半夏蛋白对人肝癌细胞Bel-7402生长抑制作用的研究

目的:观察并比较半夏蛋白对体外培养人肝癌细胞Bel-7402生长的抑制作用.方法:应用MTT技术检测半夏蛋白对人肝癌细胞Bel-7402的抑制作用,并观察其量效关系.结果:30%沉淀、60%沉淀及Tris-HCl洗脱峰的量效关系不明显,0.05M和0.1M NaCl的洗脱峰呈现较好的量效关系,且对Bel-7402细胞的抑制作用与空白对照组有显著性差异(P＜0.05).结论:层析后的半夏蛋白对体外培养肝癌细胞增殖有较好的抑制作用,呈现显著的量效关系.     

水红花子不同提取物对人肝癌细胞Bel-7402增殖抑制作用的研究

目的：观察水红花子不同提取物对人肝癌细胞Bel-7402生长的抑帝】作用,筛选其有效作用部位。方法：采用系统溶剂法制备水红花子不同提取物,MTT法观察水红花子不同浓度的各提取物对人肝癌细胞Bel-7402增殖的的抑制作用;通过光学显微镜、透射电镜观察凋亡细胞的形态学及超微结构的改变,并用流式细胞仪检测其乙酸乙酯提取物对该细胞周期分布及凋亡的影响。结果：水红花子石油醚、乙酸乙酯和正丁醇提取物对人肝癌细胞Bel-7402均有-定的抑制作用,其中乙酸乙酯提取物抑制作用最明显,呈现较好的剂量-效应曲线;流式细胞仪检测发现水红花子乙酸乙酯提取物可阻滞Bel-7402细胞周期于G0／G1期,诱导肿瘤细胞凋亡。结论：水红花子乙酸乙酯提取物可能是其抗肝癌作用的有效部位之-。     

半夏类药材不同提取物对人肝癌细胞Bel-7402生长抑制作用的研究

目的:观察并比较半夏类药材的不同提取物对体外培养的人肝癌细胞Bel-7402的生长抑制作用。方法:应用MTT技术,检测半夏类药材不同提取物对人肝癌细胞Bel-7402的抑制作用。并观察了不同提取物抑制作用的量效关系。结果:所有乙酸乙酯提取的部位都有比较好地抑制Bel-7402细胞增殖的作用(P<0.01);乙醇提取部位有一定抑制作用(P<0.05);而所有石油醚提取部位都无明显作用。此外,乙酸乙酯和乙醇提取部分对肝癌Bel-7402细胞生长抑制作用,存在着显著的量效关系,其中以亳州掌叶半夏最为明显。结论:半夏乙酸乙酯和乙醇提取物有抑制体外培养肝癌细胞增殖的作用,呈现出显著的量效关系。     

白头翁皂苷调节Bel-7402人肝癌异体移植瘤裸鼠能量代谢的研究

目的 考察白头翁Pulsatilla chinensis皂苷对人肝癌Bel-7402荷瘤裸鼠异体移植瘤的抑制作用,并从能量代谢角度探讨其作用机制。方法 制备人肝癌Bel-7402裸鼠异体移植瘤模型,通过肿瘤体积、抑瘤率观察白头翁皂苷的体内抗肿瘤活性;生物化学法检测瘤块组织乳酸及ATP的量以观察白头翁皂苷对能量代谢的调节作用;ELISA法检测白头翁皂苷对能量代谢相关酶变化的影响;Western blotting 法检测白头翁皂苷对能量代谢调控蛋白缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的影响。结果 白头翁皂苷能较好地抑制肝癌荷瘤裸鼠异体移植瘤的生长,可明显减小肿瘤体积,白头翁皂苷400、200、100 mg/kg抑瘤率依次为42.8%、31.5%、14.9%,呈剂量依赖关系,且对血液白细胞（WBC）无明显影响;白头翁皂苷能明显降低瘤块组织中乳酸和ATP的量;白头翁皂苷可降低糖酵解关键酶己糖激酶-II（HK-II）、磷酸果糖激酶（PFK）及丙酮酸激酶（PK）的量,提高三羧酸循环关键酶琥珀酸脱氢酶（SDH）的量;Western blotting检测结果显示白头翁皂苷可明显降低瘤块组织HIF-1α蛋白的表达。结论 白头翁皂苷具有较好的体内抗肿瘤作用,其可能通过HIF-1α通路调节肿瘤细胞能量代谢,来达到抑制肿瘤生长的作用。     

