血管内皮下层纤维连接素在血小板粘附中的作用

本文利用扫描电镜和荧光分光光度计技术,研究了血管内皮下层Fn在血小板与血管壁粘附中的作用.当内皮细胞剥脱后血管壁上可见大量血小板粘附:当裸露的内皮下层失与抗Fn抗体反应后,血小板的相对粘附率降低了70.1％(P<0.01),而正常血清对照组无明显变化,说明Fn在血小板粘附中起重要作用.     

血小板与血管壁粘附的扫描电镜观察

利用血小板粘附体外实验模型和扫描电镜技术,研究了内皮细胞不同程度损伤后粘附血小板的形态特征和内皮下层的纤维连接素在血小板粘附中的作用。粘附血小板表现为接触型、粘合型、铺展型和血小板聚集体4种类型。当内皮细胞剥脱后,内皮下层可见大量接触型、粘合型、铺展型血小板和少量血小板聚集体。当内皮下层的纤维连接素被去除或其活性被阻断后,粘附血小板减少,来见铺展型血小板,说明纤维连接素是参与血小板粘附的重要因素之一,主要是参与血小板在内皮下层表面的铺展。     

显露血管内皮下层纤维连接素的方法

本文报道了一种显露内皮下层纤维连接素的理想方法。大白鼠主动脉壁分别用1.0％NP-40作用5min,30.0mmol/L KCl作用10min后,内皮细胞全部脱离,内皮下层大部分纤维连接素被保留。本法适用于建立细胞与血管壁相互作用的体外实验模型。     

vWF与GPⅡb/Ⅲa在血小板黏附、聚集中的作用及与PCI术并发症的关系

遗传性假血友病因子(vWF)是一种黏附、多聚糖蛋白,分布在血浆、血小板和内皮下,在血小板黏附到内皮下的过程中起着重要作用。GPⅡb/Ⅲa在凝血过程中的血小板黏附和聚集中也起关键作用,血小板激活导致GPⅡb/Ⅲa构型发生变化,继而使GPⅡb/Ⅲa受体与配体纤维蛋白原的结合加强,纤维蛋白原在相邻血小板分子间形成桥梁,导致血小板聚集的加速。经皮冠状动脉介入治疗术后并发症的发生与血小板的激活、血栓形成有关,本文旨在简述vWF和Ⅱb/Ⅲ在血小板黏附和聚集中的作用及其与经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后并发症发生的关系。     

种植受体血管内皮细胞在异种血管移植中的实验研究

To investigate the possible significance and usefulness of reseeding the endothelial cell of recipient for the prevention of hyperacute rejection (HAR) resulting from the xenograft. METHODS: Discordant xenotransplantation model (guinea pig-to-rat) was adopted in this study. Firstly endothelial cells from rat abdominal aorta were separated and cultured. Secondly the guinea pig abdominal aorta of which the endothelium had been removed was cultured with the suspension containing rat endothelial cells (4 x 10(6)/ml). The viability of cultured vessel was assessed using light microscopy and transmission electron microscopy. Thirdly, the guinea pig vessels reseeded with rat endothelial cells were transplanted to rat in vivo. The thrombrosis time was observed. The condition of deposit of IgM and C3 in the recipient's transplanted vessel endothelium was examined by immuno-fluorescence staining assay. RESULTS: The thrombrosis time of the guinea pig vessel reseeded with rat endothelial cells (20.3 + 4.42 h) was significantly prolonged as compared with that of the normal guinea pig vessel (0.35 + 0.284 h) and the guinea pig vessel that had been deprived of endothelium (0.165 + 0.77 h). No deposit of IgM and C3 was seen in the new endothelium of guinea pig vessel in the treated group, whereas deposit of IgM and C3 was observed in the untreated normal guinea pig aorta. CONCLUSION: Donor vessels reseeded with endothelial cells from the recipient will undergo less severe rejection and this technique may be very useful in the attenuation of HAR.     

