脂多糖诱导小鼠内皮损伤早期内皮细胞表型的变化

目的观察脂多糖(LPS)诱导血管内皮细胞损伤早期内皮细胞表型的变化。方法 LPS刺激后采用流式细胞术检测外周血也中内皮细胞表达型CD62P+、CD62P+CD62E+改变。结果 LPS刺激后致使LPS组别小鼠血管内皮完整性受损,脱落内皮细胞CD62P+、CD62P+CD62E+比例明显高于对照组(P<0.05)。结论 LPS损伤血管内膜早期的重要特征是脱落内皮细胞CD62P+、CD62P+CD62E+的高表达状态。     

滋肾通络方对胶原性关节炎小鼠Th17/Treg细胞分化及平衡的影响

目的观察滋肾通络方(ZTF)对胶原性关节炎(CIA)小鼠Th17/Treg细胞分化平衡的影响,探讨其治疗类风湿关节炎的机制。方法 DBA/1小鼠随机分为正常对照组、模型组和ZTF组(8.4 g生药·kg~(-1)),造模21 d后每日灌胃给药,连续4周。检测关节炎指数、关节病理改变、血浆IL-10和IL-17水平、外周血和脾脏Th17/Treg细胞比例、CD4~+T细胞IL-10、IL-17 mRNA水平。结果 CIA小鼠踝关节病变明显,血浆IL-17水平、外周血和脾脏Th17细胞比例、CD4~+T细胞IL-17 mRNA表达明显升高;血浆IL-10水平、外周血和脾脏Treg细胞比例、CD4~+T细胞IL-10 mRNA表达明显降低。ZTF能明显减轻CIA小鼠关节病变,降低血浆IL-17水平、外周血和脾脏Th17细胞比例、CD4~+T细胞IL-17 mRNA表达;升高血浆IL-10水平、外周血和脾脏Treg细胞比例、CD4~+T细胞IL-10 mRNA水平。结论 CIA小鼠存在Th17/Treg细胞失平衡,ZTF可调节Th17/Treg细胞比例,重构Th17/Treg细胞平衡,调节相关细胞因子释放,这可能是ZTF治疗类风湿关节炎的机制之一。     

清络通痹颗粒对胶原性关节炎大鼠T细胞亚群及滑膜细胞的影响

目的：观察清络通痹颗粒(QLT)对胶原性关节炎大鼠T细胞亚群及滑膜细胞TNF-α,IL-1的影响。方法：建立胶原性关节炎(CIA)大鼠模型,同时设正常对照组．给药自d 7始,持续21 d。采用流式细胞术、酶联免疫吸附(EuSA)法、RT-PCR技术,观察QLT对CIA大鼠外周血T细胞亚群及滑膜细胞分泌TNF-α,IL-1和TNF-αmRNA,IL-1 mRNA表达的影响。结果：QLT 14．4 g·kg~(-1)可明显升高CIA大鼠外周血CD4~+T细胞,降低CD8~+T细胞,升高CD4~+/CD8~+比值(P＜0．05,P＜0．01)；QLT 7．2和14．4 g·kg~(-1)降低滑膜细胞分泌TNF-α,IL-1(P＜0．05,P＜0．01)及TNF-αmRNA,IL-1 mRNA的表达。结论：QLT可调节CIA大鼠T细胞亚群的比例,减少炎性细胞因子的产生,提示这可能是其治疗类风湿关节炎主要作用机制的一个重要方面。     

