全反式维甲酸对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭能力的影响

 目的探讨全反式维甲酸(ATRA)对人肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法划痕愈合和侵袭实验检测ATRA对SMMC-7721细胞迁移与侵袭能力的影响;real-time PCR、Western blotting检测 ATRA作用SMMC-7721细胞后CD147、MMP-2的表达。结果划痕实验结果显示,以10,20,40 μmol·L^-1 ATRA处理SMMC-7721细胞24 h后,较未处理组划痕距离明显增加(P <0.05),表明ATRA可抑制SMMC-7721细胞迁移。Transwell实验结果显示,10,20,40 μmol·L^-1 ATRA处理SMMC-7721细胞24 h后,穿膜细胞数较未处理组明显减少(P <0.05),表明ATRA可抑制SMMC-7721细胞侵袭能力。real-time PCR结果显示,以10,20,40 μmol·L^-1 ATRA处理SMMC-7721细胞24 h后,CD147和 MMP-2 的mRNA表达均明显下调(P <0.05)。Western blotting结果表明,10,20,40μmol·L^-1 ATRA处理SMMC-7721细胞24h后,CD147和 MMP-2蛋白表达均明显降低,差异具统计学意义(P <0.05)。结论ATRA可抑制人肝癌SMMC-7721细胞迁移与侵袭能力,其机制可能与下调CD147和MMP-2有关。     

全反式维甲酸对人卵巢癌细胞株HO8910增殖、侵袭能力的影响

目的:观察全反式维甲酸(All-trans retinoic acid,ATRA)对体外培养人卵巢癌细胞株HO8910增殖、侵袭能力的影响,为ATRA应用于卵巢癌的临床治疗提供实验依据.方法:选用人卵巢癌细胞株HO8910进行体外培养,以不同浓度的ATRA处理HO8910细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖抑制情况,倒置显微镜进行形态学观察,Transwell小室体外侵袭实验检测细胞侵袭能力.结果:(1)ATRA浓度为10~(-7)～10~(-5)mol/L时,均明显抑制HO8910细胞的增殖(P<0.05),并具有时间-剂量依赖性.24、48、72 h ATRA抑制HO8910细胞增殖的IC_(50)值分别为2.331×10~(-5)、0.998×10~(-6)、0.891×10~(-7)mol/L.(2)倒置显微镜可观察到经10~(-6)mol/LATRA处理的HO8910细胞部分发生形态学的良性分化.(3)体外侵袭实验显示经10~(-6)mol/L ATRA处理的HO8910细胞,穿膜细胞数目明显减少(P<0.05).结论:ATRA能明显抑制人卵巢癌细胞株HO8910的增殖、侵袭能力,有望为ATRA应用于卵巢癌的临床治疗提供新的有效的途径.     

全反式维甲酸体外诱导分化对人骨肉瘤MG-63细胞侵袭转移的影响

目的观察全反式维甲酸（alltrans retinoic acid，ATRA）诱导分化对人骨肉瘤MG-63细胞侵袭转移的抑制作用。方法体外用ATRA诱导MG-63细胞分化，通过电镜观察瘤细胞的超微结构；3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑嗅盐（MTT）检测细胞的增殖能力；软琼脂集落形成实验、侵袭和运动实验观察MG-63细胞生长和侵袭能力的变化；Westernblot检测细胞增殖核抗原（proliferation cell nuclear antigen，PCNA）、细胞黏附分子44（cell differentiation44，CD44v6）蛋白的表达。结果经诱导剂处理后．细胞的生长明显受到抑制，细胞形态呈良性分化；肿瘤细胞的软琼脂集落形成率、穿膜运动能力均被显著抑制（P〈0．01）；与对照组相比随着作用时间的增加CD44v6和PCNA的表达均降低（P〈0．01）。结论ATRA对人骨肉瘤MG-63细胞有诱导分化作用，并且从细胞的黏附、运动、降解等多环节抑制肿瘤细胞的侵袭转移能力。     

全反式维甲酸对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响

目的研究全反式维甲酸(ATRA)对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响.方法采用MTT法观察和比较MCF-7细胞在ATRA不同浓度和作用时间下的增殖能力.结果ATRA作用浓度为1 μmol/L时,第3、6、9 d的光吸收值均与对照组有显著差异(P<0.01),其中又以第6 d时ATRA对MCF-7细胞增殖的抑制作用最明显.结论ATRA对乳腺癌MCF-7细胞具有增殖抑制作用,且这种作用具有剂量和时间依赖性.     

