神经营养因子与生长因子在体外对人视网膜神经节细胞之作用

目的 研究神经营养因子(neurotrophic factor)与生长因子(growth factor)在体外对人视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)生存的作用。 方法 从捐献的尸体眼球分离并培养RGC。RGC之鉴定系根据形态学与免疫细胞化学研究。将各种神经营养因子与生长因子分别加入培养液。对RGC计数,并与未加任何因子的对照组相比较。 结果 未加任何因子的培养中不见或仅有极少量的RGC。加有神经营养蛋白-3(neurotrophin-3,NT-3)、神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)与血小板源性生长因子(plate derived growth factor, PDGF)的培养亦同。加有下列因子的培养中有较多的RGC出现,计数为(细胞数/每10个显微镜野)：脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)：4.08;睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)：1.23;神经营养蛋白-4/5(neurotrophin-4/5,NT-4/5)：2.63;碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)：2.65。 结论 BDNF、NT-4/5、bFGF与CNTF在体外能改善人RGC之生存,而NGF、NT-3、EGF与PDＧF则不能。 (中华眼底病杂志, 1999, 15: 149-152)     

表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子对人视网膜色素上皮细胞DNA合成的影响

目的探索表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞促进DNA合成的最佳刺激浓度，并对两种因子的协同作用进行探讨。方法培养的人RPE细胞第6代用于本实验。应用氚标胸腺嘧啶核苷(³H-thymidine, ³H-TdR)掺入试验及放射自显影检测EGF、bFGF对RPE细胞的促DNA合成作用。结果EGF、bFGF均可引起剂量依赖的促有丝分裂作用。在含2%血清的培养液中,EGE、bFGF作用最佳浓度为1ng/ml,明显低于无血清培养液中EGF、bFGF作用的最佳浓度(10ng/ml)。联合应用10ng/mlEGF、10ng/mlbFGF约提高RPE细胞合成DNA能力2.96倍。结论EGF、bFGF对培养的人RPE细胞具有促进DNA合成作用，且两者可产生协同效应。(中华眼底病杂志,1998,14:98-100)     

表皮生长因子通过EGFR/AKT信号通路对视网膜色素上皮细胞增殖和迁徙的影响

目的：探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)对视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞增殖和迁徙的影响。

方法：体外培养人RPE细胞株(ARPE-19细胞),给予不同浓度EGF处理ARPE-19细胞,通过噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)实验、5-溴脱氧尿苷(5-bromodeoxyuridine,BrdU)吸收实验和细胞划痕实验检测EGF对ARPE-19细胞活力、增殖和迁徙的影响; 通过Western blot法检测EGF对表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)和蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)蛋白表达的影响。

结果：MTT实验显示50、100ng/mL EGF处理12h诱导ARPE-19细胞活力增加; BrdU吸收实验显示100ng/mL EGF处理24h诱导BrdU染色阳性ARPE-19细胞数增加; 细胞划痕实验显示100ng/mL EGF处理24h可以诱导ARPE-19细胞迁徙能力增加。Western blot检测显示使用10～100ng/mL EGF 处理细胞 12h或者100ng/mL EGF 处理细胞15～180min均可以诱导磷酸化EGFR(pEGFR)表达升高和总EGFR表达降低,同时也可以诱导磷酸化AKT(pAKT)表达升高,但是对总AKT表达无显著影响。

