皮肤黑素瘤细胞3种Smad的表达

目的探讨Smad2、Smad3、Smad4在皮肤黑素瘤细胞中的表达情况。方法应用反转录-实时荧光定量PCR方法和蛋白印迹方法,分别检测人皮肤黑素瘤A375细胞和人正常黑素细胞中Smad2、Smad3、Smad4的mRNA及蛋白表达。结果 A375细胞中Smad2、Smad3、Smad4的mRNA和蛋白表达均显著低于人正常黑素细胞(t=2.361~4.214,P<0.01)。结论在黑素瘤细胞的转化生长因子β(TGF-β)/Smad信号通路中Smad2、Smad3、Smad4均出现表达下调,可能参与了皮肤黑素瘤发病。     

TGF-β1／Smad 信号通路在皮肤病理性瘢痕及瘢痕癌组织中的变化

目的：探讨TGF-β1/Smad信号通路在皮肤病理性瘢痕及瘢痕癌组织中的变化。方法：将20份病理性瘢痕组织标本设为观察A组、20份瘢痕癌组织标本设为观察B组,20份正常皮肤组织设为对照组,分别使用蛋白免疫印迹（Western blotting）和实时荧光PCR（real time PCR）观察三组组织标本TGF-β1和Smad蛋白和基因的变化情况。结果：①Western blotting：观察B组的TGF-β1和Smad蛋白显著高于观察A组和对照组（ P＜0．01）,TGF-β1和Smad在观察A组与对照组之间无统计学差异（ P＞0．05）;②Real time PCR：观察B 组的TGF-β1和Smad 基因显著高于观察A组和对照组（ P＜0．01）,TGF-β1和Smad在观察A组与对照组之间无统计学差异（P＞0．05）;③相关性分析：在皮肤瘢痕癌标本中TGF-β1与mRNA TGF-β1（r＝0．727 P＜0．01）,Smad与mRNA Smad（r＝0．812 P＜0．01）的表达均呈正相关。结论：瘢痕癌变上调TGF-β1、Smad的表达,在瘢痕癌中TGF-β、Smad 同时存在蛋白水平和基因水平的异常表达,可将改变TGF-β1/Smad信号通路的标志蛋白的表达做为治疗疤痕癌的靶方向。     

TGF-β1/Smad7信号通路在哈萨克族食管癌上皮间质转化中的作用

[目的]探讨TGF-β1/Smad7信号通路在哈萨克族食管鳞癌上皮间质转化(EMT)中的作用及其机制.[方法]运用免疫组织化学方法检测50例哈萨克族食管鳞癌组织及远端对应癌旁组织中TGF-β1与Smad7蛋白的表达.进一步在细胞水平,针对食管鳞癌细胞系Ec9706,基于RNA干扰技术,使用LipofectamineTM 2000试剂转染TGF-β1 siRNA.采用qRT-PCR技术检测TGF-β1及Smad7 mRNA表达水平;Western blot技术检测转染后各组TGF-β1、Smad7以及EMT相关蛋白表达水平;MTT、划痕及流式细胞术等方法检测各组细胞转染后的增殖、迁移、凋亡及周期的变化.[结果]免疫组化检测结果显示,哈萨克族食管鳞癌组织中TGF-β1蛋白表达明显高于癌旁组织(P＜ 0.05);Smad7蛋白在食管鳞癌组织中的表达低于癌旁组织(P＜0.05).转染TGF-β1 siRNA后,Ec9706细胞中TGF-β1 mRNA和蛋白表达量均降低,Smad7 mRNA和蛋白表达量增加;上皮标志物E-cadherin表达量增加,间质标志物Vimentin表达量降低,同时Ec9706细胞增殖、迁移受到抑制,细胞凋亡增加,细胞周期发生G0/G1期阻滞.[结论]哈族食管鳞癌中存在TGF-β1/Smad7信号通路的激活,食管癌中TGF-β1高表达,抑制了Smad7的表达,从而促进了上皮间质转化过程,进一步促进了食管癌细胞的增殖和迁移,并抑制细胞凋亡,影响细胞周期中的G0/G1期.     

