临床研究3种免核酸提取PCR试剂盒检测乙型肝炎患者血清中HBV DNA的比较

目的 比较3种免核酸提取PCR试剂盒检测乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒(HBV) DNA的灵敏度和特异度,初步探讨其用于HBV DNA检测的临床价值.方法 用3种免核酸提取PCR试剂盒分别检测30例慢性乙型肝炎患者及30例阴性参比血清标本中的HBV DNA,以荧光定量PCR结果为标准,比较3种试剂检测灵敏度和特异度.结果 3种试剂盒的HBV DNA阳性检出率分别为93.3%(28/30)、96.7%(29/30)、100%(30/30);3种试剂检测HBV阴性的特异度均为100%;3种试剂检测灵敏度A公司为103 IU/mL,B、C公司均为102 IU/mL.结论 使用免核酸提取PCR试剂检测HBV快速、简便、高效,可用于临床HBV DNA快速检测.     

产妇乳汁HBV—DNA与血清HBV—DNA含量相关性

目的探讨乙肝产妇血清中HBV—DNA含量与母乳HBV—DNA含量的关系,以便更好的指导母乳喂养。方法采用实时定量PCR（Real—time quantitative PCR,RQ—PCR）方法,对80例乙肝血清学阳性的产妇血清及乳汁中HBV—DNA定量检测,分析血清HBV—DNA含量和乳汁HBV—DNA含量之间的相关关系。结果80例患者中,60例血清HBV—DNA检测阳性,其中HBV—DNA含量〉1×10^5IU／ml为39例,血清HBV—DNA〉1×10^5IU／ml的39例患者,有30人乳汁中检测到HBV～DNA,阳性率为76．92％,而且乳汁中HBV—DNA含量对数值与血清HBV—DNA含量对数值有正相关关系,相关系数r=0．924（r=0．924）;≤1×10^5IU／ml为21例,血清HBV—DNA≤1×10^5IU／ml的21例患者,乳汁中均未检测到HBV—DNA,乳汁HBV—DNA阳性患者,血清HBeAg（＋）占80％,HBeAg（-）占20％,两组比较,差异有统计学意义（P〈0．01）;两组患者乳汁HBV—DNA含量无显著性差异（P〉0.05）。结论产妇血清与乳汁中HBV—DNA含量具有密切的相关性。而血清中的HBeAg与乳汁中HBV—DNA含量无明显关系,血清中的HBeAg作为产妇哺乳传染性指标,尚有待进一步研究。     

自动核酸提取实时荧光定量PCR检测全血及血浆中EBV DNA载量的性能评价

目的探讨自动核酸提取实时荧光定量PCR方法检测全血及血浆中EBV DNA载量的方法学性能。方法评价自动核酸提取实时荧光定量PCR方法的线性范围、灵敏度、精密度及抗干扰等方法学性能,比较自动核酸提取法和煮沸提取法的相关性。用该方法检测152例EB病毒感染儿童的全血及血浆中的EBVDNA载量,比较分析全血与血浆中的EBVDNA载量关系。结果本法的线性范围为5×102~5×108Copies/ml,检测灵敏度为500 Copies/ml。批内CV为3.78%~4.57%,批间CV为6.35%~7.56%,总CV为7.24%~8.62%。肝素、胆红素、溶血对本检测方法均无干扰。EBVDNA载量在5×103~5×108Copies/ml范围内,本法()与煮沸提取法()的相关性良好(=0.924+0.873,2=0.900,<0.01),结果相差在1.0 logCopies/ml以内。80例EB病毒活动性感染组儿童,全血EBV DNA阳性率60%,血浆EBV DNA阳性率25%,全血EBV DNA阳性率高于血浆(=0.016);72例EBV非活动性感染组全血EBV DNA阳性阳性率5.6%,血浆EBV DNA阳性率0。活动性感染组全血EBV DNA阳性率高于非活动性感染组(<0.01)。结论自动核酸提取实时荧光定量PCR方法检测全血及血浆中的EBV DNA载量,具有灵敏高、抗干扰能力强、定量准确、操作简便的优点,适合临床实验室常规开展。     