金线莲抗肿瘤活性部位的体外筛选及对LoVo细胞凋亡的影响

目的体外筛选出金线莲抗肿瘤作用的最佳活性部位,并检测其对肿瘤细胞凋亡的影响。方法采用MTT实验检测金线莲不同极性部位对人宫颈癌He La细胞、人体黑色素瘤A375细胞、人喉癌Hep-2细胞和人结肠癌Lo Vo细胞增殖抑制作用,从而筛选出活性最佳部位及对应细胞系。HE和AO/EB染色法观察最佳活性部位处理后细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡。结果 MTT实验结果显示,石油醚部位对各肿瘤细胞的生长增殖具有较强的抑制作用,其中对Lo Vo细胞的抑制效果最明显,作用48 h后其IC50为(45.51±1.66)μg/m L。HE染色和AO/EB荧光染色结果都显示石油醚部位作用于Lo Vo细胞后,出现了典型的凋亡形态学特征。流式细胞术检测经不同浓度石油醚部位作用后,Lo Vo细胞凋亡率和坏死率随浓度的增大逐渐上升。结论金线莲石油醚部对肿瘤细胞具有较强的抑制作用,其作用方式可能是通过诱导细胞凋亡来实现的。     

鲜壁虎水提物联合环磷酰胺对BEL-7402细胞增殖及P-糖蛋白表达的影响

目的:探讨鲜壁虎水提物(aqueous extracts of gecko,AG)与化疗药物环磷酰胺(CTX)联用对人肝癌细胞株BEL-7402增殖的抑制作用,比较两药联用的疗效是否优于单药,并检测两种药物联用对BEL-7402细胞P-糖蛋白(permeability-glycoprotein,P-gp)表达的影响,为二者临床联用提供实验依据。方法:MTT法检测药物对BEL-7402细胞株的增殖抑制作用,通过计算药物联合作用指数(combination index,CI)分析两种药物联用的效应;Western Blot检测两药联用后BEL-7402细胞株P-gp表达的变化,Quantity One软件对结果进行半定量分析。结果:当抑制率达到90%时,0.830或0.996 mg/m L的AG分别与10或5μmol/m L CTX合用显示为低度协同作用;CTX与AG联用后可降低BEL-7402细胞P-gp的表达,当4μmol/m L CTX与1.162 mg/m L的AG联用时抑制率达67.3%。结论:AG与CTX联合后对BEL-7402细胞增殖的抑制作用优于二者单用,显示为低度协同作用;同时能降低细胞P-gp的表达水平,提示AG与CTX联用可能有较好的抗肿瘤效果,并可逆转由Pgp介导的肿瘤细胞耐药的作用。     

