以激光扫描共聚焦显微镜三维重建肾小球系膜细胞

为进一步研究肾小球系膜细胞的结构与功能，利用激光扫描共聚焦显微镜对体外培养折人肾小球系膜细胞进行断层扫描及三维重建，并与普通荧光显微镜的图像进行了比较。结果表明，共聚焦显微镜可以清晰地显示系膜细胞的立体形态以及纤维连接蛋白在细胞质内不同层面的分布状况及分布强度，这为从立体结构方面对系膜细胞深入研究提供了一个新的方法。     

共聚焦激光扫描显微镜的三维重建特性

透射电镜、扫描电镜在观察细胞和亚细胞的精细结构方面具有划时代意义 ,然而限于二维图像水平。在器官水平 ,螺旋ＣＴ、ＭＲＩ产生的的三维影像弥补了断层图像的局限性 ,为临床工作提供了极为有价值的信息。同样 ,病理组织水平三维重建图像能够弥补二维断面所带来的信息丢失 ,但仍存在以下问题 :①连续物理切片借助计算机辅助三维重建 ,在标本制备过程中 ,脱水、切片等步骤造成组织膨胀、收缩与变形 ;②无法根本解决连续切片间的精确对位 ;③生物组织结构的复杂多样性更增加了三维重建的难度〔1〕。这使得应用计算机产生的三维图像质量受主…     

问：激光扫描共聚焦显微镜有何优越性？

答：激光扫描共聚焦显微镜（Laser scanning Confocal Microscopy，LSCM）为近代生物医学图像仪器的最重要发展之一。它是在荧光显微镜成像基础上加装激光扫描装置，使用紫外光或可见光激发荧光探针，利用计算机进行图像处理，从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像。此外。其还可从亚细胞水平观察诸如Ca^2＋、pH值、膜电位等生理信号及细胞形态的变化。     

激光扫描共聚焦显微镜技术在脑脊液细胞学临床研究中的应用

1 引言 脑脊液细胞学(CSFC)经过长期发展至今，已 广泛应用于多种神经系统疾病特别是中枢神经系 统感染、肿瘤、寄生虫病、血管病和免疫性疾病 等的诊断和鉴别诊断。     

应用于激光扫描共聚焦显微镜的活细胞标本制作方法

目的　介绍急性神经元贴壁的简易方法和应用激光扫描共聚焦显微镜观察药物作用后神经元内核酸代谢的方法。方法　以双重荧光染料吖啶橙 (Acridineorange ,AO)进行染色。在 36°C孵育箱内孵育 15分钟。激光扫描共聚焦显微镜对染色后的细胞进行光束扫描 ,以观测细胞内核酸代谢变化的规律。结果　皮层神经元RNA有显著改变。结论　本方法的建立可以成功地应用于激光扫描共聚焦显微镜对胞内核酸代谢变化的研究。     

共聚焦显微镜下观察糖尿病兔角膜细胞改变

目的:通过对糖尿病兔角膜连续活体观察,研究糖尿病角膜病理变化。方法:四氧嘧啶静脉注射12只新西兰大白兔,复制糖尿病疾病模型;另外3只为空白对照。用共聚焦显微镜在四氧嘧啶给药前和糖尿病模型建成后4、8、12周对角膜进行观察。结果:随疾病模型建立时间的延长,糖尿病兔角膜出现上皮细胞脱落增多,前、后基质细胞数目减少,内皮多形性细胞增加,内皮数目减少。结论:糖尿病兔角膜病变,上皮细胞、基质细胞、内皮细胞随病程时间延长而减少。     