3种免核酸提取PCR试剂盒检测乙肝患者血清中HBV的比较

目的 比较3种免核酸提取PCR试剂盒检测乙肝患者血清中HBV的灵敏度和特异性,初步探讨其用于乙肝病毒检测的临床价值。 方法 用3种免核酸提取PCR试剂盒分别检测30例慢性乙型肝炎病人及30例阴性参比血清标本中的HBV,以荧光定量PCR结果为标准,比较三种试剂检测灵敏度和特异性。结果 3种试剂盒的HBV检出率分别为93.3%（28/30）、96.7%（29/30）、100%（30/30）;3种试剂检测HBV的特异度均为100%;3种试剂检测灵敏度A公司为103 IU/ml,B、C公司均为102 IU/ml。结论 本研究使用免核酸提取PCR试剂检测HBV快速、简便、高效,可用于临床HBV快速检测。     

血清乙肝病毒DNA的快速提取及定量 PCR测定中应用的探讨

目的寻找简单、快速地提取血清乙型肝炎病毒(HBV)DNA并能应用于定量PCP,测定的方法.方法使用碱裂解法、酚氯仿法和煮沸裂解法同时提取血清HBV DNA,比较荧光定量PCP测定的重复性和测定值的差异.结果碱裂解法所得HBV DNA量高于酚氯仿法和煮沸裂解法(P＜0.05),并且碱裂解法所得结果的重复性好于酚氯仿法和煮沸裂解法(CV分别为0.21,0.28和0.33).结论碱裂解法提取HBV DNA简单、快速,适用于HBV DNA荧光定量测定.     

HBV-DNA定量与乙肝标志物及谷丙转氨酶结果对比分析

目的探讨血清中HBV—DNA定量与乙肝标志物（HBV—M）及谷丙转氨酶（ALT）之间的关系及临床意义。方法采用荧光定量聚合酶链式反应法（FQ—PCR）和ELISA法分别检测578例病人的血清HBV—DNA含量和HBV-M,自动生化分析仪检测ALT并对结果进行对比分析。结果HBsAg（＋）、HBeAg（＋）、HBcAb（＋）组血清HBV—DNA检出率833％（259／2311）,平均拷贝数1.1×10^8／ml。HBsAg（＋）、HBeAb（＋）、HBcAb（＋）组血清HBV--DNA检出率33．5％（44／132）,平均拷贝数5.9×10^8／ml。HBsAg（＋）、HBcAb（＋）组血清HBV-DNA检出率242％（14／58）,平均拷贝数1.9×10^8／ml。HBeAb（＋）、HBcAb（＋）组血清HBV—DNA检出率78％（1／15）,平均拷贝数3.5×10^3／ml。全阴性组血清HBVDNA检出率53％,平均峙贝数2．0×10^3／ml。HBsAg（＋）、aBeAg（＋）组的HBV--DNA阳性率高、定量值高,而HBsAg（＋）、HBeAg（-）组HBV—DNA阳性率较低、定量值也较低,二者差异有显著性;HBsAg（-）者亦可检出HBV-DNA;HBV感染者ALT阳性的概率增大,但二者在数量上无相关性。结论同时检测血清乙肝标志物和HBV—DNA及谷丙转氨酶,对临床HBV感染、复制及传染性的判断具有重要意义。     