Von Willebrand因子在血小板粘附中的扫描电镜观察

本文应用抗人von Willebrand因子(vWF)单克隆抗体SZ—29和扫描电镜,观察了血管内皮下层及血浆vWF在血小板与血管壁粘附中的作用。当内皮细胞剥脱后,血管壁表面有大量血小板粘附;当用SZ—29单抗阻断血管内皮下层或血浆vWF作用时,血管壁仍有大量血小板粘附;当血管内皮下层及血浆vWF同时被阻断,则血管壁上粘附的血小板显著减少(P<0.005),表明血管内皮下层和血浆vWF在血小板与血管内皮下层粘附中均起重要作用。     

祛风宣痹方对哮喘豚鼠细胞粘附分子的影响

[目的]探讨祛风宣痹方(平哮合剂)对支气管哮喘的作用机理.[方法]用卵蛋白致敏豚鼠复制支气管哮喘动物模型,用祛风宣痹方(平哮合剂)治疗,观察动物血浆中细胞粘附分子(ICAM-1)水平的变化.[结果]实验性哮喘豚鼠发作时血浆中细胞粘附分子(ICAM-1)水平显著高于正常对照组,祛风宣痹方(平哮合剂)对实验性哮喘豚鼠中细胞粘附分子(ICAM-1)水平有明显降低作用(95%可信区间为20.387～53.834u/ml)(P＜0.01).[结论]祛风宣痹方(平哮合剂)有效治疗哮喘的作用与抑制细胞粘附分子(ICAM-1)产生密切相关.     

Attenuation of hyperacute rejection from xenograft by reseeding of endothelial cell]

The potential solution to palliate the critical shortage of suitable donor organs for transplantation may be xenogenic transplantation. However, hyperacute rejection (HAR) after xenotransplantation is the main problem in this process. Since the vascular endothelial cell of donor organ is the primary target cell in rejection, the replacement of endothelium in donor organs with endothelial cell from recipients themselves may be beneficial to the prevention of HAR. Discordant xenotransplantation model (guinea pig-to-rat) was adopted in this study. Firstly, endothelial cell from rat abdominal aorta was separated and cultured. Secondly, the guinea pig abdominal aorta of which the endothelium had been removed was cultured with the suspension containing rat endothelial cells (4 x 10(6)/ml). The viability of cultured vessel was assessed using light microscopy and transmission electron microscopy. The guinea pig vessel reseeded with rat endothelial cell was then examined by immuno-fluorescence staining assay to find out whether IgM and C3 in rat serum were bound to it after preincubation with rat serum. It was found that rat endothelial cells grew into the monolayer endothelium on the inner surface of guinea pig vessel with previous endothelial loss. IgM and C3 in rat serum did not deposit along the new endothelium of guinea pig vessel in the treated group as shown by immuno-fluorescence microscopy, whereas possive results were observed in the untreated normal guinea pig aorta. These findings indicate that donor vessel reseeded with endothelial cell from recipients undergoes less severe rejection and this technique may be very useful for the attenuation of HAR.     

变应性鼻炎鼻粘膜中一氧化氮合酶的组织化学变化

目的：通过比较豚鼠正常和变应性鼻炎（ＡＲ）鼻粘膜中一氧化氮合酶（ＮＯＳ）的分布,探讨ＮＯＳ与ＡＲ的关系。方法：应用酶组织化学技术,以还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸－黄递酶（ＮＡＤＰＨ－ｄ）特异性地测定ＮＯＳ在正常组和ＡＲ组豚鼠鼻粘膜中的分布及ＡＲ组ＮＯＳ活性变化。结果：正常和ＡＲ组豚鼠鼻粘膜酶组织化学染色均有反应,ＡＲ组呈强阳性反应,主要分布于腺体细胞、上皮细胞及血管内皮细胞胞质。结论：正常豚鼠     

种植受者血管内皮细胞对抗异种移植超急性排斥反应的初步探讨

为探讨种植受者血管内皮细胞在抗异种移植超急性排斥反应方面的意义,选用豚鼠→大鼠移植模型,先分离、培养大鼠动脉内皮细胞,然后将其种植于去内皮的豚鼠动脉内壁,并以免疫组化技术检测了种植大鼠内皮细胞的豚鼠动脉与大鼠血清反应的情况。结果显示：大鼠血清与正常的豚鼠动脉一起培养后,前者所含IgM、C3沿后者内皮细胞表面沉积;种植大鼠内皮细胞的豚鼠动脉与大鼠血清反应后免疫荧光反应呈阴性,即无IgM和C3。以上结果表明,血管内皮细胞可在异种血管壁上种植,如将受者血管内皮细胞预先种植于供者的血管内壁,可能避免超急性排斥反应的发生。     

Bleeding in a patient taking Lorenzo's oil: evidence for a vascular defect.

