哮喘大鼠肺组织Toll样受体4和5的表达变化及甲泼尼龙对其调控作用

目的：观察哮喘大鼠肺组织中Toll样受体4（TLR4）和5（TLR5）的表达及甲泼尼龙对该受体的影响,探讨TLRs在哮喘炎症机制中的作用。方法：建立哮喘大鼠模型,随机分成哮喘组、对照组和甲泼尼龙组,每组各9只,免疫组化法检测大鼠肺组织TLR4和TLR5的表达。结果：大鼠肺组织TLR4的光密度值哮喘组为（0.196±0.045）,对照组为（0.172±0.025）,两组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;甲泼尼龙组为（0.142±0.019）,显著低于对照组和哮喘组（P均〈0.05）。肺组织TLR5的光密度值哮喘组为（0.185±0.029）,显著高于对照组的（0.138±0.014）（P〈0.05）;甲泼尼龙组为（0.143±0.038）,显著低于哮喘组（P〈0.05）,但与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。肺组织TLR4和TLR5蛋白的表达水平无显著相关性（n=25,r=0.209）。结论：Ⅴ级鸡卵白蛋白致敏的哮喘大鼠肺组织TLR5蛋白的表达升高,TLR4无明显变化,TLR5在哮喘炎症中可能具有促炎作用。甲泼尼龙能下调TLR4和TLR5的表达,其抗炎机制可能与下调TLR4和TLR5水平有关。     

NOD2和Toll样受体1在哮喘大鼠中的表达及布地奈德对其的影响

目的:观察核苷酸结合寡聚化结构域2(NOD2)和Toll样受体1(TLR1)在哮喘大鼠中的表达及布地奈德对其的影响,探讨模式识别受体在哮喘炎症过程中的可能作用机制。方法:采用大鼠哮喘模型,随机分成哮喘组、对照组和布地奈德组,免疫组织化学法检测肺组织NOD2的表达,流式细胞术检测血中性粒细胞(NEU)TLR1的表达。结果:哮喘组(0.148±0.009,OD值)肺组织NOD2的光密度值显著低于对照组(0.157±0.006,OD值)(P<0.05);布地奈德组(0.149±0.008,OD值)肺组织NOD2的光密度值分别与哮喘组、对照组相比差异无统计学意义(均P>0.05)。哮喘组和布地奈德组(分别为74.07±6.26和78.54±4.65,OD值)NEU TLR1的平均荧光强度均显著性低于对照组(84.37±4.96,OD值)(分别为P<0.01、P<0.05);布地奈德组NEU TLR1的平均荧光强度与哮喘组相比差异无统计学意义(P>0.05)。TLR1与NOD2的表达水平呈显著正相关(n=2 6,r=0.780,P<0.01)。结论:哮喘大鼠NOD2和TLR1的表达水平下降,布地奈德可能对NOD2和TLR1的上调作用较弱,模式识别受体可能参与了哮喘的炎症过程。     

哮喘大鼠肺组织Toll样受体3和9的表达及布地奈德的影响

目的 观察哮喘大鼠肺组织中Toll样受体3（TLR3）和TLR9的表达及对布地奈德的影响,探讨TLRs在哮喘炎症机制中的作用。方法 建立大鼠哮喘模型,随机分成哮喘组、对照组和布地奈德组,免疫组织化学法检测肺组织TLR3和TLR9的表达。结果 哮喘组（OD值：0.201±0.034）和布地奈德组（OD值：0.195±0.043）肺组织TLR3的光密度值显著高于对照组（OD值：0.144±0.039）（P〈0.05）,布地奈德组与哮喘组差异无统计学意义。哮喘组（OD值：0.236±0.022）和布地奈德组（OD值：0.231±0.023）肺组织TLR9的光密度值均显著低于对照组（OD值：0.271±0.025）（P〈0.05）;布地奈德组与哮喘组差异无统计学意义;肺组织TLR3和TLR9蛋白的表达水平无显著相关性（n=26,r=0.153）。结论 哮喘大鼠肺组织TLR3蛋白表达升高,TLR9蛋白的表达则反之,TLRs的表达过度或不足可能是哮喘气道炎症的重要原因之一。布地奈德的抗炎作用可能主要不是通过TLR3和TLR9的途径实现。     