应用激光扫描共聚焦显微镜观察骨组织微损伤的实验研究

目的：建立一种可以用于激光扫描共聚焦显微镜观察的骨微破裂荧光染色方法。方法：取8月龄猪髂骨1块，锯成0．90cm&;#215;O．81cm&;#215;1．89cm的规则矩形，沿长轴方向进行压缩疲劳损伤(负载大小40N，负载频率2．33Hz，负载次数30万次，湿度60％，工作温度28℃)，锯成0．2cm厚骨片，0．5mmol／L茜素红、吖啶橙、钙黄绿素、二甲酚橙、碱性品红和10g／L碱性品红染色。另取人股骨头1个锯出1．5cm&;#215;1．0cm&;#215;0．25cm大小骨片3块，分别应用0．5mmol／L钙黄绿素、茜素红和10g／L碱性品红溶液进行染色。所有骨片常规塑料包埋，磨片至40～100μm，在激光扫描共聚焦显微镜下观察。结果：在疲劳损伤后的猪髂骨和未经疲劳损伤的人股骨头骨小梁上均可以观察到微破裂。所有荧光染料中，以钙黄绿素染色后观察效果为佳，在波长为522nm的激光扫描下发出绿色荧光。茜素红在波长为605nm的激光扫描下发出红色荧光。结论：应用钙黄绿素和茜素红染色可以对骨微破裂进行荧光染色，在激光扫描共聚焦显微镜下能够观察到清晰的骨微破裂图像。     

激光共聚焦显微镜在血液病学研究中的应用

激光共聚焦显微镜(CLSM)是紫外和可见激光双重扫描共聚焦显微镜,通过特异的荧光染料可行一系列亚细胞水平的结构甚至功能的动态研究,是目前正被广泛应用的细胞研究的先进技术。本文就CLSM在血液细胞形态、功能、损伤及修复、细胞凋亡、药物代谢和细胞分选、胞内手术等方面做一综述。     

改良的肾小球系膜细胞体外培养方法

对大鼠肾小球系膜细胞进行体外培养,利用单克隆抗体进行间接免疫荧光染以,结果抗Ｖｉｍｅｎｔｉｎ和抗Ｄｅｓｍｉｎ抗体均为阳性,而抗Ｋｅｒａｔｉｎ抗体为阴性,证实培养的细胞单纯的ＧＭＣ;并探索了ＧＭＣ培养的最佳条件,且对肾小球的收集方法作了改进,结果显示,该方法收集的肾小球数多,肾小球脱落彻底,且肾小球贴壁率高,使得ＧＭＣ生长既多又好。     

激光扫描共聚焦显微镜观察脑干中的神经轴突

目的 观察脑干组织中神经轴突的正常形态。方法 用荧光免疫组织化学技术显示神经丝蛋白,在荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜下观察正常脑干组织中的神经轴突。结果 在荧光显微镜下,神经轴空粗细较均匀,少数有弯曲现象,未见不规则肿胀及断裂。激光扫描共聚焦显微镜分层扫描发现神经轴突的内部结构连续性好,三维重宾可见轴突的立体结构完整。结论 激光扫描共聚焦显微镜能观察到神经轴突的内部结构和立体结构,可用于观察神经     

激光共聚焦显微成像技术对亚细胞位点光动力损伤的动态观察

目的探讨应用激光共聚焦显微成像技术对光动力效应所致亚细胞位点损伤进行动态观察的可行性。方法实验分为HMME＋Rhodamine-123组、单加HMME组、单加Rhodamine-123组和单纯细胞组，后3组作为对照组。传代培养鼠肺毛细血管内皮细胞，将血卟啉单甲醚（HMME）与内皮细胞共同孵育24h后，加入细胞探针Rhodamine-123对线粒体进行染色。应用激光共聚焦显微镜并采用细胞器-细胞荧光强度比值法对HMME进行亚细胞定位，随后采集Rhodamine-123的荧光图像动态序列。结果HMME＋Rhodamine-123组的Rhodamine-123荧光图像在光照过程中逐渐发生变化：典型的线粒体形态特征逐渐消失，并伴有荧光强度下降，荧光在胞浆内趋于弥散分布，细胞核内出现Rhodamine-123的荧光；而单加Rhodamine-123组的Rhodamine-123荧光图像未发生明显变化。结论应用激光共聚焦显微成像技术能实现亚细胞水平光敏损伤位点的动态光学检测，线粒体和核膜可能是HMME介导的光动力损伤亚细胞位点。     

