TRAIL和顺铂对横纹肌肉瘤细胞凋亡时caspase-3活性和线粒体膜电位的影响

 目的: 探讨肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体（TRAIL）蛋白和顺铂协同抑制横纹肌肉瘤细胞生长和诱导凋亡作用及其机制。方法: 将不同浓度的TRAIL和顺铂作用于培养的人RD胚胎型横纹肌肉瘤细胞，通过MTT比色法、形态学改变、流式细胞仪检测细胞凋亡、caspase-3活性和线粒体膜电位的改变，分析其对横纹肌肉瘤细胞的作用及和顺铂协同作用的效果和机制。结果: TRAIL浓度为1.0、10.0、100.0 μg/L时，细胞毒性指数分别为18.9%、20.8%、43.5%；顺铂浓度为1.0、5.0、10.0 mg/L时，细胞毒性指数分别为9.8%、23.4%和43.8%。而浓度为100 μg/L的TRAIL与浓度为5 mg/L的顺铂联合作用时，细胞毒性指数明显高达66.4%，FCM分析显示联合应用后细胞线粒体跨膜电位降低，同时提高caspase-3的活性,与细胞凋亡率增加相一致。结论: TRAIL和顺铂联合应用对横纹肌肉瘤细胞具有明显的协同杀伤效果，这一作用与增加caspase-3活性及降低线粒体跨膜电位有关。     

青藤碱与顺铂协同诱导人纤维肉瘤HT-1080细胞凋亡

目的:探究青藤碱(sinomenine,SIN)对人纤维肉瘤HT-1080细胞顺铂敏感性的影响及其可能的分子机制。方法:采用CCK-8法检测青藤碱和顺铂对HT-1080细胞的毒性作用,采用Chou-Talalay中效分析法对两药的联合效应进行评价,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Western blot法检测铜离子转运蛋白1(copper transporter 1,CTR1)、谷胱甘肽S-转移酶π(glutathione S-transferase-π,GST-π)、Bcl-2和Bax的蛋白水平。结果:HT-1080细胞经顺铂或青藤碱处理48 h,细胞活力均受到显著抑制(P0.05),IC50分别为6.50μmol/L和1.06 mmol/L,当抑制率超过25%时,二者联用呈协同效应;青藤碱与顺铂均可诱导HT-1080细胞凋亡(P0.05),两药联合可使细胞凋亡率显著升高(P0.05);青藤碱可上调CTR1和Bax的蛋白水平(P0.05),下调GST-π和Bcl-2的蛋白水平(P0.05)。结论:青藤碱可协同增强顺铂诱导的人纤维肉瘤HT-1080细胞凋亡,这可能与青藤碱上调CTR1和Bax蛋白水平以及下调GST-π和Bcl-2蛋白水平有关。     

TRAIL基因修饰的树突状细胞诱导黑色素瘤细胞凋亡的实验研究

为研究TRAIL基因修饰的树突状细胞诱导黑色素瘤细胞凋亡的作用,研究用携带TRAIL基因的重组腺病毒转染小鼠来源的树突状细胞(dendritic cell,DC),采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测DC TRAIL蛋白的表达水平;将DC-TRAIL与B16黑色素瘤细胞混合培养,显微镜观察细胞生长情况,FCM检测B16细胞的凋亡情况;构建小鼠黑色素瘤模型,分别将DC-TRAIL、DC和PBS皮下注射于肿瘤接种部位,观察小鼠的瘤体生长情况,测量瘤体的体积。结果显示:用Ad-TRAIL转染DC后DC可高表达TRAIL。DC-TRAIL组与DC组相比可明显诱导肿瘤细胞凋亡。用DC-TRAIL、DC和PBS处理黑色素瘤移植小鼠2周后,发现DC-TRAIL组小鼠平均肿瘤体积为(0.33±0.10)cm~3,DC组小鼠平均肿瘤体积为(1.32±0.29)cm~3,PBS组小鼠平均肿瘤体积为(3.01±0.52)cm~3。与DC组和PBS组相比,DC-TRAIL组可明显抑制肿瘤生长。     

