miRNA-101通过调控胎盘滋养细胞功能参与妊娠期糖尿病的发病

目的:研究miRNA-101对胎盘滋养细胞(HTR-8/SVneo)增殖和迁移能力的影响,探讨其在妊娠期糖尿病(GDM)中的可能作用机制。方法:收集GDM患者及正常孕妇胎盘组织,PCR、Western blot法检测胎盘组织中miR-101及下游因子EZH2表达,免疫组化法检测胎盘中EZH2及其下游因子H3K27me3的定位及表达。分别上调和抑制HTR-8/SVneo细胞中miRNA-101表达,PCR法检测EZH2 mRNA表达水平,Western blot法检测EZH2及H3K27me3蛋白表达,CCK-8法、Transwell实验检测细胞增殖和迁移能力。结果:GDM组胎盘组织中miR-101 mRNA表达明显高于正常组(P0.05),EZH2及H3K27me3表达显著低于对照组(P0.05)。上调miRNA-101后,HTR-8/SVneo细胞中EZH2及H3K27me3表达显著降低(P0.05),细胞增殖能力显著降低(P0.01),迁移能力明显降低(P0.05);抑制miR-101表达后,EZH2及H3K27me3表达显著升高(P0.05),细胞增殖能力无明显变化(P0.05),迁移能力显著增强(P0.001)。结论:GDM患者胎盘中miRNA-101表达异常升高,miRNA-101可能通过EZH2-H3K27me3途径使胎盘滋养细胞增殖及迁移能力降低,参与GDM发病的病理机制。     

SIRT3在早发型子痫前期胎盘组织中的表达及作用

目的:检测早发型子痫前期(eoPE)患者胎盘组织中SIRT3表达,探讨SIRT3对滋养细胞功能的调控及其可能机制。方法:免疫组化法和免疫印迹法检测eoPE患者胎盘中SIRT3表达。试剂盒检测eoPE患者胎盘组织氧化应激因子水平。应用瞬时转染质粒使HTR-8/SVneo细胞过表达SIRT3,检测滋养细胞的侵袭和迁移能力。通过CoCl₂构建滋养细胞氧化应激模型,研究SIRT3对HTR-8/SVneo细胞抗氧化应激能力的调控。免疫印迹法检测Akt信号通路关键蛋白表达。结果:eoPE患者胎盘组织中SIRT3表达较对照组显著降低,SOD和GSH-Px水平明显降低,MDA水平明显升高。过表达SIRT3可促进HTR-8/SVneo细胞侵袭和迁移,显著缓解CoCl₂诱导的滋养细胞氧化应激。过表达SIRT3可显著上调Akt信号通路上的关键蛋白表达。结论:胎盘组织中SIRT3下调参与eoPE病理过程。SIRT3可能通过Akt信号通路促进滋养层细胞侵袭、迁移以及维持细胞氧化应激处于平衡状态。     

长链非编码RNA中OIP5-AS1在重度子痫前期孕妇胎盘组织中的表达及意义

目的 探讨长链非编码RNA Opa相互作用蛋白5-反义转录物1(Opa-interactingprotein 5 antisense RNA 1, OIP5-AS1)在重度子痫前期孕妇胎盘组织中的表达及其可能作用。方法 采用实时定量荧光（RT-qPCR）法测定30例重度子痫前期孕妇和30例正常胎盘中OIP5-AS1和miR-29b表达情况;采用过划痕实验和Transwell侵袭实验检测缺氧条件下向人绒毛膜滋养层细胞系（HTR-8/SVneo细胞）内转染OIP5-AS1对HTR-8/SVneo细胞迁移和侵袭能力的影响;采用RT-qPCR法测定转染OIP5-AS1和OIP5-AS1基因的小干扰RNA(OIP5-AS1siRNA)后HTR-8/SVneo细胞微小RNA(microRNA,miRNA)miR-29b的表达情况。结果 在mRNA水平上,重度子痫前期组胎盘组织中OIP5-AS1较对照组表达降低（P <0.01）;过表达OIP5-AS1后,HTR-8/SVneo细胞迁移和侵袭能力增加,差异有统计学意义（P <0.01）;过表达OIP5-AS1后HTR-8/SVneo细胞中...     

