CIK细胞对Lewis肺癌荷瘤鼠细胞因子水平影响的实验研究

目的观察CIK(cytokine induced killer)细胞的体外增殖和杀瘤活性及对Lewis肺癌小鼠脾细胞分泌的细胞因子浓度变化的影响。方法常规方法培养CIK细胞和LAK细胞,建立Lewis肺癌小鼠模型,给予CIK和LAK细胞治疗3周后,杀鼠取脾,用ELISA方法检测Lewis肺癌荷瘤小鼠脾细胞上清液中IL-2、IL-4、IFN-γ浓度,用MTT法测定TNF-α浓度。结果CIK细胞治疗的Lewis肺癌小鼠脾细胞培养上清液中细胞因子水平明显高于LAK组。结论CIK细胞对Lewis肺癌小鼠治疗有效,杀瘤活性强于LAK,CIK治疗组荷瘤鼠的细胞因子水平也高于LAK组。     

CIK对Lewis肺癌小鼠细胞因子水平影响的实验研究

目的 观察CIK(cytokine—induced killer)细胞的体外增殖和杀瘤活性及对Lewis肺癌小鼠脾细胞分泌细胞因子浓度变化的影响。方法 常规方法培养CIK和LAK细胞,建立Lewis肺癌小鼠模型,给予CIK和LAK细胞治疗3周后,杀鼠取脾,用ELISA方法分别测定C57小鼠脾细胞上清液的IL2、IL4、IFN-γ浓度,用MTT方法测定C57小鼠脾细胞上清液TNF-α浓度。结果 CIK治疗的Lewis肺癌小鼠脾细胞培养上清液细胞因子水平明显高于LAK组。结论 CIK细胞对Lewis肺癌小鼠治疗有效,杀瘤活性强于LAK,CIK治疗组荷瘤鼠的细胞因子水平也高于LAK组。     

细胞因子诱导的杀伤细胞对Lewis肺癌细胞的抑瘤作用及抑瘤机制的研究

目的观察细胞因子诱导的杀伤(cytokine induced killer,CIK)细胞对Lewis肺癌细胞增殖和Lewis肺癌移植瘤生长的抑制作用,探讨其抑瘤机制。方法常规方法培养CIK细胞,以CIK细胞为效应细胞,Lewis肺癌细胞为靶细胞,以不同效靶比共同培养,MTT法检测细胞增殖情况,同时电镜观察Lewis肺癌细胞形态特征改变;流式细胞仪检测Lewis肺癌细胞的凋亡;免疫细胞化学法检测并比较FasL在单个核细胞和CIK细胞表面的表达;用MTT法检测抗FasL单克隆抗体对CIK细胞杀伤Lewis肺癌细胞的影响;用ELISA方法检测Lewis肺癌荷瘤小鼠脾细胞上清液中IL-2、IL-4、IFN-γ和TNF-α浓度。结果电镜观察:CIK细胞能促进Lewis肺癌细胞凋亡超微结构的改变;流式细胞仪检测:CIK细胞组凋亡率明显高于对照组;FasL在CIK细胞表达增加;抗Fas单抗可抑制CIK杀伤Lewis肺癌细胞的活性;CIK细胞治疗的Lewis肺癌小鼠脾细胞培养上清液中细胞因子水平明显高于对照组。结论CIK细胞可在体内及体外抑制Lewis肺癌细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡,Fas/FasL途径在其中发挥一定作用,同时CIK细胞抗肿瘤作用可能与淋巴细胞活化和分泌细胞因子有关。     

CIK细胞对S180及H—22抑瘤作用的实验比较

目的：观察CIK（cytokine induced killer)细胞对S180和H－22荷瘤鼠的抑制肿瘤作用。方法；建立S180和H－22荷瘤鼠动物模型，静脉输入CIK细胞做抗肿瘤治疗。同时设LAK对照，用同位素法检测经治疗后荷瘤鼠T细胞增殖及NK细胞毒活性。结果：CIK细胞对S180和H－22荷瘤鼠的抗肿瘤作用显著强于LAK细胞。结论：CIK细胞对S180和H－22荷瘤鼠有明显的抗肿瘤作用，并且优于LAK细胞。     

CIK细胞对S180及H-22抑瘤作用的实验比较

目的观察CIK(cytokine induced killer)细胞对S180和H-22荷瘤鼠的抑制肿瘤作用。方法建立S180和H-22荷瘤鼠动物模型,静脉输入CIK细胞做抗肿瘤治疗,同时设LAK对照,用同位素法检测经治疗后荷瘤鼠T细胞增殖及NK细胞毒活性。结果 CIK细胞对S180和H-22荷瘤鼠的抗肿瘤作用显著强于LAK细胞。结论 CIK细胞对S180和H-22荷瘤鼠有明显的抗肿瘤作用,并且优于LAK细胞。     