We describe a man with adrenoleukodystrophy receiving Lorenzo''s oil (glycerol trioleate and glycerol trierucate) who developed purpura, petechiae, and bleeding. Bleeding time was markedly increased (>20 min), although he had only borderline thrombocytopenia (120 x 10(9)/1) and conventional platelet aggregation studies were normal (except for a borderline response to low concentration collagen), as were results using a new technique employing immobilised von Willebrand factor. Together these results suggest that bleeding in this man resulted from a defect in vascular wall function or in the interaction of platelets with the endothelium.     

阿司匹林抑制急性心肌梗死患者血小板与白细胞的粘附

目的　研究阿司匹林（乙酰水杨酸,ＡＳＡ）对急性心肌梗死（ＡＭＩ）患者血小板与白细胞粘附的影响及其作用机制。方法　采用体外玫瑰花结形成实验检测血小板与白细胞粘附,观察ＡＳＡ 对两者粘附的作用;用１２５Ｉ标记的单克隆抗体测定血小板表面α颗粒膜蛋白１４０（ＧＭＰ１４０）的表达,观察ＡＳＡ对凝血酶诱导的血小板表面ＧＭＰ１４０ 表达的影响。结果　ＡＭＩ患者血小板与白细胞间粘附率增高,凝血酶通过诱导血小板表面ＧＭＰ１４０ 的表达促进血小板与白细胞粘附;阿司匹林（５００、５ ０００μｇ／ｍ ｌ）抑制ＡＭＩ患者血小板与白细胞间的粘附,抑制凝血酶诱导的正常人血小板与白细胞间的粘附以及凝血酶诱导的血小板表面ＧＭＰ１４０ 的表达。结论　ＡＳＡ一方面通过抑制ＧＭＰ１４０ 的表达,另一方面可能通过影响配体间的结合抑制血小板与白细胞之间的粘附,揭示了ＡＳＡ 抗栓作用的另外一种机制     

腺苷二磷酸在凝血酶信号传递过程中的作用

目的比较腺苷二磷酸（ADP）在两类凝血酶受体活化过程中对血小板聚集率以及血小板膜表面活化标记物表达的影响,探讨ADP在凝血酶信号传递机制中的作用。方法分别以凝血酶受体（PAR）活化肽PAR1-AP与PAR4-AP诱导血小板活化,观测腺苷三磷酸双磷酸酶（Apyrase,ADP抑制剂）ⅤⅡ作用过程中血小板聚集以及血小板膜表面糖蛋白（GP）Ib与P-选择素的改变。结果两类凝血酶受体都能诱导血小板活化,产生完全的聚集波,血小板膜GPIb则呈现先进行性减少后逐渐回升的可逆性变化,P-选择素水平持续升高。ApyraseⅤⅡ作用后,PAR1-AP诱导的血小板聚集反应受到部分抑制,而PAR4-AP诱导的血小板聚集反应未有明显改变。ApyraseVⅡ加速PAR1途径GPIb回复细胞表面,对PAR4途径中GPIb的改变则没有显著影响。两种活化途径中P-选择素的表达都不受ApyraseVⅡ的影响。结论ADP在凝血酶信号传递过程中发挥重要作用,其中PAR1途径与ADP参与密切相关．     