泛素系统在人近端小管上皮细胞Smad信号传导通路中的作用

目的:观察Smad7在TGF-β致近端小管上皮细胞转分化中的变化,泛素系统对该过程中Smad信号的调节及对TGF-β所致的小管上皮细胞转分化的作用。方法:体外培养的人近端小管上皮细胞(HK-2),随机分为对照组、TGF-β1(5μg/L)组和TGF-β1(5μg/L)+MG-132(5 mmol/L)组。Western blot检测细胞中Smad2/3磷酸化水平的改变和Smad7蛋白水平的改变;半定量RT-PCR方法观察细胞中Smad7 mRNA表达的改变。结果:West-ern blot的结果显示:①MG-132+TGF-β1组中,Smad2/3磷酸化蛋白的表达减少90%(P<0.01)。②TGF-β1作用于细胞后,Smad7蛋白表达进行性减少,30 min较0 min降低20%(P<0.05),24 h时几乎无表达(P<0.01);MG-132+TGF-β1组中Smad7蛋白表达与对照组无明显差异,与TGF-β1组相比,Smad7蛋白水平上调。③半定量RT-PCR显示:TGF-β1(5μg/L)作用于细胞后,与Smad7蛋白表达不同,Smad7 mRNA迅速升高,24 h其表达增高近1倍(与0 min比较,P<0.01);MG-132+TGF-β1组中Smad7 mRNA的表达与对照组无明显差异。结论:TGF-β可诱导Smad7 mRNA表达上调,但Smad7蛋白的表达显著减少,其机制与泛素系统活化导致Smad7蛋白的降解增加有关。     

皮肤纤维瘤中Smad7的表达

目的探讨转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)信号转导途径中Smad7在皮肤纤维瘤中的表达特点及其意义。方法采用反转录(RT)-实时定量聚合酶链式反应(quantitative real-time PCR)检测皮肤纤维瘤与正常皮肤的真皮组织中Smad7的mRNA表达,用免疫组化法检测皮肤纤维瘤与正常皮肤中Smad7蛋白的表达情况。结果对20例皮肤纤维瘤标本和20例健康人对照皮肤的研究显示,与健康对照皮肤相比,皮肤纤维瘤的真皮纤维增生组织中Smad7 mRNA表达水平并无明显差异;而皮肤纤维瘤的增生表皮中Smad7蛋白的免疫组化染色强度却呈上调趋势。结论皮肤纤维瘤的真皮增生纤维组织中Smad7弱表达可促进TGF-β信号转导,有助于其纤维增殖状态的形成和维持。     

VEGF对上皮间充质转化的抑制与Smad信号途径及SnoN表达的变化

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导HK-2细胞发生肾小管上皮-间充质细胞转化(EMT)的过程中对Smad2/3,Smad7信号途径以及SnoN表达的影响。方法体外培养的HK-2细胞分为:①正常对照组;②TGF-β1(5μg/L)阳性对照组;③VEGF165(100μg/L)作用组;④TGF-β1(5μg/L)+VEGF165(100μg/L)共同作用组。采用WesternBlot法和RT-PCR分别检测各组细胞p-Smad2/3和Smad2/3(共同作用30和60min),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Smad7、SnoN的表达水平(共同作用48h)。结果 TGF-β1组α-SMA蛋白和mRNA表达与正常对照组比较明显增强,TGF-β1与VEGF165共同作用组α-SMA蛋白和mRNA表达与TGF-β1单独作用组比较明显减弱(P0.05)。体外HK-2细胞,TGF-β1组刺激30、60min,与正常对照组比较,(p-Smad2/3)/(Smad2/3)比值明显升高,TGF-β1+VEGF165组与TGF-β1单独作用组相比明显下降,且以30min时下降明显。TGF-β1组作用48h与正常对照组比较,Smad7蛋白和mRNA表达明显下降,VEGF165+TGF-β1组较TGF-β1单独作用组Smad7表达明显升高(P0.05)。VEGF165组与正常对照组相比,α-SMA、(p-Smad2/3)/(Smad2/3)、Smad7蛋白和mRNA表达的差异无统计学意义(P﹥0.05)。TGF-β1组SnoN蛋白表达与正常对照组比较明显增强(P0.05),TGF-β1与VEGF165共同作用组SnoN蛋白表达与TGF-β1单独作用组相比差异无统计学意义(P﹥0.05),各组SnoNmRNA表达差异均无统计学意义(P﹥0.05)。结论 VEGF165抑制TGF-β1诱导HK-2细胞EMT的机制可能与直接抑制Smad2/3磷酸化、上调Smad7信号表达有关,而与调节SnoN表达无关。     