MTT法检测CIK细胞的体外杀瘤活性

目的：观察CIK（cytokine induced killer)细胞的体外杀瘤活性。方法：以LAK（lympho kine activated killer) 细胞作对比，用MTT法测定并比较CIK细胞与LAK细胞的体外杀瘤活性。结果：CIK细胞的体外杀瘤活性明显优于LAK细胞，杀伤率分别为29％和15％，结论：CIK细胞是一种具有较强杀伤活性的免疫效应细胞，有可能用于抗肿瘤的生物治疗。     

CIK细胞对Lewis肺癌细胞凋亡作用的影响

目的观察CIK(cytokine induced killer)细胞对Lewis肺癌细胞增殖的抑制作用,探讨其抑瘤机制。方法常规方法培养CIK细胞,以CIK细胞为效应细胞,Lewis肺癌细胞为靶细胞,检测Lewis肺癌细胞的凋亡情况。结果电镜观察CIK细胞能促进Lewis肺癌细胞凋亡超微结构的改变;流式细胞仪检测CIK细胞组凋亡率明显高于对照组。结论CIK细胞可在体内及体外抑制Lewis肺癌细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡。     

CIK细胞的制作及对不同肿瘤细胞株体外抗肿瘤作用的研究

目的:制备细胞因子激活杀伤(CIK)细胞并观察其生物学特性及对不同肿瘤细胞株的杀伤作用.方法:外周血单个核细胞用无血清培养基经干扰素γ(IFN-γ),CD3McAb,白介素2(IL-2),白介素1α(IL-1α)诱导,制作CIK细胞,以淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)作为对照,流式细胞仪检测CIK细胞的免疫表型,MTT法检测其对不同肿瘤细胞株的杀瘤活性.结果:CIK细胞与LAK细胞相比增殖速度快、最终增殖倍数高.CIK细胞主要由CD3和CD56双阳性细胞构成.CIK细胞对多种肿瘤细胞具有较强的杀伤活性.结论:CIK细胞过继免疫治疗是一种非常有前景的抗肿瘤治疗方法.     

CIK细胞对人肺癌细胞A549凋亡作用的影响

目的观察细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine induced killer cell,CIK）对人肺癌细胞A549凋亡作用的影响,并探讨机制。方法常规方法体外诱导生成CIK细胞,CIK细胞为效应细胞,人肺癌细胞A549为靶细胞,比较观察人肺癌细胞A549的凋亡情况。结果电镜法观察CIK细胞能诱导人肺癌细胞A549出现凋亡的超微结构变化,annexinV／PI流式细胞分析法检测早期凋亡率发现CIK实验组明显高于对照组。结论体外培养的CIK细胞可明显诱导人肺癌细胞A549凋亡。     

不同来源的细胞因子诱导的杀伤细胞体外抗肿瘤作用的比较研究

目的比较来自脐带血和恶性肿瘤患者外周血的细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)体外抗肿瘤作用的差异。方法体外诱导培养肺癌患者外周血和脐血来源的CIK细胞,MTT法和流式细胞术检测诱导的CIK细胞的抗肿瘤活性及机制。结果来自肺癌患者外周血和脐血的CIK细胞中CD3+细胞、CD3+CD56+和CD3+CD8+细胞百分比均伴随培养时间的延长而升高,组间比较无统计学差异;诱导培养21 d时,脐血CIK细胞和肺癌患者外周血来源的CIK细胞的增殖率分别为(185.76±39.68)%、(254.32±74.60)%,二者之间差异有统计学意义(P=0.0012);脐血CIK细胞的抗肿瘤活性高于肺癌患者外周血来源的CIK细胞(效靶比10∶1,靶细胞为K562细胞时,P=0.0016;靶细胞为A549细胞时,P=0.0022);脐血CIK细胞CD107a表达高于来自肺癌患者外周血的CIK细胞(靶细胞为K562细胞时,P=0.0469;靶细胞为A549细胞时,P=0.0413);脐血CIK细胞IFN-γ和TNF-α的分泌水平高于肺癌患者CIK细胞(P=0.0352;P=0.0389);脐血CIK细胞和肺癌患者CIK细胞诱导K562细胞凋亡的百分率为(25.30±4.87)%和(19.87±5.41)%,二者之间差异无统计学意义(P=0.2658)。结论流式细胞术可同时检测CIK细胞的表型、功能及作用机制。本研究为临床应用CIK治疗提供更多选择和实验室依据。     