PTEN在子痫前期胎盘滋养细胞浸润不足中的作用及机制研究

目的:检测子痫前期(PE)患者胎盘组织中PTEN表达,探讨PTEN对滋养细胞迁移功能的调控及其可能机制。方法:收集重度PE患者和正常孕妇的胎盘组织各20例,实时定量PCR和Western blot法检测胎盘组织中PTEN表达;将PTEN过表达质粒(pcDNA3.1-HA-PTEN)或特异性siRNA(siPTEN)瞬时转染至HTR-8/SVneo细胞,同时转染pcDNA3.1或siCTL作为对照。采用划痕实验评估细胞迁移能力,Western blot法检测p-Akt(Thr308)、p-Akt(Ser473)、Akt、MMP-2和MMP-9表达。结果:重度PE患者胎盘组织中PTEN mRNA和蛋白表达明显高于正常孕妇,差异均有统计学意义(P0.01)。与转染pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-HA-PTEN瞬时转染HTR-8/SVneo细胞48h后,细胞迁移率明显降低[(26.42±6.68)%vs(52.92±6.71)%,P0.01],p-Akt(Thr308)和p-Akt(Ser473)表达显著下调,Akt表达无明显改变,MMP-2和MMP-9蛋白表达下降;与转染siCTL组比较,siPTEN瞬时转染HTR-8/SVneo细胞48h后,细胞迁移率则明显升高[(50.39±6.84)%vs(30.04±5.40)%,P0.01],p-Akt(Thr308)和p-Akt(Ser473)的表达明显上调,Akt表达无明显改变,MMP-2和MMP-9蛋白表达升高。结论:重度PE患者胎盘组织中PTEN表达明显升高,PTEN可通过下调Akt活性降低MMP-2和MMP-9表达,抑制滋养细胞的迁移。提示PTEN在PE的发病中发挥了一定的作用。     

PTEN在子痫前期胎盘滋养细胞浸润不足中的作用及机制研究26

目的:检测子痫前期(PE)患者胎盘组织中PTEN表达,探讨PTEN对滋养细胞迁移功能的调控及其可能机制.方法:收集重度PE患者和正常孕妇的胎盘组织各20例,实时定量PCR和Western blot法检测胎盘组织中PTEN表达;将PTEN过表达质粒(pcDNA3.1-HA-PTEN)或特异性siRNA(siPTEN)瞬时转染至HTR-8/SVneo细胞,同时转染pcDNA3.1或siCTL作为对照.采用划痕实验评估细胞迁移能力,Western blot法检测p-Akt(Thr308)、p-Akt(Ser473)、Akt、MMP-2和MMP-9表达.结果:重度PE患者胎盘组织中PTEN mRNA和蛋白表达明显高于正常孕妇,差异均有统计学意义(P<0.01).与转染pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-HA-PTEN瞬时转染HTR-8/SVneo细胞48 h后,细胞迁移率明显降低[(26.42±6.68)%vs(52.92±6.71)%,P<0.01],p-Akt(Thr308)和p-Akt(Ser473)表达显著下调,Akt表达无明显改变,MMP-2和MMP-9蛋白表达下降;与转染siCTL组比较,siPTEN瞬时转染HTR-8/SVneo细胞48 h后,细胞迁移率则明显升高[(50.39±6.84)%vs(30.04±5.40)%,P<0.01],p-Akt(Thr308)和p-Akt(Ser473)的表达明显上调,Akt表达无明显改变,MMP-2和MMP-9蛋白表达升高.结论:重度PE患者胎盘组织中PTEN表达明显升高,PTEN可通过下调Akt活性降低MMP-2和MMP-9表达,抑制滋养细胞的迁移.提示PTEN在PE的发病中发挥了一定的作用.     

