高迁移率族蛋白N2对人舌癌裸鼠移植瘤的抑瘤作用研究

目的 研究高迁移率族蛋白N2（HMGN2）对人舌癌裸鼠移植瘤生长的抑瘤作用。方法 裸鼠腋下注射接种舌鳞癌细胞 Tca8113以建立裸鼠移植瘤模型,接种 7d成瘤后,设立阴性对照组、 HMGN2蛋白组和阳性对照组,在瘤体周边分别注射含 washingbufferⅡ、 HMGN2蛋白和顺铂的细胞培养基。观察各组裸鼠肿瘤的生长情况,经过4次给药后处死裸鼠,取出瘤块,称其质量计算抑瘤率,并行苏木精-伊红（HE）染色观察形态学变化。结果 成功建立舌癌裸鼠移植瘤模型。HMGN2蛋白组和阳性对照组肿瘤体积明显小于阴性对照组。裸鼠体重在整个实验过程中并没有明显的变化。阴性对照组、HMGN2蛋白组、阳性对照组的肿瘤质量平均值分别为（0.38±0.19）、（ 0.21±0.15）、（0.23±0.16）g,3组间的差异无统计学意义。HMGN2蛋白组和阳性对照组的抑瘤率分别为45.71%和39.44%。肿瘤经肉眼观察可见阴性对照组瘤块较大,HE染色可见 HMGN2蛋白组和阳性对照组细胞坏死明显。结论 HMGN2蛋白可以明显抑制人舌癌裸鼠移植瘤的生长。     

高迁移率族蛋白N2免疫组织化学定位及其活性结构抑菌性能的体外实验研究

目的 研究高迁移率族蛋白N2(HMGN2)在猪组织中的免疫组织化学定位情况,体外评价HMGN2的活性结构α-螺旋的抑菌性能.方法 采用免疫组织化学法,观察HMGN2蛋白在猪组织中的表达;采用高效液相色谱法从猪的胸腺和淋巴结中分离和纯化HMGN2,人工合成HMGN2的活性结构α-螺旋,采用液体稀释法体外评价HMGN2及HMGN2 α-螺旋结构对变异链球菌、表兄链球菌、白假丝酵母菌及大肠杆菌的抑菌性能.结果 从猪的胸腺和淋巴结中成功分离和纯化得到HMGN2,所有受检猪组织均呈HMGN2免疫阳性反应,且HMGN2多表达在组织细胞质和细胞核中;HMGN2和HMGN2 α-螺旋结构抑菌活性相当,均对所选实验菌株均表现出不同的抑菌性能.结论 HMGN2可表达在猪组织的细胞浆和细胞核中,HMGN2及其活性结构α-螺旋具有较强的抑菌性能.     

口腔鳞状细胞癌组织中C-erbB-2蛋白表达的免疫组化定量分析

目的 探讨C-erbB-2蛋白在口腔鳞状细胞癌组织中表达的意义。方法 采用单克隆抗体免疫组化S-P法，对58例口腔鳞状细胞癌和12例正常口腔粘膜进行免疫组化染色，检测C-erbB-2基因的表达情况，并采用全自动图像分析仪对染色结果进行定量分析。结果 口腔鳞状细胞癌中C-erbB-2的表达高于正常粘膜，高分化口腔鳞状细胞癌表达低于中低分化者，颈淋巴结转移组高于未转移组。结论 C-erbB-2在口腔鳞状细胞癌中存在过度表达，其表达程度越高，提示肿瘤的恶性肿瘤程度越高，越容易发生转移或局部浸润。     

MMP－2 siRNA促进口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡作用的研究

目的：研究基质金属蛋白酶－2（MMP－2）siRNA对口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡的作用。方法：采用MMP－2 siRNA慢病毒感染Tca8113,qPCR检测MMP－2表达,MTT检测细胞活性,Annexin－V单染检测细胞凋亡。结果：MMP－2 siRNA慢病毒成功抑制Tca8113中MMP－2 mRNA表达。MMP－2干扰组细胞活性显著低于阴性病毒组（P＜0．01）,且细胞凋亡率高于阴性对照组（P＜0．01）。结论：MMP－2干扰能促进Tca8113凋亡,起到抗肿瘤效应。     