乙型肝炎病毒标志物阳性产妇血清与乳汁HBV-DNA关系的探讨

目的比较乙肝病毒标志物阳性产妇血清HBV—DNA与其乳汁HBV-DNA检测结果,探讨两者是否相关。方法用荧光定量PCR方法对205例乙肝标志物阳性产妇的血清及乳汁进行HBV-DNA检测。结果“乙肝大三阳”产妇血清与其乳汁HBV．DNA阳性率比较差异无统计学意义（P〉0．05）,两者有相关性（r=0．705）;“乙肝小三阳”等几种模式产妇血清与其乳汁HBV-DNA阳性率比较均有差异有统计学意义（P〈0．05）。血清与其乳汁HBV—DNA拷贝／ml对数值均数比较,“乙肝大三阳”产妇血清与其乳汁比较差异有统计学意义（P〈0．05）;而另外几种HBVM模式中血清与其乳汁HBV-DNA拷贝／ml对数值均数两两比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论乙肝标志物阳性产妇血清和乳汁HBV—DNA阳性率及拷贝数随HBVM模式不同差别不一,“乙肝大三阳”产妇血清HBV-DNA拷贝数均高于其乳汁。     

实时跟踪荧光PCR定量检测乙型肝炎病毒DNA的临床意义

目的探讨实时跟踪荧光PCR定量检测乙型肝炎病毒DNA临床价值。方法对2367例临床血清标本用FQ-PCR方法进行HBV—DNA定量测定，并和ELISA两对半以及ALT结果进行比较。结果HBV—DNA阳性率为60．9％（1442／2367），其中大三阳HBV-DNA检出率为89．04％（845／949）、ALT升高47．84％（454／949）、小三阳HBV—DNA检出率为39．08％（408／1044）、ALT升高33．42％（349／1044）、单HBSAg63．8％（185／290）；单抗HBeHBV—DNA检出率4．54％（1／22）。结论实时跟踪定量检测的荧光定量PCR技术可以检测HBV的真实感染和复制情况是乙型肝炎病毒复制和传染性的直接病原学依据。     

荧光定量PCR检测HBV-DNA与ELISA法乙肝免疫学检测的探讨

目的探讨HBV感染者乙肝免疫学检测与HBV—DNA的关系,为合理治疗乙肝患者提供较准确的依据。方法用ELISA方法检测HBV感染者乙肝免疫学检测,用PCR方法检测HBV—DNA,并对结果进行分析。结果HBsAg（＋）HBe般（＋）HBcAb（＋）组（大三阳组）患者血清HBV—DNA检出率97．06％（66／68）,平均拷贝数为（2．15E＋07）mL;HBsAg（＋）HBeAb（＋）HBcAb（＋）组（小三阳组）患者血清HBV—DNA检出率为62．64％（57／91）,平均拷贝数为（2．47E＋04）mL;HBsAg（＋）HBcAh（＋）组血清HBV—DNA检出率为52．94％（18／34）,平均拷贝数为（6．39E＋04）mL。结论HBsAg和HBeAg阳性与HBV～DNA复制密切相关。乙肝免疫学检测和HBV—DNA检测将成为指导乙型肝炎防治的重要手段。     

慢性乙型肝炎病毒感染者血清标志物检测及临床分析

目的 了解慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者血液中HBV各抗原抗体系存在模式及与HBV核酸基因(DNA)水平的关系。方法 对490例慢性HBV感染者进行血清标志物检测及分析。结果HBsAg、HBeAg、HBcAb均阳性("大三阳")模式占42.86％,其99.12％血液标本中HBV DNA定量值>103拷贝／mL,HBV DNA定量值>107拷贝／mL的占64.47％。HBsAg(+)、抗-HBe(+)、抗-HBc(+)均阳性("小三阳")模式占40.00％,其34.86％血液标本中HBV DNA定量值>103拷贝／mL,HBV DNA定量值>107拷贝／mL的占14.47％。结论 慢性HBV感染者,血清标志物以"大三阳"和"小三阳"两种模式存在多见,HBeAg和抗-HBe与HBV DNA水平密切相关。     

三种复检HBsAg弱阳性的方法探讨

目的了解酶联免疫吸附试验（ELISA）,化学发光免疫分析（CLIA）及HBV—DNA荧光定量PCR（HBV—DNA）法检测HBsAg弱阳性标本结果的检出率,探讨三种方法的特异性和灵敏度。方法对临床标本进行ELISA定性分析检测,对HBsAg检测的OD值在0．075～0．135的84份标本再用ELISA法（2次实验条件一致）复检,复检仍为HBsAg弱阳性的标本分别再用CLIA、HBV—DNA复检。结果CLIA法阳性检出率80．6％,HBV—DNA法72．2％,ELISA法63．9％。结论对HBsAg弱阳性结果的处理应采用多种方法比较,并消除可能引起检测标本产生弱阳性的相关因素,参考临床诊断发出报告。     