CCL2通过抑制白细胞介素-24表达增强人绒毛膜滋养细胞株的细胞活力

目的探讨白细胞介素-24(interleukin-24,IL-24)对人滋养细胞活力的调节作用。方法免疫组织化学法检测IL-24及其受体(IL-20R1、IL-20R2和IL-22R1)在正常早孕期绒毛组织的表达;In-cell Western法分析重组胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)和趋化因子CCL2对人绒毛膜滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞中IL-24表达的影响;MTT法分析重组IL-24和CCL2对HTR-8/SVneo细胞活力的影响。结果 IL-24及其受体均在正常早孕期绒毛组织滋养细胞中强阳性表达。与对照组相比,重组CCL2体外刺激后HTR-8/SVneo细胞IL-24表达水平显著下降(P0.001)。重组IL-24处理后,HTR-8/SVneo细胞活力显著降低(P0.05或P0.001);相反,IL-24中和性抗体明显促进其细胞活力(P0.05或P0.01),重组CCL2(100 ng/mL)可体外增强HTR-8/SVneo细胞活力(P0.01),但这一作用可被重组IL-24所抑制。结论 CCL2通过抑制IL-24分泌增强人滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞的体外活力,从而可能利于囊胚植入和胎盘发育。     

Wnt2在植入胎盘组织中的表达及其对滋养细胞迁移和侵袭功能的影响

目的检测Wnt2在植入胎盘组织中的表达,分析Wnt2对滋养细胞凋亡、迁移和侵袭功能的影响。方法收集2020年7月至2021年1月于武汉大学中南医院妇产科行剖宫产的胎盘植入孕产妇胎盘组织15例(植入组)和正常孕产妇胎盘组织15例(对照组)。RT-PCR法和Western blot法检测胎盘组织中Wnt2表达水平,采用siRNA敲低HTR-8/Svneo细胞中Wnt2表达水平,流式细胞学法检测细胞凋亡,Transwell侵袭和迁移实验评估细胞的迁移和侵袭能力,RT-PCR法和Western blot法检测β-catenin、Bcl-2、Caspase-3、MMP-2和MMP-9表达水平。结果与对照组相比,植入组胎盘组织中Wnt2、MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白表达量均显著升高(均P<0.05)。转染敲低HTR-8/Svneo细胞Wnt2水平后,细胞凋亡率显著增加(P<0.05),细胞迁移和侵袭能力显著抑制(P<0.01),β-catenin、Bcl-2、MMP-2和MMP-9表达显著下降(均P<0.05),而Caspase-3表达显著升高(P<0.05)。结论植入胎盘组织中Wnt2蛋白表达显著升高,且Wnt2可能通过wnt/β-catenin信号通路参与了胎盘滋养细胞的凋亡、迁移和侵袭。     

GPR30在妊娠期胎盘中的表达及其对滋养细胞侵袭能力影响的研究

目的:探讨G-蛋白偶联受体30(GPR30)在妊娠期胎盘中的表达,以及其对人胎盘滋养细胞侵袭力的影响。方法:免疫组化法检测早孕期绒毛、正常产妇胎盘和重度子痫前期患者胎盘组织中GPR30表达。用17-β-雌二醇(17β-E2)、GPR30激动剂G1和阻滞剂G15预处理体外培养绒毛组织和人绒毛外滋养细胞株HTR8/SVneo。显微镜下观察体外绒毛组织滋养细胞生长侵袭范围,Transwell侵袭实验检测HTR8/SVneo细胞侵袭能力。免疫荧光法检测绒毛组织和HTR8/SVneo细胞中GPR30蛋白表达。Western blot法检测HTR8/SVneo细胞中GPR30和MMP-9蛋白表达。结果:GPR30在早期绒毛组织和正常末期胎盘滋养细胞上都有表达,且早孕期的表达水平高于正常末期胎盘,但在重度子痫前期胎盘上GPR30蛋白表达明显减少。E2及GPR30激动剂G1可增加滋养细胞的侵袭能力,阻滞剂G15则可下调其侵袭性;E2、G1可诱导滋养细胞GPR30蛋白表达上调,而G15则下调其表达。GPR30蛋白水平与侵袭相关蛋白MMP-9表达水平有相关性。结论:GPR30可能参与人类滋养细胞侵袭力的调节,对滋养细胞的侵袭力有正性促进作用。     

