大鼠48只随机分为对照组、戊四氮致痫组(PTZ组)、GBP组、GBP干预组(干预组),每组12只。戊四氮溶液60 mg.kg-1.d-1腹腔注射诱发SE。干预组致痫后给予GBP 600 mg.kg-1.d-1;GBP组仅给予GBP 600 mg.kg-1.d-1;对照组和PTZ组给予0.9%氯化钠溶液灌胃。采用头皮针状电极单极导联法观察大鼠痫性放电的脑电图。缺口末端标记法(TUNEL)检验凋亡阳性细胞。结果 TUNEL阳性细胞在PTZ组显著高于对照组(P<0.01);GBP组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);干预组表达低于PTZ组(P<0.05)。结论戊四氮致SE大鼠海马CA1和CA3区神经元TUNEL阳性细胞显著增加,GBP能显著减少TUNEL阳性细胞。     

七氟醚对老龄大鼠海马CA3区突触结构的影响

目的观察七氟醚对老龄大鼠海马CA3区突触结构的影响。方法健康SD大鼠60只,18月龄,随机分为4组:空白对照组(C组)、3%七氟醚组(S1组)、1.5%七氟醚组(S2组)、3%异氟醚组(I组),每组15只。于麻醉结束后1、3、7 d(T1~T3)行Morris水迷宫实验,并测定海马CA3区突触结构各指标。结果与C组比较,I组T1~T3、S1组T1~T2时逃避潜伏期延长,穿越原平台象限次数减少,I组、S1组T1~T3海马CA3区突触间隙增宽,PSD厚度变薄,突触活性区长度缩短,突触界面曲率减小(P<0.05);与I组、S1组比较,S2组T1~T2时逃避潜伏期缩短,T1~T3海马CA3区突触间隙变窄,PSD厚度增厚,突触活性区长度延长,突触界面曲率增大(P<0.05);与I组比较,S1组、S2组T3时逃避潜伏期缩短,穿越原平台象限次数增加(P<0.05);与S1组比较,I组T3时逃避潜伏期延长,穿越原平台象限次数减少(P<0.05);与T1比较,I组、S1组、S2组T2~T3时逃避潜伏期缩短(P<0.05)。结论低浓度七氟醚对老龄大鼠认知功能无明显影响,高浓度七氟醚、异氟醚均可导致老龄大鼠认知功能减退,其机制可能与抑制海马CA3区突触结构的改变有关。     

Trimethylolpropane phosphate induces epileptiform discharges in the CA1 region of the rat hippocampus

The actions of trimethylolpropane phosphate (TMPP), an ethyl bicyclophosphate convulsant produced during the partial pyrolysis of some phosphate ester-based lubricants, were tested on CA1 neurons of rat hippocampal slices using intracellular recording techniques. Bath application of TMPP (0.1-100 microM) induced spontaneous paroxysmal depolarizing shifts and the associated spontaneous epileptiform bursts followed by after-hyperpolarizations in 63% of neurons tested. The TMPP-induced epileptiform bursts were blocked by muscimol, a gamma-aminobutyric acid A (GABA(A)) receptor agonist, diazepam (DZP), a GABA(A)-benzodiazepine ionophore complex agonist, or baclofen, a GABA(B) receptor agonist. While bath application of muscimol, DZP, or baclofen suppressed spontaneous activity in CA1 neurons not previously exposed to TMPP, subsequent application of TMPP (10 microM) reversed the actions of muscimol and diazepam, but not baclofen. TMPP (0.1-100 microM) also induced membrane hyperpolarization associated with an increase in peak input resistance and inward rectification in 33% of neurons tested or membrane depolarization associated with an increase in input resistance in 17% of neurons tested. In summary, TMPP induced epileptiform activities in hippocampal CA1 neurons. The epileptogenic effects of TMPP are consistent with its interaction with GABA(A)-benzodiazepine receptors.     