膈下逐瘀汤对肝癌Bel-7402细胞增殖的抑制及与磷酸化AKT的相关性研究

目的：观察膈下逐瘀汤对肝癌Bel-7402细胞增殖的抑制及与磷酸化AKT的相关性研究。方法：膈下逐瘀汤配成浓度分别为：膈下逐瘀汤(C1)：0．25×10~(-4)g/mL,膈下逐瘀汤(G2)：0．5×10~(-4)g/mL,膈下逐瘀汤(G3)：1．0×10~(-4)g/mL,膈下逐瘀汤(G4)：2．0×10~(-4)g/mL；顺铂配制成浓度分别为：顺铂(S1)：0．5μg/mL,顺铂(S2)：1．0μg/mL,顺铂(S3)：1．5μg/mL,顺铂(S4)：2．0μg/mL,作用于Bel-7402细胞,用噻唑兰(MTT)比色法检测膈下逐瘀汤各组对Bel-7402细胞生长的影响,并且与顺铂各组相对照,用蛋白印迹试验(Western blot- ting analysis)检测不同浓度药物作用48h、72h时磷酸化AKT的表达水平。结果：膈下逐瘀汤对肝癌Bel-7402细胞的增殖及磷酸化AKT的表达均有显著的抑制作用,膈下逐瘀汤浓度在2．0×10~(-4)g/mL时其48h细胞生长抑制率介于S1组与S2组之间。结论：膈下逐瘀汤抑制肝癌Bel-7402细胞增殖的机制可能是通过抑制了细胞内磷酸化AKT这一途径而起作用。     

蒲葵子抗肿瘤活性部位筛选及抗血管生成作用

目的：筛选蒲葵子抗肿瘤作用的活性部位,探讨蒲葵子抗血管生成的作用机制。方法：采用MTT法检测蒲葵子醇提物各分离部位对肿瘤细胞株增殖的影响,ELISA法检测对肿瘤细胞分泌血管内皮生长因子（VEGF）水平的影响。以活性部位作用于VEGF诱导的人脐静脉内皮细胞株（HUVEC）,RT-PCR和Western Blotting方法分析内皮细胞Flk-1 mRNA和蛋白的表达变化。结果：蒲葵子醇提物乙酸乙酯部位可选择性抑制结肠癌细胞株HT-29和膀胱癌细胞株T24肿瘤细胞的生长,其抑制率可分别达74.66%和86.52%,并可显著降低各肿瘤细胞株分泌VEGF水平。石油醚部位对HT-29和T24生长也有一定的抑制作用,其最高抑制率分别为43.80%和38.67%,并可降低各肿瘤细胞分泌VEGF水平,但作用强度均不及乙酸乙酯部位。水和正丁醇部位未表现抗肿瘤活性。对VEGF诱导内皮细胞表达FlK mRNA和蛋白,乙酸乙酯部位表现出明显的抑制作用。结论：蒲葵子醇提物乙酸乙酯分离部位有较好的抗肿瘤作用,是抗肿瘤作用的主要活性部位,其作用机制可能与降低肿瘤细胞分泌VEGF,抑制VEGF诱导内皮细胞表达Flk-1 mRNA和蛋白有关。     

西黄丸不同溶剂提取部位对A549细胞的抑制作用研究

目的：以水、乙酸乙酯、正丁醇、石油醚为提取溶剂,研究西黄丸不同极性部位对人肺腺癌细胞株A549的抑制作用,为西黄丸的剂型改造提供实验依据。方法：以MTT法测定水、乙酸乙酯、正丁醇、石油醚提取液对A549的抑制作用,计算每种溶剂提取物的半数抑制浓度（IC50）。结果：水、乙酸乙酯、正丁醇、石油醚提取溶剂对A549的IC50分别为396．4,27．3,122．3,43．6μg／mL。结论：乙酸乙酯提取溶剂对A549的抑制效果最好,石油醚次之,且随浓度增加呈剂量依赖关系。为提高西黄丸药效物质浓度．剂型改造提供了实验依据。     

栀子炒炭止血活性部位的药效学筛选研究

目的确定栀子炭止血作用活性部位.方法对栀子炭按不同提取方法、不同溶剂极性提取,以小鼠的止血时间为筛选指标对各部位进行筛选.结果栀子炭水煎煮法可明显缩短小鼠凝血时间;栀子炭的乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水部位可以明显缩短小鼠的凝血时间.结论正丁醇部位、水部位、乙酸乙酯部位为栀子炭止血作用的主要活性部位.     