Toll样受体4在胎膜早破中的表达及意义

目的：探讨Toll样受体4（TLR4）在胎膜早破中的表达及意义。方法选择100例早产胎膜早破孕妇设为PPROM组,100例足月胎膜早破孕妇设为PROM组,100例足月正常孕妇作为对照组,采用免疫组织化学法检测胎膜破裂口处胎膜组织TLRs的分布与表达。结果胎膜组织中TLR4的表达, PPROM组与PROM组比较差异无统计学意义;PROM组与对照组比较差异有统计学意义;PPROM组与对照组比较差异有统计学意义。结论 Toll样受体4在胎膜早破孕妇中高表达,为胎膜早破的早期诊断提供更敏感的信号指标。     

脂多糖对幼年哮喘大鼠Toll样受体4及气道炎症的作用

目的探讨不同浓度脂多糖对哮喘大鼠肺组织Toll样受体4表达及气道炎症的影响。方法使用清洁级SD大鼠50只,随机分为对照组（A）、哮喘组（B）、地塞米松组（C）低剂量LPS组（D1）及高剂量LPS组（D2）五组,对哮喘大鼠肺组织的病理变化、炎症细胞改变、OVA-sIgE含量的影响、肺组织TLR4mRNA表达及EOS凋亡的影响进行分析。结果肺组织的病理变化：A组肺间质视野清晰,肺组织形态良好,可见肺泡管、小支气管,未见明显炎症细胞浸润。B组肺间质及肺泡腔内、支气管及血管周围大量炎症细胞浸润,支气管黏膜下水肿,黏膜皱褶增多,粘液腺增生。与B组比较,C组和D2组上述现象明显减轻,D1组无明显变化。BALF中细胞总数、EOS计数及EOS百分比B组均明显高于A组（P＜0．01）;C组和D2组均明显低于B组（P＜0．01）;D1组与B组差异均无统计学意义（P＞0．05）。OVA—sIgE含量：c组、D2组与A相比有明显差异（P＜0．01）,但较B组有明显降低（P＜0．01）。D1组与B组比较差异无统计学意义（P＞0．05）。TLR4mRNA表达能力：A组与B组差异无统计学意义（P＞0．05）;C组、D1组、D2组均明显高于B组（P＜0．01）;D1组明显低于D2组（P＜0．01）。EOS凋亡率：B组和D1组有少许核深染为棕褐色的凋亡细胞。A组、C组、D2纽较B纽增多（P＜0．05或P＜0．01）。结论高剂量脂多糖能降低血清中OVA-sIgE水平,上调TLR4表达,诱导哮喘大鼠肺组织EOS凋亡;低剂量脂多糖虽激活TLR4信号通路,却不能缓解哮喘的气道炎症。     