全反式维甲酸对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响

目的研究全反式维甲酸(ATRA)对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响。方法采用MTT法观察和比较MCF-7细胞在ATRA不同浓度和作用时间下的增殖能力。结果ATRA作用浓度为1μmol/L时,第3、6、9d的光吸收值均与对照组有显著差异(P<0.01),其中又以第6d时ATRA对MCF-7细胞增殖的抑制作用最明显。结论ATRA对乳腺癌MCF-7细胞具有增殖抑制作用,且这种作用具有剂量和时间依赖性。     

全反式维甲酸联合干扰素-γ对人肝癌细胞株SMMC-7721抗增殖作用的研究

目的探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)和干扰素-γ(Interferon-gamma,IFN-γ)联合作用对于人肝癌细胞株SMMC-7721的抑制作用。方法用ATRA和IFN-γ处理SMMC-7721细胞后,应用MTT法检测SMMC-7721细胞的增殖抑制率,电镜观察细胞形态的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达变化。结果ATRA作用于SMMC-7721后,抑制细胞增殖并且诱导细胞凋亡发生,和IFN-γ联合作用后,这种作用加强;SMMC-7721细胞中PCNA的表达在ATRA作用后减少,ATRA与IFN-γ联合作用后进一步减少。结论IFN-γ可以增强ATRA对于肝癌细胞的抑制及诱导细胞凋亡的作用,并且明显下调了PCNA的表达。     

CAAP1对人肝癌细胞SMMC-7721增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨Caspase活性和凋亡抑制因子1(CAAP1)对人肝癌细胞SMMC-7721增殖、迁移和侵袭的影响.方法 构建CAAP1的过表达载体pcDNA3/CAAP1和敲降载体pSilencer 2.1-U6 neo/shR-CAAP1(shR-CAAP1),并进行鉴定.SMMC-7721分为4组:pcDNA3/CA...     

肝星状细胞对肝癌SMMC-7721细胞增殖、侵袭的影响及作用机制研究

目的观察人肝星状细胞LX-2对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、侵袭能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法人肝星状细胞LX-2条件培养基（HSC-CM）与肝癌SMMC-7721细胞共培养,设为HSC-CM组;人正常肝细胞LO2条件培养基(LO2-CM)与肝癌SMMC-7721细胞共培养,设为LO2-CM组（阴性对照）;1%FBS培养基与肝癌SMMC-7721细胞共培养,设为1%FBS组（空白对照）。采用CCK-8法检测3组肝癌SMMC-7721细胞增殖能力;Transwell侵袭实验检测培养48h后细胞侵袭能力;Westernblot检测增殖细胞核抗原（PCNA）、血管内皮生长因子（VEGF）、核因子资B（NF-资B）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）蛋白表达水平。结果HSC-CM组、LO2-CM组、1%FBS组肝癌SMMC-7721细胞增殖能力、侵袭能力、PCNA、VEGF、NF-资B、基质金属蛋白酶２（MMP-2）蛋白表达水平比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）;与LO2-CM组、1%FBS组比较,HSC-CM组肝癌SMMC-7721细胞增殖能力、侵袭能力均增强（均P＜0.05）;PCNA、VEGF、NF-资B、MMP-2蛋白表达水平均上调（均P＜0.05）。结论肝星状细胞可促进肝癌SMMC-7721细胞增殖、侵袭等生物学行为,其作用机制可能与上调PCNA、VEGF、NF-资B、MMP-2表达水平有关。     

丁酸、全反式维甲酸对肺腺癌细胞株A549体外增殖的影响

目的观察丁酸(BA)、全反式维甲酸(ATRA)单用及联合应用对肺腺癌细胞株A549体外增殖的影响.方法采用绘制细胞生长曲线法、MTT比色法.结果经BA、ATRA处理后A549细胞生长曲线趋于平坦,细胞增殖速度、倍增时间降低,72h、120h生长抑制率显著增高,并呈剂量依赖性,其中BA和ATRA联合处理作用后72h、120h生长抑制率分别为(72.77±2.54)%、(84.03±1.58)%,较等浓度单药BA、ATRA显著增强.结论 BA对肺腺癌A549细胞具有与ATRA相近的增殖抑制作用,BA和ATRA联合应用具有良好的协同增效作用.     