高迁移率族蛋白B1对人牙髓细胞迁移能力和增殖效应的影响术

目的：观察高迁移率族蛋白B1（HMGBl）在人牙髓细胞（Human dental pulp cells,hDPCs）中的表达,以及对hDPCs增殖和迁移能力的影响。方法：采用组织块培养法,培养原代hDPCs,取第3-6代细胞用于实验。免疫荧光检测HMGBl在hDPCs中的表达及定位;分别用含不同质量浓度（0．1ng／mL、1ng／mL、10ng／mL、50ng／mL、100ng／mL、500ng／mL、1000ng／mL）HMGBl的培养液培养hDPCs,5天后采用CCK一8法检测细胞增殖能力;细胞划痕实验法观察1ng／mL质量浓度HMGBl对hDPCs迁移能力的影响。结果：HMGBl表达在hDPCs胞核：低浓度HMGBl（O．1ng／mL、1ng／mL、10ng／mL、50ng／mL、100ng／mL）明显促进细胞增殖;1ng／mLHMGBl明显促进hDPCs迁移能力。结论：HMGBl表达在正常hDPCs胞核中,细胞外低浓度HMGBl可以促进细胞增殖和迁移。     

丙戊酸钠抑制口腔鳞状细胞癌生长的实验研究

目的:本实验探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸钠(VPA)对口腔鳞状细胞癌(Tca-8113)生长抑制情况以及促进凋亡的作用。方法:采用0、0.1、2.5、5、10、12.5、25、50、100mmol/L丙戊酸钠对口腔鳞状细胞癌进行干预,倒置相差显微镜观察细胞形态改变;CCK-8法检测细胞增殖活性;ELISA方法及Annexin-V-FITC/PI双染法检测对细胞凋亡的作用。结果:倒置相差显微镜下观察到对照组细胞呈多边形,贴壁,生长活跃;实验组细胞形态改变明显,大部分细胞核固缩,细胞变小、变圆、脱壁。细胞生长曲线显示,随丙戊酸钠浓度增加、时间延长,Tca-8113细胞生长明显受到抑制,各实验组细胞存活率与对照组相比(P<0.05),差别有统计学意义。2.5、10mmol/L丙戊酸钠作用24h,细胞总凋亡率分别为9.2%和26.7%,与对照组3.6%相比,差别均有统计学意义。结论:丙戊酸钠体外抑制口腔鳞状细胞癌生长,呈时间-剂量依赖性,并诱导细胞凋亡。     

口腔扁平苔藓及口腔鳞状细胞癌Caspase-3及Bcl-2表达的研究

口腔扁平苔藓(oral lichen planus，OLP)是一种皮肤黏膜联发疾病，1972年世界卫生组织将OLP归入癌前状态。口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)为口腔中最常见的肿瘤之一。大量研究认为肿瘤的产生与细胞凋亡受阻有关，细胞凋亡和细胞增殖相辅相承，很多肿瘤正是由于细胞增殖与死亡的速度平衡失调造成的，失调的程度决定着肿瘤的发生和发展。     

肿瘤抑制蛋白Maspin在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

目的探讨Maspin蛋白在口腔鳞状细胞癌（OSCC）发生发展过程中的作用,为临床应用提供理论依据。方法采用鼠抗人Maspin单克隆抗体及SP免疫组化法检测45例OSCC、33例癌旁组织及15例正常口腔组织中Maspin蛋白的表达水平,用半定量积分法判断结果。结果在正常口腔组织、癌旁组织和OSCC组织中Maspin蛋白表达阳性率分别为86.67％（13/15）、72.73%（24/33）和37.78%（17/45）。Maspin蛋白在OSCC组织、癌旁组织和正常口腔组织中表达逐渐增高,其中OSCC组织和正常口腔组织、OSCC组织和癌旁组织、癌旁组织和正常口腔组织之间表达差异有统计学意义（P<0.05）。Maspin蛋白的表达与OSCC淋巴结转移和组织学分级有关（P＜0.05）,与TNM分期无关（P＞0.05）。结论Maspin蛋白在OSCC的发生发展过程中可能起着重要作用,检测OSCC组织中Maspin蛋白的表达水平可能有助于对淋巴结转移潜能的预测。     

