姜黄素对UMI-77诱导急性T淋巴细胞白血病细胞凋亡的影响及其相关机制研究

目的:探究姜黄素对Mcl-1小分子抑制剂UMI-77诱导的人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞凋亡的影响及其相关机制。方法:培养T-ALL细胞系Molt-4,用不同浓度的姜黄素和Mcl-1小分子抑制剂UMI-77分别处理细胞24 h, MTT法检测经不同浓度姜黄素和UMI-77分别处理后的细胞存活率;根据姜黄素和UMI-77的作用浓度,实验设置对照、姜黄素(20μmol/L姜黄素处理细胞)、UMI-77组(15μmol/L Mcl-1小分子抑制剂UMI-77处理细胞)和姜黄素+UMI-77(20μmol/L姜黄素加15μmol/L Mcl-1小分子抑制剂UMI-77处理细胞)共4组,MTT法检测细胞增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI双染法和TUNEL染色检测细胞的凋亡情况,DCFH-DA探针检测细胞活性氧,JC-1荧光探针检测线粒体膜电位,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白和Notch1信号通路相关蛋白的表达水平。结果:经过不同浓度的姜黄素和Mcl-1小分子抑制剂UMI-77处理Molt-4细胞后,细胞存活率降低(P<0.05);与对照组比较,姜黄素组和...     

三氧化二砷诱导套细胞淋巴瘤细胞株凋亡及机制研究

本研究旨在探讨三氧化二砷(ATO)诱导套细胞淋巴瘤(MCL)细胞株凋亡的效应及其机制。以不同浓度的ATO处理细胞,再通过MTT法检测细胞MCL细胞株(jeko-1,mino,JVM-2)增殖;用AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测jeko-1细胞的凋亡;用DiOC6(3)染色流式细胞术检测jeko-1细胞的线粒体跨膜电位丢失;用Western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)及凋亡相关蛋白MCL-1,BCL-2,PUMA,NOXA,cCaspase-3,cCaspase-9,cPARP在ATO处理前后的表达变化。结果表明:ATO抑制MCL细胞增殖,诱导MCL细胞凋亡,并且引起MCL细胞线粒体跨膜电位丢失,引起MCL-1,PUMA,cyclin D1蛋白表达水平降低,cPARP,cCaspase-3,cCaspase-9表达水平增加,不影响BCL-2,NOXA表达。结论:ATO能有效抑制MCL细胞增殖,诱导MCL细胞株凋亡,其中细胞凋亡的线粒体途径起着重要的作用。     

STI571诱导K562细胞凋亡机制研究

目的　研究格列卫 (Glivec ,STI5 71)诱导P2 10BCR/ABL(+)K5 6 2细胞凋亡机制。方法　采用Annexin Ⅴ /PI双染实验、DNA的PI染色、碘化二己基恶碳菁 (DiOC6 [3])染色、2 ,7 二氯荧光素二乙酸酯 (DCFH DA)染色及DNALadder等方法测定凋亡细胞。利用Westernblot实验分析K5 6 2细胞蛋白酪氨酸磷酸化水平 ,测定Bcl XL、caspase 3蛋白的表达并分别测定线粒体及胞浆部分的细胞色素C(cytoC)蛋白。结果　STI5 71可诱导K5 6 2细胞凋亡 ,出现DNA亚二倍体凋亡峰及DNALadder,线粒体跨膜电位及活性氧物质降低 ,P2 10BCR/ABL酪氨酸磷酸化水平降低 ,Bcl XL、蛋白减少 ,caspase 3蛋白前体活化降解出相对分子质量为 2 0× 10 3 亚单位 ,胞浆部分出现cytoC ,同时线粒体cytoC减少。结论　STI5 71可迅速使P2 10BCR/ABL酪氨酸磷酸化水平下降 ,线粒体cytoC胞浆转位介导的信号通路是STI5 71诱导K5 6 2细胞凋亡的途径之一 ,STI5 71是有效的基因靶向治疗剂     

α—黑素细胞刺激素诱导黑色素瘤细胞凋亡的作用

目的：研究α—黑素细胞刺激素对恶性黑色素瘤细胞凋亡特性的影响。方法：实验于2002—10／2004—05在解放军第二军医大学完成。采用流式细胞检测分析、电镜观察、DNA琼脂糖凝胶电泳方法检测α—黑素细胞刺激素作用后恶性黑色素瘤细胞的凋亡情况，应用电泳迁移改变分析方法检测NF-κB相对活性。结果：α—黑素细胞刺激素作用1，3，24h恶性黑色素瘤细胞NF—κB相对活性分别为91.2％，52％，31％；细胞凋亡率分别为14．9％，33．7％，46．7％，各组间差异均具有显著性意义(P&;lt;0．05)；α—黑素细胞刺激素作用24h组细胞的DNA琼脂糖凝胶电泳显示明显“梯状”条带。结论：α—黑素细胞刺激素能下调NF—κB的活性表达并诱导恶性黑色素瘤细胞的凋亡。     

