双探针实时荧光定量法检测HCV RNA的临床意义

目的建立双探针荧光定量HCV RNA检测方法,探讨解决HCV RNA定量灵敏度和特异性问题。方法对89例抗HCV抗体阳性和220例阴性样本用双探针荧光定量法和两种商品荧光定量试剂方法进行检测。结果双探针荧光定量法阳性率分别为91.0%（81例）和2.72%（6例）。两种商品荧光定量试剂方法阳性率分别为82.0%（73例）和0.9%（2例）;79.7%（71例）和2.27%（5例）。结论双探针荧光定量提高了HCV RNA检测的灵敏度和特异性。     

GeneXpert MTB/RIF Ultra在结核病特殊标本检测中的应用价值

目的 比较全自动荧光定量PCR系统超强版本（GeneXpert MTB/RIF Ultra,GeneXpert Ultra,GeneXpert）、全自动荧光定量PCR系统（GeneXpert MTB/RIF,Xpert,GeneXpert）、DNA实时荧光定量核酸检测（FQ-PCR）、结核分枝杆菌RNA实时荧光恒温扩增（SAT-RNA）、DNA实时荧光恒温扩增检测（恒温扩增法）及传统BACTEC MGIT 960液体培养（培养法）对结核病特殊标本的诊断效能，为临床诊疗提供依据。方法 收集2021年1—9月西安市胸科医院特殊标本共170例（包括胸腹水标本47例，24 h尿沉渣标本34例，组织标本49例，脓液标本40例），分别采用GeneXpert Ultra、Xpert、FQ-PCR、SAT-RNA、恒温扩增法及传统培养法进行检测，以临床诊断为标准，对比其灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、符合率及Kappa值。结果 GeneXpert Ultra、Xpert、FQ-PCR、SAT-RNA、恒温扩增法及传统培养法的灵敏度分别为65.18%(73/112)、49.11%(55/112)...     

荧光定量RT—PCR快速检测手足口病病原研究

目的建立荧光定量RT—PCR技术用于检测手足口病的肠道病毒。方法利用TaqMan技术，设计一对共引物及探针，建立、优化反应体系后，构建质粒标准品，利用10倍稀释法建立相对定量标准曲线，根据TCID。倍比稀释，建立灵敏度曲线。特异性检验后利用临床标本与传统的RT—PCR法进行比较。结果定量标准曲线的灵敏度为10^5／μl（R^2=0．999），PCR扩增效率为94％。灵敏度曲线显示检测到的最低浓度值为5．0TCID50／ml（R^2=0．99），PCR扩增效率为97．6％。荧光RT—PCR检出率为80．9％，显著高于RT—PCR（检出率为62．92％）。结论研究建立的荧光定量RT—PCR方法检测肠道病毒敏感性高、特异性好、效率高，可以作为肠道病毒的快速检测方法。     

双探针实时荧光定量法检测HCV RNA抗原的临床意义

目的 建立双探针荧光定量HCV RNA检测方法,分析其定量检测HCV RNA的灵敏度和特异性以及HCV RNA含量与患者病情的相关性.方法 选取100例抗HCV抗体阳性样本,包括慢性肝炎患者45例、肝硬化患者30例、肝癌患者25例,并选取献血员50例为对照,用双探针荧光定量法和两种商品荧光定量试剂方法进行HCV RNA检测.结果 双探针荧光定量法阳性率为93%（93例）;两种商品荧光定量试剂方法阳性率分别为84%（84例）和79%（79例）.结论 双探针荧光定量提高HCV RNA检测的灵敏度和特异性,HCV RNA含量与丙型肝炎患者病情变化及严重程度相关.     