乙型肝炎病毒DNA检测与其血清标志物的相关性

目的探讨实时荧光聚合酶链反应（FIQ—PCR）检测HBV—DNA与乙型肝炎病毒五项血清标志物（HBV—M）的关系。方法采用FO—PCR技术和酶联免疫吸附法（ELISA）分别检测637例患者血清中的HBV—DNA拷贝数和乙肝五项血清标志物。结果HBV—DNA在“大三阳”组（HBsAg＋HBeAg＋抗HBc＋和HBsAg＋HBeAg＋）和“小三阳”组（HBsAg＋抗HBe＋抗HBc＋和HBsAg＋抗LHBc＋）可检出,在“单纯抗体阳性”组（抗HBs＋抗HBe＋抗HBc＋、抗HBs＋抗HBc＋、抗HBs＋抗HBe＋、抗HBs＋、抗HBe＋抗HBc＋及抗HBc＋）未捡出。“大三阳”组患者血清中HBV—DNA检出率为92．13％。且82．68％的患者HBV—DNA拷贝数在105copies／ml以上;“小三阳”组患者血清中HBV—DNA检出率为44．39％,HBV—DNA拷贝数分布范围广。结论HBeAg的存在可间接反映HBV在体内的复制状态,而HBV—DNA的检测更客观地反映了HBV复制的程度和传染性。     

慢性乙型肝炎患者检测乙型肝炎病毒大蛋白的临床意义

目的：探讨乙型肝炎患者检测乙型肝炎病毒大蛋白（HBV-largeprotein,HBV-LP）的临床意义。方法：选择120例慢性乙型肝炎患者,采用免疫荧光法检测乙型肝炎病毒基因（HBvirus—DNA,HBV—DNA）,酶联免疫吸附法检测HBV—LP和乙型肝炎表面抗原（HBVeantigen,HBeAg）,比较HBV—DNA、HBV—LP及HBeAg的检出率,比较HBeAg阴性患者HBV—LP、HBV—DNA血清学检出率,分析HBV—DNA、HBV—LP及HBeAg的相关关系。结果：HBV—LP检出率为87．50％,显著高于HBV—DNA（70．00％）（x2=10．9804,P〈0．01）和HBeAg检出率（38．33％）（x2=62．1653,P〈0．01）;HBeAg阴性患者HBV—LP阳性检出率为82．43％,显著高于HBV—DNA检出率（44．59％）（x2=22．8589,P〈0．01）;相关性检验显示HBV—LP与HBV—DNA及HBeAg之间存在正相关关系（x=O．573,P〈0．05;rs=0．681,P〈0．05）。结论：HBV—LP是评价HBV患者体内病毒复制、疾病进展及抗病毒治疗效果的敏感指标。     

FQ—PCR法检测乙肝患者血清和精液中HBVDNA含量的临床意义

目的探讨应用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）法检测男性乙肝患者血清和精液中HBVDNA含量的临床意义。方法选取男性乙肝患者70例,分别采集患者的精液和静脉血,并用FQ-PCR法检测精液及血清中HBVDNA含量。结果精液标本中HBVDNA阳性16饲（占22．86％）,HBVDNA含量为2．55X103～6．18×10^5IU／ml、平均为5．08×10^4IU／ml;血清标本中HBVDNA阳性62倒（占88．57％）,HBVDNA含量为1．21×10^3～7．52×10^7Iu／ml、平均为9．40×10^5／ml。精液中HBVDNA含量与血清中HBVDNA含量呈正相关（r=0．743）,且血清HBVDNA含量高于精液含量10倍左右;结论FQ-PCR法定量检测精液中HBVDNA含量具有较强的特异性和灵敏度,为l临床了解乙肝患者精液中HBV状态提供了帮助,具有重要的临床意义。     