Smad signal transduction pathway involved in supression of VEGF on TGF-β1 induced EMT of HK-2 cells

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导HK-2细胞发生肾小管上皮-间充质细胞转化(EMT)的过程中对Smad 2/3,Smad 7信号途径以及SnoN表达的影响.方法 体外培养的HK-2细胞分为:①正常对照组;②TGF-β1(5μgL)阳性对照组;③VEGF165(100μg/L)作用组;④TGF-β1(5 μg/L)+ VEGF165(100 μg/L)共同作用组.采用Western Blot法和RT-PCR分别检测各组细胞p-Smad 2/3和Smad 2/3(共同作用30和60 min),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Smad 7 、SnoN的表达水平(共同作用48 h).结果 TGF-β1组α-SMA蛋白和mRNA表达与正常对照组比较明显增强,TGF-β1与VEGF165共同作用组α-SMA蛋白和mRNA表达与TGF -β1单独作用组比较明显减弱(P＜0.05).体外HK-2细胞,TGF-β1组刺激30、60 min,与正常对照组比较,(p-Smad 2/3)/(Smad 2/3)比值明显升高,TGF-β1 +VEGF165组与TGF-β1单独作用组相比明显下降,且以30 min时下降明显.TGF-β1组作用48h与正常对照组比较,Smad7蛋白和mRNA表达明显下降,VEGF165+TGF-β1组较TGF-β1单独作用组Smad 7表达明显升高(P＜0.05).VEGF165组与正常对照组相比,α-SMA、(p-Smad 2/3 )/(Smad 2/3)、Smad 7蛋白和mRNA表达的差异无统计学意义(P＞0.05).TGF-β1组SnoN蛋白表达与正常对照组比较明显增强(P＜0.05),TGF-β1与VEGF165共同作用组SnoN蛋白表达与TGF-β1单独作用组相比差异无统计学意义(P＞0.05),各组SnoN mRNA表达差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 VEGF165抑制TGF-β1诱导HK-2细胞EMT的机制可能与直接抑制Smad 2/3磷酸化、上调Smad 7信号表达有关,而与调节SnoN表达无关.     

Smad 1/5和TGF-β1 mRNA在舌鳞状细胞癌组织中的表达

目的研究舌鳞状细胞癌(SCC)组织中Smad 1/5和转化生长因子β1(TGF-β1) mRNA的表达,探讨其与肿瘤临床分期、病理分级及淋巴结转移的关系。方法采用原位杂交法检测49例舌SCC、20例上皮异常增生以及10例正常口腔舌黏膜组织中Smad 1/5和TGF-β1 mRNA的表达。运用χ2检验,分析Smad 1/5和TGF-β1 mRNA表达与临床病理指标的关系;应用Spearman等级相关分析,检验Smad 1/5 mRNA与TGF-β1 mRNA表达间的相关性。结果舌SCC、上皮异常增生和正常黏膜组织中,Smad 1/5 mRNA的表达阳性率分别为73.5%、35%和30%;TGF-β1 mRNA表达阳性率分别为67.3%、25%和20%。Smad 1/5和TGF-β1 mRNA在癌组织中的表达显著高于正常黏膜组织(P<0.05)。Smad 1/5 mRNA表达阳性率,在有或无淋巴结转移及不同TNM分期间有显著差异(P<0.05)。Smad 1/5 mRNA与TGF-β1 mRNA表达呈显著正相关(r=0.405,P=0.039)。结论舌SCC的发生和发展可能与TGF-β mRNA及其下游信号通路相关。     