Toll样受体 2、Toll样受体 4 mRNA和蛋白在急性出血坏死性胰腺炎肝损伤中的表达及意义

目的 探讨Toll样受体2(TLR2)、TLR4信使核糖核酸(mRNA)和蛋白在急性出血坏死性胰腺炎(AHNP)肝损伤中的表达及意义.方法 2019年6月至12月选取健康SD大鼠(郑州大学实验动物中心)60只为研究对象,采用随机数字表法分为模型组和对照组,每组30只,同时模型组和对照组再随机分为3 h组、6 h组和12 h组各10只.模型组采用牛磺胆酸钠建立AHNP模型,对照组注射生理盐水,检测各组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和淀粉酶,qRT-PCR和Western blotting检测肝脏组织TLR2、TLR4 mRNA和蛋白表达,HE染色观察肝脏组织.结果 模型组造模后3 h组、6 h组和12 h组血清ALT[(170.02±32.21)U/L、(310.01±80.02)U/L、(720.11±112.28)U/L]、AST[(450.13±100.21)U/L、(980.12±132.21)U/L、(1100.32±145.03)U/L]和淀粉酶[(7099.27±1209.02)U/L、(11010.19±1200.01)U/L、(17003.21±2007.82)U/L],肝脏组织TLR2和TLR4 mRNA及蛋白相对表达量[TLR2 mRNA(0.962±0.201)、(1.201±0.223)、(1.501±0.212),TLR2蛋白(0.713±0.091)、(1.102±0.100)、(1.343±0.121);TLR4 mRNA(1.701±0.332)、(2.011±0.350)、(2.562±0.313),TLR4蛋白(1.210±0.170)、(1.446±0.182)、(1.788±0.190)]均逐渐增高(P<0.001),且均明显高于对照组[ALT(84.40±14.92)U/L、(85.50±15.20)U/L、(84.19±14.49)U/L;AST(170.02±20.01)U/L、(168.82±21.14)U/L、(171.14±20.11)U/L;淀粉酶(1102.00±183.29)U/L、(1154.49±190.04)U/L、(1160.03±186.27)U/L;TLR2 mRNA(0.030±0.010)、(0.031±0.011)、(0.029±0.009),TLR2蛋白(0.021±0.008)、(0.020±0.009)、(0.022±0.010);TLR4 mRNA(0.882±0.181)、(0.880±0.170)、(0.883±0.179),TLR4蛋白(0.961±0.192)、(0.967±0.181)、(0.966±0.180)](P<0.001).肝组织TLR2、TLR4 mRNA表达与血清ALT、AST和淀粉酶呈正相关(P<0.05),TLR2、TLR4蛋白表达与血清ALT、AST和淀粉酶呈正相关(P<0.05);模型组造模3 h后可见肝细胞气球样变性,6 h后炎性细胞浸润汇管区,小叶周边细胞发生嗜酸性变性,12 h后出现大片状出血坏死及灶性坏死.结论 TLR2、TLR4 mRNA和蛋白在AHNP肝损伤组织中的表达升高,可能在肝脏损伤过程中有重要作用.     

Toll样受体3在动脉粥样硬化中的作用研究进展

动脉粥样硬化(AS)是一种慢性炎症疾病。Toll样受体(TLR)尤其是TLR3作为介导天然免疫反应的一类模式识别受体,在AS进程中发挥着重要的作用。TLR3属于TLR/IL-1受体超家族的I型跨膜蛋白,由胞外区、侧翼区、跨膜区和胞质尾区4部分组成。TLR3在胎盘和胰腺组织表达最高,选择性地表达于树突状细胞的内涵体,在其他细胞类型则表达于细胞膜。TLR3识别病毒来源的双链RNA,激活干扰素调节因子及NF-κB,引起炎性细胞因子的释放。研究发现,TLR3与AS早期病变(内皮受损和泡沫化细胞形成)密切相关;也有研究发现TLR3在AS进程中具有潜在的保护效应。本文就TLR3在AS疾病进程中的作用的研究进展做一综述。     

川芎嗪对大鼠动脉粥样硬化形成中Toll样受体4表达的影响

目的 观察川芎嗪(TMP)对大鼠动脉粥样硬化(AS)形成的抑制作用及其可能机制.方法 雄性SD大鼠,随机分为对照组、模型组、TMP 20 mg/kg和40 mg/kg组.用维生素D3和高脂饲料喂养,诱导AS的形成,4周后,腹腔注射TMP,第8周后检测大鼠主动脉AS形成情况,计算斑块面积占血管断面总面积的百分比,并用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测主动脉弓Toll样受体(TLR4)的表达水平.结果 与模型组比较,TMP 2个剂量组AS斑块面积占血管断面总面积的百分比、主动脉弓TLR4表达量均显著降低,且有剂量依赖性.结论 TMP具有抗动脉粥样硬化作用,其抑制动脉壁TLR4的表达可能是其作用机制之一.     