非肥胖糖尿病小鼠调节性B细胞与其他免疫细胞的关系

目的 探讨非肥胖糖尿病(NOD)小鼠调节性B细胞(Breg细胞)与其他免疫细胞的关系.方法 45只NOD小鼠均分为A组(4周龄)、B组(8周龄)和C组(1型糖尿病小鼠)三组.HE染色观察小鼠胰腺组织形态.流式细胞术检测三组小鼠脾脏调节性T细胞(Treg细胞)(CD4+CD25+Foxp3+)、Th1 细胞(CD4+IFN-γ+)、Th17细胞(CD4+IL-17+)、B10细胞(CD19+CD5+CD1dhi B)和 IL-10+B 细胞(CD19+IL-10+)数量.结果 与A组比较,B组Th1细胞、Th17细胞、B10细胞和IL-10+B细胞增多,而C组Treg细胞减少,Th1细胞、Th17细胞、B10细胞、IL-10+B细胞、Th1/B10比例和Th17/B10比例增多(P＜0.05);与B组比较,C组Th1细胞、Th17细胞、Th1/B10比例和Th17/B10比例增多,而Treg细胞、B10细胞和IL-10+B细胞减少(P＜0.05).C组小鼠B10细胞数量与Th1细胞和Th17细胞数量呈负相关(r=-0.394、-0.472,P＜0.05),而与Treg细胞和IL-10+B细胞数量呈正相关(r=0.459、0.786,P＜0.05).结论 NOD小鼠存在Breg细胞与其他免疫细胞的免疫失衡,参与1型糖尿病的发生.     

消栓通脉颗粒逆转Th1／Th2亚群失衡治疗大鼠深静脉血栓

目的探讨Th1／Th2亚群失衡在大鼠深静脉血栓形成（DVT）中的作用及中药复方消栓通脉颗粒逆转Th1／Th2亚群失衡治疗DVT的作用机制。方法80只DVT大鼠随机分为消栓通脉颗粒组、DVT组、假手术组、正常组,分离大鼠脾脏单个核细胞,流式细胞术检测各组大鼠Thl亚群（CD4＋TNF—α）、Th2亚群（CD4＋IL-4＋）比例,ELISA法检测大鼠外周血TNF—α、IL-4水平。结果与正常组及假手术组比较,DVT大鼠脾脏Th1亚群比例显著升高（P=0．022）,Th2亚群比例显著降低（P=0．015）;血清TNF-α水平显著升高（P=0．005）;IL-4水平显著降低（P=0．012）。消栓通脉颗粒作用后,大鼠脾脏Thl亚群比例显著降低（P=0．008）,Th2亚群比例显著升高（P=0．011）,血清TNF-α水平降低（P=0．036）,IL-4水平升高（P=0．018）。结论Th1／Th2亚群失衡参与了大鼠DVT发病过程,消栓通脉颗粒诱导T细胞向Th2亚群偏移,抑制炎性因子表达进而减轻炎症反应,保护血管内皮细胞,促进血栓再通。     

多发性骨髓瘤患者外周血CD4~+T淋巴细胞亚群特点研究

目的研究多发性骨髓瘤(MM)患者外周血CD4+T淋巴细胞亚群特点。方法用流式细胞术检测30例MM初诊患者、20例治疗后患者及10名健康志愿者(对照组)外周血CD4+T淋巴细胞亚群,比较分析3组之间调节性T细胞(Treg)、辅助性T细胞(Th)1、Th17比例及Treg/Th17、Th1/Th17比值。结果初诊MM患者外周血Th17比例明显高于对照组,Treg、Th1比例及Treg/Th17、Th1/Th17比值明显低于对照组。治疗后患者Treg、Th1比例及Treg/Th17、Th1/Th17比值较治疗前明显提高,Th1及CD4+CD25+细胞比例基本恢复至对照组水平,CD4+Foxp3+细胞比例及Treg/Th17、Th1/Th17比值仍明显低于对照组。结论 MM患者外周血Th17细胞在初始T细胞的分化过程中取得了极化优势。治疗后Th17细胞极化优势现象明显改善,Th17细胞可能参与了MM的疾病进程。     