荧光定量PCR检测HBV DNA与ELISA检测乙肝病毒血清标志物结果对比分析

DNA荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）具有高度的特异性和灵敏性，其灵敏度可达0.01fg，相当于2.5个肝炎病毒颗粒。我们采用酶联免疫吸附实验（ELISA）和FQ—PCR对298例疑似乙肝的患者标本血清进行检测。检测结果对比分析如下。     

三种方法检测沙门氏菌的比较研究

目的探讨建立快速、准确的沙门氏茵检测方法。方法采用常规方法、Vitek免疫诊断分析系统（VI-DAS）和荧光RT—PCR对沙门氏茵进行检测，并对其灵敏性和特异性进行比较。结果荧光RT—PCR的灵敏度最高。VIDAS及荧光RT—PCR检测沙门氏茵的特异性均达100％。结论VIDAS及荧光RT—PCR均能对沙门氏茵进行快速检测，在应对突发公共卫生事件中将能发挥重要作用。     

HCV及HIV二联病毒核酸荧光PCR检测方法的建立

目的建立多联病毒核酸荧光PCR检测方法,为我国核酸检测技术的应用前景提供技术支持。方法使用逆转录实时荧光PCR定量方法（QRT。PCR）检测HCV、HIV病毒,在成功扩增定量单一病毒的基础上,通过主要调整Mg2＋离子、dNTPs、Taq的浓度等优化反应体系,建立同时检测两种病毒核酸的逆转录实时荧光PCR定量检测方法（一步法双检）,并分析双检体系的扩增灵敏度。结果通过优化筛选反应条件,使用QRT．PCR方法成功扩增双模板HCV／HIVRNA,且检测特异性好,灵敏度较高,能达到HCVRNA20IU／ml与HIVRNA80IU／ml的检测灵敏度。结论本试验成功建立能同时检测两种病毒核酸的QRT．PCR方法,为后续研究HBV、HCV、HIV多联荧光病毒核酸检测系统提供了理论依据与技术支持。     

两种HBV-DNA荧光定量PCR检测比较

目的优化HBV—DNA特异性定量检测方法。方法采用荧光定量PCR检测法，用10份正常血清、10份HBV高滴度（10^6 IU／mL）血清和梯度稀释的HBV克隆质粒标准品，验证两种检测方法的重复性、特异性和灵敏度；并将结果进行配对检验。结果10份正常血清标本均无假阳性HBV—DNA检测结果，特异性极好；10份HBV高滴度血清中检出1份YMDD变异，灵敏度均可达到10^3 IU／mL，重复性和灵敏度两者之间无显著性差异（t=0．702，P〉0．05）。结论该方法特异性和灵敏度高，可用于HBV的临床检测和科学研究。     

PCR-荧光探针法和核酸序列测 定法对呼吸道病原体的检测效能 比较及呼吸道病原体的流行特征 分析

目的 比较PCR-荧光探针法和核酸序列测定法对呼吸道病原体的检测效能，进一步分析呼吸道病原体的流行特 征。 方法 选择 2019 年 7 至 12 月浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院呼吸道感染患者 309 例，采集鼻咽拭子标本，分别采 用核酸序列测定法和 PCR-荧光探针法进行同步盲法检测，以核酸序列测定法的检测结果为金标准，分析 PCR-荧光探针法检测 不同病原体的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值，并分析不同呼吸道病原体的流行特征。 结果 309 例鼻咽拭子标本中， 两种方法检测结果不一致或不完全一致的样本共 2 例，针对不同病原体，PCR-荧光探针法的检测灵敏度均为 100.00%，特异度为 99.65%~100.00%，阴性预测值均为 100.00%，阳性预测值为 75.00%~100.00% 。309 例呼吸道感染患者，人鼻病毒检出率为 25.6%（79/309），人腺病毒检出率次之，为 11.3%（35/309）；学龄前儿童（＜6 岁）和 6~21 岁人群检测出 18 种呼吸道病原体，其中 以人鼻病毒检出率最高。 结论 与核酸序列测定法相比，PCR-荧光探针法检测鼻咽拭子标本中的呼吸道病原体更灵敏、安全、简 便、稳定，具有较高的临床应用价值。本院呼吸道感染以人鼻病毒为主。     

抗-HCV与HCVRNA荧光定量临床价值的比较探析

目的评价抗-HCVE ELISA法与HCV-RNA荧光定量PCR法的相关性及在临床中的应用价值。方法用荧光定量方法检测65例ELISA法抗-HCV阳性标本和106例抗-HCV阴性标本。结果65例抗-HCV阳性标本中有41例HCV-RNA含量高于1000拷贝／ml。两者有显著性差异（P〈0．01）；106例抗-HCV阴性标本中有2例HCV-RNA含量高于1000拷贝／ml，两者也有显著性差异（P〈0．05）。结论荧光定量检测HCV-RNA特异性强，灵敏度高，具有良好的应用价值，但不能代替丙肝抗-HCV的检测。     