浅蓝菌素诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡的实验研究

目的 :观察浅蓝菌素诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡作用 ,探讨浅蓝菌素抗癌的可能性。方法 :TCA 83细胞经浅蓝菌素 (10 μg/ml)处理 2 4h后 ,提取基因组DNA ,行DNA凝胶电泳。舌癌新鲜组织经浅蓝菌素(10 μg/ml)处理 2 4h后 ,行原位细胞凋亡染色 (TUNEL)。 结果 :DNA凝胶电泳得到典型的梯状DNA电泳图 ,TUNEL分析显示 ,浅蓝菌素处理组癌细胞凋亡率明显高于未经浅蓝菌素处理的癌细胞凋亡率 (P <0 .0 0 0 1) ,浅蓝菌素诱导高分化鳞状细胞癌凋亡的作用更强。结论 :浅蓝菌素可直接诱导口腔鳞状细胞癌细胞发生凋亡 ,为脂肪酸合酶抑制剂的临床应用提供了直接的参考。     

人口腔上皮鳞状细胞癌发生发展过程中Bcl-2蛋白表达的研究

目的：研究Ｂｃ１－２蛋白表达在口腔鳞状细胞癌发生发展过程中的作用及可能的临床意义。方法：对８５例病变标本采用鼠抗人Ｂｃ１－２蛋白单克隆抗体进行免疫组织化学染色。结果：正常口腔粘膜Ｂｃ１－２免疫组化染色均为阴性,口腔上皮单纯增生、异常增生、鳞癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级Ｂｃ１－２蛋白阳性表达率分别为１８．７５％、５２．１７％、１８．１８％、２２．２２％和５３．３３％。口腔粘膜异常增生Ｂｃ１－２蛋白阳性表达率显著高     

Detection of human papillomaviruses of high oncogenic potential in oral squamous cell carcinoma in a Venezuelan population

OBJECTIVE: The aim of this work was to detect and typify human papillomaviruses (HPV) in oral squamous cell carcinoma (OSCC) in a Venezuelan population. MATERIAL(S) AND METHODS: Eighteen tissue samples were obtained from biopsies, formalin-fixed, and paraffin-embedded; 16 were diagnosed as SCC. We isolated DNA from paraffin-embedded tissue; two to three sections of 5 microm were obtained and resuspended in digestion buffer and proteinase K. Five microliters of the aqueous phase was used for polymerase chain reaction (PCR). The PCR for HPV amplification was carried out with consensus primers for L1 region (MY09 and MY11) and beta-globin gene was used as internal control. The viral types were determined by molecular hybridization with a mix of probes for high/intermediate and low HPV oncogenic risk types. RESULTS: The HPV-DNA was detected in 50% (eight of 16) of the SCC cases. Of these HPV-DNA-positive samples, 68% were histopathologically diagnosed as moderately differentiated SCC. The most common anatomical location was the alveolar ridge mucosa. All positive biopsies contained high oncogenic HPV types. CONCLUSIONS: We observed a high prevalence of HPV infection of high oncogenic potential types in patients with SCC in our studied group. The moderately differentiated SCCs were more associated to HPV infection. These differences could be influenced by nutritional, environmental and genetical factors in our population but further studies should be carried out to determine these aspects.     

口腔鳞状细胞癌中NCAPD2的表达水平及生物学功能

目的 探讨非SMC凝集素Ⅰ复合亚基D2(NCAPD2)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达及生物学功能。方法 首先应用数据库分析NCAPD2在头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma, HNSCC)中的表达,然后采用免疫组化法在OSCC标本中进行验证。应用高内涵筛选(high-content screening, HCS)、流式细胞仪及蛋白质印迹法(Western Blot)检测OSCC细胞的增殖、凋亡及凋亡相关蛋白的表达。结果 NCAPD2在HNSCC中高表达,且与HNSCC临床分期、病理分级和淋巴结转移有关。免疫组化显示OSCC组织中的NCAPD2表达显著高于健康口腔组织(P<0.001),且NCAPD2表达与OSCC病理分级之间存在显著相关性。敲减NCAPD2能够抑制OSCC细胞的增殖促进凋亡。此外,BCL-2,p21表达下调,BAX,p53表达上调。结论 NCAPD2有望成为OSCC治疗的一个靶点。     