ADMA对自发性高血压大鼠血小板聚集的影响及氯沙坦的干预作用

目的:以自发性高血压大鼠为动物模型,氯沙坦为干预药物,探讨非对称性二甲基精氨酸(asymmetricdimethylarginine,ADMA)对血小板聚集的影响以及氯沙坦的干预作用。方法:自发性高血压大鼠(SHR)随机分为SHR组、L-精氨酸组(SHR L-精氨酸)、氯沙坦组(SHR 氯沙坦);另设一组京都Wistar大鼠作为对照组(WKY),每组大鼠均16只。所有大鼠自由饮水、饮食,WKY组与SHR组每天10mL/(kg·d)蒸馏水灌胃1次,L-精氨酸组与氯沙坦组分别用1.0g/(kg·d)的L-精氨酸、30mg/(kg·d)的氯沙坦钾溶解于10mL蒸馏水灌胃1次,连续2周。分别检测血小板聚集率(Pt-Ag),血浆与血小板NO,NOS,血浆与血小板ADMA浓度;另取SD大鼠血小板,分别用上述4组大鼠血管内皮孵育血小板,检测Pt-Ag。结果:(1)SHR组Pt-Ag显著高于WKY组(P<0.01);L-精氨酸与氯沙坦干预后的Pt-Ag与SHR比较均显著降低(P<0.01);(2)SHR组血浆NO浓度与血小板NO含量均显著低于WKY组(P<0.05);L-精氨酸与氯沙坦干预后NO均显著升高(P<0.05);(3)SHR组血浆与血小板NOS活性显著低于WKY组(P<0.05);L-精氨酸与氯沙坦干预后均显著升高NOS活性(P<0.01);(4)SHR组血浆ADMA浓度与血小板ADMA含量显著高于WKY组(P<0.05);L-精氨酸与氯沙坦干预后均显著降低ADMA(P<0.05);(6)血管内皮体外孵育血小板后,与对照组相比,WKY内皮组Pt-Ag显著降低(P<0.05);SHR内皮组Pt-Ag显著增加(P<0.05);与SHR内皮组相比,L-精氨酸与氯沙坦内皮组Pt-Ag均显著降低(P<0.01,P<0.05)。结论:(1)高血压大鼠ADMA浓度升高导致NOS活性降低和NO合成减少,这可能是引起血小板聚集率增高的重要原因;(2)氯沙坦在降压的同时显著降低血小板聚集率,该作用可能是通过降低体内ADMA浓度、增加NOS活性和NO合成而实现的。     

氯胺-T氧化C5、体外组装补体膜攻击复合物及其鉴定

目的：利用氧化的方法在无酶解反应发生的情况下获得活化形式的C5，进而实现以纯化的补体终末成分体外组装补体膜攻击复合物（MAC）。方法：以蛋氨酸氧化剂氯氨-T与纯化的C5相互作用后，加入C6组装具溶血活性的C56复合物。以此复合物与NHS或纯化的后续终末补体成分组装MAC，检测复合物的溶血活性。结果：反应性溶破实验证实，氯胺-T氧化C5与C6组装形成功能C56复合物，后者可与NHS或纯化的补体终末成分C7-C9体外组装具溶血性的MAC，并且所形成的C56复合物在24h达到最大的溶血活性，48h仍保持稳定。结论：氯胺-T在不裂解C5的条件下产生了C5b样活性分子，该分子能与C6组装形成稳定的活性复合物，并可与其它补体终末成分组装产生活性MAC。     

Sak衍生体对高血脂大鼠血小板功能的影响及其作用机制

目的: 观察Sak衍生体对高血脂大鼠血小板功能的影响并探讨其作用机制。方法: 30只Wistar大鼠制备高脂大鼠模型,随机分为药物组、高脂组及正常对照组。药物组大鼠尾静脉注射Sak衍生体进行干预,剂量为0.5 mg?kg-1,隔天注射,共15次;其他两组大鼠注射生理盐水作为对照,在给药前和最后一次给药24 h后采血,检测各组大鼠的血小板黏附率和二磷酸腺苷二钠(ADP)诱导的血小板聚集率;采用放免法检测血小板中钙调蛋白(CaM)含量以及ADP诱导的血小板聚集时血栓素(TXA2)的释放量。结果:与高脂组大鼠比较,药物组高脂大鼠血小板黏附功能及ADP诱导的血小板聚集率明显降低（分别是63.5%±6.71%与44.7%±8.13%,P<0.05;91.56%±9.01%与81.22%±3.45%,P<0.05）,血小板中CaM含量与TXA2的释放量明显降低（P<0.05或P<0.01）。结论:Sak衍生体通过对引起血小板活化途径的干预,抑制血小板的黏附及聚集。     