胎盘HBV-DNA定量检测与宫内感染关系的研究

目的 探讨胎盘HBV—DNA含量与官内感染的关系及作为胎盘传染性和病毒复制的直接指标的可靠性。方法 采用FQ～PCR（荧光探针定量聚合酶链反应）检测344例HBV标志物阳性孕妇足月分娩后的胎盘的HBV—DNA含量，并分别检测同一孕妇分娩前的外周血及脐血的HBV—DNA含量，比较其测定值范围及相互关系。结果 344例孕妇按乙肝标志物组合，分为三组，分别检测分娩前外周血HBV—DNA、胎盘HBV—DNA及脐血HBV—DNA，检出率分别为：（1）HbsAg携带组90例，22．2％（20／90）、33．3％（30／90）和5．6％（5／90）；（2）大三阳组134例，70．9％（95／134）、85．8％（115／134）和11．9％（16／134）；（3）小三阳组120例，20.8％（25／120）、20．8％（25／120）和3．3％（4／120）。孕妇乙肝标志物阳性以大三阳组HBV—DNA阳性率最高，胎盘组织HBV—DNA含量与母血HBV—DNA含量有一致性和相关性。结论 外周血HBV—DNA阳性孕妇更易发生胎盘感染。官内感染的程度可随胎盘组织HBV—DNA含量增加而程度加重。胎盘HBV—DNA含量可作为一个宫内感染的判断指标。     

献血人群隐匿性乙型肝炎病毒感染的流行病学和血清学研究

目的了解广州地区献血人群隐匿性乙型肝炎病毒感染(OBI)的流行病学和血清学情况。方法对广州地区199631例无偿献血者标本同时用ELISA法检测HBsAg、紫外-乳酸脱氢酶法检测ALT、核酸扩增技术(NAT)联合检测HBV/HCV/HIV及HBV单项鉴别试验,对HBsAg阴性HBV DNA阳性者进行随访,用荧光定量PCR检测病毒载量,用ELISA法检测乙肝两对半。结果 199631例标本中共检出104例HBsAg阴性HBV DNA阳性者,经随访有54例为OBI,OBI检出率为0.027%,年龄以46～55岁组检出率最高(P<0.01),外地身份证的献血者检出率高于广州市身份证者(P<0.01),OBI检出率与性别和献血次数无关(P>0.05)。104例HBsAg阴性HBV DNA阳性的标本ALT均正常,病毒载量均<1000IU/ml,平均值为162IU/ml。随访标本中,除6例ALT异常外其余均正常,54例OBI标本病毒载量均<1000IU/ml,平均值为122IU/ml,乙肝两对半中抗-HBc阳性率明显高于其他项目(P<0.01)。结论 HBsAg阴性献血者中存在OBI,有必要在献血者中开展核酸检测。     

核酸检测在血液传染病筛查的应用价值

目的 探讨核酸检测在血液传染病筛查[乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、人类免疫缺陷病毒(HIV)]的应用价值.方法 选取2018-2019年在该院住院因手术或输血需要检测乙肝五项和抗HCV、HIV抗原抗体的500例患者血清标本.化学发光法检测乙肝五项、抗HCV、HIV抗原抗体,提取核酸定性检测HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA.比较两种方法的检测结果,不一致的标本检测病毒载量确认最终结果.结果 检测出11例HBV化学发光与核酸定性结果不一致标本,未检出HCV和HIV化学发光与核酸定性结果不一致标本.2例HBsAg阳性HBV DNA定性阴性检测标本检测载量均小于20 IU/mL.9例HB-sAg阴性HBV DNA定性阳性样品中2例未检测到HBV DNA载量,6例标本检测到HBV DNA载量小于20 IU/mL,1例标本HBV DNA载量为23.6 IU/mL.结论 HBV、HCV、HIV病原体核酸检测有利于检测出窗口期和免疫状态异常的感染者.     