一氧化氮合成酶在人肾小球系膜细胞中表达的研究

目的探讨肾小球系膜细胞 (MC)诱生型一氧化氮合成酶 (iNOS)的表达。方法采用 4个月龄水囊引产的胎儿 ,取胎肾 ,用不锈钢网筛分离技术 ,培养原代系膜细胞 ,用胰酶传代 ,取Ⅲ代细胞用于实验。设实验组和对照组 ,观察脂多糖 (LPS)刺激后不同时间 (4、6、2 4、4 8小时 )及一氧化氮合成酶抑制剂 (L NAME)刺激后同一时间 (2 4小时 )对诱生型一氧化氮合成酶表达的影响。结果细胞为梭形、星形或树枝状 ,核居中央 ,呈圆形或椭圆形 ;免疫荧光结果为抗结蛋白抗体、抗Ⅳ型胶原、抗纤维连接蛋白 (FN)、抗层粘连蛋白 (LN)阳性 ;抗角蛋白、抗Ⅷ因子抗体阴性 ;在未刺激的MC中无iNOSmRNA的表达 ;LPS刺激后 4小时 ,即可检测到iNOS ;6小时后开始明显增加 ;2 4小时达到高峰 ;至 4 8小时iNOS仍较高 ;L NAME为iNOS特异性的抑制剂。结论肾小球MC确含有iNOS ,且在生理状态下呈稳定状态 ,病理状态下 (如LPS刺激后 )表达上调。     

基于激光共聚焦显微镜λ扫描检测蒿草切片荧光光谱的研究

目的研究激光扫描共聚焦显微镜λ扫描检测蒿草切片的荧光光谱,为基于共聚焦显微镜获得生物医学样本的荧光光谱提供理论和实验依据。方法运用普通荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜分别观察荧光染色的蒿草切片,实验分为三组:A组用普通荧光显微镜观察并拍照;B组用激光扫描共聚焦显微镜检测荧光光谱;C组用激光扫描共聚焦显微镜扫描荧光图像。结果荧光显微镜可以观察到蒿草切片的荧光图像,但不能准确获取其相应荧光激发和发射波长,而且会发生串色干扰现象。激光扫描共聚焦显微镜能对蒿草切片进行荧光光谱扫描,排除了干扰波长,获取其荧光激发和发射波长,得到高清晰度的荧光图像。结论与普通荧光显微镜比较,激光扫描共聚焦显微镜有能准确获取样本荧光光谱,得到高清晰度荧光图像的优点。     

Simultaneously multi-parameter determination of hematonosis cell apoptosis by two-photon and confocal laser scanning microscopy

Flow cytometry (FCM), TdT-mediated dUTP Nick End Labeling (TUNEL), and DNA ladder are conventional methods to detect apoptosis of drug-treated cells. However, the assumption of cell number restricts their applications in clinics. In this paper, we report a cell-saving imaging method for quick identification of the hematonosis cell apoptosis induced by chemotherapeutic drugs. By the combination of two-photon and confocal microscopy, three main apoptosis parameters (the change of nuclear morphology, collapse of mitochondrial membrane potential, and increase of intracellular calcium) were recorded simultaneously for single As2O3-induced Molt-4 cells. The results are highly in accordance with those produced by classical flow cytometry. This work suggests that this new imaging method would be promising in the quick identification of hematonosis cell apoptosis.     

