联合基因治疗小型猪冠状动脉闭塞的实验研究

目的　探讨联合血管内皮生长因子 (VEGF)及促血管生成素 1(Ang 1)基因治疗小型猪冠脉闭塞的疗效。方法　在小型猪冠脉闭塞模型的心肌内注射质粒PCD2 /VEGF和 (或 )PCD2 /Ang 1,检测外源基因在心肌中的表达并观察其生物学作用。结果　逆转录 PCR及免疫组化染色均检测到外源基因的表达。转PCD2 /VEGF和 (或 )PCD2 /Ang 1基因治疗组毛细血管计数及小动脉计数均高于空载质粒对照组 (P <0 0 5 ) ,联合基因治疗组血管计数最高。冠状动脉造影证明联合基因治疗组促进闭塞冠脉侧支循环建立更为有效。结论　心肌内联合注射PCD2 /VEGF及PCD2 /Ang 1基因能够获得外源基因mRNA及蛋白的有效表达 ,与单基因治疗相比联合基因治疗能更有效地促进血管生成及侧支循环的建立。     

血管生成素2及CD105在急性心肌梗死大鼠中的表达及与梗死面积的关系探讨

目的建立急性心肌梗死大鼠模型,观察急性心肌梗死大鼠梗死边缘区心肌血管生成素2(Ang2)基因水平变化及新生血管标志物内皮糖蛋白抗体(CD105)基因水平变化,探讨其与急性心肌梗死大鼠梗死面积的关系。方法选取健康清洁级SD大鼠60只,随机分为假手术组、急性心肌梗死组(AMI组)、重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)组,每组20只。每组大鼠术后连续3d给予腹腔注射青霉素,之后每组大鼠再随机分为7d组和14d组,各10只,分别于术后第7天、第14天麻醉后取心脏,氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定心肌梗死面积,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定梗死边缘区心肌组织Ang2与CD105基因水平的表达变化。结果第7天、第14天rhG-CSF组Ang2基因表达水平较同时间AMI组升高(P<0.01),且第14天基因表达水平高于第7天(P<0.01);第7天、第14天rhG-CSF组和AMI组Ang2基因表达水平较同时间假手术组显著升高(P<0.05)。第7天、第14天rhG-CSF组CD105基因表达水平较AMI组升高(P<0.01);第7天、第14天rhG-CSF组和AMI组CD105基因表达水平较同时间假手术组显著升高(P<0.01)。TTC染色法检测结果显示:第7天、第14天rhG-CSF组心肌梗死面积均较同时间AMI组缩小(P<0.01)。结论Ang2与大鼠AMI后心肌梗死面积减小有一定的相关性,rhG-CSF可能通过增加Ang2及CD105表达证明与大鼠AMI后心肌梗死面积的减小有关。     

血管内皮生长因子165及血管生成素-1减小大鼠心肌梗死面积的研究

目的 在体条件下探讨血管内皮生长因子165(VEGF165)和血管生成素-1(angiopoietin-1，Ang1)对心脏缺血损伤的保护作用及其机制。方法 构建编码人VEGF165和Ang-全长基因的复制缺陷型腺病毒载体Ad—VEGF165和Ad—Ang1。结扎SD大鼠冠状动脉前降支，在缺血区周围心肌内注射Ad—VEGF165和(或)Ad—Angl，术后72h检测心脏组织中三磷酸肌醇激酶活性和抗凋亡因子Bcl-2表达水平；术后1周收取心脏，分析结扎区内梗死心肌的面积变化。结果 Ang-1和VEGF165单用组及两者联用组心肌梗死面积显著减小。其中，Ang-1单用组和两者联用组效果要好于VEGF165单用组。VEGF165和(或)Ang-1转染后，心肌内三磷酸肌醇激酶活性和Bcl-2表达水平均显著增高。结论 VEGF165和(或)Ang-1可激活心脏中三磷酸肌醇激酶并促进Bcl-2表达，减小心肌梗死面积，有明确的心脏保护作用。     