三七皂苷R1对LPS诱导的小鼠心肌损伤的保护作用

目的探讨三七皂苷R1(Notoginsenoside R1)对内毒素诱导的C57BL/6J小鼠心肌损伤的保护作用,阐明其抗心肌炎症的作用机制。方法 C57BL/6J小鼠预防性给予三七皂苷R1 3 d后,注射LPS(10 mg.kg-1,ip)建立急性内毒素心肌损伤模型。采用超声心动测定射血分数(EF),缩短分数(FS)等指标,观察小鼠心功能;采用免疫组化检测心室肌中ED-1+和CD11b+炎性细胞的浸润情况;Western blot检测IκBα和NF-κB p65的表达变化;应用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测心肌组织匀浆中TNF-α、IL-1β和VCAM-1、ICAM-1的表达水平。结果超声心动显示,与模型组(LPS组)相比三七皂苷R1能明显抑制LPS诱导的小鼠的左心室收缩功能减弱的情况;免疫组化可观察到R1有效抑制了ED-1+和CD11b+细胞的侵入;Western blot法显示R1对IκBα的降解具有抑制作用,同时对由此产生的NF-κB的活化也具有抑制作用;ELISA实验显示与模型组相比,R1明显降低了组织中TNF-α、IL-1β的浓度,抑制心肌组织中VCAM-1和ICAM-1的表达。结论三七皂苷R1对LPS引起的心肌炎症具有明显的抑制作用,能有效改善由此导致的心肌损伤。     

大鼠佐剂性关节炎病程不同阶段T细胞亚群及重要器官的病理学变化

目的观察大鼠佐剂性关节炎(adjuvant rheumatoid arthritis,AA)病程不同阶段的脾脏T细胞亚群及其重要器官的病理学变化,探讨病程不同的阶段AA大鼠T细胞亚群变化的规律及局部组织和全身重要器官的病理学变化特点。方法选用20只♂Lewis大鼠,完全弗氏佐剂(CFA)诱导AA模型,造模后d 7、d 10、d 13、d 16、d 19、d 22进行全身评分和关节炎指数评分,计算关节肿胀数。造模后d 14(炎症初期)、d 22(炎症高峰期)处死大鼠,流式细胞仪检测炎症初期和炎症高峰期脾脏总T细胞(CD3+CD4+)、记忆T细胞(CD4+CD44+)、未致敏T细胞(CD4+CD62L+)的细胞亚群和Th17(CD4+IL-17+)细胞亚群比例。d 22取心、肝、脾、肺、肾、踝关节、肠系膜淋巴结组织,光镜观察各组织的病理学改变。结果大鼠免疫后10 d出现继发侧足爪红肿,炎症初期(d 10~d 14)和炎症高峰期(d 19~d 22)AA大鼠的全身评分、关节炎指数评分和关节肿胀数有不同程度的增加。踝关节病理见滑膜组织增生、炎细胞浸润,血管翳出现等,且心、肝、脾、肺、肾、肠系膜淋巴结组织的病理也有不同程度的炎性变化。与正常组比较,炎症初期AA大鼠脾脏总T细胞、记忆T细胞和未致敏T细胞亚群比例都无明显变化、炎症高峰期AA大鼠脾脏总T细胞、记忆T细胞和未致敏T细胞亚群比例明显升高;Th17细胞亚群比例在炎症初期和高峰期都明显升高。结论 AA大鼠的T细胞亚群在炎症初期和高峰期出现不同的变化特点;在大鼠AA不仅有关节局部的病理表现,且全身主要脏器组织均有受累。     

类风湿关节炎发生发展中TNF-α信号通路与CD4~+T细胞的关系

CD4+T细胞各亚群在类风湿关节炎(RA)的发生发展过程中发挥不同的作用。其中,辅助性T细胞1(Th1)/Th2细胞、Th17/调节性T细胞(Treg)细胞比例的失衡及细胞因子白细胞介素-1(IL-1)、IL-2、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等产生的免疫损害,是导致RA慢性炎症的关键因素。TNF-α作为一种重要的促炎细胞因子在RA致病过程中起到了重要作用。TNF-α有两个受体,TNF受体1(TNF receptor 1,TNFR1)在大多数细胞上表达,而TNFR2仅在T细胞等免疫细胞上表达,调节T细胞的存活、活化和增殖。反之,T细胞对TNF-α信号通路也有影响。该文就RA的发病机制中TNF-α及其信号通路和CD4+T细胞各亚群功能的关系加以综述,为RA的防治提供新的思路。     