子痫前期产妇胎盘组织中的氧化应激对Wiskott-Aldrich综合征关联蛋白2表达的影响

目的 探讨子痫前期产妇胎盘组织存在的氧化应激对胎盘滋养细胞Wiskott-Aldrich综合征关联蛋白2 (Wiskott-Aldrich syndrome related protein 2,WAVE 2)表达的影响. 方法 研究对象为2011年8月15日至2012年2月23日在重庆医科大学附属第一医院分娩的子痫前期产妇20例及正常足月产妇23例(对照组).剖宫产术后取胎盘组织,采用免疫组织化学法检测胎盘组织WAVE2的定位及分布.采用蛋白质印迹法检测胎盘组织WAVE2的表达,实时荧光定量聚合酶链反应法检测胎盘中WAVE2 mRNA的表达,采用组织匀浆法检测2组产妇胎盘组织活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,并对胎盘组织中ROS水平与WAVE2表达水平进行相关性分析.(2)通过构建体外滋养细胞缺氧复氧损伤模型,模拟缺血再灌注诱导的氧化应激损伤.人妊娠早期绒毛外滋养细胞株HTR 8/SVneo细胞贴壁完全后分别置于常氧(常氧组)和缺氧复氧条件(缺氧复氧组)下48 h,采用流式细胞仪分析细胞内ROS水平.采用Transwell实验观察细胞迁移侵袭状况.采用细胞免疫荧光法和蛋白质印迹法检测HTR-8/SVneo细胞内WAVE2的定位及表达水平的变化.采用独立样本t检验及Pearson相关检验对数据进行分析. 结果 (1)子痫前期组24 h尿蛋白、母体收缩压及舒张压均高于对照组,新生儿出生体重及胎盘重量均低于对照组[24 h尿蛋白:(1.96±0.24)g与(0.08±0.05)g,t=19.436;母体收缩压:(154±13) mm Hg与(98±11) mm Hg,t=11.324;母体舒张压:(105±14)mm Hg与(69±8)mm Hg,t=9.612;新生儿出生体重:(2446±187)g与(3207±233)g,t=16.307;胎盘重量:(432±53)g与(536±67)g,t=14.562;均P＜0.05].子痫前期组WAVE2 mRNA表达低于对照组[(0.28±0.07)与(1.01±0.02),t=12.747],WAVE2相对表达量低于对照组[(0.63±0.08)与(1.34±0.19),t=11.648],ROS水平高于对照组[(144.22±12.32) nmol/(mg·prot)与(75.17±8.71)nmol/(mg·prot),t=20.467],差异均有统计学意义(均P＜0.05).子痫前期组胎盘组织中ROS水平与WAVE2表达水平呈显著负相关(r=-0.726,P=0.000).(2)在常氧组中,HTR-8/SVneo细胞内的ROS水平为(82.9±5.8)％,而缺氧复氧组为(155.6±8.1)％,高于常氧组(t=12.747,P＜0.05).缺氧复氧48 h后的HTR-8/SVneo细胞与常氧组相比,迁移和侵袭力明显降低[缺氧复氧组分别为(58.4±4.2)％和(51.9±3.3)％,常氧组为100％,t值分别为11.034和13.839,P均＜0.05].细胞免疫荧光检测结果显示,WAVE2定位于滋养细胞的细胞质中.缺氧复氧48 h后,HTR-8/SVneo细胞中WAVE2的表达强度明显弱于常氧组(0.37±0.05与0.76±0.06,t=8.631,P＜0.05). 结论 子痫前期胎盘组织中存在过度氧化应激,与胎盘组织中WAVE2表达下调密切相关.缺氧复氧致氧化应激损伤可下调滋养细胞WAVE2的表达;WAVE2表达下调可能损伤滋养细胞迁移侵袭能力,从而参与子痫前期的发生发展.     