促血管生成素1和血管内皮生长因子基因合适剂量配比有效促进血管生成

目的在大鼠后肢缺血模型中,探讨联合转染促血管生成素1和血管内皮生长因子基因治疗对新生血管数量和侧支循环形成的影响,并观察不同基因剂量配比对新生血管形态和功能的影响。方法制备大鼠后肢血管闭塞病变模型,采用电脉冲法介导转基因,按不同剂量配比进行肌肉组织转染携带促血管生成素1基因的质粒和/或携带血管内皮生长因子基因的质粒。采用逆转录聚合酶链反应检测外源基因的表达、免疫组织化学染色检测缺血局部毛细血管和小动脉的数量和分布、通过后肢血管造影检测侧支循环建立的情况。结果单独转促血管生成素1基因或血管内皮生长因子基因治疗组血管生成数量略有增加,联合基因治疗组中,血管内皮生长因子质粒剂量为100μg时,随着促血管生成素1质粒剂量的增加,小动脉计数较同期空载质粒对照组分别增加0.90倍、1.40倍和1.45倍;当促血管生成素1质粒剂量为100μg时,随着血管内皮生长因子质粒剂量的增加,小动脉计数较同期空载质粒对照组分别增加1.90倍、1.07倍和1.39倍。血管通透性检测表明,随着血管内皮生长因子质粒剂量的增加,血管通透性渐增加,促血管生成素1质粒能降低新生血管的通透性;其中促血管生成素1质粒200μg联合血管内皮生长因子质粒100μg组在有效促进小动脉形成的同时血管通透性与正常对照组最为接近。结论联合血管生成素1和血管内皮细胞生长因子基因治疗能更有效促进小动脉形成,其中血管内皮生长因子质粒与促血管生成素1质粒比例为1:2时血管通透性最接近生理状态,是比较理想的联合基因治疗剂量配比。     

碱性成纤维细胞生长因子在鼠缺血心肌中表达及其促血管新生作用

目的 探讨腺病毒穿梭质粒介导的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因质粒在大鼠缺血心肌中的表达情况及其对缺血心肌血管新生、梗死面积的影响.方法 42只健康SD大鼠接受冠状动脉左前降支结扎术,存活30只,随后随机分为治疗组(n=15)和对照组(n=15),治疗组于心肌梗死区和正常区交界处局部注射100 μl bFGF基因(1 μg/μl),对照组以等体积生理盐水处理.4 w后观察红色荧光蛋白(RFP)和bFGF 表达情况.微血管计数和氯化三苯四氮唑(TTC)分别检测血管新生情况和梗死面积.结果 ①基因转染后4 w的心肌冰冻切片中均可见RFP表达;治疗组心肌组织bFGF mRNA表达水平较对照组明显增高[1.238±0.323 vs 0.771±0.102(P＜0.05)],仅在治疗组检测到bFGF 蛋白表达.②治疗组微血管密度明显高于对照组[141.13±17.65 vs 75.58±6.59/视野(P＜0.05)];治疗组梗死面积小于对照组[16.32±0.43 vs 17.00±0.57%(P＜0.05)].结论 重组bFGF裸质粒经心肌内直接注射后能有效表达并发挥促进梗死后心肌血管新生和缩小梗死面积的作用.     

急性心肌梗死后血管内皮细胞生长因子及碱性成纤维细胞生长因子表达动态变化

目的　以急性心肌梗死大鼠为模型,观察血管内皮细胞生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在心肌中的表达,探讨急性缺血缺氧刺激下VEGF和bFGF表达变化与新生血管形成的关系及意义。方法　建立Wistar大鼠急性心肌梗死模型,分为对照组和急性心肌梗死组( 3d ,7d ,1 4d ,2 8d ,4 2d ,56d)。免疫组化检测心肌细胞和内皮细胞中VEGF和bFGF的表达,Ⅷ因子相关抗原标记内皮细胞,检测新生毛细血管密度。结果　实验组心肌梗死后VEGF和bFGF产生量迅速增加,梗死区VEGF和bFGF的表达在梗死后第7天达高峰,2 8天开始下降,4 2天和56天时表达明显下降,新生毛细血管密度与两者产生量成正相关,与对照组比较差异有统计学意义。结论　在心肌梗死急性缺血期心肌细胞和内皮细胞能通过自身分泌VEGF和bFGF协同刺激血管内皮细胞增殖,促进血管形成,从而改善缺血心肌的血液供应。二者的表达在梗死后第7天达到最高峰,第2 8天时开始下降,为选择在表达消退期应用外源性VEGF和bFGF进行基因治疗提供了实验依据。     