阿司匹林增强TRAIL诱导的HepG-2细胞凋亡

目的:研究阿司匹林能否增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导的HepG-2细胞凋亡,并初步探讨其作用机制。方法:HepG-2细胞放入含15%胎牛血清的DMEM培养液中培养,改良苯酚-品红染色观察细胞形态变化,MTT法检测细胞增殖程度,TUNEL法检测细胞凋亡指数,RT-PCR检测细胞中survivinmRNA的表达水平,FCM检测细胞凋亡率和细胞周期。结果:不同浓度的阿司匹林联合TRAIL实验组细胞增殖抑制率明显高于空白对照组及TRAIL和阿司匹林单独用药组,且细胞凋亡指数也明显提高,凋亡率与阿司匹林的浓度呈现剂量依赖关系,联合用药组凋亡相关基因survivin的表达与空白对照组和TRAIL和阿司匹林单用组相比明显下调。结论:阿司匹林能够增强TRAIL诱导的HepG-2细胞凋亡,其作用机制可能与survivin基因的表达下调有关。     

顺铂诱导大鼠C6胶质瘤细胞凋亡

为深入进行胶质瘤细胞凋亡的分了生物学研究及提高胶质瘤辅助化疗疗效打下基础。通过光镜,电镜,荧光显微镜分析,DNA断裂分析及流式细胞仪分析,进行顺铂诱导C6胶质瘤细胞调亡研究。本研究证实在3μg／mLCDDP作用72h,C6细胞出观细胞凋亡;光镜和电镜可见细胞形态学上出现细胞皱缩,染色质浓集贴达;流式细胞仅结果提示有凋亡峰出现,凋亡细胞占细胞总数17.3％±1.2％;荧光显微镜观察出现染色质浓集,染色质断裂：DNA电泳未表现出DNA呈梯状带型断裂。上述结果提示用顺铂成功地诱导大鼠C6胶质瘤细胞发生凋亡。     

抗人DR5单克隆抗体——mDRA-6与顺铂协同杀伤白血病细胞HL-60作用研究

目的：观察抗死亡受体5（Death receptor 5,DR5）单克隆抗体--mDRA-6与顺铂（DDP）对HL-60细胞的协同杀伤作用.方法：DR5蛋白免疫BALB/c小鼠,融合筛选抗DR5杂交瘤细胞,制备抗DR5单抗--mDRA-6;流式细胞术测定顺铂对HL-60细胞表面DR5表达及细胞凋亡率;荧光显微镜下观察mDRA-6与顺铂协同作用下HL-60细胞形态变化;MTT法测定不同浓度的顺铂与mDRA-6对HL-60细胞存活的影响;琼脂糖凝胶电泳检测mDRA-6与顺铂联合对HL-60细胞DNA片段化的影响.结果：顺铂可诱导HL-60细胞表面DR5表达增加,mDRA-6与顺铂联用致HL-60细胞出现染色质浓缩、断裂,细胞出芽,凋亡小体形成等细胞凋亡形态学变化;250 ng/ml的mDRA-6作用于HL-60细胞10小时,细胞凋亡率为16.61%;0.16 μg/ml的DDP作用于HL-60细胞10小时,细胞凋亡率为2.35%;二者联合作用后,HL-60细胞凋亡率增至57.10%;mDRA-6与DDP联合作用HL-60细胞,DNA琼脂糖凝胶电泳显示明显“梯形”条带.结论：抗DR5单抗--mDRA-6与DDP对HL-60细胞具有强大的协同杀伤作用.     

乙型肝炎病毒X基因促TRAIL诱导Huh7细胞凋亡的机制

目的探讨乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)X基因(HBX)促肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF relatedapoptosis inducing ligand,TRAIL)蛋白诱导人肝癌细胞Huh7凋亡的机制。方法应用脂质体转染法将pcDNA3.1-HBX、pcDNA3.1分别转染Huh7细胞,建立稳定表达HBX的细胞模型Huh7-HBX和空载体对照细胞模型Huh7-3.1;运用TRAIL蛋白分别作用Huh7-HBX细胞、Huh7-3.1及Huh7细胞后,采用CCK8、流式细胞术检测细胞增殖和凋亡情况;Western blot检测死亡受体4(deathreceptor 4,DR4)和死亡受体5(death receptor 5,DR5)的表达情况;分光光度法检测细胞caspase8和caspase3活性。结果 RT-PCR及Western blot证实成功构建细胞株Huh7-HBX;CCK8和流式细胞术检测结果均显示Huh7-HBX细胞的凋亡率明显高于Huh7-3.1及Huh7(P<0.05);Western blot显示Huh7-HBX细胞的DR4、DR5的表达量明显高于Huh7-3.1及Huh7细胞(P<0.05);caspase活性检测结果显示,Huh7-HBX细胞caspase8及caspase3的活性明显高于Huh7-3.1及Huh7(P<0.05)。结论 HBX能够通过上调Huh-7细胞表面死亡受体DR4、DR5的表达,进而促进TRAIL蛋白诱导的细胞凋亡,为进一步研究HBX的促凋亡机制提供实验依据。     

