抗HIV药物胆固醇基磷酰齐多夫定自组装体的体外药效学评价

目的考察胆固醇基磷酰齐多夫定(CPZ)自组装体的体外抗人免疫缺陷病毒(HIV)作用,为其治疗艾滋病提供实验依据。方法制备CPZ自组装体,以HIV-1感染的MT4细胞为实验模型,以合胞体产生为评价指标,与原药齐多夫定(AZT)比较,考察CPZ自组装体的抗HIV作用。同时采用MTT法考察CPZ自组装体的细胞毒性。考察了RAW264.7细胞对CPZ自组装体的吞噬作用。结果 CPZ自组装体的抗HIV活性与AZT比较大大增强,其半数有效浓度(EC50)是AZT的1/10～1/50,选择系数较大,安全性高。结论 CPZ自组装体的抗HIV作用较强,有望成为治疗艾滋病新药。     

磷酰N-十四酰吉西他滨脂质衍生物自组装体的制备、性质和抗肿瘤作用

目的 制备磷酰N-十四酰吉西他滨（CPTG）脂质衍生物自组装体并考察其性质和抗肿瘤作用.方法 合成CPTG脂质衍生物,用Langmuir膜天平考察该前药分子成膜性,用注入法制备自组装体,通过透射电镜观察形态,用纳米激光粒度仪测定粒径,用HepG2细胞模型和荷瘤小鼠模型考察其药效学.结果 以吉西他滨为原料合成得到CPTG.水/空气界面上的表面压-分子面积曲线显示前药分子呈两亲性,成膜性好.前药自组装体呈囊泡状,粒径为93.52 nm,Zeta电位为-31mV.前药自组装体与原药吉西他滨相比,对HepG2细胞和H22实体瘤抑制作用显著.结论 CPTG脂质衍生物自组装体为肝癌靶向治疗提供了一种新方法.     

HPLC测定健康人体内齐多夫定的浓度及药动学研究

目的 建立HPLC-紫外检测方法测定健康人体中齐多夫定含量的方法,并用该法研究齐多夫定在健康人体内的药动学.方法 色谱柱为Symmetry C18(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为水-乙腈(75∶25),检测波长265 nm.以替硝唑为内标,血样以固相萃取法进行预处理.结果 血浆样品线性范围20～4 000 μg·L-1(r=0.999 9),血浆样品萃取回收率均在90%以上,日内、日间的RSD皆小于3%.应用该法研究12名健康受试者po 400 mg齐多夫定胶囊后的药动学,其体内过程符合二室模型,其药动学参数为:tmax为(0.73±0.13)h,ρmax为(2 234.50±853.87)μg·L-1,用梯形法计算所得的AUC0-t为(3 358.75±572.97)μg·h·L-1,t1/2β为(1.43±0.49)h.结论 此方法准确,灵敏,适于药物分析,其药动学参数为临床合理用药提供理论依据.     

齐多夫定片剂人体生物等效性研究

目的:研究齐多夫定片剂与胶囊在健康人体的生物等效性。方法:20名健康志愿者采用双周期交叉试验,单剂量空腹口服齐多夫定片剂和胶囊剂各300mg,HPLC法测定其血清中齐多夫定浓度,血药浓度-时间数据经DAS2.0统计软件处理,计算主要药代动力学参数,并进行两种制剂的生物等效性评价。结果:齐多夫定片剂与胶囊的主要药代动力学参数分别为:t_1/2(0.909±0.308)h和(0.987±0.234)h、C_max(1.723±0.870)μg/ml和(1.457±0.578)μg/ml、T_max(0.90±0.69)h和(0.80±0.41)h、AUC_0-8h(2.302±0.503)μg·h-1·ml-1和(2.361±0.567)μg·h-1·ml-1。片剂与胶囊比较相对生物利用度为(100.8±25.8)%。结论:齐多夫定片剂与胶囊具有生物等效性。     