促血管生成素1、2及Tie-2受体mRNA在肺腺癌中的表达

促血管生成素 1(Ang 1)、促血管生成素 2 (Ang 2 )及它们的内皮细胞特异性酪氨酸激酶受体 (Tie 2 )为肿瘤血管生成的重要调节因子[1] 。我们采用逆转录 多聚酶链反应 (RT PCR)结合计算机图像分析技术 ,对肺腺癌和癌旁肺组织Ang 1、Ang 2及Tie 2的mRNA的表达进行半定量分析 ,观察Ang 1、Ang 2及Tie 2在肺腺癌中表达水平 ,探讨 3者在肺腺癌肿瘤血管生成中的作用。材料与方法　病例来源及标本收集 :2 0 0 0年 1～ 10月 ,我院收治经手术切除病理证实肺腺癌 4 3例。男 2 8例 ,女 15例。年龄 35～ 70岁 ,平均年龄 5 6岁。临床分期 :Ⅰ期 1…     

电针干预高血压大鼠脑缺血血管内皮生长因子和促血管生成素1表达的研究

目的观察电针对易脑卒中型肾血管性高血压大鼠(RHRSP)脑缺血再灌注血管内皮生长因子(VEGF)、促血管生成素1(Ang 1)表达及血管新生的影响。方法用环形银夹钳夹SD大鼠的双侧肾动脉,制成RHRSP 120只,随机分为4组:空白组(12只),假手术组(12只)、模型组(48只)和电针组(48只),后2组大鼠再用线栓法制成一侧大脑中动脉闭塞模型,电针组给予"百会"、"大椎"穴位电针治疗,1次/d,14天。免疫组织化学法和光镜等技术观察脑缺血2 h后,再灌注1、7、14、28天大鼠脑内缺血区VEGF、Ang 1表达及缺血区微血管密度(MVD)的变化。结果与空白组和假手术组比较,模型组大鼠7、14、28天梗死灶周围VEGF和Ang 1的表达明显增强(P0.05);与模型组比较,电针组大鼠7、14、28天VEGF和Ang 1的表达均明显增强(P0.05),脑缺血14、28天缺血区及周围MVD明显增加(P0.05)。结论电针对RHRSP脑缺血再灌注损伤的保护作用,可能与增强梗死灶周围VEGF和Ang 1的表达,促进缺血区的血管新生有关。     

重组血管内皮生长因子_(165)腺相关病毒对心肌梗死大鼠心功能的影响

目的探讨直接心肌注射基因重组内皮生长因子_(165)腺相关病毒(rAAV-hVEGF_(165))对急性心肌梗死大鼠心功能的影响。方法选择雄性SD大鼠81只,将0.1 ml生理盐水或rAAV-hVEGF_(165)分3点注射于梗死交界处心肌内。根据注射药物的不同随机分为4组:假手术组(15只),心肌梗死组(25只),生理盐水组(25只),血管内皮生长因子(VEGF)组(16只)。注射4周后测定心肌组织VEGF含量、超声心动图参数、梗死面积、微血管数量、心钠素水平。结果 VEGF组大鼠心肌梗死面积较心肌梗死组和生理盐水组明显减小(P<0.05),左心室射血分数明显高于心肌梗死组和生理盐水组(P<0.01),心肌组织VEGF含量较心肌梗死组和生理盐水组有所增加。血管计数显示,VEGF组大鼠较其他3组有更多的新生血管形成(P<0.01)。结论直接心肌注射rAAV-hVEGF_(165)能够明显改善急性心肌梗死大鼠的心功能,缩小梗死面积,促进心肌内新血管的形成。     