结论：EGF通过EGFR/AKT信号通路增加RPE细胞的活力、增殖和迁徙能力,可能对增殖性玻璃体视网膜病变中RPE细胞的异常增殖和迁徙起到重要作用。     

胚胎与成人视网膜神经细胞培养

目的 建立胚胎及成人视网膜神经细胞体外培养系统，为视网膜神经细胞的基础研究与药物开发提供实验模型。 方法 10～13周龄胎儿及20～40岁成人视网膜神经层用不同的酶进行消化，分散的细胞接种于预先经过包被的细胞培养盘内，加入或不加入表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)、成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor, FGF)、脑源性神经营养因子(brainderived neurotrophic factor, BDNF)、神经营养素 4(neurotrophic-4，NT-4)等培养。通过BrdU掺入、免疫组织化学及免疫荧光等方法检测培养细胞增殖并辨别细胞成分。 结果 胚胎及成人视网膜细胞可在体外连续培养100及180 d以上。加入EGF、FGF、BDNF或NT-4可明显促进胚胎与成人视网膜神经元存活，胎儿视网膜细胞增殖。与对照组相比，处理组神经元或神经节细胞的百分率较高。 结论 胚胎及成人视网膜神经细胞培养技术为视网膜神经细胞基础研究及药物开发提供了一种十分有价值的手段，加入外源性的生长因子可促进培养的视网膜神经细胞存活、增殖与分化。 (中华眼底病杂志, 2002, 18: 279-282)     

EGF促进RPE细胞β2肾上腺能受体诱导的cAMP形成：受体间交互作用分析

研究证实表皮生长因子(EGF)不影响培养人眼视网膜色常上皮(RPE)细胞cAMP的基础水平，但促进异丙肾上腺索激活β₂受体后诱导cAMP水平升高的效应，井呈量效信赖关系。EGF对腺嘌呤核苷A₂受体激动剂NECA诱导cAMP水子升高的效应没有明显影响．细胞增殖分析表明，EGF刺激人眼RPE细胞增殖，而DibutyrylcAMP和异丙肾上腺素抑制RGF刺激增殖的效应。结果提示，在人眼RPE细胞EGF和β₂受体之间存在受体间交互作用． （中华眼底病杂志，1995，11：25-27）     

生长因子对培养的胚胎视网膜神经细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF）、成纤维细胞生长因子（fibroblast growth factor,FGF）及胎牛血清对体外培养的人胚胎视网膜神经细胞 生长、增殖、分化和凋亡等的影响及可能的机制。 方法 采用胎牛血清培养人胚胎视网膜神经细胞，加入或不加入EGF、FGF。通过神经元特异稀醇化酶（neuron specific enolase, NSE）、视网膜神经节细胞特异的Thy1.1抗体、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫组织化学染色、倒置显微镜及扫描电镜观察鉴定细胞成分；细胞生长曲线及溴脱氧尿苷（bromodeoxyuridine, BrdU）掺入测定细胞增殖率；原位末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸切口末端标记（Tdt-mediated dUTP nick end labelling, TUN EL）检测细胞凋亡；c-fos、c-jun及bcl-2、bax免疫组织化学染色判断转录调控因子及细胞凋亡调控因子表达水平，计数阳性细胞并进一步作统计分析。 结果 经过EGF、FGF培养的人胚胎视网膜细胞总数增加，细胞倍增时间缩短，BrdU掺入率增加，凋亡细胞数减少，其 中NSE、Thy1.1阳性细胞数明显增加。同时，c-fos、c-jun及bcl-2阳性细胞数也增加。 结论 生长因子EGF、FGF可通过上调转录因子c-fos、c-jun及细胞凋亡抑制因子bcl-2表达促进体外培养的人胚胎视网膜细胞存活与增殖。 （中华眼底病杂志，2003，19：113-116）     

永生化胚胎视网膜干细胞的体外诱导分化

目的：研究R71882永生化视网膜干细胞系细胞的体外诱导分化。方法：对R71882细胞系细胞进行体外培养扩增，利用含有表皮生长因子(epidermal growth factor，EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)及白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor，LIF)等生长因子的DMEM／F12培养液对第43代细胞进行体外诱导分化，免疫荧光细胞化学鉴定诱导后细胞的抗原表达。结果：诱导后的R71882细胞系细胞增殖速度减慢，细胞表达微管相关蛋白2(microtubule-associated protein 2，MAP2)、胶质源性纤维酸性蛋白(glial fibrillary acid protein，GFAP)、蛋白激酶C-α(protein kinase C-α，PKC-α)、Thy1．1及Calretinin，同时部分细胞仍表达巢蛋白(Nestin)，但未见视紫红质(Rhodopsin)表达。结论：R71882细胞是一种多能视网膜干细胞。在EGF及bFGF等多种生长因子的共同作用下，该细胞系中部分细胞仍能表达未分化细胞标记物Nestin，部分细胞开始向神经元、神经胶质细胞及双极细胞、神经节细胞和无长突细胞等视网膜终末细胞方向分化。     