Toll样受体4和9基因在肺纤维化大鼠的表达和意义

目的:观察Toll样受体9(TLR-9)及Toll样受体4(TLR-4)基因在肺成纤维细胞大鼠的动态演变及其在炎性反应中的作用.方法:博莱霉素诱导实验性大鼠肺纤维化模型,采用微波改良Masson染色、VG染色法、qRT-PCR等方法,观察实验性大鼠肺纤维化的发病过程及其肺组织中TLR-9和TLR-4基因表达水平的动态变化及其下游分子NF-KB和IFN-γ的表达.结果:实验性大鼠肺纤维化发病过程中,呈现典型的肺泡炎(7d)、纤维组织增生(14d)及稳定的肺纤维化(28~56d)等表现;与对照组相比,TLR-9、TLR-4、NF-KB和IFN-γ显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01);TLR-9与NF-KB和IFN-γ表达呈正相关(r=0.91、r=0.88,P<0.01);TLR-4与NF-KB和IFN-γ表达也呈正相关(r=0.96、r=0.98,P<0.01).结论:TLR-9和TLR-4可能参与肺纤维化的发生发展及调控大鼠肺成纤维的炎症反应.     

激素干预对IgA肾病患儿Toll样受体9表达的影响

目的 探讨激素治疗对IgA肾病（IgAN）患儿Toll样受体9（TLR-9）表达水平的影响及临床意义。方法 2013年1月至2016年3月在安徽省儿童医院治疗的45例确诊IgAN患儿为研究对象,分血尿组、轻度蛋白尿组、中度以上蛋白尿组,血尿组采用对症治疗,轻度蛋白尿组、中度以上蛋白尿组分别在血尿组的基础上予小剂量激素及中等剂量以上激素治疗或冲击治疗,治疗前、治疗后第7、15天常规检测IgAN患儿临床指标及外周血单个核细胞（PBMCs）TLR-9的表达情况。结果 治疗前,3组患儿TLR9-mRNA及蛋白表达（0.31±0.07,0.31±0.15;0.55±0.07,0.55±0.11;0.60±0.07,0.60±0.12）较健康儿童（0.10±0.35,0.10±0.35）均处在高表达状态,差异有统计学差异（P<0.05）;治疗后第7天,中度以上蛋白尿组24 h尿蛋白定量较治疗前下降,差异有统计学意义（P<0.05）;治疗后第15天,轻度蛋白尿组血清清蛋白水平较治疗前上升,差异有统计学意义（P<0.05）,中度及以上蛋白尿组24 h尿蛋白定量、TLR-9表达量（0.23±0.11,0.23±0.13）较治疗前下降,血清清蛋白水平上升,差异均有统计学意义（P<0.05）;IgAN患儿TLR-9表达量与血清清蛋白呈线性负相关（r=-0.824,P<0.05）,与24 h尿蛋白定量呈线性正相关（r=0.820,P<0.05）。结论 TLR-9在IgAN患儿体内处于高表达状态,激素治疗后与24 h尿蛋白定量及血清清蛋白水平呈线性相关。     