TRAIL联合氟尿嘧啶体外诱导结肠癌细胞凋亡

目的:探讨氟尿嘧啶(Fu)对重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-relatedapoptosis-inducing ligand,TRAIL)诱导结肠癌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测Fu及联合rmhTRAIL对人结肠癌SW480的IC50值;流式细胞术检测不同浓度Fu与rmhTRAIL联合处理SW480 24 h后细胞的凋亡率;实时荧光定量PCR和Western印迹法检测不同浓度Fu与rmhTRAIL联合处理SW480 24 h后细胞survivin基因mRNA和蛋白表达变化。结果:细胞经药物处理24 h后,单用组IC50值为29.5μmol/L,Fu联合rmhTRAIL组IC50值为6.4μmol/L,高质量浓度联合组药物相互作用系数为0.92;Fu与rmhTRAIL联合作用24 h后,随Fu质量浓度增高survivin mRNA和蛋白的表达显著下调。结论:Fu能增强TRAIL诱导的结肠癌细胞凋亡,其机制可能与下调survivin表达有关。     

甲状腺癌中肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及其受体的表达

目的　研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体(TRAILR)在甲状腺癌中的表达及意义。　方法　采用免疫组织化学方法 ,检测 5例正常甲状腺、13例乳头状甲状腺癌、3例滤泡状甲状腺癌和 12例甲状腺癌旁组织中TRAIL和TRAILR的表达和分布。　结果　乳头状、滤泡状甲状腺癌组织和正常甲状腺组织中的甲状腺滤泡细胞均表达TRAIL和全部的TRAILR ,其中诱捕受体TRAILR4在正常甲状腺组织和甲状腺癌旁组织表达较弱。　结论　甲状腺癌组织中的甲状腺滤泡细胞表达TRAIL和全部的TRAILR ,提示癌变的甲状腺滤泡细胞通过自身表达TRAIL ,以自分泌或旁分泌的形式和其死亡受体TRAILR1、TRAILR2结合 ,诱导癌变的甲状腺滤泡细胞发生凋亡 ,诱捕受体TRAILR3、TRAILR4的存在也不能影响其对TRAIL诱导的细胞凋亡的敏感性     

TRAIL联合紫杉醇诱导胃腺癌SGC-7901细胞凋亡作用研究

目的:观察紫杉醇联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导人胃腺癌SGC-7901细胞凋亡的作用及其协同作用机制。方法:将TRAIL、紫杉醇及TRAIL联合紫杉醇诱导SGC-7901细胞48小时,用流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率和线粒体跨膜电位的改变;用MTT法检测SGC-7901细胞增殖反应;用免疫印迹(Westernblot)法检测TRAIL死亡受体DR4(TRAIL-R1)、DR5(TRAIL-R2)的表达变化。结果:TRAIL和/或紫杉醇对SGC-7901细胞增殖有抑制作用,两者联合用药组对细胞增殖的抑制率较单独用药明显增加(P<0.01);联合用药组细胞凋亡率较单独用药组明显增加(P<0.01);0.3μmol/L紫杉醇作用48小时后,DR4表达明显升高(P<0.05),而DR5表达没有明显改变(P>0.05)。结论:紫杉醇可协同TRAIL诱导SGC-7901细胞凋亡,DR4表达增加可能是其协同作用的机制。     