增生性玻璃体视网膜病变发病机制的研究进展

增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy，PVR)是在孔源性视网膜脱离或视网膜脱离复位术后，由于视网膜色素上皮细胞(RPE)及神经胶质细胞的增生和收缩，造成牵拉性视网膜脱离的病变。PVR的病理特征是细胞增生，RPE一旦开始增殖，就产生细胞生长因子，而这些细胞生长因子反过来又刺激细胞增殖。PVR的过程有多种细胞及因子的参与，参与PVR增生的细胞主要是RPE和视网膜神经胶质细胞；涉及PVR的生长因子有：PDGF、EGF、VEGF、TGF、FGF、IGF、HGF等。     

视网膜静脉阻塞和Eales病患者玻璃体内皮生长因子含量测定

目的：了解血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)在视网膜血管增殖性疾病患者玻璃体中的含量。 方法：采用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)测定伴有新生血管的视网膜静脉阻塞(retinal vein occlusion，RVO)和视网膜静脉周围炎(Eales病)患者玻璃体VEGF含量。 结果：RVO患者(7例)和Eales病患者(7例)玻璃体VEGF含量分别为(4.67士3.38)ng/ml和(1.79土0.44)ng/ml，是正常人(0.35土0.15)ng/ml的13倍和5倍(P<0.01)。 结论；RVO和Eales病患者玻璃体VEGF水平明显升高，提示VEGF可能参与其眼内新生血管增殖机制。 （中华眼底病杂志，1997，13：171-173）     

表皮生长因子诱导人视网膜色素上皮细胞整合素α5表达对细胞增生和迁移的影响

目的 观察表皮生长因子(EGF)诱导人视网膜色素上皮(RPE)细胞整合素α5表达对细胞增生和迁移的影响.方法 在0.1、1.0、10.0、20.0、100.0 ng/ml EGF浓度条件下,体外培养人RPE细胞.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及流式细胞术观察不同浓度组整合素α5mRNA和蛋白的表达.后将实验分为Dulbecco改良的Eagle培养基(DMEM)/F12、DMEM/F12+10.0 ng/ml EGF、DMEM/F12+10.0ng/ml EGF+兔抗人整合素α5多克隆抗体(1:100)及DMEM/F12+10.0 ng/ml EGF+兔抗人波形蛋白抗体(1:100)组,采用噻唑蓝(MTT)比色法和Boyden小室法检测细胞增生及迁移.结果 RT-PCR检测显示,细胞培养12 h,EGF对人RPE细胞整合素α5mRNA合成无明显影响(F-0.618,p=0.687);细胞培养24、48 h,EGF能刺激人RPE细胞合成整合素α5mRNA,并呈浓度依赖性(F=465.303,212.340;P=0.000,0.000).流式细胞术检测显示,10.0 ng/ml组整合素α5荧光强度最强,与空白对照组和0.1 ng/ml组比较,差异有统计学意义(P<0.01).MTT比色法和Boyden小室法检测显示,整合素α5的表达促进人RPE细胞增生和迁移.结论 EGF促进整合素α5mRNA和蛋白的表达,整合素α5的表达促进人RPE细胞增生和迁移.     