齐多夫定加拉米夫定加奈韦拉平组合抗病毒治疗对血糖血脂的影响及疗效观察

目的:探讨齐多夫定加拉米夫定加奈韦拉平组合抗病毒治疗对血糖血脂的影响和疗效观察。方法:选择艾滋病患者60例,根据随机抽签原则分为治疗组与对照组各30例。对照组给予齐多夫定加拉米夫定加依非韦伦治疗,治疗组给予齐多夫定加拉米夫定加奈韦拉平组合抗病毒治疗。结果:对照组出现血糖异常3例,血脂升高4例,发生率为23.3%;而治疗组只出现血糖异常与血脂升高各1例,发生率为6.7%。治疗组的不良反应发生率明显低于对照组(P<0.05)。结论:齐多夫定加拉米夫定加奈韦拉平组合抗病毒治疗艾滋病有很好的治疗效果,且对血糖血脂无明显影响,值得推广应用。     

透明质酸修饰天冬酰胺酶自组装仿生纳米囊的稳定性及其体内药代动力学

考察了透明质酸修饰的天冬酰胺酶(asparaginase,Asp)自组装仿生纳米囊(hyaluronic acid-modified asparaginase self-assembled bionic nanocapsules,ASNCs)的稳定性及药代动力学特性。使用分子自组装法制备ASNCs,考察其形态、粒径、Zeta电位和抗胰蛋白酶稳定性。大鼠静脉注射给予游离Asp和ASNCs后,取不同时间点下大鼠血浆样品测定Asp的活性。采用DAS药代动力学软件计算药代动力学参数。实验测定ASNCs的粒径为(99.17±0.21)nm,电位为-(13.13±0.60)mV。在胰蛋白酶溶液中,ASNCs表现出更优异的稳定性。ASNCs的活性-时间曲线下面积AUC_{0-48 h}与天冬酰胺酶相比约提高了2倍,平均滞留时间MRT_{0-48 h}约为Asp的1.7倍,生物利用度为Asp的195%。研究结果表明,透明质酸修饰的天冬酰胺酶自组装仿生纳米囊能提高天冬酰胺酶抗胰蛋白酶稳定性及生物利用度,延长了Asp在体内的循环时间。     

齐多夫定对小鼠糖脂代谢平衡的影响及作用机制

研究核苷类抗病毒药物齐多夫定（zidovudine,AZT）对小鼠整体代谢及肝脏糖脂代谢平衡的影响。雄性ICR小鼠连续灌胃齐多夫定12周，每天记录小鼠的饮水量及摄食量。检测给药12周后不同禁食时间血清葡萄糖（GLU）、甘油三酯（TG）水平以及血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）水平，进行糖耐量实验（OGTT）和胰岛素耐量实验（ITT）;HE染色观察肝脏病理学变化；RT-PCR检测葡萄糖转运蛋白（Glut2）、肉碱棕榈酸转移酶（Cpt1α）、中链酰基辅酶A脱氢酶（Mcad）以及磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（Pepck）、葡萄糖-6-磷酸酶（G6pase）的基因水平；Western blot检测肝脏胰岛素信号Akt、P-Akt及Glut2、Mcad、Cpt1α的蛋白水平。结果显示，齐多夫定导致禁食后脂代谢能力显著下降，糖耐量受损，肝细胞体积增大，显著增加肝脏TG、非酯化脂肪酸（NEFA）含量，提高Glut2基因表达，下调脂肪酸氧化代谢基因Cpt1α、Mcad和糖异生相关基因水平，以及下调Cpt1α的蛋白表达。实验结果提示齐多夫定能够引起禁食后糖脂代谢紊乱，且呈一定的剂量依赖性。     

牛血清白蛋白对人肝微粒体UGT2B7代谢齐多夫定的影响

目的研究牛血清白蛋白对人肝微粒体尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(uridine-5’-diphosphate glucuronosyltransferase,UGT)2B7代谢活性的影响。方法采用差速离心法制备人肝微粒体,以齐多夫定(3’-叠氮-3’-脱氧胸苷)为探针,考察人肝微粒体孵育体系中UGT2B7代谢活性,采用反相高效液相色谱法测定齐多夫定及其代谢物浓度。孵育体系分为两组,分别为对照组和牛血清白蛋白组(含2%的牛血清白蛋白)。结果在两种人肝微粒体反应体系中,UGT2B7代谢齐多夫定的动力学行为均符合米曼式方程。对照组和牛血清白蛋白组齐多夫定的酶动力学参数如下:V_(max)分别为(1 359.0±135.8)和(1 268.4±300.1)pmol/(min·mg protein),K_m分别为(368.0±64.3)和(111.4±6.9)μM,CL_(int)分别为(3.7±0.4)和(11.4±2.7)μl/(min·mg protein)。与对照组相比,牛血清白蛋白组的K_m显著降低(P<0.05),CL_(int)明显升高(P<0.05)。结论牛血清白蛋白可显著影响人肝微粒体反应体系UGT2B7催化活性,使UGT2B7代谢齐多夫定的K_m降低、CL_(int)升高。     