PRDX6过表达对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其分子机制

目的:探讨过表达过氧化物氧化还原蛋白6(PRDX6)基因对肝细胞癌增殖、侵袭和迁移的影响,并阐明其可能的作用机制.方法:人肝癌HepG2和Hep3B细胞分为过表达PRDX6组(转染过表达质粒PIRES-EGFP-PRDX6)和空载体组(转染对照质粒PIRES).实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western bl...     

全反式维甲酸对神经母细胞瘤SY5Y细胞增殖的影响

[目的]研究全反式维甲酸(ATRA)对神经母细胞瘤细胞增殖的影响.[方法]神经母细胞瘤细胞SY5Y经全反式维甲酸(ATRA)处理不同时间后(2、4、6d)分别于显微镜下观察细胞形态学改变及使用MTS方法观察细胞增殖情况.对经ATRA处理4d的细胞进行溴脱氧尿苷(Brdu)染色观察DNA合成及利用流式细胞仪进行细胞周期分析.[结果]与对照组比较,SY5Y细胞经ATRA处理4d或6d后于显微镜下可见明显的轴突延伸,MTS方法显示细胞增殖明显降低.ATRA处理4d时Brdu染色显示DNA合成减少,利用流式细胞仪对细胞周期的分析表明细胞被阻滞在G1期.[结论]ATRA可抑制神经母细胞瘤细胞增殖.     

全反式维甲酸对培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞增生及P21表达的影响

目的　探讨全反式维甲酸 (ATRA)对培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞增生及P2 1蛋白表达水平的影响。方法　血管平滑肌细胞 (VSMC)采用组织贴块法培养。ATRA(2 .5×10 -6mol·L-1)作用于经 2 0 %胎牛血清刺激后的血管平滑肌细胞 ,2 4h后分别行 3H TdR掺入实验测定和P2 1蛋白印迹检测P2 1蛋白表达。结果　ATRA明显抑制血管平滑肌细胞DNA合成和促进P2 1蛋白表达。结论　ATRA促进P2 1蛋白表达是抑制VSMC增生的原因之一     

全反式维甲酸对兔颈动脉粥样硬化病变中C-myc表达及血管平滑肌细胞增生的影响

目的探讨全反式维甲酸（ATRA）对兔颈动脉粥样硬化病灶中血管内膜的增生、血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖、增殖细胞核抗原（PCNA）及原癌基因C-myc表达规律的影响。方法36只新西兰雄性大白兔随机分为3组：正常饮食组、手术组、ATRA治疗组,每组12只。手术组和治疗组均给予高脂饮食．2周后用空气干燥法制作颈动脉内膜损伤模型,治疗组于术前3d开始给予ATRA灌胃。于术后1、4周处死动物,取病变血管应用苏木精-伊红染色、免疫组化和计算机图像分析法进行形态学、PCNA和C-myc表达水平的检测。结果①正常动脉壁未见PCNA及C—myc表达;②手术组在术后第1周时内膜开始增生,第4周增生明显,且出现泡沫细胞、脂质核心形成、管腔狭窄;增生内膜中C-myc表达水平增高;③治疗组C-myc的表达明显低于手术组（P〈0．05）,VSMCs的迁移、增殖、内膜增生和管腔狭窄显著减轻（P〈0．05）。④PCNA表达与C—myc表达呈显著正相关（P〈0．01）。结论ATRA可通过抑制C-myc表达,抑制VSMCs的迁移和增殖,从而抑制兔颈动脉粥样硬化新生内膜过度增生和管腔狭窄。     