过表达miR-198通过靶向调控Wnt2 B表达抑制滋养细胞HTR-8/SVneo的增殖、转移与侵袭

目的:研究过表达miR-198对人滋养细胞株HTR-8/SVneo增殖、转移和侵袭能力的影响,并探讨其可能作用机制.方法:qRT-PCR检测子痫前期(PE)患者及正常产妇胎盘组织中miR-198表达水平.培养人滋养细胞株HTR-8/SVneo,采用脂质体法将miR-198 mimics及其阴性对照mimics NC转染...     

缺氧通过TrkB抑制人滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞增殖和侵袭

目的:探讨缺氧对人滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞增殖和侵袭的影响及可能的分子机制。方法:将人滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞分为缺氧培养(实验组)和常氧培养(对照组),培养48h后,采用CCK8法检测细胞增殖能力,采用Transwell实验评估细胞侵袭能力;采用RT-PCR和Western blot法分别检测HIF-1αmRNA、p-TrkB、TrkB、p-Akt和Akt表达。结果:缺氧处理显著抑制了HTR-8/SVneo细胞的增殖和侵袭能力(P0.05);48h的缺氧处理降低了HIF-1αmRNA表达;缺氧处理48h后,p-TrkB表达显著减少(P0.05);同时Akt的磷酸化水平明显被抑制(P0.05)。结论:长时间持续缺氧通过抑制HTR-8/SVneo细胞中TrkB的活化,进而抑制PI3K/Akt通路的激活来抑制人滋养细胞的增殖和侵袭。     

内皮脂酶与重度子痫前期的相关性及其对滋养层细胞功能影响的研究

目的:探讨内皮脂酶(EL)基因在重度子痫前期(PE)患者胎盘组织中的表达,以及EL对人胎盘滋养层细胞生物学功能的影响及其调控机制。方法:收集12例重度PE患者和12例正常孕妇的胎盘组织。Real time-PCR、Western blot法检测EL mRNA和蛋白水平表达。脂质体转染人正常绒毛膜滋养层细胞系HTR8/SVneo干扰EL表达,Real timePCR、Western blot法检测EL转录及表达水平。用Annexin V-FITC、Transwell、Invasion、Tube formation等检测EL表达降低对HTR8/SVneo细胞凋亡、侵袭、迁移及血管化等能力的影响。Real time-PCR探究HTR8/SVneo功能改变的分子机制。结果:PE胎盘组织中EL表达水平下降;EL表达下降影响滋养细胞凋亡、侵袭、迁移等生物活性,MMP-9表达降低。结论:EL可能通过改变MMP-9表达影响人滋养层细胞的生物学功能,并通过S1PR-SPHK-e NOS通路参与胎盘血管的浅着床过程,从而促进PE的发生发展。     

微小RNA-101在子痫前期胎盘组织中表达及调控机制研究

目的探讨微小RNA-101(miR-101)在子痫前期(PE)患者胎盘组织中的表达和作用及可能的调控机制。方法收集2012年1月至2015年12月咸宁市中心医院收治的40例PE患者和40例正常孕妇胎盘组织,采用荧光定量PCR分析胎盘组织中miR-101的表达情况。体外转染miR-101抑制物至人滋养层细胞系(HTR-8/SVneo),并观察其对细胞侵袭及凋亡的影响。通过生物信息学,双荧光素酶报告基因试验及蛋白质印迹分析miR-101靶基因。结果 miR-101在PE患者胎盘组织的表达量明显高于正常胎盘组织(P0.05),而基质金属蛋白酶-1(MMP-1)在PE患者胎盘组织的表达量明显低于正常胎盘组织(P0.05),二者表达水平呈明显负相关(P0.05)。体外敲低miR-101可明显促进HTR-8/SVneo细胞的侵袭(P0.05),并抑制细胞凋亡(P0.05)。MMP-1是miR-101的靶基因,miR-101可通过与MMP-1信使RNA的3’-非编码区(3’-UTR)结合并抑制其翻译。体外敲低miR-101可显著增加MMP-1的蛋白表达水平(P0.05)。结论 miR-101在PE患者胎盘组织中呈现高表达,敲低miR-101可显著促进胎盘细胞的侵袭并抑制其凋亡。MMP-1是miR-101的下游直接靶基因,提示miR-101可能通过负性调控MMP-1参与子痫前期的发生发展过程。     