白藜芦醇预处理对局灶性脑缺血/再灌注大鼠海马CA1区神经元凋亡的保护作用和机制

目的探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)预处理对局灶性脑缺血/再灌注大鼠海马CA1区神经元凋亡的保护作用及其机制。方法♂SD大鼠60只,随机分为假手术组(Sham)、缺血/再灌注组(I/R)、白藜芦醇预处理组(Res+I/R),每组20只。采用线栓法阻断大脑中动脉血供90 min,拔出栓线造成局部脑区缺血/再灌注损伤。Res+I/R组缺血前1 h腹腔注射白藜芦醇(30 mg·kg-1)。缺血/再灌注后第5天,TUNEL法原位标记海马CA1区凋亡的神经元细胞,免疫组化法检测海马CA1区PI3K、p-Akt及Caspase-3的表达。结果 TUNEL染色结果显示,与I/R组相比较,白藜芦醇预处理明显减少脑缺血/再灌注损伤所引起的大鼠海马CA1区神经元凋亡(P<0.05);免疫组织化学结果显示,与I/R组相比,白藜芦醇预处理使海马CA1区PI3K、p-Akt表达明显增多(P<0.05),Caspase-3表达明显减少(P<0.05)。结论缺血前1 h白藜芦醇预处理对局灶性脑缺血大鼠海马CA1区神经元凋亡具有保护作用,其主要作用机制可能是通过激活PI3K-Akt信号通路进而抑制凋亡相关蛋白Caspase-3的表达有关。     

依达拉奉、米诺环素及ONO-1078对缺氧缺糖诱导大鼠海马脑片电生理改变的作用

目的建立离体海马脑片缺氧缺糖(OGD)电生理变化模型,观察依达拉奉、米诺环素和ONO-1078 {pranlukast,4-氧-8-［对-(4-苯丁氧基)苯甲酰氨基］-2-(5-四氮基)-4H-1-苯并吡喃半水化合物}的神经保护作用。方法 大鼠海马脑片以无氧无糖处理,记录脑片群峰电位(PS),部分实验以TTC染色观察脑片活性。结果OGD处理4 min为最佳损伤条件,1 h后可恢复至基础水平的(29±6)%。自由基清除剂依达拉奉(1和10 μmol·L^-1)明显增强PS波的恢复;抗炎药米诺环素(10 μmol·L^-1)和白三烯受体拮抗剂ONO-1078(1 μmol·L^-1)无显著恢复作用;阳性对照药氯胺酮也浓度依赖性促进PS恢复。结论4 min OGD为离体海马脑片缺血电生理变化的可行模型;依达拉奉对OGD脑片损伤有浓度依赖性保护作用,而米诺环素和ONO-1078未显示保护作用。     

加锡果宁抑制荷包牡丹碱在大鼠海马脑片CAl区诱发的痫样放电

在大鼠离体海马脑片标本表面灌流荷包牡丹碱(10μmol·L~(-1)),单脉冲电刺激Schaffer侧支,激活CAl区锥体细胞,给出痫样放电,作者在这种痫样放电模型上研究了加锡果宁对该痫样放电的影响,结果表明,微量推注不同浓度的加锡果宁到脑片CAl区表面,对荷包牡丹碱诱发的CAl区锥体细胞痫样放电呈剂量依赖性抑制,提示加锡果宁可对抗荷包牡丹碱的致痫作用,并讨论了可能机理。     

(-),(+)-7-羟基-黄皮酰胺对大鼠海马齿状回突触传递功能的影响(-),(+)-7-羟基-黄皮酰胺对大鼠海马齿状回突触传递功能的影响

目的观察(-),(+)-7-羟基-黄皮酰胺(7-hydoxy-clausenamide,7-OH-Clau)对大鼠海马齿状回基础突触传递功能的影响。方法细胞外记录低频刺激(1/30 Hz,1.0 mA)引起的海马齿状回群峰电位(population spike, PS)。结果侧脑室注入脑终浓度为2×10^-6 mol·L^-1 (-)-7-OH-Clau后15,30,60 min,PS幅值比给药前均增加了30%以上,比空白对照组增加了27%～41%;而同剂量的(+)-7-OH-Clau在注射后的3个时间点上,PS幅值比给药前下降了18%～25%,比空白对照组下降了11%～20%。结论(-)-7-OH-Clau能增强大鼠海马齿状回的基础突触传递活动,而(+)-7-OH-Clau对这种活动显示出抑制作用。     

石杉碱甲对大鼠海马脑片CA1神经元θ节律及长时程增强的影响

目的:研究石杉碱甲(HupA)对大鼠海马脑片CA1锥体神经元θ节律、长时程增强的影响,以分析其增强学习记忆功能的神经细胞电生理机制。方法:应用大鼠海马脑片神经元细胞内记录技术,观察石杉碱甲对大鼠海马脑片的CA1锥体神经元θ节律、长时程增强的影响。结果:(1)未用药组出现膜电位振荡前后4～10Hz(θ节律)功率分量之和无显著性差异,但在HupA(1μmol·L-1)灌流15min后出现膜电位振荡,与用药前没有膜电位振荡的4～10Hz功率分量之和配对t检验比较有显著差异(n=3,P<0.005)。(2)在LTP期间,对照组EPSP幅度在强直刺激后30min显著性的升高(P<0.05),而HupA组在强直刺激后15min即出现显著性升高(P<0.01)。结论:HupA可增加大海马锥体神经元在θ频率范围内的功率分量,并易化LTP的诱发,这可能是其增强学习记忆功能的细胞电生理机制之一。     