葛根素前体脂质体的制备及体外性质研究

目的 制备葛根素前体脂质体,并对其体外性质进行研究.方法 采用载体沉积法制备葛根素前体脂质体,单因素考察和正交实验优选处方;透射电镜观察形态;马尔文激光粒度仪测定粒径、Zeta电位;透析法结合高效液相色谱法测定包封率;动态透析法考察体外释药性质.结果 制得的脂质体形态多为圆形或椭圆形,平均粒径为278 nm,Zeta电位为-17.5 mV,包封率为(43.53&#177;1.33)%,体外释药符合一级动力学方程.结论 葛根素前体脂质体包封率较高,具有一定的缓释效果.     

γ射线照射大鼠肝细胞内线粒体降解过程的超微酶细胞化学观察

采用电镜酶细胞化学方法观察了γ射线照射后大鼠肝细胞内自噬体的一系列变化特征，特别是线粒体的降解，及此过程中自噬体的形成和自噬体与溶酶体之间的相互关系，结果显示，照射后大鼠肝细胞产生大量自噬体，受体线粒体被自噬后，溶酶体参与其降解过程。     

比卡鲁胺片人体生物等效性研究

目的 研究国产比卡鲁胺片在健康人体的药代动力学特征,比较其与同规格进口片剂的生物等效性。方法 20名健康男性志愿者单剂量交叉口服两种比卡鲁胺片,在每次服药前,服药后1、3、4、6、9、12、16、20、24、28、32、36、40、48 h,3、7、14、21、28 d分别采集血样,用HPLC法测定血浆中药物浓度,用3P97软件拟合药代动力学参数,并用SAS软件进行等效性检验。结果 试验组口服国产比卡鲁胺片50 mg后,平均C_max为691.50 μg/L,平均T_max为20.65 h,平均AUC_0～∞为148 124 μg·h/L,平均消除半衰期为127.46 h;对照组口服进口比卡鲁胺片Casodex 50 mg后,平均C_max为697.30 μg·L^-1,平均T_max为24.10 h,平均AUC_0～∞为153 782 μg·h/L,平均消除半衰期为131.06 h。统计分析表明两种制剂生物等效,受试制剂与参比制剂的相对生物利用度为99.43%。结论 两种比卡鲁胺片剂具有生物等效性。     

2-芳基咪唑并［1，2-a］吡啶-3-乙酰胺衍生物的合成与抗焦虑活性研究

目的 寻找水溶性较好、抗焦虑活性较强的新型化合物。方法 设计合成2-芳基咪唑并［1,2-a］吡啶-3-乙酰胺类化合物,通过体外苯二氮卓受体竞争结合实验及小鼠高架迷宫行为实验,评价化合物的体内外抗焦虑活性,分析化合物的构效关系。结果与结论 共合成28个新型化合物,通过¹H-NMR和 MS确证其结构,其中I8和I10水溶性良好。苯二氮受体竞争结合实验结果表明,化合物Ⅰ₁、Ⅰ₈、Ⅰ₁₀ 、Ⅰ₁₃ 、Ⅰ₁₉ 与苯二氮卓受体的亲和力与阳性对照药物Ro5-4864相当,在浓度为100 nmol/L时,其对放射性配体与受体结合的抑制率分别为87%、89%、85%、89%和76%,而Ro5-4864为82%。对水溶性及活性均较好的化合物Ⅰ₈和Ⅰ₁₀ 进行小鼠抗焦虑活性评价结果表明,其具有明显的体内抗焦虑作用。     

Steady-state pharmacokinetics of zidovudine in Chinese HIV-infected patients

Background  The pharmacokinetics of zidovudine (AZT) are possibly influenced by weight, age, sex, liver and renal functions, severity of disease, and ethnicity. Currently, little information is available on the steady-state pharmacokinetics of AZT in Chinese HIV-infected patients. The current study aimed to characterize the steady-state pharmacokinetics of AZT in a Chinese set-up.

