地高辛配基标记HBV DNA探针与生物素标记探针用于肝组织原位杂交的探讨

作者应用地高辛配基标记HBV DNA探针进行原位杂交,检测16例(重症肝炎10例、HBsAg阳性3例、非肝脏疾病3例)肝组织标本内HBV DNA。结果表明:HBV DNA阳性物质在肝细胞内的分布有全胞浆型、包涵体型、全胞核型及核仁-核膜型4种方式。进一步说明地高辛配基标记探针原位杂交可以在一定程度上反映HBV DNA在细胞内的存在状态。作者将地高辛配基标记HBV DNA探针原位杂交与生物素标记探针进行比较,结果前者较后者灵敏度高、特异性强、实用性好,是理想的检测HBV DNA的新一代非同位素探针。     

标记TRAILR地高辛探针及原位杂交检测喉癌组织mRNA

目的:标记肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体(TRAILR)地高辛(DIG)探针,检测喉癌组织中TRAILR mRNA,并探讨其意义.方法:采用RT-PCR原位杂交法检测喉癌组织TRAILR mRNA. 结果:TRAILR地高辛探针标记成功;喉癌和正常对照中死亡受体4、5(DR4,DR5)mRNA呈强阳性,阳性率均为100%(34/34,5/5);正常对照中诱捕受体2(DcR2)mRNA呈强阳性,阳性率100%(5/5);喉癌中DcR2 mRNA可检出,阳性率14.71%(5/34);DcR2 mRNA主要分布在癌巢组织边缘,强度由癌巢中央到癌巢边缘逐渐加强.结论:TRAIL受体基因可能在喉鳞状细胞癌凋亡调控机制中发挥重要作用.     

影响地戈辛标记cDNA探针检测prET—1mRNA原位杂交效果的因素探讨

影响地戈辛标记ｃＤＮＡ探针检测ｐｒＥＴ－１ｍＲＮＡ原位杂交效果的因素探讨①华西医科大学附属第一医院（６１００４１）陈明②黄颂敏刘聪地戈辛标记探针的原位杂交是利用地戈辛配基作为标记物，非放射性检测特异性ＤＮＡ或ＲＮＡ序列的一种分子生物学技术，可特异判别...     

地高辛标记探针原位杂交对肝细胞癌HBV DNA分布的研究

为了探讨ＨＢＶ与肝细胞癌（ＨＣＣ）发病的关系，作者应用地高辛标记ＨＢＶ ＤＮＡ探针原位杂交及免疫组化检测了８０例ＨＣＣ组织及癌周肝组织的ＨＢＶ ＤＮＡ、ＨＢｓＡｇ。结果显示，癌周肝组织ＨＢＶ阳性６３例（７９％），癌组织ＨＢＶ阳性４９例（６０％），癌周阳性细胞数明显多于癌内。癌周ＨＢＶ ＤＮＡ，以复制型为主，而癌组织的ＨＢＶ ＤＮＡ大多属整合型。结果表明大多数ＨＣＣ病例与ＨＢＶ存在密切相关，而且整合     

地高辛标记的探针和膜原位杂交法筛选cDNA文库

应用地高辛标记探针方法、筛选噬菌体ｃＤＮＡ文库并克隆ＣＮＴＦ基因，将文库以１０００个／皿的噬斑密度铺皿，待形成肉眼可见的噬斑后覆盖尼龙膜进行原位转移，再生变性、中和、交联等处理。ＰＣＲ法扩增出ＣＮＴＦ探针，随机引物法进行地高辛标记，与处理后的尼龙膜杂交，挑出阳性斑进行第二轮低噬斑密度筛选，得到ＣＮＴＦ单克隆基因片断，此法具有实验操作简单、周期短、探讨针保存时间长，并可反复使用的特点。     