血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂与心肌梗死后左室重构

急性心肌梗死（AMI）后左室重构（LVRM）是梗死后心肌组织结构和心室功能变化的病理生理过程,其影响梗死后患者的心脏血流动力学状态,并且是决定梗死后心脏事件发生率和远期预后的主要因素〔1,2〕。在AMI的药物治疗中,阿司匹林、β-受体阻滞剂、血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）已证明能够阻抑LVRM并降低病死率〔3〕。近年来,已有血管紧张素（Ang）Ⅱ受体拮抗剂逐渐应用于临床,但有关此类药物的大规模临床试验尚未进行,其对AMI后LVRM的影响尚未明了。 　　大规模临床试验已证实ACEI在治疗高血压、充血性心力衰竭、心肌梗死,防治心脏与血管的病理性重构及某些肾脏性疾病方面具有明显的效果。虽然ACEI可通过抑制AngⅡ的生成及缓激肽(BK)的降解阻抑LVRM,但由于ACEI不能抑制胃促胰酶等非血管紧张素转化酶途径转化AngⅠ为AngⅡ〔4〕,故在一定程度上削弱了ACEI的药理学效应。同时ACEI存在两个重要的副反应,即咳嗽和血管性水肿,这严重影响了患者服药的依从性,所以人们致力于寻找可完全阻断AngⅡ作用的药物,近年来,Ang Ⅱ受体拮抗剂问世并应用于临床,成为继ACEI后具有强大AngⅡ阻断效应的治疗心血管疾病的药物。 1　AngⅡ受体及其拮抗剂的作用机制 　　目前至少已发现了3种AngⅡ受体（AT）：AT1、AT2、AT3〔5,6〕。已知的AT1受体的作用包括：促平滑肌细胞收缩、醛固酮释放、儿茶酚胺释放、体液调节以及促进心室肌和动脉壁细胞的增殖肥大等〔7〕。而AT2受体似乎具有与AT1受体相反的调节功能。它的激活可产生血管舒张,抑制细胞生长分化,促尿钠排泄,并产生NO、前列腺素、缓激肽。但AT2受体仅在胎儿生长发育中表达,出生后,AT2受体表达即关闭。AT1受体拮抗剂通过与AT1受体上跨膜部位的氨基酸结合而阻止AngⅡ与受体结合,其对AT1受体具有高度亲和力、选择性和特异性,从而在受体水平阻断了AngⅡ的心血管效应〔8〕。与ACEI不同的是其在阻断AT1受体的同时刺激AT2受体的表达,从而激活AT2受体抗心肌和血管增殖的效应,故在药理学机制上AngⅡ受体拮抗剂较ACEI有更好的阻抑LVRM的作用。     

miR-126及VEGF在大鼠心肌梗死交界区表达的动态变化

目的 观察大鼠心肌梗死(MI)后MI交界区微小RNA-126(miR-126)及血管内皮生长因子（VEGF）表达的动态表达变化,初步探讨miR-126及VEGF对缺血局部血管新生的影响。方法 雄性SD大鼠结扎冠状动脉左前降支建立急性心肌梗死模型组(AMI组),另设假手术对照组(Sham组),每组30只。于术后7 d、14 d和28 d分别处死10只大鼠,进行MI面积百分比测定,实时荧光定量PCR法检测心梗交界区miR-126、VEGF mRNA表达水平,免疫组织化学方法检测各组大鼠MI交界区VEGF蛋白的表达。结果 Sham组术后7 d、14 d和28 d心肌组织 miR-126 mRNA和VEGF mRNA的表达均无明显区别,AMI组术后7 d、14 d和28 d,MI交界区mir-126 mRNA表达与相应的Sham组相比,均有不同程度的下降(P<0.01),而VEGF mRNA的表达则均有不同程度的增高(P<0.01);在AMI组,随着MI时间的延长,miR-126和VEGF mRNA的表达均逐渐升高,且在AMI 14 d达到高峰（P<0.05）。VEGF 的蛋白表达情况与其基因表达基本一致。结论 大鼠MI后VEGF mRNA及其蛋白的表达明显升高的同时伴随miR-126基因表达的降低,随着缺血时间延长,miR-126 mRNA表达有所恢复。     

血管形成素1基因转染治疗兔缺血性心肌梗死的实验研究

目的　利用兔心肌梗死模型 ,探讨心肌内直接注射血管形成素 1(Ang1)重组腺病毒对缺血性心脏病的治疗作用。　方法　 4 5只新西兰大白兔结扎冠状动脉 (冠脉 )制造心肌梗死模型 ,随机分为Ang1组、培养基 (DMEM )组与半乳糖苷酶基因 (LacZ)重组腺病毒组 ,心肌内分别直接注射Ang1重组腺病毒、DMEM和LacZ重组腺病毒。第 7、14、2 8d各组分别处死 5只 ,以观测心肌梗死及血管新生情况 ,术前及处死前行超声心动图检查。　结果　结扎冠脉后 7、14d ,Ang1组与LacZ组和DMEM组心肌梗死范围及新生毛细血管数差异均无显著性 ,术后 2 8d ,Ang1组心肌梗死范围显著小于LacZ组和DMEM组〔分别为 (9 1± 1 6 ) %对 (14 1± 2 2 ) %和 (13 8± 3 0 ) % ,P <0 0 1〕 ;而术后 14、2 8d新生毛细血管密度明显高于与LacZ组和DMEM组〔分别为 (10 0 7± 1 30 )个 /视野对(5 5 2± 1 0 9)个 /视野和 (5 73± 1 0 3)个 /视野 ,P <0 0 5及 (4 2 93± 6 35 )个 /视野对 (15 88±4 4 3)个 /视野和 (13 17± 1 2 9)个 /视野 ,P <0 0 1〕。心肌梗死发生 2 8d后各组的左室射血分数Ang1组改善幅度明显高于LacZ组和DMEM组〔分别为 (6 5± 6 ) %对 (4 0± 5 ) %和 (4 4± 5 ) % ,P <0 0 1〕。　结论　Ang1能促进兔实验性心肌梗死区     