自身免疫性甲状腺炎小鼠发病中调节性T细胞、Th17细胞的变化

目的观察高碘诱发自身免疫性甲状腺炎(AIT)动物模型中CD4+CD25+调节性T细胞、Th17细胞的变化。方法选取NOD.H-2h4雌鼠饮0.005%碘化钠水,HE染色观察淋巴细胞浸润情况并进行甲状腺炎症程度评分;测定血清甲状腺球蛋白抗体(TgA b)水平;免疫荧光染色流式细胞仪分析CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞、Th17细胞比例的变化;实时定量RT-PCR检测Foxp3 mRNA、IL-17 mRNA、RORγt mRNA表达水平。结果 NOD.H-2h4小鼠高碘饮水后,甲状腺炎的发生率明显高于对照组,甲状腺组织有不同程度的淋巴细胞浸润,甲状腺相对重量及血清TgA b水平均较对照组小鼠明显升高(P<0.05)。脾细胞中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞所占比例和Foxp3 mRNA表达量均较对照组明显降低(P<0.01);脾细胞中Th17细胞所占比例和IL-17 mRNA表达量、RORγt mRNA表达水平均较对照组明显升高(P<0.05)。结论 NOD.H-2h4小鼠在高碘诱导发生甲状腺炎时,脾脏CD4+CD25+调节性T细胞比例明显降低,Th17细胞比例明显升高。     

Impact of small molecules immunosuppressants on p-glycoprotein activity and T-cell function

Purpose. P-glycoprotein (Pgp) is a member of the ABC-transporter family that transports substances across cellular membranes acting as an efflux pump extruding drugs out of the cells. Pgp plays a key role on the pharmacokinetics of several drugs. Herein, we have studied the effects of immunosuppressants on Pgp function, assessing rhodamine-123 (Rho123) uptake and efflux in different T-cell subsets. Methods. Different immunosuppressants such as Cyclosporine (CsA), Rapamycin (Rapa) and Tacrolimus (Tac) were used to assess the in vitro effect on Pgp function of main T-cell subsets among healthy volunteers. We measured Rho123 uptake, efflux and kinetic of extrusion in CD4+ and CD8+ subsets by flow cytometry. Antigen-specific memory T-cell responses were assessed by measuring T-cell proliferation and cytokine secretion using an allogeneic mixed lymphocyte reaction. Results. Rho123 uptake in groups treated with CsA and CsA+Rapa was significantly decreased compared to non-treated group and the other immunosupressants in both T cells subsets. Pgp activity was also reduced in CsA and CsA+Rapa compared to the other immunosupressants but it was only significant in the CsA group for CD8+ subset. Kinetic extrusion of Rho123 by Pgp in all groups was faster in CD8+ T cells. All immunosuppressants and the specific Pgp inhibitor PSC833 diminished antigen-primed T-cell proliferation, especially CD8+ T-cell subset. Conclusions. Our data indicate that small molecules immunosuppressants, especially CsA, inhibit Pgp activity and T-cell function being the CD8+ T cells more susceptible to this effect. These findings support the importance of Pgp when designing combined immunosuppressive regimens. This article is open to POST-PUBLICATION REVIEW. Registered readers (see "For Readers") may comment by clicking on ABSTRACT on the issue's contents page.     

左旋精氨酸通过上调Th1应答介导抗疟保护性免疫

目的探讨左旋精氨酸(L-Arginine,L-Arg)对致死型约氏疟原虫(Plasmodium yoelii 17XL,P.y17XL)感染BALB/c小鼠Th1免疫应答的调节效应。方法于P.y17XL感染前7天,连续每日给予BALB/c小鼠L-Arg(1.5 g.kg-1体质量)灌胃预处理;动态观察各组感染小鼠原虫血症水平和生存率;于感染后d 0、d 3和d 5分别提取小鼠脾细胞,流式细胞术检测BALB/c小鼠CD4+CD69+T细胞、F4/80+CD36+巨噬细胞数量;ELISA法检测脾细胞培养上清中IFN-γ的分泌水平,Griess反应检测脾细胞培养上清中NO含量。结果与NC组比较,L-Arg能够降低感染小鼠的原虫血症水平,延长生存时间。L-Arg组CD4+CD69+T细胞数量出现有意义的增加,IFN-γ分泌水平明显提高,F4/80+CD36+巨噬细胞数量出现明显升高,NO的分泌也明显增加。结论在感染早期L-Arg处理可诱导Th1免疫应答的有效建立,明显遏制P.y17XL感染早期红内期疟原虫的感染进程。     