吴茱萸碱通过Hippo-YAP通路诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡的实验研究

目的探讨吴茱萸碱对人肝癌细胞株BEL-7402凋亡的影响并阐明其发挥作用的可能机制。方法 CCK-8法检测吴茱萸碱对BEL-7402细胞增殖的影响;Hoechst 33258染色观察吴茱萸碱对BEL-7402细胞凋亡现象的影响;流式细胞术观察吴茱萸碱对BEL-7402细胞凋亡和周期的影响;实时荧光定量PCR(q RT-PCR)和Western blotting实验检测Hippo-YAP通路中哺乳动物STE20样蛋白激酶1(MST1)、MST2、大肿瘤抑制因子1(LATS1)和Yes相关蛋白(YAP)在正常人肝细胞株HL-7702与BEL-7402细胞中的表达差异及吴茱萸碱对BEL-7402细胞这些关键基因表达水平的影响;免疫荧光实验观察吴茱萸碱对BEL-7402细胞中YAP表达水平的影响。结果吴茱萸碱对BEL-7402细胞增殖活力具有明显的抑制作用(P0.05),呈浓度和时间依赖性;Hoechst 33258染色显示吴茱萸碱能够引起BEL-7402细胞出现核固缩、核边集等凋亡的典型形态学改变。流式细胞术结果提示吴茱萸碱能够诱导BEL-7402细胞出现凋亡数目增多和G2/M期阻滞(P0.01);q RT-PCR和Western blotting检测结果提示,与HL-7702细胞相比,MST2和LATS1在BEL-7402细胞中的表达明显下调(P0.05),YAP则明显升高(P0.05);吴茱萸碱能够激活Hippo信号通路,分别上调MST2、LATS1和抑制YAP在BEL-7402细胞中的表达水平(P0.05)。免疫荧光结果显示吴茱萸碱能够显著抑制BEL-7402细胞中过表达的YAP荧光强度(P0.01)。结论吴茱萸碱能诱导BEL-7402细胞的凋亡,其机制可能是通过激活Hippo信号通路,进而抑制下游关键基因YAP的表达。     

基于UPLC-Q-Orbitrap HRMS技术的龙眼叶降血糖有效部位化学成分分析

目的:为明确龙眼叶的降血糖物质基础,采用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱法(UPLC-Q-OrbitrapHRMS)对龙眼叶有效部位的化学成分进行快速分析和鉴定.方法 :采用Thermo Hypersil GOLD C,8色谱柱(2.1 mmx 100 mm,1.9 μm),流动相0.1％甲酸乙腈溶液-0...     

温阳散结中药诱导BEL-7402细胞凋亡的初步研究

目的 :探讨温阳散结中药的抗肿瘤机制 ,研究温阳散结中药诱导BEL-7402细胞凋亡作用。方法 :采用细胞形态学、原位末端标记和流式细胞技术 ,观察温阳散结中药对BEL-7402细胞的影响。结果 :BEL-740 2细胞经中药处理后 ,光镜下可见凋亡细胞的形态学特征性改变 ,TUNEL标记阳性 ,流式细胞仪分析DNA含量 ,在非凋亡细胞二倍体峰 (G1)之前细胞出现典型的凋亡细胞峰 (Ap峰 )。 0005g·ml-1中药组和001g·ml^-1中药组发生凋亡的细胞数分别为139%和 216%。结论 :温阳散结中药可诱导BEL-740 2细胞发生凋亡 ,并有随浓度升高作用增强的趋势 ,实验结果表明 ,诱导肿瘤细胞凋亡可能是温阳散结中药治疗肝癌的作用机理之一。     

40种香豆素类化合物对人胃癌细胞株BGC和人肝癌细胞株BEL-7402细胞生长抑制活性的筛选

目的:寻找中药中抗肿瘤活性化合物和先导化合物,为开发新药奠定基础。方法:采用人胃癌细胞株BGC和人肝癌细胞株BEL-7402体外培养法,鉴定受试的40种香豆素类化合物对其生长的抑制作用。结果:伞形花内酯刘寄奴酸酯、木桔素、环氧酸橙皮油素、酸橙皮油素、前胡酮、芸香苦素、牛防风素和异香柑内酯对人胃癌细胞株BGC细胞的生长有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系;伞形花内酯刘寄奴酸酯、异虎耳草素、前胡素和二氢山芹醇当归酸酯对人肝癌细胞株BEL-7402细胞的生长有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系。结论:香豆素类化合物是潜在的抗肿瘤药物。     