人参皂苷Rg3抑制B16黑色素瘤生长和诱导凋亡的实验研究

目的观察人参皂苷Rg3抑制黑色素瘤生长和诱导其凋亡的作用并探讨其可能的作用机制。方法采用B16黑色素瘤实体瘤模型和TUNEL（TdT-mediated dUTP nick-end labeling）染色观察Rg3对黑色素瘤生长和诱导凋亡的作用，免疫荧光染色方法检测easpase-3的表达情况。结果实体瘤模型中，Rg3各组瘤重明显低于对照组（P〈0．01），并且TUNEL染色和easpase-3免疫荧光染色见Rg3各组细胞阳性率均高于对照组（P〈0．05）。结论Rg3抑制B16黑色素瘤生长，并且促进肿瘤细胞easpase-3的活化和表达，诱导肿瘤细胞凋亡。     

线粒体在细胞凋亡机制中的作用

细胞凋亡过程中许多重要事件的发生都与线粒体密切相关，本文就线粒体形态、通透性转换孔、膜电位的改变。细胞色素C（Cyt C）的释放，mtDNA的损伤以及Bcl-2基因家族对凋亡的调控在细胞凋亡机制中的作用作一综述。     

藤黄酸对K562细胞的凋亡诱导及其作用机制研究

本研究探讨藤黄酸（gambogi cacid,GA）对K562细胞的抑制作用及机制。以不同浓度的藤黄酸处理K562和K562／A02细胞;用四甲基偶氮唑盐（MTF）法检测GA对细胞增殖的影响;碘化丙啶（PI）染色分析细胞周期;AnnexinV／PI双染法检测细胞的凋亡;JC-1染色法检测线粒体跨膜电位水平;流式细胞仪检测荧光素激活的caspase-3、caspase-8、caspase-9阳性细胞水平。结果显示：藤黄酸呈时间和浓度依赖性抑制K562细胞增殖。K562／A02细胞（GA〉2μg/ml）比K562细胞（GA〉0．5μg／ml）需要更高的藤黄酸浓度才显示增殖抑制作用。藤黄酸呈浓度依赖性诱导K562细胞凋亡。藤黄酸0、0．5、1．0、2．0μg／ml浓度对K562细胞周期未显示明显影响。藤黄酸作用后的K562细胞的线粒体跨膜电位明显降低。藤黄酸2μg/ml作用24小时激活的caspase3、caspase8、caspase9阳性细胞比例与对照相比分别上升2．19％、-1．95％、34．01％;作用48小时分别上升60．4％、71．3％、77．7％。结论：藤黄酸对K562细胞株有显著的抑制作用,该作用是通过诱导细胞凋亡实现的。藤黄酸不影响K562细胞的细胞周期。藤黄酸通过线粒体跨膜电位途径和胞浆激活途径诱导K562细胞的凋亡。     

硝普钠诱导K562细胞凋亡机制的研究

为了研究外源性一氧化氮供体硝普钠诱导K562细胞凋亡机制,将不同浓度的硝普钠与K562细胞在体外培养,同时设高铁氰化钾（PFC）对照组和空白对照.用Annexin-V/PI双标记、DNA片段原位末端标记法、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析等方法检测细胞凋亡;用Rh123/PI测定线粒体跨膜电位（△ψm）;以双氢罗丹明123（dihydrorhodamin123,DRH）和2′,7′-二氯双氢荧光素二乙酸酯（2′,7′-dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA）为荧光探针,测定线粒体内和细胞胞质内过氧化物;用流式细胞术测定线粒体膜蛋白和bcl-2、bax、bad、p53和Fas凋亡调控基因蛋白.结果表明：K562细胞经硝普钠作用后出现典型的细胞形态改变,DNA片段化,亚G1峰检出并显著增加,annexin-V/PI和DNA片段原位末端标记表达增加,这些结果均证实NO能诱导K562细胞凋亡,大部分细胞阻滞于G0/G1期.硝普钠诱导K562细胞凋亡过程中,胞质和线粒体内活性氧自由基增加,线粒体跨膜电位降低,bcl-2基因蛋白表达下调,同时bax、bad、p53、Fas和线粒体膜蛋白表达均上调.结论：NO诱导k562细胞凋亡是通过产生活性氧自由基,使p53基因表达增加,下调bcl-2基因和使bax、bad基因表达上调,线粒体膜通渗性转运孔开放,△ψm降低来实现的,此外还存在Fas系统激活途径.     