Smad 1/5和TGF-β1 mRNA在舌鳞状细胞癌组织中的表达

目的 研究舌鳞状细胞癌(SCC)组织中Smad 1/5和转化生长因子β1 (TGF-β1)mRNA的表达,探讨其与肿瘤临床分期、病理分级及淋巴结转移的关系.方法 采用原位杂交法检测49例舌SCC、20例上皮异常增生以及10例正常口腔舌黏膜组织中Smad 1/5和TGF-β1 mRNA的表达.运用χ2检验,分析Smad 1/5和TGF-β 1 mRNA表达与临床病理指标的关系;应用Spearman等级相关分析,检验Smad 1/5 mRNA与TGF-β1 mRNA表达间的相关性.结果 舌SCC、上皮异常增生和正常黏膜组织中,Smad 1/5 mRNA的表达阳性率分别为73.5%、35%和30%;TGF-β1 mRNA表达阳性率分别为67.3%、25%和20%.Smad 1/5和TGF-β1 mRNA在癌组织中的表达显著高于正常黏膜组织(P＜0.05).Smad 1/5 mRNA表达阳性率,在有或无淋巴结转移及不同TNM分期间有显著差异(P＜0.05).Smad 1/5 mRNA与TGF-β1 mRNA表达呈显著正相关(r＝0.405,P＝0.039).结论 舌SCC的发生和发展可能与TGF-β mRNA及其下游信号通路相关.     

Smad2,3,4,7蛋白在慢性移植性肾病的定位和表达变化

【目的】探讨Smad2,3,4,7蛋白在慢性移植性肾病（chronic allograft nephropathy,CAN）的定位和表达变化。【方法】收集13例经组织病理学明确诊断为CAN并行移植肾切除的肾标本作为实验组;取10例正常肾组织作为对照组。用免疫组化法检测Smad2、Smad3、Smad4、Smad7和TGF-β1蛋白的定位和表达;图像半定量分析肾小球和肾小管间质中Smads蛋白和TGF-β1的含量变化。【结果】Smad2、Smad3和Smad4主要在正常肾组织的肾小管上皮细胞内表达,肾小球偶见;而Smad7主要在肾小球表达。与对照组相比,Smad2、Smad3和Smad4蛋白在CAN中肾小球和肾小管上皮细胞的表达均明显增加（P〈0.01）,与TGF-β1上调成正相关;而Smad7蛋白在肾小球中的表达却明显下降（P〈0.01）,与TGF-β1上调成负相关。并且随着CAN的加重Smad2,3,4蛋白的表达逐渐增加,而Smad7蛋白的表达逐渐减少（P〈0.01）。【结论】TGF-β/Smad信号通路参与了CAN的纤维化进程,Smad2,3,4蛋白过度表达和Smad7负调控不足是导致CAN的纤维化的主要原因。     

信号传导蛋白Smad2和Smad3的研究进展

Smad蛋自家族是近年来发现的新的细胞内信号转导蛋白,哺乳类中共发现了有8种不同的Smad蛋白.可分为3个不同的亚族:R-Smad、Co-Smad和I-Smad.Smad2和Smad3属于R-Smad,本文从Smad2和Smad3的结构、功能以及相关蛋白等多个方面探讨Smad2和Smad3在TGF-Bl信号转导中的不同作用.     