NFATc1与OX40-OX40L在ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化中的表达及意义

目的 探讨活化T细胞核因子c1(NFATc1)与OX40-OX40配体(OX40L)在载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)中的表达及意义.方法 选取16只ApoE-/-小鼠作为手术组,应用颈动脉硅胶圈植入法快速制作斑块模型;另选16只C57BL/6J小鼠作为对照组.免疫组化检测颈动脉粥样斑块中NFATc1表达,RT-PCR和流式细胞术分别检测淋巴细胞NFATc1、OX40及OX40L mRNA和蛋白表达.结果 NFATc1在手术组颈动脉斑块中显著表达,而在对照组中不表达;手术组NFATc1、OX40、OX40L mRNA和蛋白表达均明显高于对照组(P＜0.01);ApoE-/-小鼠NFATc1与OX40、OX40L表达均呈正相关(r分别为0.938、0.964,P＜0.01).结论 NFATc1与OX40-OX40L在AS发生发展中发挥着重要作用,NFATc1可能是受OX40-OX40L调控的下游分子.     

视神经脊髓炎的T细胞亚型的分析

目的 探讨末梢血T细胞亚型在视神经脊髓炎及其临床分期中的特点及变化。方法 利用流式细胞仪测定并分析视神经脊髓炎和健康对照的末梢血巾CD4 记忆T细胞的表面受体。结果 与健康对照比较视神经脊髓炎及其复发期时的CD4 CD45RO CD62L-细胞显著增加。结论 在视神经脊髓炎是以I型辅助性T细胞反应占优势．在复发期这种反应的优势比缓解期要明显提高。同时也说明对T细胞亚型进行分析对神经系统自身免疫性疾病的诊断及治疗有一定的参考价值。     

急性乙型肝炎外周血淋巴细胞亚群动态分析

目的 探讨急性乙型肝炎(AHB)患者外周血免疫细胞包括T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞和自然杀伤(NK)细胞在疾病发展中的动态变化及其意义.方法 流式细胞技术检测17例AHB患者(AHB组)外周血淋巴细胞亚群动态变化和36例慢性乙型肝炎(CHB组)患者及32例正常对照组淋巴细胞亚群分布特点;动态检测AHB患者CD4~+/CD8~+变化,并探讨其与ALT改变及与HBVDNA清除的相关性.结果 AHB组人院4周内外周血CD3~+、CD4~+和CD8~+T细胞频率显著高于CHB组和对照组,NK细胞4周内均低于其余2组(P<0.05).AHB疾病早期ALT高水平异常时CD4~+/CD8~+明显低下;随着ALT恢复正常,CD4~+/CD8~+比值呈逐渐升高趋势.结论 AHB患者外周血免疫细胞的分布与对照组和CHB患者不同,淋巴细胞亚群的动态变化与疾病发展可能有一定的相关性.     

两种方法治疗复发性生殖器疱疹疗效及对细胞免疫功能的影响

目的 探讨两种方法治疗复发性生殖器疱疹(RGH)患者疗效及对T细胞亚群的影响.方法 64例RGH患者随机分为联合治疗组32例、对照组32例,对照组口服伐昔洛韦片治疗,联合治疗组除口服伐昔洛韦片外,还接受乌体林斯注射液治疗,观察两组的治疗效果,并检测治疗前后T细胞亚群情况.结果 联合治疗组治疗后RGH复发频率[(1.01±0.79)次/年]较对照组[(2.53±0.93)次/年]明显下降(P<0.01);联合治疗组治疗后CD+4T细胞数[(40.38±6.85)%]及CD+4/CD+8比值(1.59±0.50)均较对照组[(36.28±6.76)%,(1.28±0.49)%]明显升高(P<0.05),CD+8细胞数[(26.32±6.05)%]较对照组[(29.73±5.49)%]明显下降(P<0.05).结论 RGH患者存在细胞免疫功能异常,伐昔洛韦联合乌体林斯治疗RGH,可以增强细胞免疫,提高治疗效果.     