α-黑素细胞刺激素诱导黑色素瘤细胞凋亡的作用

目的:研究α-黑素细胞刺激素对恶性黑色素瘤细胞凋亡特性的影响。方法:实验于2002-10/2004-05在解放军第二军医大学完成。采用流式细胞检测分析、电镜观察、DNA琼脂糖凝胶电泳方法检测α-黑素细胞刺激素作用后恶性黑色素瘤细胞的凋亡情况,应用电泳迁移改变分析方法检测NF-κB相对活性。结果:α-黑素细胞刺激素作用1,3,24h恶性黑色素瘤细胞NF-κB相对活性分别为91.2%,52%,31%;细胞凋亡率分别为14.9%,33.7%,46.7%,各组间差异均具有显著性意义(P<0.05);α-黑素细胞刺激素作用24h组细胞的DNA琼脂糖凝胶电泳显示明显“梯状”条带。结论:α-黑素细胞刺激素能下调NF-κB的活性表达并诱导恶性黑色素瘤细胞的凋亡。     

薏苡仁诱导急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡及其机制

本研究探讨薏苡仁油对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞的增殖和凋亡效应及其作用机制。分别用0．4．0．8,1．6mg／ml的薏苡仁油作用Jurkat细胞24小时,用CCK法检测细胞增殖,应用Hoechst33258染色、PI及PI／AnnexinV染色后流式细胞仪来检测细胞凋亡,然后采用JC-1染色分析线粒体膜电位。结果表明：0．8和1．6mg／ml的薏苡仁油能显著抑制Jurkat细胞增殖;随着薏苡仁油浓度的增加,凋亡细胞数目增多,线粒体膜电位降低。结论：薏苡仁油对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞有明显的抗增殖和促凋亡作用,而且此效应与线粒体膜电位降低有关,本研究结果为临床应用薏苡仁油治疗白血病提供了实验依据。     

T-钙黏蛋白对B16F10黑素瘤细胞周期调节的研究

目的探讨T-钙黏蛋白对B16F10黑素瘤细胞周期的影响。方法应用脂质体LipofectamineTM2000将构建的pEGFP-N1-T-钙黏蛋白以及pEGFP-N1空载体转染至B16F10细胞,OPTI-MEM培养基体外培养6 h后RPMI-1640继续培养24 h,应用碘化丙啶标记,流式细胞仪检测T-钙黏蛋白对B16F10黑素瘤细胞周期的影响。结果转染T-钙黏蛋白组G0/G1期和G2/M期细胞比率分别为(60.917±1.897)%、(8.513±0.651)%,明显高于未转染组的(53.563±1.856)%、(2.627±0.434)%和pEGFP-N1空载体组的(53.880±2.164)%、(2.770±0.466)%,差异有显著性(P<0.05);转染T-钙黏蛋白组S期细胞比率为(30.570±1.368)%,低于未转染组的(43.810±2.003)%及pEGFP-N1空载体组的(43.350±2.629)%,差异有统计学意义(P<0.05)。未转染组与转染pEGFP-N1空载体组各期差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 T-钙黏蛋白使B16F10细胞G0/G1期和G2/M期比率增高,S期比率降低。     

