乙型肝炎患者血清HBV DNA定量检测

近年来 ,定量ＰＣＲ检测技术不仅用于科研领域 ,也成为临床检验重要的检测手段。现将 16 9例乙型肝炎(以下简称乙肝 )患者的血清ＨＢＶＤＮＡＰＣＲ定量检测结果 ,结合临床资料 ,报告如下。1　材料和方法1.1　检测对象　 2 0 0 0年 10月至2 0 0 1年 2月 ,在我院住院治疗的各型乙肝患者共 16 9例 ,其中男 118例 ,女5 1例 ,平均年龄 37.3岁。按 2 0 0 0年全国病毒性肝炎治疗方案的诊断标准分型 ,急性肝炎 14例 ,慢性肝炎轻度47例 ,慢性肝炎中度 6 4例 ,慢性肝炎重度 16例 ,重型肝炎 8例 ,肝硬化 2 0例。1.2　检测方法　 16 9例乙肝患者均作Ｈ…     

聚合酶链反应检测慢乙肝患者血清HBV—DNA54例分析

<正> HBV-DNA位于HBV核心部分,其与HBeA8几乎同时出现于血液中,是HBV感染的最直接、特异和灵敏的指标,故可用于HBV感染的确定和抗病毒药物治疗的疗效考核。随着分子生物学检测手段的提高,使用聚合酶链反应方法检测血清中HBV—DNA已在临床上运用。本文特将临床上所观察到的部分慢乙肝病人用PCR法检测的HBV-DNA的结果作一分析,以了解慢乙肝病人肝功能异常期间其     

乙肝抗体阳性血清中HBV—DNA的检测

常规HBV血清标记物检查，只能间接反映HBV在体内的复制。我们在工作中发现有些慢性乙肝患者抗体（抗-HBs、抗-HBc和抗-HBe）阳性而抗原（HB－sAg、HBeAg）阴性。为了解这部分人体内是否存在HBV复制，我们用套式PCR方法对他们进行了HBV－DNA的检测，结果报告如下。1材料和方法1．1检测对象收集本科门诊和住院慢性乙肝病人抗体阳性血清86份。其中男性49人，女性37人；年龄最大58岁，最小21岁，平均年龄32岁。1．2试验方法取血清50μl，加20μl蛋白酶K（10mg/ml）、缓冲液20μl、去离子水120μl，混句后68℃水浴消化2小时。用等体…     

乙肝患者肝组织和淋巴细胞内HBV检测及存在状态

目的 探讨慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞内ＨＢＶ存在状态及其与肝内带毒状况的相关性。方法 抽提肝穿刺活检组织，外周血淋巴细胞ＤＮＡ、以ＨＢＶ探针点杂交检测ＨＢＶ ＤＮＡ，并以Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析其存在状态。结果 慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞、肝组织ＨＢＶ ＤＮＡ阳性率分别为８７．１％和８３．８％，配对计数的３１例标本Ｘ＾２检验显示，二者间有一定相关性（ｒ＝０．８１，Ｐ〈０．０５），整合型与混     

生物素探针分子杂交试验检测乙型肝炎患者血清HBV—DNA的意义

用生物素探针分子杂交试验检测６１７临床各类乙型肝炎患者血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ，总阳性率为３５．６５％（２２０／６１７），各临床类型间无差异性。ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率：在ＨＢｅＡｇ阳性患者中为６７．０２％（１８７／２７９），而ＨＢｅＡｇ阴性性患者中为９．７６％（３３／３３８）；在ＨＢｓＡｇ阳性患者中为３９．１５％（２１１／５３９），而ＨＢｓＡｇ阴性患者中为１１．５４％（９／７８）；抗－ＨＢｅ阳性者为８．     

地高辛标记探针与生物素标记探针用于斑点杂交检测HBV DNA的初步研究

为研究地高辛标记和生物素标记核酸探针斑点杂交检测ＨＢＶ ＤＮＡ的敏感性、特异性和稳定性，用两种探针和＾３２Ｐ标记探针进行平行检测对照。结果表明，地高辛探针检测灵敏度为０．１Ｐｇ，已达到＾３２Ｐ标记探针水平。生物素探针为１￣１０Ｐｇ。两种探针与＾３２Ｐ标记探针相比。符合率分别９６．６５％和８９．１３％；敏感性分别为９４．４４％和８３．３３％；特异性分别为９６．４３％和９２．８６％。两种探针在－２０℃     

慢性乙肝患者血清及外周血单个核细胞中HBV DNA的研究

利用国产生物素交联光敏补骨酯素(Biotin—Psoralen)标记核酸探针,建立了外周血单个核细胞(PBMC)的原位杂交方法,同时应用聚合酶链反应技术(PCR)检测了血清中的HBV DNA,结合PBMC的原位杂交结果,对HBV DNA在PBMC中存在的状况和意义进行了初步探讨。     

地高辛素标记乙型肝炎病毒DNA探针的制备及应用

采用随机引物法以地高辛素标记的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸(dig-II-dUTP)标记克隆的乙型肝炎病毒(HBV)DNA adw/pAM6,制得高特异性和高敏感性的HBV DNA探针。用于斑点杂交检测HBV DNA,最大敏感度为0.lpg。用于检测HBsAg阳性血清,HBV DNA阳性率为82.7％(91/110),与市售同类药盒相比,阴阳结果一致,与缺口翻译的生物索探针相比,检出率有显著提高(P<0.01)。用于肝癌组织与血清HBV DNA研究,与既往用~32P探针所得结果相符。该探针操作简单、使用方便、出结果快速、价格便宜又无需特殊设备,故适于在临床单位尤其是基层医疗单位应用推广。     