重组人可溶性TRAIL的制备及其联合硼替佐米诱导肿瘤细胞的凋亡作用

目的:构建重组人肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)原核表达质粒p ET-28a(+)-TRAIL114-281,优化蛋白表达和纯化条件,制备重组人可溶性TRAIL并鉴定其活性。方法:使用CCK-8初步验证TRAIL是否具有抑制肿瘤细胞生长的生物活性;将制备的TRAIL单独或联合50 nmol/L硼替佐米应用于H460细胞(对TRAIL敏感)和K562细胞(对TRAIL抵抗)24 h,流式细胞术检测细胞凋亡率,比色法检测caspase-8、-9、-3的活化程度,Western blot分析细胞中Bax、Bcl-2和c FLIP蛋白的表达。流式细胞术检测硼替佐米处理H460细胞和K562细胞24 h后DR4和DR5的表达量变化。结果:制备了具有生物学活性且性质稳定的重组人可溶性TRAIL,且成功诱导H460和K562细胞凋亡。不同浓度TRAIL处理H460细胞后其凋亡率随着TRAIL浓度升高而显著升高(P0.05),但K562细胞凋亡率并未随着TRAIL浓度明显升高。联合用药组的H460和K562细胞凋亡率均显著高于单独用药组(P0.05),凋亡过程中caspase-8、-9、-3均被活化,药物处理组的Bcl-2和c FLIP表达量均比对照组下降,尤其联合用药组表达量下降最为显著(P0.05),而Bax表达量无明显变化。硼替佐米处理H460和K562细胞后DR4和DR5表达量均上调(P0.05)。结论:硼替佐米能协同TRAIL启动内源性凋亡途径诱导H460和K562细胞凋亡,其可能机制是通过上调死亡受体DR4和DR5的表达量、下调抗凋亡蛋白Bcl-2和c FLIP的表达量来实现的。     

杭白菊增强TRAIL基因诱导大肠癌细胞凋亡及机制的实验研究

目的：探讨杭白菊提取液对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因（TRAIL）抑制人大肠癌细胞株DLD-1作用的影响及其可能机制。 方法： 杭白菊提取液联合重组腺病毒载体（Ad）介导的TRAIL基因作用于人大肠癌细胞株DLD-1，通过倒置显微镜、MTT比色法和流式细胞仪，研究分析其对DLD-1细胞抑制作用的效果。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和流式细胞术检测杭白菊提取液作用前后DLD-1细胞TRAIL、TRAIL受体（TRAIL-Rs）mRNA以及细胞表面TRAIL蛋白表达的变化。 结果： Ad/hTERT-gTRAIL对DLD-1细胞的生长抑制率和凋亡率分别为31.4%和13.5%；联合杭白菊提取液后，生长抑制率和凋亡率均显著提高，达93.1%和45.4%（P<0.05）。杭白菊提取液作用后DLD-1细胞TRAIL mRNA的表达量从作用前的0.46上调至1.01, 细胞表面TRAIL蛋白表达的百分率从作用前的2.2%升高到5.0%（P<0.05）。TRAIL死亡受体（DR4、DR5）mRNA的表达量分别从0.70和0.22上调至1.10和0.83（P<0.05），而TRAIL诱骗受体（DcR1、DcR2）mRNA的表达量从0.60和1.15下调至0.19和0.78（P<0.05）。 结论： 杭白菊提取液联合重组腺病毒载体（Ad）介导的TRAIL基因(Ad/hTERT-gTRAIL)能有效诱导DLD-1细胞的凋亡。杭白菊提取液上调TRAIL死亡受体表达以及下调TRAIL诱骗受体的表达可能在增强TRAIL诱导的凋亡作用中起着重要作用。     

吴茱萸碱抑制Huh7细胞生长并增强细胞对TRAIL的敏感性

目的:探讨吴茱萸碱对人肝癌Huh7细胞生长和凋亡的影响,阐明吴茱萸碱促进肿瘤坏死因子凋亡诱导配体(TRAIL)抗肿瘤活性的分子机制。方法:MTT法检测吴茱萸碱对Huh7细胞活力的影响;流式细胞术观察吴茱萸碱对细胞周期的阻滞;TUNEL染色法检测细胞凋亡的变化;Western blot实验测定细胞内细胞周期和凋亡相关蛋白的表达水平。结果:Huh7细胞经吴茱萸碱处理后,细胞活力明显下降(P0.05);同时,细胞发生G_2/M期阻滞,p27、cyclin B1、细胞分裂周期蛋白2(Cdc2)和p-Cdc2的蛋白水平上调(P0.05);吴茱萸碱能够诱导Huh7细胞发生凋亡,促进多聚ADP核糖聚合酶(PARP)和caspase-3的切割。当吴茱萸与TRAIL联用后,Huh7细胞活力明显下降,PARP和caspase-3的切割增加;另外,吴茱萸上调Huh7细胞中死亡受体5(DR5)的蛋白水平。结论:吴茱萸碱通过抑制细胞活力和阻滞细胞周期于G_2/M期而抑制细胞生长,并诱导Huh7细胞发生凋亡;上调DR5的表达水平可能与吴茱萸碱增强Huh7细胞对TRAIL的敏感性相关。     