细胞凋亡在烫伤鼠肺组织损伤中的作用及其机制的实验研究

目的 :探讨细胞凋亡在烫伤鼠肺组织损伤中的作用及基因调控机制 ,为进一步阐明烫伤鼠肺组织损伤机制和在细胞凋亡水平防治烧伤后脏器损伤提供理论依据。方法 :采用原位末端标记 (TUNEL)法及免疫组织化学技术观察烫伤鼠肺组织细胞凋亡及肺组织 Fas/Fas L、核因子κB(NFκB) /IκB和 Bcl 2基因表达、鼠烫伤后肺组织通透性及 VE 钙黏附分子表达 ;电镜扫描肺组织血管内皮细胞连接的变化。结果 :1烫伤鼠肺组织细胞发生凋亡 ,尤其是肺泡上皮细胞和肺血管内皮细胞凋亡增加明显 ;2烫伤鼠肺组织对 99锝标记的亚锡喷替白蛋白通透性明显增加 ,同时肺组织血管内皮细胞 VE 钙黏附分子表达下降 ,与肺组织细胞凋亡呈平行关系 ;3烫伤鼠肺组织 Fas/Fas L 表达明显上调 ,Bcl 2表达明显下调 ,Fas/Fas L 表达的增加与肺组织细胞凋亡增加呈平行关系 ;4NFκB/IκB的表达与 Fas/Fas L表达相一致 ;5电镜扫描见肺组织血管内皮细胞连接增宽。结论 :鼠烫伤后肺泡上皮和肺血管内皮细胞发生凋亡 ,细胞凋亡参与了烫伤鼠肺组织损伤、通透性增加及内皮细胞连接损伤的发生过程 ;鼠烫伤后肺组织 Fas/Fas L、NFκB/IκB和 Bcl 2系统活化 ,可能参与了烫伤后肺脏损伤的机制及肺组织细胞凋亡的信号转导     

黄芩苷诱导HL-60细胞凋亡的分子机制研究

本研究旨在探讨黄芩苷对急性髓系白血病HL-60细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制。CCK-8法检测黄芩苷对HL-60细胞增殖抑制情况;普通光学显微镜和Hoechst 33342染色后荧光显微镜下观察细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR方法检测凋亡相关基因caspase-3、caspase-9、Bcl-2、Bax mRNA表达;Westernblot检测Bcl-2、Bax、caspase-8及caspase-3剪切片段的蛋白表达。结果表明,黄芩苷对HL-60细胞具有明显的增殖抑制作用,呈浓度和时间依赖性;在光学显微镜和荧光显微镜下细胞均呈凋亡的形态学改变;AnnexinⅤ/PI法检测到细胞早期凋亡;caspase-3、caspase-9、Bax基因mRNA表达水平呈上升趋势,Bcl-2 mRNA表达水平呈下降趋势,Bax、caspase-8及capsase-3剪切片段蛋白表达上调,同时Bcl-2蛋白表达下调,Bcl-2/Bax比值降低。结论:黄芩苷显著抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与降低Bcl-2/Bax比值,激活线粒体凋亡途径及死亡受体途径有关。     

TRAIL联合药物诱导肿瘤细胞凋亡协同机制的研究

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（tumor necrosis factor-related apoptosis inducingligand,TRAIL）能选择性诱导肿瘤细胞和恶性转化细胞凋亡,对大多数正常细胞却无杀伤作用,被认为是一种非常具有发展潜力的抗肿瘤因子,近年已成为国内外研究的热点。许多学者发现在TRAIL联合各种药物作用于肿瘤细胞的过程中二者有协同效应,但不同药物与TRAIL协同诱导肿瘤细胞凋亡的机制各不相同。     

高能 X射线治疗脑功能性疾病的剂量及照射方式探索

目的探索高能X射线使小白鼠脑组织产生坏死和凋亡的致死剂量和照射方式.方法应用100Gy、150Gy高能X射线一次与分二次照射小鼠全脑.制作光镜、电镜标本.结果光镜下显示神经元细胞核固缩,星形细胞水肿.电镜下表现为神经元染色质凝聚、核固缩,星形细胞水肿等.胶质细胞和神经元出现凋亡变化.分二次照射(2次间隔24h)组,星形细胞水肿较轻.结论100Gy、150Gy高能X射线可使小鼠脑神经元细胞产生坏死和凋亡;分二次(2次间隔24h)照射,星形细胞水肿轻于一次照射组.     

lncRNA KCNQ1OT1靶向miR-760调控心肌细胞凋亡的作用机制

目的 探讨lncRNA KCNQ1OT1对缺血再灌注心肌细胞凋亡的作用机制.方法 采用H9c2细胞制备缺血再灌注模型,通过转染调控心肌细胞KCNQ1OT1和miR-760的表达,并随机分为对照组、模型组、阴性对照组、si KCNQ1OT1组和miRNA抑制剂组,以CCK-8检测KC-NQ1OT1对心肌细胞活力的影响,流...     