钙通道阻断剂硝苯地平对血迷路屏障的通透性研究

目的：探讨钙通道阻断剂硝苯地平的血迷路屏障通透性，建立高效液相色谱仪测定豚鼠外淋巴液硝苯地平浓度的方法。方法：豚鼠腹腔注射硝苯地平1周采集外淋巴液，应用反相高效液相色谱法(reversed phase highperformance liquid chromatography，RT-HPLC)测定外淋巴液硝苯地平的浓度。结果：本法的灵敏度为5ng／ml。在浓度为50ns／ml时的平均回收率为98％。测定的相对偏差为8．56％。外淋巴液硝苯地平的浓度为50．2—124．2ng／ml。结论：硝苯地平可以通过血迷路屏障，浓度随给药时间变化。本实验方法简便、快捷、准确可靠，可有效用于豚鼠外淋巴液硝苯地平的药理学研究。     

急性早幼粒细胞白血病血浆GMP-140与vWF的表达

目的 了解急性早幼粒细胞白血病（APL）患者血浆中血小板颗粒膜蛋白140（GMP-140）及血管性血友病因子（vWF）水平的变化规律,以期为临床诊治APL合并的凝血病提供理论依据。方法 （1）应用双抗体夹心ELISA法检测APL患者初诊、治疗中（第14天左右）、缓解时及正常人的血浆GMP-140水平,并计算GMP-140（ng）／10^7血小板数;（2）应用增强免疫胶乳法测定上述各期患者的血浆vWF：Ag水平。结果 （1）APL患者在初诊与治疗中GMP-140（ng）／10^7血小板数（4．55±3．10,4．73±2．78）显著高于正常对照（0．94±0．67）（P〈0．01）,缓解期（1．08±0．65）则与正常对照无显著差异（P〉0．05）。（2）APL患者各病期vWF水平（％）（初诊时245．00±82．83,治疗中257．22±104．18,缓解期193．62±61．15）均较正常对照组（129．34±34．57）升高（初诊和治疗中P〈0．01,缓解期P〈0．05）;缓解时的vWF水平较初诊时、治疗中明显下降（P〈0．05）。结论 APL患者发病过程中可能存在着血小板活化及内皮损伤,随着化疗的进行,骨髓造血逐渐改善,血小板的功能趋于正常;而内皮损伤恢复更慢,因而化疗中及化疗后期也应注意血栓的形成。     

支气管哮喘发作时PAdT与PAgT的改变

通过对32例支气管哮喘急性期患者血小板功能的测定,结果显示支气管哮喘急性期患者血小板粘附性(PAdT)与聚集性(PAgT)明显增高,与缓解期相比有明显差异(P<0.01),提示血小板功能异常与支气管哮喘的常规发病机理有关。     

TTC染色评价豚鼠离体心脏缺血/再灌注损伤梗死面积的适宜观察时间及计算方法

 目的探索氯化三苯基四氮唑（TTC）染色法评价豚鼠离体心脏缺血/再灌注损伤梗死面积的适宜观察时间及计算方法。 方法将11只豚鼠离体心脏分为2组：对照组（control 组, n = 5）和缺血30 min再灌注60 min组（I30R60 组, n = 6）。 Langendorff灌流后垂直心脏长轴将心脏横切成5片,弃去心耳片后,由心耳往心尖方向依次记为第1片、第2片、第3片、第4片并进行TTC染色,分别于染色后4个时间点（1、2、3、4周）对4个横切片进行逐个观察,并通过统计前2片、前3片和前4片的方法计算梗死面积百分比。 结果与control组比较,I30R60组在第1周观察时第1至第4横切片梗死面积百分比均显著增加（P < 0.05）;第2周观察时,第1片无明显梗死,其余3个横切片与control组比较可见明显梗死区域（P < 0.05）;第3周观察时,4个心脏横切片梗死面积与control组比较无统计学差异（P > 0.05）;第4周观察时,仅第4片与control组比较具有统计学差异（P < 0.05）。在计算梗死面积百分比方法中,与control组比较,I30R60组无论采用前2片、前3片和前4片进行计算,在第1周和第2周观察梗死面积具有统计学差异（P < 0.05）,在第3周、第4周观察均无明显差异（P > 0.05）。 结论用TTC染色法评价豚鼠离体心脏缺血/再灌注损伤时,单片及多片心脏横切片评估梗死程度可以染色后第1周及第2周内观察为宜。