Smad4及Smad7在胃癌组织中的表达研究

目的:研究Smad4及Smad7在不同胃组织中的表达及作用.方法:病理学证实的胃癌根治术切除的胃癌组织标本78例,胃癌旁组织78例,采用SP免疫组织化学染色技术,检测Smad4及Smad7在不同胃组织中的表达.结果:qDSmad4蛋白在胃癌旁组织中的阳性表达率为69.23%,在胃癌组织中的阳性表达率为44.87%(P<0.01);随着胃癌分化程度的降低其阳性表达率降低;有淋巴结转移者阳性表达率为23.25%,无淋巴结转移者的阳性表达率为71.43%,差别亦有统计学意义(P<0.01).②Smad7蛋白在胃癌旁组织中的阳性表达率为17.95%,在胃癌组织中的阳性表达率为89.74%(P<0.01);随着胃癌分化程度的降低其阳性表达率升高;有淋巴结转移者阳性表达率为97.67%,无淋巴结转移者的阳性表达率为80.00%,有淋巴结转移者阳性表达率高于无淋巴结转移者(p<0.05 .结论:①smad4蛋白在胃癌组织中低表达,与癌旁组织比较差异有统计学意义(P<0.01),其表达的阳性率与胃癌的分化程度及转移有关.②Smed7蛋白在胃癌组织中高表达,与癌旁组织比较差异有统计学意义(P〈0.01),其表达的阳性率与胃癌的分化程度及转移有关.     

Smad2,3,4,7蛋白在大鼠5/6肾切除肾衰模型中的定位和表达变化

目的　研究Smad2 ,3 ,4,7蛋白在 5 6肾切除模型中的定位和表达变化。方法　Wistar大鼠行 5 6肾切除 ,分别于模型 4、8、12周处死大鼠。用免疫组化检测Smad2、Smad3、Smad4和Smad7蛋白的定位和表达 ;纤维化程度通过测定肾组织羟脯氨酸含量来判断。结果　Smad2、Smad3和Smad4主要在肾小球和肾小管上皮细胞内有表达 ,而Smad7主要在肾小球表达。随着肾功能衰竭的加重 ,肾小球Smad2、Smad3和Smad4蛋白表达逐渐增加 ,而Smad7蛋白表达却逐渐下降 ,并伴有肾组织羟脯氨酸含量的明显增高。结论　TGF β Smad信号通路参与了肾间质纤维化进程 ,Smad2 ,3 ,4高表达和Smad7负调控不足是本模型TGF β高表达导致肾小球硬化加重的主要原因之一。     

Smad2和Smad4蛋白在乳腺癌组织中的表达及其意义

目的：研究细胞信号传导分子Smad2和Smad4蛋白在乳腺癌组织中的表达,阐明其与乳腺癌发生发展的关系及意义。方法：选取53例乳腺导管癌和50例癌周正常组织标本,应用免疫组织化学SP法检测乳腺癌组织和癌周正常组织中Smad2和Smad4蛋白的表达水平,并评估二者的表达与乳腺癌临床病理参数间的关系。结果：乳腺癌组织中Smad2蛋白表达水平明显高于癌周正常组织（Z=-2.08,P < 0.05）;乳腺癌组织中Smad4蛋白表达水平明显低于癌周正常组织（Z=-5.01,P < 0.01）。乳腺癌组织中Smad2和Smad4蛋白的阳性表达率与患者年龄无关（r=0.035,P > 0.05;r=-0.077,P > 0.05）,与肿瘤大小无关（r= 0.128,P > 0.05;r=0.133,P > 0.05）,与淋巴结转移无关（r=0.163,P > 0.05;r=0.006,P > 0.05）,与是否有远处转移无关（r=0.113,P > 0.05;r=0.126,P > 0.05）,与ER的表达无关（r=0.056,P > 0.05;r=0.047,P > 0.05）,与PR的表达无关（r=0.129,P > 0.05;r=0.107,P > 0.05）;但与HER2的阳性表达率呈负相关关系（r=-0.388,P < 0.01;r=-0.360,P < 0.01）,与乳腺癌病理分级呈负相关关系（r=-0.331,P < 0.05;r=-0.388,P < 0.01）;乳腺癌组织中Smad2与Smad4的表达呈正相关关系（r= 0.830,P < 0.01）。结论：Smad2和Smad4蛋白在乳腺癌的发生发展过程中起重要作用,可能成为评估乳腺癌恶性程度及预后的重要生物学指标。     