Methods  Eleven Chinese HIV-infected patients were involved in the steady-state pharmacokinetic study. In total, 300 mg of AZT, as a part of combination therapy, was given to patients, and serial blood samples were collected for 12 hours. The samples were measured by a high-performance liquid chromatography (HPLC) assay, and the results were analyzed by both the non-compartment model and the one-compartment model.

Results  The C_max of AZT in Chinese patients was higher than that in non-Asian patients. The half-life of AZT, analyzed by the non-compartment model (P=0.02), in male patients ((1.02±0.22) hours) was shorter than that of AZT in female patients ((1.55±0.29) hours). The AZT clearance, analyzed by the one-compartment model (P=0.045), in male patients ((262.60±28.13) L/h) was higher than that in female patients ((195.85±60.51) L/h).

Conclusion  The present study provides valuable information for the clinical practice of AZT-based highly active antiretroviral therapy in a Chinese set-up.

     

基于流化床顶喷技术的巴戟天寡糖胶囊成型工艺研究

目的 采用流化床顶喷制粒技术优化和建立中药巴戟天寡糖颗粒一次成型的工艺路线和工艺参数。方法 采用单因素考察法,设定流化床顶喷包衣锅的主要工艺参数范围,将巴戟天水提取物喷至一定量的微晶纤维素粉末上,制备巴戟天寡糖颗粒,并分别测定其休止角、抹角、松密度、轻敲密度、压缩度和均一度等,计算流动性指数和平均粒径。结果 当进风温度设定为40～45℃;进风压力设定为 0.35～0.45 bar;雾化压力设定为1.5～2.0 bar;喷液速率设定为15～25 r·min^-1范围时,制备的巴戟天寡糖颗粒可顺利灌装装量均一的胶囊。结论 该工艺使制剂一次成型,具有生产周期短、生产效率高、辅料用量小和产品成本低等优点,在中药制剂的成型工艺中值得推广应用。     

小鼠急性铊中毒半数致死剂量的测定

目的 测定硝酸亚铊急性中毒小鼠的半数致死剂量(median lethal dose,LD50).方法 130只小鼠随机分为13组,每组10只,雌雄各半,给小鼠经口灌入不同剂量的硝酸亚铊水溶液,观察并记录2周内各组小鼠症状、毒性反应及死亡情况,观察死亡小鼠肠道的组织病理学变化.以小鼠死亡率为指标,按改良寇氏法计算其LD5...     

枸杞多肽对D-半乳糖诱导小鼠的抗衰老作用及其可能机制

目的 研究枸杞多肽对D-半乳糖（D-gal）衰老模型小鼠的影响及其可能作用机制。方法 ICR小鼠60只,随机分为正常对照组、衰老模型组、 枸杞多肽200,400, 800 mg/（kg·d）剂量组和100 mg/（kg·d）维生素E（VitE）组。除正常组外均采用D-gal 10 mg/kg颈背部皮下注射,每日1次,连续注射5周,同时枸杞多肽和VitE组按20 ml/（kg·d）灌胃给药。观察各组小鼠的行为学及学习记忆改变,并于5周后检测小鼠血清、心脏、肝脏、脑组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量及端粒酶活性。结果 与正常对照组相比,衰老模型组小鼠体重增加明显减少,小鼠跳台错误次数明显增多,小鼠血清、心脏、肝脏和脑SOD和端粒酶活性降低,MDA含量增加（P<0.01）。与模型组相比,枸杞多肽组和VitE组小鼠体重增加升高（P<0.01）,小鼠跳台错误次数减少（P<0.05）,小鼠血清、心脏、肝脏和脑组织SOD活性升高,MDA含量减少（P<0.05）;枸杞多肽200 mg/(kg·d)剂量组及VitE组小鼠血清端粒酶活性有升高的趋势,但差异不显著;400和800 mg/(kg·d)剂量组小鼠血清和心脏端粒酶活性升高（P<0.01）,VitE组小鼠心脏端粒酶活性也明显升高;而各治疗组小鼠肝脏和脑组织端粒酶活性无明显变化。结论 枸杞多肽对D-gal诱导衰老模型小鼠有抗衰老作用,其机制可能与提高小鼠血清、心脏、肝脏和脑组织SOD活性,减少MDA含量,以及提高血清和心脏端粒酶活性有关。     