乙型肝炎病毒前S1抗原与病毒DNA检测及相关性研究

目的了解乙型肝炎病毒（HBV）前S1（Pre-S1）抗原在乙肝患者血清中的表达及评判其与HBV复制的关系。方法采用ELISA法检测858例各型乙肝患者血清标志物,以荧光定量PCR法检测HBV DNA,并比较分析Pre-S1抗原、HBeAg与HBV复制的相互关系和临床意义。结果858例各型乙肝患者中,Pre-S1抗原阳性总检出率为30．1％（258／858）,HBeAg阳性总检出率为20．7％（178／858）,HBV DNA阳性总检出率为43．2％（371／858）。在258例Pre-S1抗原阳性患者中,HBV-DNA阳性检出率为94．1％（243／258）,而在371例HBV DNA阳性乙肝患者中,Pre-S1抗原和HBeAg阳性率分别为65．5％（243／371）和45．6％（169／371）,两者差异有显著性（P〈0．01）。结论Pre-S1抗原能够比HBeAg更灵敏地反映HBV复制,临床上可作为乙肝患者体内HBV复制的重要标志,但其敏感性不如HBV DNA强。     

乙型肝炎患者血清HBV-DNA载量与前S1抗原和e抗原关系探讨

目的探讨乙型肝炎患者血清病毒DNA（HBV—DNA）载量与前S1抗原（PreS1）、e抗原（HBeAg）的关系;评价PreS1的临床检测意义。方法30例健康对照者血清和272例未经抗病毒治疗的乙型肝炎患者血清,同时采用实时荧光定量PCR法测定HBV-DNA载量、ELISA法检测PreS1和HBeAg。结果健康对照HBV—DNA载量、PreS1和HBeAg均阴性。乙肝患者血清HBV—DNA〈10^3copies／ml150例,其中PreS1阳性81例（54．00％）,HBeAg阳性10例（6．67％）;10^3～1065 copies／ml44例,其中PreS1阳性22例（50．00％）,HBeAg阳性16例（36．36%）;10^5～10^8 copies／ml 68例,其中PreS1阳性59例（86．76％）．HBeAg阳性43例（63．24％）;〉10^8 copies／ml 10例,其PreS1和HBeAg均为阳性。以HBV—DNA载量10^3copies／ml为切割值,则PreS1和HBeAg的敏感性分别为74．59％．56．56％,特异性分别为46．00％、93．33％,阳性预测值分别为52．91％、87．34％,阴性预测值分别为69．00％、72．54％,准确率分别为58．82％、76．84％。结论随着HBV—DNA载量的升高,PreS1和HBeAg的检出率大幅提高;虽然PreS1判断HBV复制的敏感性高于HBeAg,但其特异性、阳性预测值、阴性预测值、准确率均低于HBeAg。     

HBV感染者中HBV前S1蛋白检测分析

目的检测HBV前S1蛋白（PreSl-Ag）的水平,分析与HBVDNA复制的关系。方法用酶联免疫吸附分析法（EusA）检测HBV感染者血清中PreSl-Ag和HBV血清标志物（HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb）,同时用RealTimePCR检测血清中HBVDNA含量。结果407例HBV感染者HBeAg（＋）的大三阳模式135例血清中,HBV—DNA、PreSl-Ag阳性率分别为87．4％和81．5％,两者差异无统计学意义;在117例HBeAg（-）的小三阳模式血清中,HBV—DNA．PreSl-Ag阳性检出率分别为74．4％和69．2％,两者差异无统计学意义。在266例HBV—DNA阳性患者血清中,PreSl-Ag阳性和HBeAg阳性检出率分别为74．4％、60．2％,两者差异具有统计学意义,P〈0．01。结论PreSl-Ag与HBV—DNA检测结果-致性较好,较HBeAg能更灵敏地反映体内HBV的复制状况,可与HBV—DNA互相补充,在临床诊断和治疗HBV感染中有重要意义。