深低温停循环对大鼠额叶皮质Smad2和Smad4表达的影响

目的探讨深低温停循环对缺血缺氧大鼠额叶皮质信号转导分子2（Smad2）和信号转导分子4（Smad4）表达的影响.方法 40只SD大鼠经随机分组（其中4只为预灌注血液供体）后采用体外插管法建立大鼠闭胸式体外循环模型,三组动物分别经深低温停循环（DHCA,n=12,脑温〈20℃,停循环10 min）、常温停循环（NTCA,n=12,脑温36.5℃～37.5℃,停循环10 min）和常温不停循环（NC,n=12,脑温36.5℃～37.5℃）处理后,快速断头取额叶皮质,液氮保存.免疫组化染色后图像分析系统处理判断Smad2和Smad4在缺血早期大鼠额叶皮质的表达情况.结果 Smad2和Smad4在DHCA组中较NTCA组和NC组表达均有明显升高,差异有统计学意义（P〈0.05）;Smad2和Smad4在NTCA组中较NC组表达有升高,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论缺血缺氧可诱导大鼠额叶皮质Smad2和Smad4的表达,而深低温可以进一步促进额叶皮质内Smad2和Smad4的表达,反应性地增强脑损伤保护因子TGF-β1的作用,从而发挥脑保护作用.     

MAPK抑制因子对HSC中Smad2/3磷酸化及Smad4核转位的影响

目的 探究3种丝裂原活化蛋白激酶( MAPK)抑制因子对转化生长因子-β( TGF-β)活化的大鼠肝星状细胞( HSC)中Smad2/3磷酸化及Smad4 核转位的影响. 方法采用Ⅳ型胶原酶和链酶蛋白酶原位肝灌流法分离正常大鼠HSC并传代培养,分别用细胞外信号调节激酶( ERK)、c-Jun氨基末端激酶( JNK )、p38 抑制因子( PD98059、SP600125、SB203580 )与HSC共同培养,再加入TGF-β1活化细胞,采用免疫沉淀和 Western blot 法检测 pSmad2C、pSmad2L、pS-mad3L蛋白表达;采用细胞免疫荧光法检测Smad4 蛋白表达及细胞内定位情况. 结果 Western blot显示静息状态下HSC几乎不表达 pSmad2C 而低表达 pSmad2L、pSmad3L, TGF-β1刺激后显著上调上述磷酸化蛋白表达, p38 抑制因子(1、3 μmol/L)、ERK 抑制因子(1 μmol/L)对 Smad2C、Smad2L、Smad3L 磷酸化无显著影响;p38 抑制因子( 10μmol/L)降低了 pSmad3L 蛋白表达;ERK 抑制因子( 3、10μmol/L)降低了pSmad2C蛋白表达;JNK抑制因子(1、3、10μmol/L)减少了 pSmad2C、pSmad2L、pSmad3L 蛋白表达.TGF-β1刺激可明显诱导Smad4核转位,而3种MAPK抑制因子不同程度地抑制TGF-β1 诱导的Smad4 转位入核. 结论 在 HSC 细胞中 TGF-β1 可能通过活化 JNK 通路促进Smad2/3磷酸化,活化ERK、JNK、p38 通路促进Smad4 核转位.     

shRNA抑制Smad3基因的表达对瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad7表达的影响

目的 构建抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloidfibroblast,KFB)Smad3基因表达的shRNA真核表达载体.研究Smad3 shRNA对KFB Smad7表达的影响.方法 用前期实验筛选出的1对最有效siRNA重组构建Smad3 shRNA表达质粒.通过脂质体介导的方法,将Smad3 shRNA转染到KFB,用RT-PCR及Western blot的方法检测Smad3、Smad7在不同时间点(0～9 d)表达的变化.结果 ①RT-PCR和Western blot的结果证实Smad3 shRNA载体构建成功.②转染Smad3 shRNA后,随着时间的延长,KFB中Smad3的mRNA与蛋白表达都显著减低,到72 h作用最强.光密度分析与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).Smad7的mRNA与蛋白表达都明显升高(P＜0.05).结论 体外构建的shRNA-Smad3 RNAi真核表达载体能显著抑制KFB Smad3的表达.Smad3可能对Smad7起反向调节的作用.     