Increased expression and release of functional tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) by T cells from lupus patients with active disease

Increased expression of TRAIL in membrane-bound and soluble form in patients with systemic lupus erythematosus (SLE) has been previously reported. In this study, we characterized the upregulation of T-cell-associated and soluble TRAIL (sTRAIL) in vivo and the modulation of TRAIL expression and soluble protein release in vitro following T cell activation and IFNalpha exposure. The expression of membrane-bound TRAIL as determined by flow cytometry was higher on CD4(+) and CD8(+) T cells from lupus patients compared to controls, particularly on activated CD69(+)CD8(+) T cells. Similarly, sTRAIL levels determined by ELISA were significantly elevated in serum from patients with active SLE and correlated with levels of IFNalpha. In vitro, both T-cell-associated and sTRAIL were maximally induced by T cell activation plus IFNalpha in patients and controls. By Western blot analysis, sTRAIL was detected in sera in both the monomeric and multimeric, functional form. Both forms of TRAIL were functional in vitro as determined by Annexin V staining and (51)Cr release assay but the apoptotic activity of membrane TRAIL was 2.5-fold higher compared to that of sTRAIL. These results indicate that IFNalpha-induced enhancement of TRAIL expression and of TRAIL-mediated apoptosis may amplify the abnormal apoptotic process in SLE.     

白藜芦醇对TRAIL诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的影响研究

目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）诱导人肝癌细胞株SMMC-7721凋亡作用及白藜芦醇对TRAIL的增敏效果。方法培养SMMC-7721细胞,同步化后,分成对照组、TRAIL干预组、Res＋TRAIL干预组,作用24h后,收集细胞,用流式细胞仪进行凋亡分析。结果对照组SMMC-7721细胞的凋亡率为3．02％±0．17％,TRAIL干预组凋亡率为8．55％±1．46％,Res＋TRAIl。干预组中25μmol·l-1、50μmol·l-1、100μmol·l-1。凋亡率分别为8．61％±1．41％、20．72％±1．33％、27．19％±1．43％。TRAlL干预组、Res＋TRAIL干预组与对照组相比,差异均有显著性（P〈0．01）。Res＋TRAIL干预组（5μmol·l-1、100μmol·l-1白藜芦醇）与TRAIL干预组相比,差异均有显著性（P〈0．01）;而Res＋TRAIL干预组（25μmol·l-1白藜芦醇）与TRAIL干预组比较差别无显著性（P〉0．05）。结论本研究表明’FRAIL对SMMC-7721细胞有凋亡诱导作用;白藜芦醇对TRAIL诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡有致敏作用,且呈剂量依赖关系。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体参与雷帕霉素诱导血管内皮细胞功能损伤的体外研究

目的: 探讨雷帕霉素对内皮细胞凋亡和增殖、迁移能力的影响,以及肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)表达水平的变化。方法: 用浓度为0、1、10、100 μg/L 的雷帕霉素孵育内皮细胞24 h,应用CCK8法检测血管内皮细胞的增殖能力,Transwell小室和划痕试验检测细胞迁移能力,DAPI染色观察凋亡细胞核形态改变,Western blotting法检测caspase-3活性以显示血管内皮细胞的凋亡,并用 Western blotting检测TRAIL在凋亡的内皮细胞中的表达。结果: 雷帕霉素(1-100 μg/L)能诱导血管内皮细胞凋亡并抑制其迁移能力(P<0.01)。除雷帕霉素1 μg/L外, 10 μg/L和100 μg/L雷帕霉素均能抑制内皮细胞增殖能力(P<0.01),同时雷帕霉素(10-100 μg/L)使TRAIL蛋白表达增加,两者作用均呈浓度依赖性(P<0.01)。结论: 雷帕霉素能诱导内皮细胞发生凋亡并抑制其增殖和迁移能力。TRAIL表达上调与雷帕霉素诱导血管内皮细胞损伤有一定的相关性。     