环氧化酶在大鼠缺血心肌血管生成及内皮祖细胞动员中的作用

目的探讨环氧化酶（COX）1、2在缺血心肌血管生成和内皮祖细胞动员中的作用及机制。方法实验大鼠随机分为心肌缺血加选择性COX2抑制剂罗非昔布组、心肌缺血加选择性COX1抑制剂valeryl salicylate（VS）组和单纯心肌缺血组。心肌缺血组于术后1周取血浆测血管内皮生长因子（VEGF）,外周血分离单个核细胞培养计数内皮祖细胞和缺血心肌组织检测缺氧诱导因子-1α mRNA,28天后取缺血区心肌免疫组化法测毛细血管密度。结果心肌缺血加罗非昔布组与单纯心肌缺血组、心肌缺血加VS组比较,血浆VEGF水平、循环血内皮祖细胞计数、缺血心肌毛细血管密度和缺氧诱导因子-1α mRNA表达均显著减少（P〈0．05）,其余指标两组差异无统计学意义。结论COX2在心肌缺血时内皮祖细胞动员和缺血心肌血管生成中起重要作用,其可能机制与增加缺氧诱导因子-1α和VEGF的表达有关,而COX1没有作用。     

Effect of mini-tyrosyl-tRNA synthetase/mini-tryptophanyl-tRNA synthetase on ischemic angiogenesis in rats: proliferation and migration of endothelial cells

The purpose of this study was to determine the mechanism of mini-tyrosyl-tRNA synthetase/mini-tryptophanyl-tRNA synthetase (mini-TyrRS/mini-TrpRS) on ischemic angiogenesis in rats with acute myocardial infarction and proliferation, migration, potential signaling pathways of rat coronary venular endothelial cells (RCVECs). The effects of mini-TyrRS/mini-TrpRS on RCVECs proliferation were evaluated using the MTT colorimetric assay. Cell migration was assayed using a modified Boyden chamber technique. The potential involvement of Erk and PI3K signaling pathways was explored using selective chemical inhibitor or Western-blot analysis. Left coronary artery ligation was used to establish the model of acute myocardial infarction in rats (Sprague-Dawley male rats, 200-250 g, 2-3 months old), 20 μl of mini-TyrRS, mini-TrpRS, or PBS (vehicle) was injected subcutaneously every 12 h. The rats were randomly divided into four experimental groups: sham operated group; coronary artery ligation (CAL); CAL + mini-TyrRS (20 μl, twice daily, 600 μg kg(-1) day(-1)); and CAL + mini-TrpRS (20 μl, twice daily, 600 μg kg(-1) day(-1)). The experiment was carried out at four time points on the 3rd, 7th, 14th, and 28th day after ligation. To determine whether mini-TyrRS/mini-TrpRS affected the angiogenesis activity of rats with myocardial infarction, we measured the myocardial infarction size by TTC staining, and microvessel density (MVD) was determined by CD34 staining. The results show that proliferation and migration in RCVECs could be promoted by mini-TyrRS at concentrations of 1-100 μg/ml, and inhibited by mini-TrpRS. Phospho-PI3-kinase and Erk expression increased significantly when mini-TyrRS was added, but could be attenuated by mini-TrpRS. Compared to the CAL group, the myocardial infarction size of the mini-TyrRS group at the 3rd, 7th, 14th, and 28th day were decreased, while mini-TrpRS increased, but only in days 14 and 28 was there a significant difference. Except that, the microvessel density of RCVECs was promoted in mini-TyrRS group but inhibited in the mini-TrpRS group. These results indicated that angiogenesis could be either stimulated by mini-TyrRS or inhibited by mini-TrpRS.     