支气管哮喘患者外周血单个核细胞Toll样受体2基因表达与血清白细胞介素4和白细胞介素12的相关性分析

目的：观察支气管哮喘（简称哮喘）控制期、未控制期患者及正常对照人群中外周血单个核细胞Toll样受体2（TLR2）mRNA表达及血清白细胞介素4（IL-4）、IL-12水平,并探讨上述指标间有无相关性。方法根据全球哮喘防治创议（GINA）2006哮喘控制水平分级标准,选取门诊急诊哮喘控制期及未控制期患者各20例,选取体检健康者20名作为正常对照组。采用逆转录聚合酶链反应（ RT-PCR）法检测各组对象外周血单个核细胞TLR2 mRNA表达。用酶联免疫吸附测定（ ELISA）双抗体夹心法检测各组对象血清IL-4、IL-12水平。结果哮喘患者外周血单个核细胞 TLR2 mRNA 的表达水平高于正常对照组[（0．963±0．132）比（0．632±0．172）],差异有统计学意义（P＜0．01）。哮喘控制期与未控制期患者外周血单个核细胞TLR2 mRNA的表达水平差异无统计学意义[（0．936±0．117）比（0．991±0．147）]（ P＞0．05）。哮喘患者外周血IL-4水平高于正常对照组[（34．0±8．2）ng/L比（9．8±2．7）ng/L],差异有统计学意义（t＝13．87,P＜0．01）,未控制组患者外周血IL-4水平高于哮喘控制组[（42．5±5．4）ng/L比（29．4±4．2）ng/L]（t ＝8．53,P＜0．01）。哮喘患者外周血 IL-12水平低于正常对照组[（29．4±3．9）ng/L 比（55．8±6．1）ng/L]（t＝20．54,P＜0．01）,哮喘控制组与未控制组患者外周血IL-12水平差异无统计学意义[（28．7±4．5）ng/L比（30．1±3．0）ng/L]（t＝-1．16,P＞0．05）。哮喘患者外周血单个核细胞TLR2 mRNA表达与外周血IL-4水平呈正相关（r＝0．532,P＜0．01）,与外周血IL-12无明显相关（r＝-0．05,P＞0．05）。结论哮喘患者外周血单核细胞TLR2 mRNA的表达水平高于正常对照,外周血IL-4水平高于正常对照,未控制期外周血IL-4水平高于控制期,外周血IL-12水平低于正常对照。哮喘患者外周?     

Toll-like receptor 4, Toll-like receptor 7 and Toll-like receptor 9 agonists enhance immune responses against blood-stage Plasmodium chabaudi infection in BALB/c mice

BackgroundToll-like receptor (TLR) signals play vital roles during the blood-stage of malaria infections. However, the roles of TLR agonists in the regulation of immune responses and the development of protective immunity to malaria remain poorly understood.MethodBALB/c mice were pre-treated with TLR4, TLR7 and TLR9 agonists, followed by infection with Plasmodium chabaudi. After infection, splenic dendritic cells (DCs), Th1 cells and programmed death-1 (PD-1) expressed on Th1 cells, as well as regulatory T cells (Tregs) were analyzed by flow cytometry. The levels of IFN-γ, TNF-α, TGF-β and IL-10 in splenocytes and IgG1 and IgG2a in serum were measured by ELISA.ResultAdministration of TLR4, TLR7 and TLR9 agonists prior to infection improved disease outcomes. All TLR agonists promoted DC activation, and the proportions of Th1 cells increased. In TLR4, TLR7 and TLR9 agonist treated groups the levels of pro-inflammatory cytokines IFN-γ and TNF-α were elevated, and IgG1 and IgG2a serum levels were also significantly increased. TLR4, TLR7 and TLR9 agonists diminished the activation of Tregs and down-regulated the anti-inflammatory cytokines TGF-β and IL-10. Finally, PD-1 expressed on Th1 cells were decreased in TLR4, TLR7 and TLR9 agonist treated groups compared with control groups.ConclusionTLR4, TLR7 and TLR9 agonists activated DC-mediated innate immune responses and adaptive immune response, which against the blood-stage of Plasmodium and might be applied to malaria protection and treatment.     