Smad6、7蛋白表达与梗阻性肾病小管间质损伤关系的实验研究

目的 研究Smad6，7蛋白表达与梗阻性肾病小管间质损伤的关系。方法 32只Wistar大鼠随机分为单侧输尿管梗阻组和假手术组（对照组），于术后3、7、14、21d处死大鼠。采用逆转录多聚酶链反应（RT－PCR）检测TGF－β1 mRNA表达水平；用免疫组化和Western杂交分别检测Smad6,Smad7蛋白的定位和表达；DNA处断末端标记原位检测肾小管细胞凋亡数；图像分析小管细胞和肾小球毛细血管球囊平均卡规直径的变化。判断纤维化程度通过测定肾组织羟脯氨酸含量。结果 与对照组相比，梗阻肾组织TGF－β1 mRNA表达显著增高，并伴有明显的肾小管和肾小球毛细血管球囊萎缩、小管细胞的凋亡，以及肾组织羟脯氨酸含量增高。Smad6、7蛋白主要在肾小球和皮质肾小管上皮细胞内表达。输尿管梗阻后，Smad6、7蛋白表达明显下降，该Anti-Smad蛋白下调与小管间质损伤呈明显相关。结论 TGF－β1信号通路参与了梗阻性肾病小管间质损伤的进程，Anti-Smad蛋白表达下降可能是该模型TGF－β1致伤作用加重的主要原因。     

人腱细胞Smad2、Smad4基因MH2结构域的克隆和序列鉴定

目的从人腱细胞内克隆转化生长因子－β特异的细胞内信号转导基因Ｓｍａｄ２、４的功能性结构域－ＭＨ２结构域。 方法　原代培养人腱细胞,从培养的细胞中提取总 ＲＮＡ,逆转录合成单链 ｃＤＮＡ;设计引物进行 ＰＣＲ,扩增 Ｓｍａｄ２、４基 因ＭＨ２结构域的基因片段,将其定向插入ｐＧＥＭ－Ｔ载体,转化大肠杆菌ＤＨ５α。挑选阳性克隆并进行核苷酸序列测定 分析。结果测序结果与 Ｇｅｎｅｂａｎｋ中克隆的基因序列完全一致。结论从人腱细胞中克隆成功 Ｓｍａｄ２、４基因的 ＭＨ２结 构域,证实了 Ｓｍａｄ２、４基因在人腱细胞中的表达;提示人腱细胞内存在 ＳＭＡＤ２、４信号转导途径,ＴＧＦ－β对人腱细胞 分化的调节可能是通过ＳＭＡＤ２、４信号转导途径实现的。     

大鼠Smad7基因慢病毒载体的构建及鉴定

目的:构建大鼠Smad7慢病毒载体。方法:提取大鼠大脑皮质及肾脏的总RNA,逆转录PCR扩增获得Smad7目的基因片段,EcoRI及BamHI酶切连接慢病毒载体质粒pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP,构建融合copGFP共表达的Smad7重组质粒。转化感受态细菌,筛选阳性克隆,经PCR扩增及测序鉴定正确后,Smad7重组质粒与慢病毒包装质粒共转染至包装细胞293TN,包装产生病毒液,转染H1299细胞株测定病毒滴度。结果:通过扩增获得1.3kb Smad7 cDNA片段,测序结果证实目的基因与Genebank序列完全一致,Smad7重组质粒慢病毒包装后获得Smad7慢病毒载体,病毒滴度为1.0×107ifu/ml。结论:成功构建大鼠Smad7慢病毒载体,为进一步研究Smad7基因的相关功能提供了适合的转染载体。