bFGF、EGF和NGF对人角膜内皮细胞生长调控的实验研究

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子（Basicfibroblastgrowthfacfor，bFGF）、表皮细胞生长因子（Epidermalgrowthfactor，EGF）和神经细胞生长因子（Nervegrowthfactor，NGF）对体外培养的人角膜内皮细胞的生长调控作用。方法：将相同数量的人角膜内皮细胞接种于96孔板。加入浓度分别为0ng／ml、1ng／ml、3ng／ml、10ng／ml、30ng／ml、100ng／ml的EGF、bFGF和NGF进行培养。5天后MTT法用检测增殖情况。结果：在0ng／ml、1ng／ml、3ng／ml、10ng／ml、30ng／ml、100ng／ml浓度下bFGF组的平均OD值分别为：0．224±0．045、0．239±0．040、0．262±0．0342、0．278±0．0319、0．281±0．0324、0．260±0．0310。EGF组的平均OD值分别为：0．228±0．0304、0．245±0．0418、0．267±0．0454、0．275±0．0347、0．271±0．0449、0．250±0．0253。NGF组的平均OD值分别为：0．216±0．0187、0．228±0．0226、0．231±O．0225、0．242±0．0279、0．245±0．0294、0．247±0．0349。结论：bFGF在30ng／ml范围内对内皮细胞生长有促进作用，并具有剂量依赖性。高于100ng／ml时促生长作用降低。EGF在10ng／ml范围内对内皮细胞生长有促进作用，并具有剂量依赖性。高于30ng／ml时促生长作用降低。NGF本次实验剂量范用内对角膜内皮细胞生长无明显作用。     

表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子对人视网膜色素上皮细胞DNA合成的影响

目的探索表皮生长因子（ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＥＧＦ）、碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ｂＦＧＦ）对培养的人视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ，ＲＰＥ）细胞促进ＤＮＡ合成的最佳刺激浓度，并对两种因子的协同作用进行探讨。方法培养的人ＲＰＥ细胞第６代用于本实验。应用氚标胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ，３Ｈ－ＴｄＲ）掺入试验及放射自显影检测ＥＧＦ、ｂＦＧＦ对ＲＰＥ细胞的促ＤＮＡ合成作用。结果ＥＧＦ、ｂＦＧＦ均可引起剂量依赖的促有丝分裂作用。在含２％血清的培养液中，ＥＧＦ、ｂＦＧＦ作用最佳浓度为１ｎｇ／ｍｌ，明显低于无血清培养液中ＥＧＦ、ｂＦＧＦ作用的最佳浓度（１０ｎｇ／ｍｌ）。联合应用１０ｎｇ／ｍｌＥＧＦ、１０ｎｇ／ｍｌｂＦＧＦ约提高ＲＰＥ细胞合成ＤＮＡ能力２．９６倍。结论ＥＧＦ、ｂＦＧＦ对培养的人ＲＰＥ细胞具有促进ＤＮＡ合成作用，且两者可产生协同效应。     

Epidermal growth factor receptor in cultured human retinal pigment epithelial cells

BACKGROUND: Migration and proliferation of retinal pigment epithelial (RPE) cells play an important role in proliferative vitreoretinopathy. Epidermal growth factor receptor (EGFR) is a cell surface receptor with intrinsic tyrosine kinase activity. The engagement of the receptor by its ligand can induce intracellular mitogenic signal transduction pathways and stimulate proliferation, migration and differentiation of cells. This experiment aimed to investigate the activation and role of EGFR signal transduction pathway in proliferation of human RPE cells. METHODS: Cultured human RPE cells of the 3rd to 6th passages were studied by colorimetric assay for cellular growth and survival (MTT assay) to test the effects of EGF (0.1, 1, 10, 50, and 100 ng/ml) and fetal bovine serum (FBS) on proliferation of human RPE cells. An in vitro wound healing model was also set up, and the number of cells that had entered the denuded area was counted. The human RPE cells were cultured for 3 days with 0.1% FBS, 10% FBS, 10 ng/ml EGF + 0.1% FBS and a combination of EGF and 10% FBS, respectively. Immunohistochemical staining and in situ hybridization were used to observe the expressions of EGFR protein and mRNA, respectively. Activation of mitogen-activated protein kinase (MAPK) was detected by immunohistochemical method with specific antiphosphorylated extracellular signal-regulated kinase (ERK)1/2 antibody. RESULTS: EGF stimulated proliferation and migration of cultured human RPE cells in a concentration-dependent manner. The maximum of the proliferation rate of RPE cells was 81.8% with EGF at a concentration of 10-100 ng/ml of EGF in serum-free Dulbecco's modified essential medium (DMEM) and 122.7% at a concentration of 1-10 ng/ml of EGF in 5% FBS DMEM (p < 0.001); there was a significant difference between serum-free DMEM groups and 5% FBS DMEM groups. The maximum of the migration rate of the cells was 438.9% at a concentration of 10-100 ng/ml of EGF in 10% FBS DMEM, 147% with 10% FBS, and only 36% with EGF in 0.1% FBS at the concentration of 10 ng/ml (p < 0.001). EGF promoted the expression of EGFR protein and mRNA in RPE cells. FBS cooperated with EGF in the stimulation of EGFR expression, and it had a stronger effect in the process than EGF alone. After 3 days of incubation with EGF, phosphorylated ERK1/2 was detectable in the nucleus of RPE cells, whereas cells presented immunostaining positive for phosphorylated ERK1/2 in the cytoplasm before stimulation, indicating that EGF could induce MAPK nuclear translocation. CONCLUSION: EGF could induce EGF-EGFR-MAPK signal transduction pathway in human RPE cells in a concentration-dependent manner in vitro, which may play a key role in the activation of human RPE cell proliferation and migration.     