实时荧光定量测定人B细胞激活因子受体基因表达水平

目的：建立实时荧光定量聚合酶链反应（RFQ-PCR）检测人B细胞激活因子受体（BAFF-R）含量的方法，及探讨其在外周血单个核细胞（PBMC）中BAFF-RmRNA表达的检测价值。方法：在BAFF-R基因高保守区设计特异性引物和荧光探针，用逆转录（RT-PCR）扩增目的片段实时检测产物的荧光强度，根据标准品建立标准曲线，由软件自动计算出待测样本中BAFF-RmRNA含量，并以BAFF-RmRNA和132MmRNA含量的比值进行BAFF-R表达水平评价。结果：RFQ-PCR检测BAFF-R含量的线性范围为10^∧9～10^∧1pg／ml，低浓度样本批内和批间变异系数（CV）分别为12．5％和11．9％，高浓度样本批内和批间CV分别为8．3％和9．3％。30名健康献血员样本的PBMC中，83％（25／30）有BAFF-RmRNA表达，范围为0．14-1．03。结论：RFQ-PCR检测BAFF-mRNA含量的方法，具有较好的检测灵敏度和重复性。     

实时荧光定皇PCR的研究进展及其应用

随着PCR（聚合酶链反应）技术的飞速发展，实时荧光定量PCR（real—time quantitative PCR）技术以其特异性强、灵敏度高、自动化和重复性好、定量准确、污染少等优点，成为分子生物学和其它领域的重要技术工具，并广泛应用于遗传病、病原体和肿瘤等方面的检测和诊断。本文就实时荧光定量PCR技术的主要原理、定量方法及目前在研究领域中主要的应用进行了概述。     

Taqman荧光探针技术检测结核分枝杆菌

目的：比较Taqman荧光探针技术与常规PCR电泳技术检测结核分枝杆菌的灵敏度及特异性，评价Taqman荧光探针技术（Taqman技术）检测临床标本中结菌的应用价值。方法：应用细菌培养法，常规PCR电泳技术与Taqman技术检测300份临床结核病患者痰标本及50份非结核呼吸系统疾病患者痰标本。结果：细菌培养法检测结核阳性率为112/300；常规PCR电泳技术检测结核菌阳性率为169/300，特异性96%；Taqman荧光探针技术检测结核菌阳性率为141/300，特异性100％。结论：Taqman荧光探针技术是一种全新的PCR分子杂交模式，集PCR扩增、荧光探针杂交、荧光检测一体化，在单一管内完成，简便、快速、防污染、敏感性高、特异性强，是结核病辅助诊断的有效方法。     

MTT还原法测定人淋巴增殖活性

目前检测淋巴细胞增殖活性的方法已很多，但都有不足，如同位素（３ＨＴｄＲ，１２５ＩｕｄＲ）掺入法虽具有灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点，但却存在着须作同位素防护、半衰期以及操作繁琐等问题；而非放射性检测方法如细胞计数法、Ｇｉｅｍｓａ染色法、荧光染色法...     

丙肝病毒核心抗原荧光定量型生物条形码检测体系的建立与评价

目的建立丙肝病毒核心抗原（HCVcAg）的荧光定量型生物条形码检测体系,并对检测体系进行方法学评价。方法制备标记有HCVcAg多抗及特异DNA链的金纳米颗粒探针（NP探针）和标记有HCVcAg单抗的磁性微球探针（MMP探针）,形成MMP探针-HCVcAg-NP探针复合物,再利用去杂交将NP探针上标记的DNA链释放出来,通过荧光定量PCR方法鉴定这些释放的DNA链可确定丙肝病毒的存在。结果建立了HCVcAg的荧光定量型生物条形码检测体系,检测灵敏度可达100fg/ml,是相应的HCVcAg ELISA检测方法的104倍。结论本研究为发展高灵敏度丙肝病毒的荧光定量型生物条形码检测试剂盒奠定了基础。     