p38和CARP的表达与大鼠心肌梗死后心肌重塑的关系

目的探讨p38丝裂原激活的蛋白激酶（p38）和心锚重复蛋白（CARP）的表达与大鼠心肌梗死（MI）后心肌重塑的关系。方法结扎大鼠冠脉前降支致MI,术后2 h存活大鼠随机分为MI组、p38抑制剂SB203580组（SB组）和假手术组（Sham组）。测定各组第1、7和28天左心室质量指数（LVWI）、心肌细胞横切面面积（CSA）。RT-PCR法测定p38和CARP在心脏的表达。结果与Sham组相比,MI组LVWI和CSA在第7、28天时明显增加（P均〈0.05）,各时间点磷酸化p38（p-p38）表达均明显升高（P均〈0.05）,CARP在第1、7天时表达明显升高（P均〈0.05）。与MI组相比,SB组LVWI在第7天时明显降低（P〈0.01）;CSA在第1天时增大（P〈0.01）,第7、28天时明显缩小（P均〈0.01）;p-p38在第1天时表达降低,CARP在第7天表达降低（P〈0.01）。结论MI后早期p38和CARP即被激活,并促进随后心肌重塑的发展,抑制p38可以抑制CARP,改善心肌重塑。     

硝酸异山梨酯对大鼠缺血心肌血管新生的影响

目的观察硝酸异山梨酯对急性心肌梗死(AMI)大鼠缺血心肌组织形态、梗死面积及毛细血管新生的影响。方法Wistar大鼠90只建立AMI模型后,随机分为5组,分别为正常组,假手术组,模型组,硝酸异山梨酯低剂量组(IDL组)和硝酸异山梨酯高剂量组(IDH组),每组18只。大鼠饲养7、14天后各随机处死9只,截取心肌组织,进行光镜、电镜观察,利用NBT染色法测定心肌梗死面积,应用免疫组织化学法测定Ⅷ因子,进而计算缺血心肌微血管密度(MVD),通过RT-PCR技术检测血管内皮生长因子(VEGF)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因表达情况。结果光镜下观察,缺血区可见炎细胞浸润、心肌肿胀、梗死区纤维化。与模型组比较,IDL组和IDH组7、14天心肌梗死面积明显缩小,MVD明显增加(P<0.05);正常组、假手术组VEGF mRNA、bFGF mRNA表达有所减少,而IDH组则有所增加。结论硝酸异山梨酯可明显缩小AMI大鼠梗死面积,促进缺血心肌的毛细血管新生,对心肌缺血损伤具有保护作用。     

Reciprocal regulation of angiopoietin-1 and angiopoietin-2 following myocardial infarction in the rat

OBJECTIVE: This study sought to characterize changes in the angiopoietin system in a rat model of myocardial infarction (MI). BACKGROUND: Angiopoietin-1 (Ang-1) and angiopoietin-2 (Ang-2) bind to the endothelial-specific receptor tyrosine kinase, TIE-2. Ang-2 has been suggested to be an antagonist of TIE-2, possibly acting to release endothelial cells from the tonic stabilizing influence of Ang-1. However, on prolonged exposure, Ang-2 has been shown to acquire agonistic activity at TIE-2, raising the possibility that this isoform may play a direct role in neovascularization. METHODS: Sprague-Dawley rats were subjected to left coronary ligation and myocardial tissues were harvested from the infarct and peri-infarct regions, or from non-infarcted myocardium. Changes in gene expression were determined by RT-PCR and confirmed by Northern analysis. Changes in protein expression were confirmed by Western analysis and immunocytochemistry, and TIE-2 activity was determined by immunoprecipitation with anti-TIE-2 and antiphosphotyrosine immunoblotting. RESULTS: At 24 h, Ang-1 mRNA and protein expression within the infarct and peri-infarct regions were decreased compared to non-infarcted myocardium, whereas Ang-2 mRNA levels were markedly increased and TIE-2 expression was unchanged. Immunohistochemical staining revealed Ang-1 and TIE-2 immunoreactivity localized to vascular endothelium. In the infarct territory, Ang-2 immunostaining was localized primarily to invading leukocytes at 24 h. At 1 week, Ang-1 expression was partially restored, whereas Ang-2 expression remained elevated. At the time of peak elevation in Ang-2, Tie2 phosphorylation was found to be markedly increased, consistent with receptor activation. CONCLUSIONS: Thus, myocardial ischemia induced by left coronary artery ligation resulted in a sustained increase in Ang-2 expression and a reciprocal decrease in Ang-1, consistent with a predominant role for Ang-2 in the angiogenic response to MI.     