The risk of circulating angiogenic T cells and subsets in patients with systemic sclerosis

To ascertain the number and percentage of angiogenic T (Tang) cell subsets by flow cytometry in systemic sclerosis (SSc), and their relation with specific clinical features.Thirty SSc patients and 15 healthy controls (HCs) were included. Luminex was performed to analyze the levels of interleukin (IL)-17A, vascular endothelial growth factor (VEGF), tumor necrosis factor-α, and vascular cell adhesion molecule (VCAM). The ratio of circulating CD3 + CD31 + CXCR4 + T (CD3 + Tang) cells and CD8+ CD31 + CXCR4 + T (CD8+ Tang) cells in SSc patients was enlarger than in HCs, while CD4 + CD31 + CXCR4 + T cells (CD4 + Tang) exhibited no difference between SSc patients and HCs. The number and percentage of Tang cells were higher in SSc patients with pulmonary artery hypertension (PAH) than in non-PAH SSc patients and HCs. The ratios of Tang cell subsets in nucleolar pattern-positive SSc patients were markedly raised as compared with their negative ones and HCs. Additionally, the percentage of circulating CD3 + Tang cells was positively associated with VEGF serum levels in SSc patients. Meanwhile, the rate of CD8+ tang cells might have been emphatically corresponded to VEGF and VCAM serum levels in SSc patients. These results imply that the increase in Tang cells in peripheral blood are associated with immunoregulatory disturbances in SSc patients.     

胸腺肽-α1对肠结核患者免疫功能及临床疗效的影响

目的 观察肠结核患者用胸腺肽-α1治疗前后外周血T细胞亚群、NK细胞的变化.方法 66例肠结核患者在常规抗结核治疗基础上,加用胸腺肽-α1治疗,采用流式细胞术检测治疗前后外周血T细胞亚群及NK细胞的水平;62例常规抗结核治疗的肠结核患者作为对照组.结果 66例患者在治疗12,16周后,CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+检测值均较治疗前明显增高(P<0.05);NK细胞在治疗第8,12,16周均显著性增高(P<0.05);而对照组患者则治疗前后差异无显著性(P>0.05);且试验组临床疗效较好(P<0.05).结论 胸腺肽-α1能够显著改善肠结核患者的机体免疫功能状态.     

Acute immunotoxicity of p-chloronitrobenzene in mice: II. Effect of p-chloronitrobenzene on the immunophenotype of murine splenocytes determined by flow cytometry.

To evaluate the immunotoxicity of p-chloronitrobenzene (p-CNB), we investigated its effect on the immunophenotype of murine splenocytes. BDF1 male mice were randomly divided into exposed and control groups: the exposed group received p-CNB at 300 mg/kg dissolved in olive oil, while the control group received only olive oil, by a single intraperitoneal (i.p.) or subcutaneous (s.c.) injection. On days 3, 5, 7, and 10 after the injection, splenocytes were harvested from both groups, and the following cell phenotypes were quantified by flow cytometry: (1) B cells (CD45R/B220); (2) T cells (CD3e); (3) T-cell subsets (CD4 and CD8a); (4) natural killer (NK) cells (NK-1.1); (5) macrophages (CD11b; Mac-1); (6) nucleated erythrocytes (Ter-119); and (7) dead cells with propidium iodide (PI). The percentages and numbers of B, T, subsets of T (CD4 and CD8), and NK cells in the exposed mice significantly decreased as compared with the respective control. On the other hand, macrophages (Mac-1+ cells), nucleated erythrocytes (Ter-119+ cells), and dead cells in the exposed mice markedly increased as compared with the respective control after i.p. injection of p-CNB. The above findings indicate that p-CNB has an immunotoxic effect on mice.