CIK细胞与LAK细胞对H-22腹水瘤的抑瘤作用

目的 观察ＣＩＫ细胞及ＬＡＫ细胞对Ｈ－２２荷瘤鼠的抗肿瘤作用。方法 建立Ｈ－２２荷瘤鼠肿瘤动物模型,静脉输入ＣＩＫ细胞３周做抗肿瘤治疗,同时设ＬＡＫ对照;用同位素法检测,经治疗后荷瘤鼠Ｔ细胞增殖及ＮＫ细胞毒活性。结果 ＣＩＫ细胞对Ｈ－２２荷瘤鼠的抗肿瘤作用显著强于ＬＡＫ的细胞（抑瘤率分别是５４％ＶＳ２７％）,并且ＣＩＫ疗法的抗作用可能与荷瘤鼠Ｔ细胞增活性增高有关。结论 ＣＩＫ细胞对Ｈ－２２荷瘤鼠的     

恶性肿瘤患者自体CIK细胞的实验研究

目的通过比较CIK细胞和LAK细胞的增殖、表型和抗瘤效应,为临床应用CIK细胞过继免疫治疗提供资料。方法取12例恶性肿瘤患者外周血,常规分离成单个核细胞,用不同细胞因子培养诱导出LAK细胞和CIK细胞,观察两种细胞的增殖、表型和抗瘤效应。结果培养后12天,CIK细胞数量达原来的11.5倍,而LAK细胞数量只有原来的5.2倍;比较培养前后CIK细胞的表型,可发现CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD56+、CD25+在培养后均有明显增高(P<0.05或0.001)。CIK细胞杀伤K562细胞和Raji细胞的能力均明显优于LAK细胞(P<0.05或0.001)。结论CIK细胞不仅具有强大的增殖功能,并且对不同的肿瘤细胞系显示出较LAK细胞更强的杀伤活性。因此,它是一种新型的过继免疫治疗方法。     

Anti-tumor and apoptotic effects in vitro and in vivo of a traditional Chinese medicine prescription

Background  Zhongfei Mixture (ZM), a traditional Chinese medicine, exploited from the clinical experience, has mainly been used for the treatment of advanced lung cancer since it was produced in 1983. However, little research has been conducted on its anti-tumor mechanism. In this study, we aimed to investigate the anti-tumor and apoptotic effects of ZM in vitro and in vivo.

Methods  The growth inhibition effect of ZM on A549 cells was evaluated by MTT assay. Morphological observation and clone forming tests were performed to determine the effect of ZM on cell viability. Cell cycle distribution and apoptosis were analyzed by flow cytometry. In addition, the in vivo anti-proliferation activity of ZM was evaluated using mice bearing Lewis lung carcinoma. Further, the apoptosis of cells in tumor tissue was determined by the terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labeling (TUNEL) assay, and the expression of Ki-67 protein in tumor tissues was analyzed by En-Vision immuno-histochemistry staining.

Results  ZM exerted an obvious inhibitory effect on proliferation of A549 cells. It arrested A549 cells in G₂-M phase and induced apoptosis. Compared with 3.02% and 5.32% in control group, the percentages of cells arrested in G₂-M phase were 19.20% and 19.58% in 7.94 mg/ml ZM treated A549 cells at 24 hours and 48 hours. Moreover, the apoptosis rate increased from 0.18% to 18.01% after ZM treatment for 48 hours. ZM also significantly inhibited tumor growth in the tumor-implanted mice. Compared with saline control group, the effects of ZM showed significant tumor growth inhibition (P <0.05). Furthermore, ZM could down-regulate the expression of Ki-67 in tumor tissue in mice bearing Lewis lung carcinoma.

Conclusions  Our results indicated that ZM has notable anti-tumor effect and the effects of ZM in moderate dose groups were superlative both in vitro and in vivo. The possible mechanism of ZM might be associated with arresting cell cycle in G₂-M phase as well as down-regulating Ki-67 expression in tumor tissues.

     

依托泊苷壳聚糖-海藻酸钠微球的体内抗癌活性及在小鼠体内分布

目的研究制备的依托泊苷壳聚糖-海藻酸钠微球(Etoposide Chitosan-alginate Microsphere,ECAM)的体内抑瘤作用及体内分布。方法通过比较各组小鼠移植性Lewis肺癌的抑瘤率,考察含药微球的抑瘤效果;用高效液相色谱法测定各组织中依托泊苷浓度。结果依托泊苷微球抑瘤率为63.62%,明显高于其他各组;小鼠尾静脉注射微球后15min,肺内依托泊苷量占注入总量的(52.64±1.79)%。结论 ECAM具有明显的抑制移植性Lewis肺癌的作用和肺靶向效果。     