Shc1在肝癌组织中的表达及对肝癌SMMC-7721细胞增殖迁移能力的影响

目的 研究Shc1在肝癌组织中的表达情况及其对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、迁移能力的影响。 方法 采用实时定量RT-PCR(Real-time polymerase chain reaction)、蛋白质印迹法（Western Blot）、免疫组织化学法检测33例肝癌及33例对应的癌旁组织中Shc1的表达情况,并分析Shc1蛋白表达量与临床特征间的关系;培养肝癌SMMC-7721细胞,siRNA干扰Shc1的表达,采用MTT法检测细胞增殖活力,细胞划痕试验检测迁移能力。结果 Shc1在33对样本中,肝癌组织中的表达高于癌旁组织（P＜0.05）;Shc1表达于肝细胞癌的胞浆上;无肝硬化的患者Shc1阳性率（100%）高于伴肝硬化者（54.2%）;术前Child-Pugh分级A级的患者Shc1阳性率（75.9%）高于B级或C级的患者（0%）;术前检测血中AFP阳性患者Shc1阳性率（79.2%）高于AFP阴性患者（33.3%）;术后病理EdmondsonⅢ、Ⅳ级患者Shc1阳性率（79.2%）高于Ⅰ、Ⅱ级的患者（42.9%）;差异均有统计学意义（P＜0.05）。干扰Shc1表达后,随时间延长, SMMC-7721细胞增殖、迁移明显受到抑制（P＜0.05）。 结论 Shc1在肝癌组织中高表达,且Shc1的阳性率与肝硬化、Child-Pugh分级、术前AFP、病理Edmondson分级相关;干扰Shc1的表达可抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖、迁移能力。     

重组人Hespintor对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用

目的 完善重组Hespintor蛋白(rHespintor)的纯化方法,提高蛋白提取效率,并探讨其对肝母细胞瘤HepG2细胞增殖及侵袭作用的影响.方法 在重组蛋白提取中增加包涵体洗涤过程,更改蛋白纯化缓冲体系,并利用Na-苯甲酰-DL-精氨酸-对硝基酰胺盐酸盐(BAPNA)为作用底物,测定纯化的rHespintor对胰蛋白酶水解抑制活性.以空白组为对照组,通过MTT实验、细胞划痕愈合实验、肿瘤细胞侵袭实验分别检测rHespintor对肝母细胞瘤HepG2细胞生长的影响及作用效果.结果 对包涵体蛋白进行尿素梯度洗涤后可有效去除目的蛋白中绝大多数杂蛋白,一步纯化后,目的蛋白rHespintor具有较高胰蛋白酶水解抑制活性,且抑制效果呈剂量依赖关系.rHespintor作用于肝母细胞瘤HepG2细胞后,细胞增殖受到抑制,迁移能力减弱,侵袭的细胞数量显著减少.结论 rHespintor在体外可明显抑制肝母细胞瘤HepG2细胞的增殖及侵袭作用.     

高效液相色谱法测定人血浆中全反式维甲酸血药浓度

目的建立高效液相色谱法测定人血浆中全反式维甲酸浓度。方法色谱柱为Supelcosil LC-18DB柱(5μm,4.6 mm×250 mm);流动相为甲醇-水-冰乙酸(体积比82∶17∶1);柱温为室温;流速1.5 mL.m in-1;检测波长为340 nm。结果全反式维甲酸血药质量浓度在10~1000 ng.mL-1范围内,与峰面积比有良好的线性关系(r=0.9997),最低检测浓度为2.5 ng.mL-1。平均方法回收率为(94.5±4.7)%(n=15)。日内RSD≤4.1%,日间RSD≤6.2%。结论本方法简单、快速、灵敏、重现性好,适用于全反式维甲酸临床血药浓度监测及人体药代动力学研究。     

短程全反式维甲酸对人结肠癌LoVo细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨短程全反式维甲酸(ATRA)对人结肠癌LoVo细胞增殖和凋亡的影响。方法四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测ATRA对LoVo细胞的生长抑制率并筛选合适的药物用量,流式细胞仪检测ATRA诱导的肿瘤细胞周期和凋亡率变化。结果选择1.0μmol·L-1ATRA作为进一步实验的工作浓度。1.0μmol·L-1ATRA作用12 h后G1期细胞开始增多,48 h后G1期细胞明显增多并伴S期、G2/M期细胞减少(P<0.05)。1.0μmol·L-1ATRA作用48、72 h组的早期凋亡率和总凋亡率与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01);ATRA作用48、72 h组的早期凋亡率和总凋亡率的组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论短程1.0μmol·L-1ATRA主要通过阻滞LoVo细胞于G1期并诱导其细胞发生早期凋亡,可明显抑制肿瘤细胞的增殖。