The effect of prolonged treatment with tricyclic antidepressants on the actions of 5-hydroxytryptamine in the hippocampal slice of the rat

The effect of long-term treatment with the tricyclic antidepressants imipramine (IMI) and desmethylimipramine (DMI) on neuronal responsiveness to 5-hydroxytryptamine (5-HT) was examined in the hippocampal slice preparation from the rat. Population spikes, evoked by electrical stimulation of the stratum radiatum, were recorded in the pyramidal cell layer of the CA1 region of the isolated hippocampus. When 5-HT (10(-7) to 2 X 10(-5) M) was applied there was an initial increase followed by a decrease in the amplitude of the population spike. On washout of 5-HT the amplitude increased transiently above control levels. Daily injection of 10 mg/kg of imipramine or desmethylimipramine, intraperitoneally, into rats for 4-5 weeks was found to produce a significant decrease in the inhibitory effect of 10(-5) M 5-HT, whereas there was no apparent change in the excitatory effects. The acute application of 10(-5) M imipramine or desmethylimipramine antagonized the inhibitory effect of 10(-5) M 5-HT without affecting the excitatory effects. Acute application of the 5-HT receptor antagonists cyproheptadine (10(-5) M) and ketanserin (7.5 X 10(-6) M) completely prevented the appearance of the inhibitory effect of 10(-5) M 5-HT without affecting the excitatory effects. It was concluded that the decreased inhibitory effect of 5-HT which was produced by chronic treatment with imipramine or desmethylimipramine was probably due to a reduction in the number of 5-HT receptors or a reduction in the post-receptor effector mechanisms for 5-HT.     

双苯氟嗪抗大鼠全脑缺血再灌注所致海马CA1区神经元损伤的作用机制

目的研究双苯氟嗪抗大鼠全脑缺血再灌注损伤的作用机制。方法大鼠全脑缺血15 min再灌注3 d，再灌注开始后给予双苯氟嗪(20,40和80 mg·kg^-1,ig)。免疫组织化学方法观察Fas及Fas配体的分子定位，Western blotting和RT-PCR方法检测Fas，Fas配体，caspase 10 p20，caspase 8，I-κB-α和p-I-κB-α蛋白及mRNA表达。结果双苯氟嗪明显降低海马CA1区免疫阳性细胞数量及Fas，Fas配体，caspase 10 p20蛋白表达(P<0.01)，且呈剂量依赖性（20和40 mg·kg^-1组，r=0.92,P<0.01)；显著降低Fas及Fas配体mRNA表达(P<0.01)；caspase 8和I-κB-α蛋白表达在给药前后无显著变化(P>0.05)；未能检测出p-I-κB-α蛋白表达。结论双苯氟嗪通过抑制CD95分子启动的死亡信号转导通路发挥其抗脑缺血再灌注损伤作用；这一作用与转录因子NF-κB无关。     

二氮嗪预处理大鼠海马脑片抗缺氧无糖损伤作用与激活PKC-ERK1/2通路有关

目的观察二氮嗪预处理对大鼠海马脑片缺氧无糖(oxygenglucosedeprivation,OGD)损伤的作用及PKC、ERK1/2抑制剂对其的影响。方法建立大鼠海马脑片OGD损伤模型,分别以25、50、100μmol·L-1二氮嗪灌流海马脑片30min,或分别用mitoKATP通道、PKC、ERK1/2抑制剂5HD、chelerythrine、U0126灌流30min,再用二氮嗪(100μmol·L-1)预处理,观察OGD13min、复氧1h后顺向群峰电位(orthodromicpopulationspike,OPS)的变化。结果二氮嗪预处理组(50、100μmol·L-1)OPS消失时间明显延长,复氧供糖后OPS恢复良好;二氮嗪(100μmol·L-1)预处理抗OGD损伤作用可被5HD完全取消,可被chelerythrine或U0126部分取消。结论mitoKATP通道特异性开放剂二氮嗪预处理有抗海马脑片OGD损伤作用,该效应与激活PKCERK信号通路有关。