Biological action of angiopoietin-2 in a fibrin matrix model of angiogenesis is associated with activation of Tie2

The endothelial cell (EC) specific tyrosine kinase receptor, Tie2, interacts with at least two ligands, angiopoietin-1 (Ang1) and angiopoietin-2 (Ang2). Ang1 stimulates Tie2 receptor autophosphorylation, while Ang2 has been reported to inhibit Ang1-induced Tie2 receptor autophosphorylation. We studied the effects of Ang1 and Ang2 in an in vitro model of angiogenesis. Human ECs (HUVEC), cultured on 3-D fibrin matrices, were treated with conditioned media (CM) from stably transfected cells expressing human Ang1 or Ang2, or with purified recombinant proteins. EC tube formation was measured as a differentiation index (DI), calculated as the ratio of total tube length over residual of EC monolayer. CM from Ang1 overexpressing A10 SMC or HEK293T cells induced profound HUVEC differentiation, resulting in the formation of extensive capillary-like tubes within 48 h (DI: 24.58+/-5.91 and 19.13+/-7.86, respectively) vs. control (DI: 2.73+/-1.68 and 2.15+/-1.45, respectively, both P<0.001). Interestingly, CM from two independent cell lines overexpressing Ang2 also produced a significant increase in EC differentiation (DI: 9.22+/-3.00 and 9.72+/-4.84, both P<0.005 vs. control) although the degree of angiogenesis was significantly less then that seen with Ang1. Addition of Ang1* (a genetically engineered variant of naturally occurring Ang1) or Ang2 also resulted in dose dependent increases in DI, which were blocked by an excess of soluble Tie2 receptor (20 microg/ml). Both Ang1* and Ang2 induced modest increases in [3H]thymidine incorporation into HUVECs (20 and 26%, respectively), which were inhibited by excess soluble Tie2. Although Ang2 was unable to induce significant Tie2 receptor phosphorylation during a 5-min exposure, a 24-h pretreatment with Ang2, followed by brief re-exposure, produced Tie2 phosphorylation in HUVEC comparable to that produced by Ang1*. These results demonstrate for the first time that Ang2 may have a direct role in stimulating Tie2 receptor signaling and inducing in vitro angiogenesis. Our findings suggest that the physiological role of Ang2 is more complex than previously recognized: acting alternately to promote or blunt Tie2 receptor signaling in endothelial cells, depending on local conditions.     

基质金属蛋白酶及抑制剂在心肌梗死后心室重构中的作用

目的　研究大鼠心肌梗死后外源性基质金属蛋白酶抑制剂 (多西环素 ,Doxycycline)在心室重构中的作用。方法　 70只SD大鼠随机分为对照组 (10只 )、手术对照组 (9只 )、心肌梗死后 1天组 (10只 )、心肌梗死后 1周组 (10只 )、心肌梗死后 2周组 (8只 )、心肌梗死后 4周组 (7只 )、治疗 2周组 (8只 )和治疗 4周组 (8只 ) ,采用免疫组织化学、酶谱法、免疫印迹 (WesternBlotting)、逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)和AcusonSequoia 5 12超声心动图仪分别测定胶原含量 ,Ⅰ Ⅲ胶原比例、基质金属蛋白酶 2 ,9(MMP 2 ,9)蛋白和mRNA的变化规律及心功能。结果　多西环素治疗后 ,胶原含量明显减少 ,Ⅰ Ⅲ胶原比例下降得以改善 (P <0 .0 5 ) ,MMP 2 ,9蛋白和mRNA在心肌梗死后活性减少 ,基质金属蛋白酶组织抑制剂 1蛋白含量和mRNA转录无明显变化 ,治疗组心功能在术后 4周得以改善。结论　多西环素治疗后MMP 2 ,9的mRNA转录减少 ,MMP 2 ,9活性降低 ,胶原含量减少 ,Ⅰ Ⅲ胶原比例恢复 ,这些影响可能是其改善心肌梗死后心室重构的机制之一。