EGF联合KGF促进人角膜上皮细胞生长

目的:寻找促进角膜上皮损伤修复,治疗持续性角膜上皮缺损的有效药物方法:用~3H—胸腺嘧啶核苷(~3H—TDR)掺入及液体闪烁技术,观察外源性表皮生长因子(EGF)联合角蛋白细胞生长因子(KGF)对体外培养的角膜上皮细胞DNA合成的影响,并计算细胞倍增时间。结果:10ng/mlEGF,10ng/mlKGF单独或联合应用均有明显促进人角膜上皮细胞DNA合成的作用(与对照组比较 P<0.01),联合用药,作用更强(P<0.05)。应用EGF与KGF明显缩短了细胞倍增时间。结论:外源性EGF与KGF对体外培养的人角膜上皮细胞有明显的促细胞增生作用,联合用药,效果更佳。表明EGF与KGF具有应用于临床,促进角膜上皮损伤修复的可能性。眼科学报1996; 12:107-109。     

人视网膜色素上皮细胞增生中表皮生长因子-表皮生长因子受体-有丝分裂原激活蛋白激酶信号传导途径的激活及其作用

目的 观察人视网膜色素上皮（RPE）细胞增生中表皮生长因子(EGF)表皮生长因子受体(EGFR)有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号传导途径的激活及其作用。 方法 人RPE细胞分别在0.1%、10%小牛血清(FCS)，EGF(0.1、1、10、50、100 ng/ml)及上述各浓度EGF与10%FCS联合作用下培养3 d。采用原位杂交及免疫细胞化学方法，检测RPE细胞EGFR mRNA及蛋白质表达 。使用抗磷酸化细胞外信号调节激酶(ERK) 1/2抗体进行免疫细胞化学染色，以观察MAPK激活情况. 结果 EGF在10%FCS改良Eagle培养液（DMEM）中作用时，其最佳刺激浓度为1 ng/ml，EGF在0.1%FCS-DMEM中作用时最佳作用浓度为10 ng/ml ；EGF作用后，磷酸化ERK 1/2抗体由在细胞浆中表达转移至在细胞核中表达。 结论 EGF呈浓度依赖性地促进RPE细胞EGFR mRNA及蛋白质的表达，且对MAPK也具有浓度依赖性的核转位作用。推测 EGF-GFR-MAPK信号传导途径可能在RPE细胞增生中起重要作用，血清在此过程中有明显的促进作用。（中华眼底病杂志，2004，20：67-132）     