共聚焦激光显微内镜对早期胃癌的识别和分类

目的 研究共聚焦激光显微内镜(CLE)识别早期胃癌(EGC)并对其进行分类的可行性.方法 选取完成CLE检查的182例患者的CLE图像,其中EGC 42例,高级别上皮内瘤变9例,低级别上皮内瘤变30例,胃炎52例,肠上皮化生49例.3名熟练掌握CLE诊断技术的内镜医师,根据已制定的胃黏膜病变的CLE诊断标准,以盲法对每例患者做出CLE诊断及分类,结果与组织学诊断比较.结果 CLE诊断胃癌的敏感性和特异性分别为88.1%和98.6%;如果把高级别上皮内瘤变归为癌性病变,敏感性和特异性则为90.2%和98.5%.而且,单纯依赖CLE图像区分EGC分化型和未分化型的准确性为84.9%;如果结合CLE和普通白光内镜图像,则准确性为94.4%.结论 CLE可以较准确地在体识别EGC并对其进行初步分类;CLE在EGC的诊断中具有很大价值.     

激光共聚焦扫描仪检测丙型肝炎蛋白芯片的临床应用

目的对LuxScan 10K激光共聚焦扫描仪的性能进行评估及对其与丙型肝炎蛋白芯片的临床应用进行研究。方法对LuxScan 10K激光共聚焦扫描仪性能进行评估；采用已获国家食品药品监督管理局批准的以酶联免疫吸附法（ELISA）为原理的丙型肝炎病毒抗体检测试剂盒检测临床样本，判断丙型肝炎病毒抗体阴、阳性。对样本编盲后，样本与丙型肝炎蛋白芯片进行反应。芯片反应后，针对编号样本用LuxScan 10K激光共聚焦扫描仪和GenePix 4000B微阵列扫描仪分别进行检测。解盲，统计临床确诊阳性、阴性样本的检测情况，检测结果用SPSS11．0软件统计分析。结果LuxScan 10K扫描仪的检测能力能达到0．1荧光分子μm^2；动态范围〉10^3；具有较高的检测重复性、一致性。LuxScan 10K扫描仪与GenePix 4000B扫描仪扫描丙型肝炎蛋白芯片的结果与ELISA方法检测丙型肝炎病毒抗体的阳性符合率均为90．3％，检测结果差异无统计学意义；阴性符合率分别为83．9％和90．3％，检测结果差异无统计学意义。结论我国研制的LuxScan 10K激光共聚焦扫描仪性能已达国际同类产品水平，配合适用的生物芯片LuxScan 10K微阵列扫描仪可用于临床样本检测。     

Morin inhibits cell proliferation and fibronectin accumulation in rat glomerular mesangial cells cultured under high glucose condition

Morin, is a natural bioflavonoid isolated from Chinese herbs of the Moraceae family, has been reported to possess antidiabetic activity. However, the role of morin on glomerular mesangial cells (MCs) proliferation and extracellular matrix (ECM) accumulation in diabetic condition is still unclear. Therefore, in this study, we investigated the role of morin on cell proliferation and ECM accumulation in rat glomerular MCs cultured under high glucose (HG) condition. Our results showed that morin inhibited HG-induced MC proliferation, arrested HG-induced cell-cycle progression, reversed HG-inhibited expression of p21^Waf1/Cip1 and p27^Kip1. It also inhibited HG-induced ECM expression, ROS generation and NOX4 expression in MCs. Furthermore, morin suppressed HG-induced phosphorylation of p38 MAPK and JNK1/2 in MCs. These data suggest that morin inhibits HG-induced MC proliferation and ECM expression through suppressing the activation of p38 MAPK and JNK signaling pathways. Thus, morin may be useful for the prevention or treatment of diabetic nephropathy.     

激光扫描共聚焦显微镜观察脑组织中血浆蛋白分布在损伤早期的改变

目的：观察脑组织中血浆蛋白分布在损伤早期的改变。方法：用免疫组织化学染色显示人脑组织中的白蛋白、IgG和IgM,用激光扫描共聚焦显微镜观察这些血浆蛋白的分布在损伤早期的改变。结果：政党脑组织中,白蛋白、IgG和IgM闰于血管内,未见血浆蛋白阳性神经细胞,在损伤早期,脑组织中出现大量白蛋白,IgG及IgMB阳性神经细胞和社会纤维,结论：脑组织中血浆蛋白分布在损伤早期发生了改变,提示血脑屏障和神经细胞均有不同程度的损伤。