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1.
目的研究应用无血清培养基悬浮法培养U-251胶质瘤细胞系的方法;并分离该细胞系中的脑肿瘤干细胞,鉴定其特异性标志物CD133+的表达并观察其生长和分化特征.方法应用培养大鼠神经干细胞的培养基和培养方法,在无血清培养基中采用悬浮法培养人U-251胶质瘤细胞系;再将分离获得的悬浮生长的脑肿瘤干细胞利用免疫荧光法检测脑肿瘤干细胞特异性标志物CD133+在脑肿瘤干细胞球中的表达.再将脑肿瘤干细胞接种于含血清培养基,观察其分化生长和分化特征.结果 U-251胶质瘤细胞系中有约(2.56±0.2)%的肿瘤细胞在无血清培养基中能够存活,增殖,形成自由漂浮的细胞球;其细胞表达CD133+神经干细胞的标志物,并可连续传代,若重新接种于含血清培养基中可重新贴壁分化,贴壁分化后细胞形态与直接在含血清培养基中培养的U-251胶质瘤细胞系无明显差别.结论用悬浮无血清培养法从U-251人胶质瘤细胞系中成功培养出脑肿瘤干细胞,其肿瘤干细胞能够产生为多种细胞形态的分化细胞,脑肿瘤干细胞的分离培养成功对脑肿瘤的基础和临床研究具有重要价值 相似文献
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目的: 运用蛋白质组学的方法,对C6脑肿瘤干细胞(BTSC)和非BTSC细胞进行配对研究,建立差异性蛋白文库,为探讨胶质瘤病因提供初步线索.方法: 在C6细胞中,参照神经干细胞(NSC)培养条件进行培养.出现典型的神经球后,利用免疫荧光染色检测细胞标记,包括nestin,神经元特异性烯醇化酶(NSE),神经胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)等,以及诱导分化等方法,鉴定神经球细胞是否为BTSC.收集神经球和非神经球细胞,进行配对,利用双向凝胶电泳(2D-PAGE)检测细胞总体蛋白,分析差异性蛋白点.结果: C6细胞在NSC培养条件下,出现比较典型的神经球.神经球细胞nestin阳性,NSE和GFAP阴性.经诱导发生分化,分化后细胞形态与C6相似,能够表达NSE和GFAP等多种表型细胞标记,证实这种神经球细胞为肿瘤干细胞.在2D-PAGE结果中,C6肿瘤干细胞和非干细胞配对比较,有统计学差异(P<0.05)的蛋白点共有84个,大于2倍差异蛋白点有50个,大于3倍的有17个,大于4倍的有6个,最大差异倍数为11.607 2.在BTSC中,有55个差异蛋白表达增多(上调),29个蛋白表达下降(下调).结论: 胶质瘤C6细胞系中存在肿瘤干细胞,在蛋白质组学方面与非BTSC细胞有明显差异. 相似文献
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目的:比较有血清培养基(Serum-supplemented medium,SSM)培养的细胞中和无血清培养基(Serum-free medium,SFM)培养的肿瘤干细胞球体中肿瘤干细胞样亚群的比例,以期获得较好富集肿瘤干细胞的方法.方法:SFM培养细胞,观察形成肿瘤干细胞球过程中的细胞形态;更换培养基为SSM诱导其... 相似文献
4.
目的培养恶性胶质瘤TJ905细胞,并从中分离、培养和鉴定肿瘤干细胞,观察干细胞生长特征,为脑肿瘤干细胞的进一步研究奠定基础。方法将TJ905细胞置于含血清培养基中培养;将TJ905细胞置于含生长因子的无血清培养基中培养,待其形成悬浮生长的细胞球后用免疫磁珠分离获取CD133+细胞。用细胞免疫荧光染色对肿瘤干细胞及其分化细胞进行鉴定。结果在恶性胶质瘤细胞系TJ905中成功分离出肿瘤干细胞,培养于无血清培养液中,细胞呈球形、悬浮生长,具有很强的繁殖与自我更新能力;将该细胞置于含血清的培基中可分化;免疫荧光染色显示脑肿瘤干细胞中神经上皮干细胞蛋白(Nestin)表达阳性。结论培养的恶性胶质瘤细胞系TJ905中有脑肿瘤干细胞的存在,并且能在体外将其培养、分离及诱导分化,可为肿瘤干细胞的研究提供便利条件。 相似文献
5.