神经生长因子对人结膜杯状细胞增殖与黏蛋白基因表达的影响

目的探讨神经生长因子（NGF）对体外培养人结膜杯状细胞增殖与黏蛋白MUC5AC基因表达的影响。方法利用抗NGF高亲和力受体（TrkA）的单克隆抗体进行免疫组织化学染色,初步检测杯状细胞膜表面是否存在此受体。在传代的人结膜杯状细胞中加入含20、40、60及80ng／ml NGF的RPMI-1640培养液,加入不含NGF的培养液作为阴性对照。于加药后1、3、5d分别用四甲基偶氮唑盐（MTT）法观察细胞增殖情况。加入含80ng／ml NGF的培养液后第5天,通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测NGF对杯状细胞中MUCSAC基因表达的影响。结果人结膜杯状细胞膜表面存在NGF高亲和力受体（TrkA）。加入NGF后不同时间（F=12．766,P=0．000）、不同浓度组（F=892．406,P=0．000）之间的吸光度值比较,差异有统计学意义,时间和浓度这两个因素之间无交互作用（F=1．778,P=0．095）。NGF组MUC5AC的mRNA表达量明显高于对照组（t=4．963,P=0．000）。结论体外培养的人结膜杯状细胞膜表面存在NGF高亲和力受体;NGF有促进杯状细胞增殖的作用,并随浓度增加和时间的延长而促增殖作用增强;NGF能够促进杯状细胞黏蛋白MUC5AC基因表达。     

Thrombin stimulates the proliferation of human retinal glial cells

Retinal glial cells may play a role in most of the proliferative retinopathies. Although glial cell proliferation is a frequent event in retinal pathobiology, no specific mitogens for human retinal glial cells are known. Using cultured retinal glial cells obtained from postmortem adult human eyes, we found that thrombin stimulates glial cell proliferation in a dose-dependent manner with a half-maximal concentration of 100 ng/ml (0.4 U/ml). Thus, thrombin may be a plasma-derived mitogen capable of stimulating retinal glial cells to proliferate when there is a breakdown of the blood-retinal barrier. We also observed that this proliferative response of retinal glia requires more than 6 h of continuous exposure to thrombin. This finding suggests that a thorough wash-out of a thrombin-containing infusate and/or the rapid inactivation of this molecule would prevent thrombin from exacerbating a proliferative disorder of the retina.     

Thrombin stimulates the proliferation of human retinal glial cells

Retinal glial cells may play a role in most of the proliferative retinopathies. Although glial cell proliferation is a frequent event in retinal pathobiology, no specific mitogens for human retinal glial cells are known. Using cultured retinal glial cells obtained from postmortem adult human eyes, we found that thrombin stimulates glial cell proliferation in a dose-dependent manner with a half-maximal concentration of 100 ng/ml (0.4 U/ml). Thus, thrombin may be a plasma-derived mitogen capable of stimulating retinal glial cells to proliferate when there is a breakdown of the blood-retinal barrier. We also observed that this proliferative response of retinal glia requires more than 6 h of continuous exposure to thrombin. This finding suggests that a thorough wash-out of a thrombin-containing infusate and/or the rapid inactivation of this molecule would prevent thrombin from exacerbating a proliferative disorder of the retina.     

Effects of Nerve Growth Factor on Proliferation and DNA Synthesis of Cultured Human Fetal Retinal Pigment Epithelium Cells

Objective: To investigate the effects of nerve growth factor(NGF)on proliferation and DNA synthesis of cultured human fetal retinal pigment epithelium (RPE) cells in vitro. Methods: Primary culture and subculture of human fetal retinal pigment epithelium cells were established in vitro first. Cultured RPE cellswere treated with NGF by various concentrations 0μg/L, 50μg/L, 100μg/L,200μ,g/L and 300μg/L(final concentration) for 48 hs. After 48 hs, cells proliferation was measured with methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) assay method and the amount of DNA was determined by the absorbance at 280 nm of nucleic acid & protein analysis.Results: The A values of 100μg/L, 200μg/L, 300μg/L NGF was(0. 213 7 ± 0. 233), (0.218 8 ±0. 018 1), (0.232 2 ±0.016 4) as compared with(0. 1897 ±0.0152) of A value of 0 μg/L NGF respectively, q value was 3.63,4.40,6.42 and P value was 0.015, 0.000, 0. 000(q-test).The DNA concentrations of 100μg/L, 200μg/L, 300μg/L and 400μg/L NGF was (981. 220 4±123. 5357), (1375.