靶向人类白细胞抗原G1(HLA-G1)的siRNA真核表达载体的构建及表达

目的:构建靶向人类白细胞抗原G1(HLA-G1)的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体(pSUPER-HLA-G1),并检测其在滋养细胞系HTR-8/SVneo中的敲减效率。方法:将设计的HLA-G1 siRNA寡聚脱氧核苷酸链与真核表达载体pSUPER连接,构建重组pSUPER-HLA-G1真核表达载体,并用脂质体法将其转染入HTR-8/SVneo细胞系中。pSUPER-HLA-G1质粒转染后采用RT-PCR检测HLA-G1在HTR-8/SVneo细胞中的基因转录情况,Western blotting检测HLA-G1蛋白的表达情况。结果:构建的真核表达载体pSUPER-HLA-G1可在HTR-8/SVneo细胞中表达,HLA-G1 mRNA和其蛋白表达抑制率分别为74.85±7.43%和71.07±6.11%。结论:构建的人HLA-G1 siRNA蛋白真核表达载体pSUPER-HLA-G1有效地沉默了HLA-G1在HTR-8/SVneo滋养细胞中的基因表达及蛋白表达,为今后以HLA-G1为靶点的基因研究奠定了基础。     

妊娠肝内胆汁淤积症胎盘细胞凋亡与Fas、FasL的研究

目的　探讨妊娠肝内胆汁淤积症 (intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)胎盘组织Fas及 Fas L (Fasligand)表达在细胞凋亡中的作用。　方法　采用 d U TP缺口末端标记法 (TU NEL )和免疫组化技术对 31例 ICP患者胎盘组织中的细胞凋亡、Fas、Fas L的基因表达进行检测 ,并以正常妊娠胎盘组织 31例作为对照组。　结果　 ICP组胎盘组织中细胞滋养细胞、合体滋养细胞、蜕膜细胞及绒毛间质细胞的凋亡指数 (AI)分别为 4 9.0 9± 9.13(t=13.4 1)、4 6 .6 4± 9.77(t=12 .16 )、35 .0 9±9.4 9(t=8.4 3)、38.74± 9.70 (t=11.2 8) ,明显高于对照组 (P<0 .0 0 5 )。 ICP组细胞滋养细胞和合体滋养细胞 Fas表达明显增强 (P<0 .0 0 5 ) ,Fas L在细胞滋养细胞、合体滋养细胞、蜕膜细胞及绒毛间质细胞中的表达明显低于对照组 (P<0 .0 0 5 )。　结论　 ICP患者胎盘组织中 Fas表达增强 ,Fas L表达减弱 ,可导致母胎间免疫耐受的破坏 ,胎盘细胞凋亡增加 ,可能与 ICP患者胎盘功能减退有关。     