应用地高辛标记的cRNA探针原位杂交法检测大上丘脑生长抑素mRNA

用成年雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠，经４％多聚甲醛灌注固定，取下丘脑组织，和再固定２４ｈ，常规石蜡包埋和切片，用地高辛标记的ｃＲＮＡ探针进行原位杂交，结果显示在弓状核及其邻近区域见到阳性神经元，阳性信号为蓝色颗粒，胞质、核膜及核仁呈阳性，阴性对照均无阳性反应出现，本实验证实，用石蜡切片进行原位杂交组织化学研究，能检测下丘脑生长抑素神经元基因表达产物ｍＲＮＡ，方法稳定，重复性好，便于普通实验室开展工作。     

逆转录法制备地高辛标记的食管癌cDNA探针

目的：制备食管癌cDNA探针用于Reverse Northern Blot筛选差异基因片段。方法：提取食管癌组织总RNA,通过逆转录反应,用地高辛标记为cDNA探针。结果;所制备的探针灵敏度高达0．01ng/L.结论：用该方法制备cDNA探针快速、经济,所需模板RNA量少,可用于大规模初筛差异基因片段的研究。     

地高辛标记探针原位杂交在人巨细胞病毒感染鼠脑神经元研 …

目的 建立一种适用于检测人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染新生乳鼠大脑皮质神经元原代培养物中病毒ＤＮＡ的原位杂交法。方法 制备和培养新生乳鼠大脑皮质神经元并进行病毒感染;在感染后的第３,５天及第１～４周连续取样用地高辛标记的ＨＣＭＶ即刻早期抗原（ＭＩＥ）和晚期抗原（ＬＡ）寡核苷酸特异性探针分别进行核酸原位交杂,检测受染神经元内相应病毒核酸及分布。结果 ＭＩＥ寡核苷酸探针可在ＨＣＭＶ感染后第４～７天检出神     

逆转录法制备地高辛标记的食管癌cDNA探针

目的 :制备食管癌cDNA探针用于ReverseNorthernBlot筛选差异基因片段。方法 :提取食管癌组织总RNA ,通过逆转录反应 ,用地高辛标记为cDNA探针。结果 :所制备的探针灵敏度高达 0 .0 1ng/L。结论 :用该方法制备cDNA探针快速、经济 ,所需模板RNA量少 ,可用于大规模初筛差异基因片段的研究。     

地高辛标记探针原位杂交法检测人脑胶质瘤组织猴病毒40的表达

目的：检测猴病毒40（SV40）DNA在人脑胶质瘤中的定位表达,探讨其在脑胶质瘤发生发展中的生物学意义。方法：采用地高辛标记探针原位杂交技术,检测256例人脑胶质瘤和11例正常脑组织标本。结果：SV40 DNA定位于胶质瘤细胞核,阳性细胞呈弥漫性或局灶性分布;SV40 DNA阳性率40.6％（104／256）,正常脑组织均未检测出SV40 DNA;SV40 DNA阳性率与病理分级无关（P＞0.05）。结论：SV40感染与人脑胶质瘤病因学密切相关;地高辛标记探针原位杂交技术,是探讨SV40病毒核本以在组织中定位、分布和感染机制的一种新的特异性方法。     

标记肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体-2地高辛探针

目的：标记肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）受体-2的地高辛探针。方法：查阅核酸序列数据库上TRAILR-2的基因全序列，计算机辅助设计引物，RT-PCR扩增目的条带，用地高辛（Digoxin，DIG）进行标记，制作TRAILR-2的探针。结果：地高辛标记的TRAILR-2电泳能力下降，标记成功。结论：TILCILR-2地高辛探针的标记成功为进一步研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体-2与喉鳞状细胞癌的关系奠定了一定的基础。     