血清HBV—DNA的检测在乙肝疫苗阻断HBV母婴传播中的意义

对42例HBsAg 阳性产妇的婴儿用国产乙肝血源疫苗按0、1、6月注射。每次20μg,在6月龄时的结果:20例HBeAg和HBV—DNA阳性母亲所生婴儿接受免疫注射后,11例免疫失败(55％),9例HBeAg阳性、HBV—DNA阴性母亲所生婴儿仅1例免疫失败(11.2％),p<0.001。2例HBeAg阴性而HBV—DNA阳性母亲的婴儿免疫保护均告失败,11例HBsAg阳性,HBeAg及HBV—DNA均阴性母亲所生婴儿,免疫保护均成功。4例婴儿出生时矢状窦血HBV—DNA阳性,而HBsAg、HBeAg、抗—HBcIgM均阴性,提示HBV母婴传播,也可发生于分娩过程中。     

建立检测血清HBV DNA的多聚酶链反应技术

建立检测血清HBV DNA的多聚酶链反应技术。人工合成adr、adw和ayw三个业型HBV的两个共有序列NC1和NC2作为引物扩增一长428bp且含一BglⅡ酶切点的HBV C基因片段。含FD酶的反应体系在水浴93℃30秒、55℃60秒、72℃90秒依序循环30周期,当克隆HBV DNA模板最小加量为10 fg时,产物作琼脂糖凝胶电泳经溴化乙锭染色在紫外线下观察仍可见428 bp位置的阳性荧光带。阳性产物经BgⅠⅡ酶切后分为125 bp和303 bp的两个特异片段。同一条件下的阴性对照则出现阴性结果。这一技术用以检测经常规DNA提取的127例HBsAg阳性血清,结果HBV DNA检出率达88％,其中HBeAg阳性血清HBV DNA检出率为97％,抗HBeAg阳性血清HBV DNA检出率为82％。     

无症状HBsAg携带者传染性与年龄关系的研究

本文应用斑点杂交试验直接检测154例无症状HBsAg携带者血清HBV DNA,四个年龄组HBV DNA阳性率分别为:11月～15岁82.3％(28/34),～30岁67.8％(40/59),～40岁37.1％(13/35),41～60岁19.2％(5/26),其间有显著差异(X~2=32.1675 P<0.01)。四个年龄组HBeAg阳性率分别为:82.3％(28/34),67.8％(40/59),40％(14/35),26.9％(7/26),其间有显著差异(X~2=25.5248 P<0.01)。各组HBVDNA检出与HBeAg存在密切相关,与HBsAg、抗-HBe及抗—HBe阳性或阴性并无相关。结果表明无症状HBsAg携带者随着年龄增长,血清HBV复制水平降低,传染性减小。所以,在防治无症状HBsAg携带者构成社会极重要的传染源的同时,要特别注意小儿及青少年无症状HBsAg搏带者的防治。     

血清HBV DNA复制与慢性乙型肝炎肝脏损伤程度的研究

目的：探讨慢性乙型肝炎急性发作时,ＨＢＶ复制水平与肝脏组织损伤程度之间的关系。方法：Ｃ地４４例自发性发作的慢性乙型肝炎患者进行肝组织活检,并采用荧光定量多聚酶链反应测定血清ＨＢＶＤＮＡ含量。结果：血清ＨＢＶＤＮＡ含量与肝脏炎症程度（Ｇ１－Ｇ４）及纤维化程度（Ｓ１－Ｓ４）之间比较,无明显相关性（Ｐ〉０．０５）;与血清丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）、门冬氨酸转氨酶（ＡＳＴ）及总胆红素（Ｔ－ＢＩＬＩ）之间也无相     

斑点杂交试验直接检测血清HBV DNA的临床意义

本文应用斑点杂交试验直接检测101例乙肝病毒(HBV)无症状携带者、慢活肝及肝硬化患者血清HBV DNA,阳性率分别为58.3％(21/36)、36.9％(17/46)、10.5％(2/21),三组间有显著差异(P<0.01)。并与血清免疫标志进行比较,在HBeAg阳性时,HBV DNA检出率分别为95.2％(20/21)、70.8％(17/24)、25.0％(1/4),三组间有显著差异(P<0.05)。HBsAg、抗-HBc及抗-HBe与血清HBV DNA并非一致。结果表明,HBV无症状携带者比慢活肝及肝硬化具有更高的传染性,是极重要的传染源。     

PCR法快速制作地高辛配基标记的人型结核杆菌DNA探针

该文探索了用PCR法快速制作地高辛配基标记的DNA探针的方法．证明可靠、安全、快速。对结核病防治而言，找到了一种优于结核培养的查菌方法；对其他需DNA探针的情况而言，该文探索到一种快速制作法。     

原发型肝癌的HBV感染及肝内的HBVDNA

应用~(32)P标记的3.2kb克隆HBVDNA探针对36例原发型肝癌患者的血清和肝组织作HBVDNA斑点杂交,结果:血清、肝癌组织、癌近邻肝组织和癌远邻肝组织的阳性率分别为56％、91％88％和80％,皆高于国内外一些同类研究,说明其HBV感染率比一般认为的还要常见,尽管肝内良恶组织的HBV DNA阳性率未见显著差别。此外,尚对HBV6项血清标记作了检测,结果HBsAg和PHSA·Re的阳性率均较高,分别为83％和75％,说明多数病例的HBV感染仍然处于病毒活动复制阶段。由于血清HBsAb阳性者,肝内HBV DNA全阳性,提示HCC阶段的“保护性抗体”并不能清除病毒感染。