端粒酶卡侯体蛋白1干扰慢病毒对口腔鳞状细胞癌细胞裸鼠致瘤作用的研究

目的：探测端粒酶卡侯体蛋白1（TCAB1）基因沉默对裸鼠移植瘤生长及肿瘤细胞生物学行为的影响。方法采用定量荧光原位杂交（Q-FISH）方法测定RNA干扰慢病毒shTCAB1和sh阴性对照（NC）处理后经稳定筛选26代人口腔鳞状细胞癌（OSCC）的Cal27细胞系染色体末端端粒的信号强度。然后将RNA干扰的Cal27细胞接种于裸鼠颈部皮下左、右两侧,定期监测肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,称取瘤体重量。采用免疫组织化学检测移植瘤组织中TCAB1、B细胞淋巴瘤蛋白-2（Bcl-2）、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3、血管内皮生长因子（VEGF）和细胞周期蛋白D1的表达。结果 Q-FISH结果显示,shTCAB1处理后的Cal27细胞较shNC处理后及野生型Cal27细胞的端粒平均长度明显缩短。shTCAB1处理组OSCC移植瘤生长速度明显较shNC对照组减慢。移植瘤平均重量为0.06 g,对照组为0.26 g,抑瘤率达76.9%。免疫组织化学结果显示,shTCAB1组移植瘤中TCAB1表达明显降低,同时,Bcl-2、VEGF和细胞周期蛋白D1的表达降低,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3的表达升高。结论shTCAB1慢病毒能够明显抑制裸鼠人OSCC移植瘤的生长,其抗肿瘤机制与诱导肿瘤细胞凋亡、延长肿瘤细胞分裂周期及抑制血管生成有关。     

雷公藤内酯醇对人口腔鳞状细胞癌细胞株Tca8113作用的实验研究

目的 观察雷公藤内酯醇对人口腔鳞状细胞癌细胞株Tca8113的抑制作用,并与传统化疗药物顺铂的作用相比较,评价其作为抗头颈部恶性肿瘤药物的价值.方法噻唑蓝比色法检测雷公藤内酯醇和顺铂对Tca8113增殖的抑制作用,形态学观察经药物作用后细胞的生长情况.结果雷公藤内酯醇对Tca8113的增殖有明显抑制作用,呈量-效、时-...     

Skp2蛋白在口腔鳞癌中的表达及其与c-myc、p27蛋白表达的关系

目的:研究Skp2、c-myc及p27蛋白在口腔鳞癌组织中的表达.方法:免疫组化检测Skp2、c-myc及p27蛋白在54例口腔鳞癌和15例正常口腔黏膜组织中的表达.结果:口腔鳞癌组织中Skp2、c-myc阳性表达率分别为35.19%(19/54)和38.89%(21/54),显著高于正常口腔黏膜组织6.67%(1/15)、6.67%(1/15)(P＜0.05);p27阳性表达率为55.56%(30/54)显著低于正常口腔黏膜组织86.67%(13/15)(P＜0.05);Skp2的表达与口腔鳞癌的临床分期、病理分级、淋巴结转移显著相关(P＜0.05),与年龄、性别、肿瘤部位等因素无关(P＞0.05);口腔鳞癌中Skp2与c-myc表达呈正相关(r=0.562,P＜0.01);与p27蛋白的表达呈负相关(r=-0.532,P＜0.01).结论:Skp2蛋白过表达在口腔鳞癌的发生及发展中起重要作用;并可能与c-myc蛋白有协同作用,Skp2蛋白过表达与靶蛋白p27蛋白降解有关,联合检测Skp2、c-myc及p27蛋白的表达有助于综合评估口腔鳞癌的生物学行为.     

新辅助化疗对口腔鳞状细胞癌Survivin表达影响及意义

目的研究新辅助化疗对口腔鳞状细胞癌组织中Survivn蛋白表达的影响。方法选择18例活检病理确诊为口腔鳞癌的临床病例,予DFP方案行术前新辅助化疗2个疗程,分别取新辅助化疗前、后肿瘤组织,另取唇裂修补术中切除的多余的唇组织为口腔正常组织对照组10例,共3组,进行免疫组化染色检测Survivin表达。结果正常口腔组织、新辅助化疗前、后肿瘤组织Survivin阳性细胞表达率分别为(14.50±1.96)%、(57.78±3.39)%、(45.72±2.32)%,组间比较F=814.37,P<0.05。Survivin平均吸光度值为12.75±1.13、77.90±12.64、47.17±15.08,组间比较F=90.98,P<0.05。结论 Survivin在DFP方案新辅助化疗后表达显著降低。