44种生物碱类化合物对人胃癌细胞株BGC和人肝癌细胞株BEL-7402细胞增殖抑制活性的筛选

目的：从中药中筛选有抗肿瘤活性的化合物。方法：应用人胃癌细胞株BGC和人肝癌细胞株BEL-7402筛选44种生物碱类化合物对其增殖的抑制作用。结果：伊波加因、哈尔明碱、黄连碱、小檗碱、延胡索碱、小檗胺、吐根碱、马兜铃酸Ⅰ、番茄碱苷、澳洲茄次碱、茄次碱、金鸡宁、罂粟碱和酒石酸麦角胺对人胃癌细胞株BGC细胞的增殖有一定程度的抑制作用。且呈浓度一效应关系；最强者为黄连碱、延胡索碱、小檗胺、吐根碱、番茄碱苷、澳洲茄次碱和金鸡宁，其次为伊波加因、哈尔明碱、小檗碱、马兜铃酸Ⅰ、茄次碱、罂粟碱和酒石酸麦角胺。蛇根精、γ-崖椒碱、黄连碱、小檗碱、延胡索碱、吐根碱、马兜铃酸Ⅰ、茄次碱和喜树碱对人肝癌细胞株BEL-7402细胞的增殖有一定程度的抑制作用，且呈浓度-效应关系；最强者为吐根碱、小檗碱、延胡索碱和喜树碱，其次为黄连碱、马兜铃酸Ⅰ和茄次碱。结论：上述生物碱类化合物可能是含有该生物碱、有抗肿瘤活性中药的有效成分，亦可能成为开发抗肿瘤新药的候选药物。     

全蝎蛋白药效组分对Bel7402肿瘤细胞凋亡的影响

目的:研究全蝎(Scorpio)蛋白药效组分对Bel7402肿瘤细胞凋亡的影响,为建立全蝎与临床疗效对应的生物效应质量评价方法奠定基础。方法:蛋白质提取和冷冻干燥的方法获得全蝎蛋白药效组分,采用改良MTT法、流式细胞法研究全蝎蛋白药效组分对Bel7402细胞毒和细胞周期抑制的作用。结果:抑制癌细胞生长的浓度大于或等于37 g.L-1,剂量与效应呈正比,相关系数为0.912 5,IC50为241 g.L-1,显效时间0～48 h;全蝎蛋白药效组分浓度大于或等于9.25 g.L-1时,能显著提高Bel7402细胞的凋亡率。结论:全蝎蛋白药效组分具有促进Bel7402细胞凋亡、抑制增殖的作用,其生物效应指标为:9.25～175 g.L-1,可作为全蝎生物效应质量评价的指标之一。     

Polyphenol‐Rich Fraction from Larrea divaricata and its Main Flavonoid Quercetin‐3‐Methyl Ether Induce Apoptosis in Lymphoma Cells Through Nitrosative Stress

Larrea divaricata is a plant with antiproliferative principles. We have previously identified the flavonoid quercetin‐3‐methyl ether (Q‐3‐ME) in an ethyl acetate fraction (EA). Both the extract and Q‐3‐ME were found to be effective against the EL‐4 T lymphoma cell line. However, the mechanism underlying the inhibition of tumor cell proliferation remains to be elucidated. In this work, we analyzed the role of nitric oxide (NO) in the induction of apoptosis mediated by Q‐3‐ME and EA. Both treatments were able to induce apoptosis in a concentration‐dependent and time‐dependent manner. The western blot analysis revealed a sequential activation of caspases‐9 and 3, followed by poly‐(ADP‐ribose)‐polymerase cleavage. EA and Q‐3‐ME lowered the mitochondrial membrane potential, showing the activation of the intrinsic pathway of apoptosis. Q‐3‐ME and EA increased NO production and inducible NO synthase expression in tumor cells. The involvement of NO in cell death was confirmed by the nitric oxide synthases inhibitor L‐NAME. In addition, EA and Q‐3‐ME induced a cell cycle arrest in G0/G1 phase. These drugs did not affect normal cell viability. This data suggested that EA and Q‐3‐ME induce an increase in NO production that would lead to the cell cycle arrest and the activation of the intrinsic pathway of apoptosis. Copyright © 2016 John Wiley & Sons, Ltd.     