BACE1抑制剂分子水平高通量筛选体系的建立

目的 建立体外分子水平β?鄄分泌酶（BACE1）抑制剂高通量筛选体系。方法 采用均相时间分辨荧光法（HTRF）,通过优化反应时间、酶浓度、检测仪器等实验条件,建立BACE1抑制剂高通量筛选体系,根据待测样品对BACE1活性抑制程度筛选其抑制剂。结果 采用HTRF法建立了BACE1抑制剂高通量筛选体系,其中反应时间确定为6 h、BACE1浓度为670 U/L,采用VICTOR3酶标仪测得信噪比为649.6,信背比为44.6,Z′因子为0.91,变异系数小于10%,并筛选到一系列IC₅₀小于10^-6 mol/L的化合物。结论 采用HTRF法建立的BACE1抑制剂筛选体系灵敏度高、特异性和稳定性好,可用于BACE1抑制剂的高通量筛选。     

黄蜀葵花对肾病综合征模型大鼠肾小管损伤保护作用的研究

为探讨中药黄蜀葵花对肾病综合征肾小管损伤的保护作用 ,将每只实验大鼠静脉注射阿霉素 5mg/kg,同时饲以黄蜀葵花 ,观察其对大鼠尿Ⅲ型胶原、N 乙酰 β D 氨基葡萄糖苷酶 (NAG)、β2 微球蛋白 ( β2 MG)总排泄量的影响。结果 :阿霉素肾病模型大鼠尿Ⅲ型胶原、NAG、β2 MG水平均显著高于对照组 (P <0 .0 1 ) ,而黄蜀葵花治疗组的上述 3项指标与对照组相比无差异 ,且显著低于模型组 (P <0 .0 1 )。结果提示 :阿霉素肾病综合征模型大鼠存在肾小管间质损害 ,黄蜀葵花对其具有保护作用     

大鼠消化道平滑肌细胞KATP通道的牵张敏感性

目的探讨大鼠结肠平滑肌细胞上是否存在ATP敏感K+通道(ATP-sensitive potassium channel,KATP)及其牵张敏感性。方法用RT-PCR方法检测SD大鼠结肠平滑肌组织KATPmRNA的表达;联合应用单通道膜片钳技术和压力钳技术,采用inside-out模式记录大鼠结肠平滑肌细胞上KATP通道的电活动。结果在大鼠结肠平滑肌组织中可检测出较高水平的KATPmRNA的表达;用inside-out模式在大鼠结肠平滑肌上可记录到KATP通道的电活动,该通道在膜电位钳制电压为+60 mV时电导值为(44.5±1.5)pS。KATP通道特异性阻断剂——glibenclamide能抑制该通道的活动。且该KATP通道在负压刺激下开放概率增加。结论大鼠结肠平滑肌细胞上分布有KATP通道,该KATP通道对牵张刺激敏感。     

β_2肾上腺能受体与黏蛋白2在大鼠结肠黏膜的共存

目的探究去甲肾上腺素对大鼠结肠黏液分泌的影响以及肾上腺能β受体在大鼠结肠黏膜的分布。方法采用酶联免疫吸附测定法检测去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)对结肠黏液分泌的影响;用免疫荧光组织化学方法观察黏蛋白2(mucin2,MUC2)及β肾上腺能受体在结肠黏膜的分布;实时定量PCR方法检测β肾上腺能受体在大肠结肠黏膜的表达;同时采用阿利新蓝/过碘酸雪夫染色方法检测黏液细胞在结肠黏膜的分布;使用激光共聚焦显微镜观察β2肾上腺能受体与MUC2在结肠黏液细胞的共存。结果去甲肾上腺素可刺激大鼠远端结肠黏膜的黏液释放增加,比对照组增加约247%。免疫荧光组织化学结果显示β1和β3肾上腺能受体在结肠黏膜有弱表达,β2肾上腺能受体为高表达。β1和β2肾上腺能受体mRNA表达相对量与免疫荧光组织化学一致。黏蛋白MUC2主要表达在结肠隐窝的黏液细胞内,且与β2肾上腺能受体有共存。结论β2肾上腺能受体与MUC2在结肠黏液细胞共存;去甲肾上腺素可促进结肠黏液分泌。