锌离子对脂多糖作用下大鼠腹膜间皮细胞凋亡的影响及机制

目的 研究锌离子对脂多糖（LPS）诱导的大鼠腹膜间皮细胞（RPMC）凋亡的影响及机制的探索,从而为锌离子在腹膜透析中的应用提供实验基础.方法 胰蛋白酶消化法培养原代大鼠腹膜间皮细胞、传代、经鉴定后分组：①对照组;②LPS组;③ZnSO4组;④ZnSO4/LPS组.应用AnnexinV-FITC凋亡检测试剂盒及流式细胞仪检测RPMC凋亡率,并采用Westen Blot方法检测细胞外信号调节激酶（P-ERK）,BAX,凋亡诱导因子（AIF）,天冬氨酸特异性半胧氨酸蛋白酶3（caspase3）,天冬氨酸特异性半胧氨酸蛋白酶9 （caspase9）蛋白表达.应用流式细胞术,采用活性氧自由基（ROS）检测试剂盒检测各组别的ROS蛋白表达情况.结果 与对照组相比,LPS组RPMC凋亡细胞数量和相关凋亡蛋白（BAX,AIF,caspase3,caspase9）表达升高（P＜0.01）.与LPS组相比,ZnSO4作用组RPMC凋亡细胞数量和相关凋亡蛋白表达明显降低（P＜0.01）.LPS组ROS显著高于对照组而ZnSO4作用组ROS显著低于LPS组（P＜0.01,P＜0.01）.与LPS组相比,ZnSO4作用组P-ERK的表达明显升高（P＜0.01）.结论 ZnSO4可能可以逆转LPS所致的RPMC凋亡,对腹膜透析相关腹膜炎过程中所导致的RPMC损伤具有保护作用,其作用机制可能是通过ERK通路而发挥作用.     

UbcH10基因沉默对多发性骨髓瘤U-1996细胞增殖和凋亡的作用研究

目的采用脂质体法转染siRNA的方法沉默多发性骨髓瘤U-1996细胞中的UbcH10基因,研究基因沉默后U-1996细胞增殖活性及凋亡等生物学特性的变化情况。方法根据UbcH10基因信息,设计针对UbcH10基因编码序列(CDS)区的siRNA序列。通过脂质体法转染相关siRNA序列至多发性骨髓瘤U-1996细胞。在转染siRNA后48h,采用实时定量聚合酶链反应及蛋白免疫印迹法检测U-1996细胞中UbcH10基因的mRNA和其蛋白水平。选取未转染siRNA序列的空白组和转染阴性siRNA序列组作为试验对照,采用CCK-8法检测转染siRNA序列后24、48、72hU-1996细胞的增殖情况,采用流式细胞术检测48h后U-1996细胞的凋亡情况。结果通过脂质体法成功转染构建siRNA序列至U-1996细胞。转染后的U-1996细胞中UbcH10基因的mRNA及蛋白表达情况较转染前均明显下降,差异有统计学意义(P0.05)。和对照组相比,沉默UbcH10基因后U-1996细胞的增殖活性下降,差异有统计学意义(P0.05),细胞凋亡率上升,差异也有统计学意义(P0.05)。结论干扰UbcH10基因表达可显著抑制多发性骨髓瘤细胞的增殖活性并增加细胞凋亡。     

P53上游凋亡调节蛋白在依托泊苷诱导直肠癌细胞凋亡中作用机制的研究

目的 研究P53上游凋亡调节蛋白(PUMA)在直肠癌细胞HCT116中的表达及其关联性作用机制.方法 应用依托泊苷诱导直肠癌细胞HCT116,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、流式细胞仪测定依托泊苷作用前后细胞HCT116的凋亡情况;蛋白印迹法(Western blot)测定PUMA、P53蛋白的表达水平.结果 依托...     

细胞周期蛋白D2的RNA干扰质粒转染对骨髓瘤细胞系LP-1细胞增殖和凋亡的影响

目的构建细胞周期蛋白 D2(CCND2)的短发夹 RNA 表达质粒,并观察对骨髓瘤细胞系 LP-1细胞增殖和凋亡的影响:方法设计、合成 CCND2短发夹 RNA 双链 DNA 模板,构建表达质粒 pGenesil-2/CCND2,转染 LP-1细胞,以 RT-PCR 检测对 CCND2表达的抑制作用,以锥虫蓝染色计数和 MTF 检测细胞增殖,以 Annexin V 检测细胞凋亡,流式细胞术榆测细胞周期。结果质粒 pGenesil-2/CCND2转染 LP-1细胞.转染率为34.2%,可以明显抑制 CCND2的表达,细胞增殖明显受抑制,72h后细胞凋亡率为(25.7+4.8)%。结论抑制 CCND2的表达可以抑制骨髓瘤细胞生长,并诱发骨髓瘤细胞的凋亡,可能是潜在的治疗靶点。