脑胶质瘤是中枢神经系统中最常见的恶性肿瘤,随着各种生物治疗方法在肿瘤治疗领域的应用,关于大鼠C6胶质瘤分子生物学方面的研究进展迅速。文章主要对大鼠C6脑胶质瘤血管生成或抑制因子、细胞周期调控因子以及自杀基因的应用等方面予以综述。 相似文献
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无血清培养法在肿瘤干细胞培养中的应用 总被引:1,自引:0,他引:1
无血清培养基(Serum free medium,SFM)是在合成培养基的基础上,引入成分完全确知或部分明确的血清替代成分,使培养基既满足细胞培养要求,又有效避免因使用血清而带来的问题,已被广泛应用于研究和生产领域。 相似文献
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胶质瘤中肿瘤干细胞的分离、培养及鉴定 总被引:8,自引:0,他引:8
目的在胶质瘤中分离,培养及鉴定脑肿瘤干细胞,观察脑肿瘤干细胞的生长特性,建立脑肿瘤干细胞分离、培养及鉴定的方法,为脑肿瘤干细胞的进一步研究打下基础。方法术中取胶质瘤细胞,接种于含生长因子的无血清培养基中培养,使其中的脑肿瘤干细胞增殖,并进行有限稀释实验确定肿瘤比例及增值能力;利用细胞免疫荧光及组织免疫组化法检测脑肿瘤干细胞在细胞培养或组织切片中CD133和Nestin的表达。结果在胶质瘤中,只有大约1%的细胞能在无血清培养基中存活并悬浮生长,并增殖形成克隆性脑肿瘤干细胞球,传代后脑肿瘤干细胞仍保持很强的自我更新和增殖能力;体外培养中脑肿瘤干细胞表达神经干细胞的特异性标志物Nestin和CD133,在肿瘤组织切片中表达CD133阳性细胞。结论胶质瘤组织中存在极少数的脑肿瘤干细胞(大约为1%),并能在体外将其分离,培养;神经干细胞可能是脑肿瘤干细胞的起源细胞。 相似文献
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无血清培养基分离培养脐带间充质干细胞的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探讨应用无血清培养体系分离培养脐带间充质干细胞,明确其成骨生物学特性,为临床应用奠定实验基础。方法在无血清干细胞培养体系下,利用组织块贴壁培养法分离培养,扩增脐带间充质干细胞,在倒置显微镜进行形态学观察,流式细胞检测鉴定其表面标记CD34、CD44、CD90及CD45的表达,成骨诱导液培养2~3周后观察其细胞形态学变化,茜素红染色鉴定其成骨情况。结果脐带组织块接种后第1次更换培养液12h后,有少量梭形的细胞从脐带组织边缘爬出,培养5~6d左右成单层状生长,12d左右梭形状细胞呈现复层生长趋势,细胞表面标记CD44、CD90均呈阳性为间充干细胞来源,CD34、CD45均呈阴性为非造血干细胞来源;细胞经成骨诱导2~3周后具有良好的分化成骨能力。结论利用无血清的人间充质干细胞专用培养基培养体系,脐带组织培养法能够分离培养出大量的脐带间充质干细胞,避免了培养中异种蛋白的混入而降低临床排异反应。 相似文献
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脑胶质瘤占原发性颅内肿瘤首位,其中恶性胶质瘤侵袭力强,手术治疗后易复发,对放、化疗常不敏感,5年生存率小.神经干细胞(Neuralstemcell,NSCs)是一类具有分裂潜能和自更新能力的母细胞,它可以通过不对等的分裂方式产生神经组织的各类细胞.近来很多研究发现脑胶质瘤中存在少数具有NSCs特性的肿瘤细胞,这些细胞具有自我更新、无限增殖和多向分化能力,胶质瘤的各类细胞成分正是由这些有NSCs特性的瘤细胞分化而来,故可称之为脑肿瘤干细胞(Brain Tumor Stem Cells,BTSCs),这些细胞可能是脑肿瘤发生和发展的来源.了解这些细胞的生物学特性,以便靶向治疗脑肿瘤,有望提高治疗效果,从源头阻断脑肿瘤的生长,达到治愈的目的. 相似文献
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目的 建立大鼠C6脑胶质瘤模型 ,寻找简易判定颅内肿瘤大小的可靠指标。方法 应用立体定向法 ,将 1%琼脂糖含 1× 10 6C6瘤细胞悬液 10 μl注入大鼠右脑尾状核并行一般观察和MRI检查。在接种后第 10、15、2 0、2 5天和自然死亡前 ,对大鼠做主动脉多聚甲醛灌注固定 ,对脑组织和肿瘤标本进行大体观察和HE染色。结果 5 0只接种大鼠均有颅内肿瘤生长 (10 0 % ) ,远处和颅外转移率为 0 % - 4 %。结论 成功建立大鼠C6脑胶质瘤模型 ,接种后大鼠的生存时间可作为判定颅内肿瘤生长大小的指标。 相似文献