RT-qPCR技术在前列腺癌诊断中的应用

实时荧光定量PCR技术，具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点。本文就RT-qPCR技术在检测与前列腺癌关系较密切的三个肿瘤标志物：前列腺特异性膜抗原（ PSMA）、α-甲基酰基辅酶A消旋酶（AMACR）及前列腺癌基因3（PCA3）中的应用进行如下综述。     

用聚合酶链反应技术诊断结核病

用聚合酶链反应技术对结核杆菌特异性重复序列ＩＳ６１１０部分基因１２３ｂＰ的片段进行扩增。该法检测人型结核杆菌灵敏度可达到１０ｆｇＤＮＡ，对１４９份结核患者临床标本检测结果显示ＰＣＲ总阳性率（６９．１％）明显高于直接涂片荧光镜检（１５．４％）与细菌培养（１０．１％）的阳性率（Ｐ＜０．０１）。研究表明ＰＣＲ是一种特异、敏感、快速诊断结核病的好方法，值得推广。     

酶放大时间分辨荧光免疫分析酶底物试剂5-氟水杨酸磷酸酯的研制(简报)

酶放大时间分辨荧光免疫分析法（EATRFIA），是酶放大湖系元素发光法（EALL）在免疫分析中的应用，集中了生物素（BT）一链霉亲和素（SA）的高亲和力和放大作用，酶放大作用，湖系元素的激发光与发射光波长之间距离大，荧光寿命长等特有优点，集其时间分辨和波长分辨测量技术等于一体，是近年来发展起来的一种全新的超灵敏生物分析法。例如检测血清中促甲状腺激素灵敏度可达0·003mlU／L，其原理是抗原与包被单抗和生物素化单抗同时反应后，再与链霉亲和素（SA）一碱性磷酸酶（AP）复合物（SA－AP）反应，成为结合了AP的免疫反应…     

四种幽门螺杆菌检测方法的灵敏度比较实验

  目的  用标准微生物学方法测定4种幽门螺杆菌实验室常用检测方法的灵敏度并纵向比较各方法的差异性。  方法  用幽门螺杆菌标准菌株（SS1）为参照,以菌落形成单位（CFU）为测定能力定量分析单位,以不同浓度梯度稀释的SS1菌液为模拟样本,分别对幽门螺杆菌培养法、快速脲酶试验法、抗原检测法、荧光定量PCR法进行测定能力的试验研究,记录4种幽门螺杆菌常用检测方法对应的不同浓度的CFU值并进行差异性分析。  结果  幽门螺杆菌培养法检测灵敏度为2.0×10 CFU/mL,快速脲酶试验法检测灵敏度为2.0×107 CFU/mL,抗原检测法检测灵敏度为2.0×105 CFU/mL,荧光定量PCR法检测灵敏度为2.0×102 CFU/mL。  结论  幽门螺杆菌实验室不同检测方法的灵敏度差异显著。培养法和荧光定量PCR法的敏感性较高,但培养法耗时长、操作复杂;抗原检测和快速脲酶试验需要的时间短,但试验敏感性较低。临床以及实验室可根据检测目的选择能识别幽门螺杆菌对应变化的检测方法。     

实时荧光PCR定量检测粪便中Akkermansia muciniphila方法研究

目的 建立实时荧光PCR定量检测粪便中Akkermansia muciniphila （A. muciniphila）的方法,为A. muciniphila的定量检测及深入研究提供技术支持。 方法 建立SYBR Green Ⅰ 荧光PCR 定量检测A. muciniphila的方法,利用A. muciniphila标准品制备标准曲线,评价该方法的灵敏度、特异性、抗干扰性及重复性,并对30例人粪便样本进行检测。 结果 标准曲线线性关系良好（R2=0.999）;方法灵敏度可达到1.0×102CFU/mL;该方法可特异性扩增A. muciniphila,不受其他肠道细菌的影响;组内和组间重复性较好,Ct值的变异系数均小于2%;30例人粪便样品中A. muciniphila阳性率为73%,Ct值为17.40～31.77。 结论 本研究建立的实时荧光PCR定量检测粪便中A. muciniphila的方法简便、快速、经济,且具有良好的灵敏度、特异性、抗干扰性和重复性,适用于实际粪便样品的检测。