rhTRAIL对小鼠乳腺癌的抑制作用

目的:探讨重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（rhTRAIL）对小鼠乳腺癌的抑制作用。 方法: 将5×109cells/L对数生长期的小鼠乳腺癌细胞D2F2接种于BALB/c小鼠右上肢皮下,每只接种0.2 mL（1×106个细胞）,随机分为5组。空白对照组：PBS 0.2 mL;rhTRAIL低、中、高剂量组：剂量分别为2.5 mg/kg、5.0 mg/kg、10.0 mg/kg;阳性药物组：环磷酰胺30.0 mg/kg。各组均采用腹腔注射,每天1次,共15 d。每天小鼠称重记录,每3 d观察肿瘤的生长情况并用游标卡尺测定肿瘤的长径和短径,计算肿瘤体积和抑瘤率。停药后处死小鼠,取瘤进行肿瘤组织光镜和电镜观察。同时流式细胞仪检测经不同浓度rhTRAIL作用后细胞凋亡及细胞周期变化。 结果: 与空白对照组相比,rhTRAIL 2.5 mg/kg、5.0 mg/kg、10.0 mg/kg（低、中、高）剂量组的肿瘤重量和体积明显低于空白对照组（P＜0.01）,且rhTRAIL低、中、高剂量组的肿瘤重量和体积随药物浓度的增加而降低（P＜0.01）。rhTRAIL 2.5 mg/kg、5.0 mg/kg、10.0 mg/kg（低、中、高）剂量组肿瘤细胞既有坏死也有凋亡样改变,肿瘤组织破坏面积大,很多区域看不到正常的肿瘤细胞,可见凋亡小体。流式细胞仪检测结果显示rhTRAIL蛋白可诱导D2F2细胞凋亡,0.25 mg/L、0.5 mg/L、1.0 mg/L组细胞凋亡率分别为7.56%、21.37%、27.16%,凋亡率随剂量增大而升高（P＜0.05 )。 结论: rhTRAIL可诱导小鼠乳腺癌细胞D2F2凋亡并有大量的乳腺癌细胞坏死,rhTRAIL对小鼠乳腺癌细胞D2F2具有抑制作用。     

告达庭增强TRAIL诱导的HepG2细胞凋亡

目的:研究C21甾体苷元告达庭对肿瘤坏死因子凋亡诱导配体(TRAIL)诱导的Hep G2肝癌细胞增殖和凋亡的影响,并进一步明确其作用机制。方法:采用MTT法和细胞集落形成实验检测告达庭与TRAIL联合对细胞增殖的影响;TUNEL染色法检测细胞凋亡的变化;免疫印迹实验分析蛋白的表达水平。结果:告达庭与TRAIL联合作用Hep G2细胞24 h后,细胞活力明显下降,细胞增殖受到抑制;同时,两者联用后细胞凋亡数目明显增加,显著高于告达庭和TRAIL单用诱导的细胞凋亡率;与对照相比,告达庭与TRAIL联用促进了caspase-3、caspase-7、caspase-9和PARP的活性切割,而凋亡抑制蛋白survivin的表达则下调。结论:告达庭能够增强TRAIL诱导Hep G2细胞凋亡,其机制可能与激活caspase家族因子的活性切割和抑制survivin的表达相关。     

白花丹醌增强TRAIL诱导Kasumi-1细胞凋亡及其机制

目的: 观察白花丹醌、rsTRAIL单独及其联合体外诱导Kasumi-1细胞凋亡的作用,探讨其作用机制。方法: 采用WST-8 (CCK-8)比色法测定rsTRAIL、白花丹醌单独和联合应用对Kasumi-1细胞的生长抑制率;用流式细胞术、TUNEL法观察并且检测凋亡率;实时定量PCR检测白花丹醌作用后DR4和DR5 mRNA水平变化;Western blotting法检测单独应用及联合应用后DR5、caspase-3、caspase-8、caspase-9、Bid、Bax及c-FLIP的变化。结果: (1)白花丹醌和rsTRAIL单独应用均可抑制Kasumi-1细胞的生长,联合应用可增加对Kasumi-1细胞的生长抑制率且呈时间和剂量依赖性(P<0.05)。(2)rsTRAIL(100 μg/L)和白花丹醌(2 μmol/L)单用及其联合使用诱导Kasumi-1细胞Annexin V阳性细胞百分率分别为(27.7±2.9)%、(25.6±3.1)%和(52.1±3.3)%。(3)TUNEL法检测发现联合应用组较单用组凋亡细胞显著增多。(4)实时定量PCR检测发现白花丹醌可以上调DR5的表达。(5)Western blotting发现白花丹醌单独作用及其联合rsTRAIL应用时上调DR5、激活caspase-8和下调c-FLIP表达。结论: 白花丹醌具有增强TRAIL诱导Kasumi-1细胞凋亡的作用,其机制与DR5上调、caspase-8激活和c-FLIP下调有关。