DEHP对HTR-8/Svneo细胞功能的影响及机制研究

目的:通过研究常见的邻苯二甲酸酯类中邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)对人滋养细胞HTR-8/SVneo(简称HTR-8)功能的影响及机制,初步探讨DEHP导致稽留流产的机制。方法:采用不同浓度DEHP溶液干预HTR-8细胞,CCK-8检测细胞毒性、流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期的变化。用Western-blot方法探讨DEHP对凋亡相关蛋白的影响,分析DEHP致凋亡的可能通路。结果:(1)CCK-8检测细胞毒性示:DEHP≥30 ng/ml作用24小时及48小时,HTR-8细胞活性明显受抑制(P0.05);DEHP浓度为20 ng/ml时作用24小时,对HTR-8细胞活性无明显抑制作用;但作用48小时,HTR-8细胞活性同样受到抑制(P0.01)。(2)凋亡实验结果:小剂量DEHP(15 ng/ml)能抑制HTR-8细胞凋亡(P0.05);而大剂量DEHP(30 ng/ml)促进细胞凋亡(P0.05)。(3)流式细胞检测发现:DEHP浓度15 ng/ml作用HTR-8细胞24小时,细胞阻滞于S期(P0.05);DEHP浓度30 ng/ml作用HTR-8细胞24小时,细胞阻滞于G0/G1期(P0.01)。(4)DEHP浓度15 ng/ml作用HTR-8细胞6小时,促凋亡因子Bax蛋白表达下降而凋亡抑制因子Bcl-2的蛋白表达增加。结论:大剂量DEHP(≥30 ng/ml)使滋养细胞活力明显受抑制,且不受作用时间的影响。小剂量DEHP(≤15 ng/ml)对滋养细胞活力无明显影响,但抑制其凋亡,可能与小剂量的DEHP下调Bax、上调Bcl-2的表达有关,这可能是DEHP致稽留流产的机制之一。     

妊娠高血压综合征患者胎盘滋养细胞凋亡基因表达谱的研究

目的　采用基因芯片技术筛查妊娠高血压综合征 (妊高征 )患者胎盘滋养细胞凋亡基因的差异表达 ,探讨细胞凋亡与妊高征发病的关系。方法　妊高征患者 2 0例为妊高征组 ,正常孕妇 10例为对照组。采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记 (TUNEL)方法检测两组孕妇胎盘组织滋养细胞凋亡情况。同时采用上海博星公司生产的基因芯片进行凋亡基因表达谱的筛查。判断基因差异表达的标准 :(1)cy5 (妊高征组 ) /cy3(对照组 )的自然对数绝对值 >0 6 9,cy3与cy5的信号相差 2倍以上。 (2 )cy3或cy5、cy3和cy5的信号值其中之一必须 >80 0。 结果　 (1)TUNEL检测显示 ,每 10 0 0 0 μm2 绒毛面积中滋养细胞凋亡数 ,妊高征组为 1 5 84个 ,对照组为 0 0 32个 ,两组比较 ,差异有极显著性 (P <0 0 1)。 (2 )基因芯片筛查有差异表达的凋亡基因 10个 ,占基因芯片筛查凋亡基因总数的 5 %。妊高征组胎盘组织中的凋亡基因表达均明显下调 ,即cy5 /cy3比值 <1。其中包括具有明显抗凋亡作用的SFRP2 、IAP2 、DHCY2 4及ATPIA1基因。结论　妊高征患者胎盘滋养细胞存在显著的凋亡现象 ,具有抗凋亡作用的基因表达明显下调 ,将可能导致胎盘滋养细胞凋亡 ,从而导致妊高征发病。     

重度妊娠高血压综合征患者胎盘组织细胞凋亡及其调控基因 …

目的　研究细胞凋亡及其调控基因在重度妊娠高血压综合征 (妊高征 )发生、发展中的作用。方法　对 40例正常晚孕妇女 (对照组 )和 40例重度妊高征患者 (观察组 )的胎盘组织进行分析。用DNA缺口原位末端标记 (TUNEL)技术检测细胞凋亡 ;免疫组织化学方法检测促进和抑制凋亡基因 (bax/bcl 2 )的表达。结果　对照组胎盘细胞滋养细胞、合体滋养细胞中凋亡指数分别为 ( 1.1±0 .9) %、( 41.8± 1.5 ) % ;bax阳性率分别为 ( 1.0± 0 .9) %、( 2 8.9± 9.7) % ;bcl 2阳性率分别为 ( 2 .2±0 .8) %、( 2 2 .9± 0 .7) % ,总bax/bcl 2为 0 .7～ 1.7。观察组胎盘细胞滋养细胞、合体滋养细胞的凋亡指数分别为 ( 4.3± 1.2 ) %、( 45 .3± 1.4) % ;bax阳性率分别是 ( 2 .2± 0 .8) %、( 42 .5± 11.7) % ;bcl 2阳性率分别是 ( 3 .2± 0 .8) %、( 2 3 .3± 7.8) % ;总bax/bcl 2为 1.0～ 3.2。即 :对照组胎盘中有一定量的细胞凋亡、bax、bcl 2表达 ,bax/bcl 2表达间呈平衡趋势 ;观察组中细胞凋亡明显增高 (P <0 .0 1) ,bax表达也明显增强 (P <0 .0 1) ,bcl 2表达仅呈增高趋势 ,但差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,bax/bcl 2比值明显增高(P <0 .0 1)。结论　细胞凋亡及其调节基因的表达间具有一致性 ;细胞凋亡、bax/bcl 2表达     