地高辛标记反义RNA探针对大鼠不同组织生长抑素mRNA原位杂交的实验研究

应用地高辛（ＤＩＧ）标记的生长抑素（ＳＯＭ）反义ＲＮＡ探针，与Ｗｉｓｔａｒ大鼠胃、十二指肠和甲状腺组织进行原位分子杂交，以显示不同组织中ＳＯＭｍＲＮＡ对ＳＯＭ细胞进行分子水平的细胞定位和形态学观察。结果显示：杂交阳性信号呈蓝色位于胞质内，背景清晰，细胞轮廓清楚，主要分布于胃粘膜底部，十二指肠阳性细胞较少，在甲状腺滤泡旁和滤泡上皮细胞之间均可见到形态不一的杂交阳性细胞。用ＲＮａｓｅＡ预处理标本和免去探针均无杂交信号出现。表明ＤＩＧ标记的反义ＲＮＡ探针具有高度的敏感性和特异性。     

地高辛标记寡核苷酸探针原位杂交检测大鼠移植静脉TGF—βmRNA表达

平滑肌细胞过度增殖是导致移植血管再狭窄的关键，其发病机理迄今尚未完全明确。分子生物学的迅猛发展为深入研究其分子机理创造了条件。组织切片原位杂交即是重要手段之一。传统的放射性标记探针由于半衰期短，实验周期长，且具辐射损伤等，限制了其应用。本实验利用地高辛标记寡核苷酸探针原位杂交检测大白鼠自体移植静脉ＴＧＦ－βｍＲＮＡ表达，取得满意效果。     

地高辛精标记cRNA探针原位杂交法检测大鼠胃肠胰系统生长…

目的：建立敏感的非放射性原位杂交技术检测胃肠调节肽基因的表达。方法：用体外转录法制备地高辛精（Ｄｉｇ）标记生长抑素ｃＲＮＡ探针，在４％多聚甲醛固定的胃、十二指肠和胰腺恒冷箱切片标本上进行了原位杂交。结果：杂交阳性部位呈紫蓝色，位于胞浆，背景浅谈，反差强烈。含生长抑素ｍＲＮＡ细胞与以前所报道的生长抑素免疫反应细胞的形态、分布均一致。结论：Ｄｉｇ标记ｃＲＮＡ探针原位杂交法敏感、简便、迅速、可靠，可用于     

DIG标记的cRNA探针用于原位杂交最佳条件探讨

对地高辛（ＤＩＧ）标记的反义ＲＮＡ探针用于原位杂交的技术问题进行研究。结果表明：①杂交标本取材后应在１ｈ内放入固定液，时间过长，杂交信号明显降低；②探针工作浓度以０．４ｍｇ／Ｌ为宜，过高或过低影响杂交背景或阳性率；③防止ＲＮａｓｅ的污染是技术成败的关键之一；④杂交温度和时间以４３℃，１６ｈ为宜；⑤防止脱片是原位杂交的基本技术需要。     

简便,敏感的地高辛标记DNA探针原位分子杂交技术

本文应用人乳头瘤病毒6B和11型基因探针原位分子杂交技术检测了57例尖锐湿疣和假性湿疣。同时用免疫组化ABC法做对照检测。探针标记选择地高辛随机引物延伸法。原位分子杂交的主要步骤包括:石蜡切片的预处理;杂交;免疫检测及显色。结果显示:在尖锐湿疣中,人乳头瘤病毒的阳性率为94.4％;免疫组化核壳抗原检测阳性率为47.2％;假性湿疣杂交结果均为阴性。结果表明:原位分子杂交方法比免疫组化方法敏感,提高了阳性率。本实验过程中遇到并试图解决的主要技术问题有:(1)防止脱片;(2)蛋白酶K的浓度;(3)显色时间的掌握;(4)左旋脒唑的剂量。     

用地高辛配基标记DNA探针进行菌落原位杂交

A simple, rapid method for colony hybridization has been developed. The DNA probes were labelled by digoxigenin. Hybridization signal was detected by enzyme-linked immunoassay reaction. The results showed that this method is sensitive and reproducible, and it can be used for colony hybridization instead of isotopic methods.