1,25-二羟维生素D3对其诱导的树突状细胞上Toll样受体7表达的抑制作用

目的探讨Toll样受体7（TLR7）在1,25-二羟维生素D3（1,25-（OH）2D3）抑制树突状细胞（DC）成熟中可能的机制。方法体外扩增小鼠骨髓来源的DC,采用流式细胞术和混合淋巴细胞反应检测1,25-（OH）₂D₃对DC表型和功能的影响;利用RT-PCR半定量方法测定1,25-（OH）₂D₃对DC的TLR7表达的影响。结果 1,25-（OH）₂D₃处理后,DC表达CD86和MHCⅡ的荧光强度均明显降低;对T细胞的刺激能力较对照组明显减弱,差异有统计学意义（P<0.05）;与对照组比较,1,25-（OH）₂D₃可以明显下调TLR7的表达（P<0.05）。结论 1,25-（OH）₂D₃可能通过影响TLR7的表达来抑制DC细胞的成熟,从而使DC具有耐受性特征。     

Glycyrrhetinic acid extracted from Glycyrrhiza uralensis Fisch. induces the expression of Toll-like receptor 4 in Ana-1 murine macrophages

Glycyrrhetinic acid (GA) is an active component of licorice root that has long been used as a herbal medicine for the treatment of peptic ulcer, hepatitis, and pulmonary and skin diseases in Asia and Europe. In this study, we analyzed the effect of GA extracted from Glycyrrhiza uralensis Fisch. on the expression of Toll-like receptors (TLRs) that play key roles in regulating the innate immune response against invading pathogens. Stimulation of Ana-1 murine macrophages with GA induced a significant dose-dependent expression of TLR-4, and its mRNA expression that increased from 3-h post-treatment was approximately fivefold over the level in the mock-treated cells. No endotoxin contamination contributed to the GA-induced TLR-4 expression, because polymyxin B treatment did not alter the upregulated expression of TLR-4 in GA-treated cells. Several molecules, such as myeloid differentiation factor 88, interferon-β, and interleukin-6, which are involved in the TLR-4 downstream signaling pathway, were upregulated significantly in response to GA stimulation. Our findings demonstrate that GA is able to induce the expression of TLR-4 and activate its downstream signaling pathway.     

TLR4调控自噬与肾脏疾病的研究进展

自噬是一种高度保守的分解过程,用于清除细胞质组分,包括蛋白质聚集物和受损的细胞器。自噬的作用不仅有降解产物,而且它也是一个动态的回收系统,为细胞修复和动态平衡产生新的蛋白和能量。近年来研究表明 Toll 样受体 4（TLR4）作为介导病原体识别和免疫活化的受体蛋白诱发相关炎症产生的同时也可介导自噬异常,而自噬异常参与多种肾脏疾病的发生发展。本文从 TLR4 介导自噬异常与肾脏疾病的研究进展进行综述。     

氯喹对AHNP肝损伤Toll样受体2/4表达的影响及作用机制研究

目的探讨氯喹对急性出血坏死性胰腺炎（AHNP）肝损伤中促炎因子及Toll样受体2/4（TLR2/4）mRNA表达作用机制的影响。方法采用逆行胆碱牛黄胆酸钠（TAC）逆性建立AHNP肝损伤动脉模型,将36只健康成年雄性SD大鼠随机分为假手术组（NC组）、胰腺炎组（SAP组）以及氯喹治疗组（治疗组）,每组12只。采用RT-PCR法测定各组大鼠不同时间点肝损伤TLR2/4 mRNA表达情况。结果 SAP组同一时间点肝腹水、胰腺病理组织评分及肝病理组织评分均高于NC组,NO水平低于NC组,差异有统计学意义（P〈0.05）。治疗组血清淀粉酶、ALT、AST、TNF-α水平显著低于SAP组,NO高于SAP组（P〈0.05）。SAP组3 h TLR2、TLR4水平、肝腹水、胰腺病理组织评分、肝病理组织评分显著高于治疗组,且在12 h达到最高峰。结论 AHNP肝损伤的发生及进展可能与TLR2/4 mRNA表达上调有关,氯喹可显著抑制AHNP肝组织中TLR2/4 mRNA的表达,减轻肝损伤。