胎盘生长因子与子痫前期发病及一氧化氮关系的研究

目的:探讨胎盘生长因子(PLGF)在子痫前期发病中的作用及其与一氧化氮的关系。方法:选择妊娠期高血压疾病患者45例,其中妊娠期高血压10例,轻度子痫前期12例,重度23例;选择同期正常妊娠妇女20例作为对照组。采用免疫组织化学染色法和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测两组患者胎盘PLGF蛋白及mRNA的表达。采用硝酸盐还原酶法测定两组胎盘组织NO浓度的变化。结果:(1)免疫组化结果显示,轻度和重度子痫前期的胎盘绒毛合体滋养细胞、绒毛间质PLGF表达均显著低于正常妊娠组(P<0.05),妊娠期高血压组与正常组无差别;PLGF在妊娠期高血压、子痫前期组及正常妊娠组分布范围基本一致,主要分布在绒毛合体滋养细胞和间质细胞胞浆,部分血管合体膜上也有表达;(2)轻、重度子痫前期胎盘组织PLGF mRNA平均灰度分别为3.33±0.39、1.97±0.29,显著低于正常妊娠组的平均灰度4.87±0.60(P<0.01);(3)轻、重度子痫前期胎盘组织中NO浓度分别为8.20±5.56μmol/g、6.46±2.25μmol/g,显著低于对照组18.10±7.12μmol/g(P<0.05);妊娠期高血压组胎盘组织NO浓度与对照组差异无显著性;(4)胎盘组织中胎盘生长因子表达水平与胎盘组织NO浓度呈显著正相关(r=0.54,P<0.05)。结论:子痫前期胎盘组织中胎盘生长因子水平降低,NO浓度下降,可能在子痫前期的发病中起一定作用。     

胎盘生长因子与妊娠高血压综合征发病的相关性研究

目的　探讨胎盘生长因子(PLGF)与妊娠高血压综合征（妊高征）发病的关系。方法用酶联免疫吸附法(ELISA)、免疫组织化学染色法和逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测23例妊高征患者(妊高征组)、20例正常妊娠妇女(正常妊娠组)的外周血及其新生儿脐静脉血PLGF水平、胎盘蜕膜PLGF蛋白及其mRNA表达。结果　(1)妊高征组外周血PLGF水平［(112.7±63.8)μg/L］低于正常妊娠组［(200.3±140.9)μg/L］,两组比较,差异有显著性(P<0.05),且与新生儿体重和胎盘重量呈正相关,相关系数分别为0.4、0.6。(2)妊高征组合体滋养细胞、绒毛间质和蜕膜PLGF表达均显著低于正常妊娠组(P<0.01,P<0.01,P<0.05),其合体滋养细胞PLGF表达水平与妊高征病情的轻、重有关。(3)妊高征组胎盘和蜕膜组织总PLGFmRNA表达均显著低于正常妊娠组(P<0.05,P<0.05),尤其胎盘组织主要表现为PLGF-2mRNA表达明显下降(P<0.01)。结论　PLGF的表达异常在妊高征发病中起着重要作用。