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Development of a rat C6 brain tumor model 总被引:9,自引:0,他引:9
Objective To establish rat C6 brain- tumor models and find a simple reliable index to judg e tumor volume. Methods C6 cell suspension (10 μl) containing 10 g/L agarose and 1×10[6] cells was i njected into the right caudate nucleus of the rat brain by a stereotaxic method . After implantation, rats were observed and given MRI scans. Rats were perfus ed with paraformaldehyde trans- aorta at the 10th, 15th, 20th and 25th day and b efore natural death. All brains, lungs, spinal cords and tumors were sectioned and inspected. Tumor- containing samples were prepared histologically by hemato xylin and eosin (HE) stains. Results Fifty implanted rats had 100% yield of intracerebral growth, with distant metast asis of 0% to 4%. Conclusion A rat C6 brain- tumor model was successfully established. Rat survival time is correlated with tumor volume and may be useful as an index of tumor size . 相似文献
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目的 建立大鼠C6脑胶质瘤模型,寻找简易判定颅内肿瘤大小的可靠指标.方法 应用立体定向法,将1%琼脂糖含1×106 C6瘤细胞悬液10μl 注入大鼠右脑尾状核并行一般观察和MRI检查.在接种后第10、15、20、25天和自然死亡前,对大鼠做主动脉多聚甲醛灌注固定,对脑组织和肿瘤标本进行大体观察和HE染色.结果 50只接种大鼠均有颅内肿瘤生长(100%),远处和颅外转移率为0%-4%.结论 成功建立大鼠C6脑胶质瘤模型,接种后大鼠的生存时间可作为判定颅内肿瘤生长大小的指标. 相似文献
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立体定向接种胶质瘤细胞系C6形成大鼠脑内原位移植瘤的生长特性 总被引:4,自引:2,他引:4
目的通过立体定向技术建立大鼠脑原位移植瘤模型,观察其生长特性.方法在立体定向仪引导下,将体外培养的大鼠C6胶质瘤单细胞悬液(1×106/10 μl)接种于27只Wistar大鼠右尾状核区.以接种C6细胞后大鼠的允许生存期,将大鼠分成2组,观察大鼠生存状态、成瘤情况、肿瘤体积、脏器转移灶、组织学形态、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、血管内皮生长因子(VEGF)、兔抗人因子Ⅷ相关抗原免疫组化染色.结果大鼠成瘤率为100%,无颅外转移.荷瘤大鼠平均生存期为(25.50±5.75)d.肿瘤体积在第3~4周时肿瘤迅速增大.肿瘤呈浸润性生长,甚至侵袭颅骨;瘤细胞病理性核分裂像多见,GFAP蛋白呈散在阳性表达,VEGF蛋白强阳性表达;瘤组织内有典型的栅栏状坏死和丰富的微血管.结论 C6细胞在大鼠脑内原位移植瘤与人脑胶质母细胞形态和生长特性十分相似,具有分化程度低、微血管丰富、生长速度快且高度侵袭等特点. 相似文献