Insulin releasing and alpha-glucosidase inhibitory activity of ethyl acetate fraction of Acorus calamus in vitro and in vivo

Ethnopharmacological relevance

The radix of Acorus calamus L. (AC) is widely used in the therapy of diabetes in traditional folk medicine of America and Indonesia, and we previously reported the insulin sensitizing activity of the ethyl acetate fraction of AC (ACE).

Aim of the study

To investigate the insulin releasing and alpha-glucosidase inhibitory activity of ACE in vitro and in vivo.

Materials and methods

Insulin releasing and alpha-glucosidase inhibitory effects of different fractions from AC were detected in vitro using HIT-T15 cell line and alpha-glucosidase enzyme. Furthermore, effects of ACE orally on serum glucose were detected in fasted and glucose/amylum challenged normal mice.

Results

AC and ACE increased insulin secretion in HIT-T15 cells as gliclazide did. As in vivo results, ACE (400 and 800 mg/kg) significantly decreased fasting serum glucose, and suppressed the increase of blood glucose levels after 2 g/kg glucose loading in normal mice. In addition, ACE as a mixed-type inhibitor inhibited alpha-glucosidase activity in vitro with an IC₅₀ of 0.41 μg/ml, and 100 mg/kg of it clearly reduced the increase of blood glucose levels after 5 g/kg amylum loading in normal mice.

Conclusions

Apart from its insulin sensitizing effect, ACE may have hypoglycemic effects via mechanisms of insulin releasing and alpha-glucosidase inhibition, and thus improves postprandial hyperglycemia and cardiovascular complications.     

血竭石油醚提取物对人胃癌HGC-27和MGC-803细胞的抗肿瘤作用

目的:研究血竭石油醚提取物(SDPEF)对人胃癌HGC-27和MGC-803细胞增殖、凋亡、体外迁移能力及自噬的影响,并阐明其分子作用机制.方法:采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测SDPEF(0,20,40,60,80 mg·L-1)作用24,48,72 h时,对人胃癌HGC-27和MGC-803细胞体外增殖的...     

Anti-inflammatory and analgesic effects of Daphne retusa Hemsl

Daphne retusa Hemsl. belongs to the genus Daphne, a member of Thymelaeaceae family. The barks and stems of Daphne retusa are used as a folkloric medicine 'Zhu Shi Ma' in Western China because of its effects of detumescence and acesodyne. In this paper, we investigate the anti-inflammatory and analgesic effects of the 75% ethanol extract of the stems and barks of Daphne retusa and different fractions partitioned with petroleum ether, methylene chloride, ethyl acetate and n-butanol, respectively. The anti-inflammatory effects were evaluated using xylene-induced ear oedema in mice and carrageenan-induced paw oedema in rats, while the acetic acid-induced writhing test and hot-plate test as models for evaluating the centrally and peripherally analgesic activity. The results showed the plant has significant anti-inflammatory and analgesic effects (P<0.05-0.01). Meanwhile, the result of the acute toxicity test at which the MTD was above 5g/kg indicates that the plant extract is relatively safe in, and/or non-toxic to, mice. The findings of these experimental animal studies indicate that the Daphne retusa ethanol extract possesses anti-inflammatory and analgesic properties, and thus provide pharmacological support to folkloric, ethnomedical uses of 'Zhu shima' in the treatment and/of management of anti-inflammatory and painful conditions in China.