正常人CIK细胞对卵巢癌SKOV3ip细胞抗肿瘤的活性

目的　观察正常人CIK(cytokine inducedkiller)细胞对人卵巢癌细胞株SKOV3ip的体外细胞毒活性以及对卵巢癌腹水瘤模型的体内抗肿瘤作用。方法　取正常人的外周血单个核细胞 (PBMC) ,加入细胞因子γ IFN、IL 2、抗 -CD3单抗和IL - 1,体外诱导成CIK细胞 ,用MTT法测定CIK细胞体外对人卵巢癌细胞株SKOV3ip的细胞毒活性 ,并与CD3AK作对比。在Babl/c裸小鼠腹腔内接种卵巢癌SKOV3ip细胞 ,观察CIK细胞对荷瘤鼠的抑瘤作用。结果　体外实验证明 ,CIK细胞对SKOV3ip有明显的细胞毒活性 ,对比CD3AK其抑瘤率为 89.7%与 6 7.1% (P <0 .0 5 )。裸鼠卵巢癌腹水瘤模型体内实验表明 ,CIK细胞能够显著抑制癌性腹水生长 ,其抑制率可达 10 0 %。结论　CIK细胞是一种新型、高效的免疫活性细胞 ,具有较强的体内外抗卵巢癌细胞活性 ,具有明显的抑制癌性腹水生长的作用 ,有可能用于临床上卵巢癌腹水的过继性免疫治疗     

白细胞介素12基因修饰的Lewis肺癌瘤苗的抗肿瘤免疫作用

目的：研究白细胞介素12（IL-12）基因修饰的Lewis肺癌瘤苗的抗肿瘤免疫作用。方法：用含IL-12基因的腺病毒载体,在体外以不同感染系数感染Lewis肺癌细胞,并分别接种于C57BL/6小鼠皮下,观察其致瘤性的变化;并用Lewis肺癌细胞及B16黑色素瘤细胞再 次攻击免疫后的C57BL/6小鼠,观察肿瘤发生情况。 结果：以各种感染系数AdCMVIL-12制备的瘤苗,接种于小鼠皮下后,无肿瘤生长,完全消除了Lewis肺癌细胞的致瘤性;瘤苗注射6 d后,用Lewis肺癌细胞再次攻击,仍无肿瘤生长,抑瘤率达100%;用B16黑色素瘤细胞攻击,10~12 d均有肿瘤生长,说明此瘤苗具有肿瘤特异性。结论：AdCMVIL-12能消除Lewis肺癌细胞的致瘤性,并能诱导显著的抗肿瘤免疫反应,对肿 瘤的复发及转移有较好疗效。     

多次小剂量pEgr-IFNγ-Endostatin基因-放射治疗对小鼠Lewis肺癌的抑瘤作用

目的：探讨多次小剂量pEgr-IFNγ-Endostatin基因-放射治疗对荷Lewis肺癌小鼠的抑瘤 效应。 方法：将荷瘤小鼠随机分为对照组、10 Gy照射组、4次2.5 Gy照射组、4次质粒组、质粒 + 10 Gy组和4次(质粒+2.5 Gy）组。小鼠肿瘤局部注射脂质体包裹的质粒后36 h,接受X射线照射,观察各组小鼠治疗后不同时间肿瘤生长速率, 18 d后计数各组小鼠肺转移 结节数, 并称量瘤重。 结果：治疗后12~18 d,4次（质粒+2.5 Gy）组肿瘤生长速率明显低于质粒+10 Gy组（P<0.001）。治疗后18 d,4次（质粒+2.5 Gy）组小鼠肺转移结节数和瘤重明显低于质粒+10 Gy组（分别为P<0.001和P<0.01）。 结论：多次小剂量pEgr-IFNγ-Endostatin基因-放射治疗的抑瘤效应优于单次大剂量基因-放射治疗。     

OK—432联合IL—2抑制C57BL／6小鼠Lewis肺癌的生长及PCNA的表达

目的 研究ＯＫ－４３２与ＩＬ－２抑制Ｃ５７ＢＬ／６小鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌（ＬＬＣ）生长及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达。方法 ４０只Ｃ５７ＢＬ／６荷瘤ＬＬＣ小鼠,雌雄各半,分４组,分别用生理盐水、ＯＫ－４３２与ＩＬ－２处理,观察用药后对肿瘤生长的抑制及用抗鼠ＰＣＮＡ单克隆抗体进行ＳＡＢＣ免疫组化技术半定量测定ＰＣＮＡ在Ｌｅｗｉｓ肺癌原发灶中的表达。结果 二者联合后明显增强抑瘤率（Ｐ〈０．０５）,对肿