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吗啡对培养大鼠胶质细胞瘤C6细胞增殖的抑制作用 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:探讨吗啡对神经系统细胞的影响及作用机理.方法:应用基因克隆技术克隆大鼠增殖细胞核抗原(PCNA)的cDNA基因片段,并应用逆转录PCR技术研究了吗啡对大鼠胶质细胞瘤C6细胞PCNA基因表达的影响.结果:0.1、1.0 mg.L-1 吗啡作用于大鼠C6细胞24 h后,PCNA mRNA相对含量明显下降,且剂量越高PCNA mRNA相对含量越低.结论:吗啡对正常生长的大鼠C6细胞的增殖具有一定的抑制作用,其机理可能是通过抑制大鼠C6细胞PCNA的转录过程,使PCNA转录水平降低,从而抑制细胞核酸合成代谢. 相似文献
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目的采用高场强高分辨磁共振波谱仪在体观察正常大鼠脑组织及种植C6胶质瘤的代谢及生化改变,以评价高分辨1H磁共振波谱在大鼠脑肿瘤模型中的应用价值. 方法将20只体质量200~250 g左右的Wister大鼠分为两组. 正常组:5只;肿瘤组15只,在右尾状核接种C6细胞. 肿瘤组动态观察MR平扫及动态增强扫描的改变,并于接种C6细胞后15~20 d采用点分辨波谱法(PRESS: point resolved spectroscopy)行1H磁共振波谱检测. 结果正常组脑组织1H波谱可检出N-乙酰门冬氨酸(NAA),胆碱类化合物(Cho),肌酸和磷酸肌酸(Cr+PCr)、谷氨酸和谷胺酰胺(Glu+Gln),脂质(Lip),乳酸(Lac). C6胶质瘤NAA较正常组明显降低,NAA/Cho较正常组明显降低(P<0.01),NAA/Cr较正常组也明显下降(P<0.01),Cho/Cr明显升高(P<0.05),Lac升高. 结论高场强磁共振波谱仪可以准确观察在体大鼠脑组织及C6胶质瘤的1H磁共振波谱. 高分辨1H磁共振波谱的改变早于MRI形态改变,能够对肿瘤的早期代谢及生化改变进行监测. 相似文献
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目的:研究诱导分化剂苯乙酸(PA)对胶质瘤C6细胞增殖的抑制作用,探讨此过程中PA对癌基因c-myc及抑癌基因P16蛋白水平表达的影响.方法:应用平板集落形成试验及[3H]- TdR掺入试验检测增殖抑制;以免疫组化SP染色法检测基因蛋白水平的表达.结果:应用PA后,C6细胞平板集落形成能力下降,PA 2.5 mmol*L-1处理组及5.0 mmol*L-1处理组抑制率分别达到90.4%和99.1%.同时[3H]- TdR掺入量降低;c-myc基因胞浆阳性表达下降,阳性细胞灰度值(Y值)对照组为(130.5±2.8),2.5 mmol*L-1处理组为(152.8±3.1)(P<0.01);P16基因胞浆阳性表达升高,对照组Y值为(167.1±6.2),2.5 mmol*L-1处理组为(149.2±1.5)(P<0.01).结论:PA对C6细胞增殖存在时间和剂量依赖性抑制,其机制可能与抑制癌基因c-myc对增殖的转录调节并激活了抑癌基因P16的活性有关. 相似文献
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目的探索与C6胶质瘤细胞体外共培养后大鼠神经干细胞(Neural Stem Cells NSCs)的增殖变化。方法分别培养神经干细胞、星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞。利用共培养池(cell culturetranswell inserts)建立两种细胞的体外共培养模型。应用相差显微镜及电镜观察各组共培养后NSCs的形态变化;共培养后NSCs MTT法作生长曲线。结果原代培养后获得神经干细胞及星形胶质细胞;与C6胶质瘤细胞共培养7天后的NSCs增殖较对照组快,电镜观察可见核质比增高,细胞器较发达。结论 C6胶质瘤细胞对体外共培养的大鼠NSCs的增殖有一定促进作用。 相似文献