多抗甲素对人NK细胞活性的影响

本文应用~3H-TdR掺入法研究多抗甲素对人外周血 (PBL)NK细胞活性的影响。实验结果表明:食道癌患者外周血NK细胞活性明显低于正常人。多抗甲素不论与正常人还是食道癌患者PBL共孵时,都能明显增强NK细胞活性,分别上升12.39±4.5％和19.66±5.4％。对食道癌患者NK细胞活性促进作用明显高于正常人,并能使其NK细胞活性恢复到正常水平。当浓度为100μg/5×10~6 cell/     

多抗甲素对人NK细胞活性作用的机理研究

本文应用单细胞细胞毒试验及形态学观察,研究PAA对人外周血NK细胞活性的作用机理。结果表明:正常人外周血淋巴细胞(PBL)与靶细胞在体外结合迅速,15分钟,2及4小时无明显差异。食道癌患者PBL与靶细胞结合迟缓,各时间点的结合率(B％)明显低于正常人。食道癌患者PBL的杀伤率(K％)明显低于正常人。经PAA预处理后能增强食道癌患者PBL明显低下的B％和K％,也可增强正常人PBL的K％,但对正常人PBL     

多抗甲素对人免疫功能的影响

动物实验曾表明多抗甲素(PAA)有明显的免疫促进作用。为了进一步了解国产新药PAA的抗肿瘤免疫作用机制,作者应用~3H—TLR参入法研究PAA对正常人和食道癌患者外周血淋巴细胞增殖反应(LP)和自然杀伤细胞(NK)活性的影响。结果表明:1、食道癌患者外周血淋巴细胞(PBL)对PHA刺激的LP反应明显低于正常人(P<0.01),100μg.ml~(-1)PAA对23例正常人和22例食道癌患者LP反应有直接剌激作用在促细胞有丝分裂剂PHA作用下,PAA促进正常人和食道癌LP反应的浓度分别为100—1000μg.ml~(-1)和     

IL—12以及IL—12P40对子宫内异症患者NK细胞功能的免疫调节

目的通过观察正常人及子宫内膜异位症(EM)患者外周血及腹腔液中IL-12、IL-12P40含量变化,分析其分子诱导NK细胞对子宫内膜细胞的细胞毒效应的影响,探讨IL-12、IL-12P40分子与EM患者NK细胞功能低下的相关性.方法ELISA酶联免疫检测IL-12、IL-12P40含量以及MTT释放法检测NK细胞毒活性.结果①EM患者腹腔上清液可使正常人外周血NK细胞杀伤活性(16.80%±3.6%)明显下降(8.37%±4.5% )(P＜0.05).② EM患者IL-12含量血清为66.38±12.6 pg/ml,低于对照组84.97±13.7 pg/ml(P＜0.05);腹腔液中为77.76±14.6 pg/ml,低于对照组106.92±10.7 pg/ml(P＜0.05).③EM患者IL-12P40含量血清为35.64±10.6 pg/ml, 与对照组无明显差异;腹腔液含量为79.76±12.6 pg/ml, 高于对照组40.54±10.0 pg/ml(P＜0.05), 并与疾病的程度呈负相关.④IL-12能增强NK细胞对子宫内膜细胞的杀伤,并呈剂量依赖.在10 ng/ml浓度诱导后杀伤率为31.90%,高于对照组的16.80%.⑤IL-12P40能拮抗IL-12对NK细胞活性的诱导,当加入IL-12P40后,使IL-12诱导的活性(29.3%)下降为19.36%.结论子宫内膜异位症患者腹腔液中IL-12P40含量的增高可能与NK细胞功能下降有关.     

多抗甲素对食道癌患者淋巴细胞的促增殖作用

本文应用淋巴细胞增殖反应(LP)试验来研究多抗甲素(PAA)对25例正常人和22例食道癌患者外周血LP反应的影响。结果表明:食道癌患者LP反应显著低于正常人(低于正常者高达63.64％,P<0.001)、PAA 1000μg/ml体外单独应用对正常人和食道癌患者的外周血淋巴细胞(PBL)有刺激作用。在亚适浓度PHA(5μg/ml)刺激下,PAA对正常人和食道癌患者PBL促增殖作用的浓度分别为100—1000μg/ml和10—100g/ml。判定LP反应的三项参数(NCPm,SI,RPI)灵敏度差异比较的结果说明;增殖指数(RPI)是判定食道癌患者LP反应降低的最灵敏的参数。转化值(NCPm)次之,刺激指数(SI)最不灵敏。因此,PAA对食道癌患者外周血淋巴细胞促增殖起免疫调节作用。     

银屑病外周血T细胞亚群与肿瘤坏死因子的研究

本文以结晶紫染料摄入法,检测52例寻常型银屑病患者内毒素诱导的外周血单个核细胞(PBMCs)产生肿瘤坏死因子(TNF)活性,并用T 细胞表型(T_1、T_4、T_8)单克隆抗体间接免疫荧光法,检测患者外周血T 细胞及其亚群的百分率。结果寻常型银屑病患者外周血TNF 诱生活性(6.13±2.41U/ml)、T_4细胞百分率(46.31±6.31%)及T_4/T_(?)比值(1.54±0.27)均显著低于正常人对照组(P<0.01),而T_(?)细胞百分率(30.33±2.12%)则明显增高(P<0.01)。表明银屑病患者存在细胞免疫功能缺陷;TNF 产生能力低下和T_4/T(?)的比例失调与银屑病的发病密切相关。     

导入NKG5—SV基因增强细胞杀伤活性的研究

目的研究免疫效应蛋白NKG5的拼接异构体基因NKG5-SV导入外周血自然杀伤细胞(NK细胞)对其杀伤活性的影响.方法Percoll细胞分离液分离外周血NK细胞,流式细胞仪检测分离后CD56阳性细胞浓度.以逆转录病毒为载体将NKG5-SV基因和对照基因LacZ导入NK细胞,Northernblot检测NKG5-SV的表达,K562细胞杀伤实验检测病人NK细胞转染NKG5基因前后和正常人NK细胞的NK活性.结果Percoll分离后的淋巴细胞CD56阳性细胞为77.44%,分离前为15.88%.病人NK细胞经NKG5-SV基因转染后NKG5-SVmRNA表达增高.病人NK细胞、NK-LacZ细胞、NK-NKG5-SV细胞和正常人NK细胞对K562的杀伤活性分别为5.96%±0.38%、6.03%±0.42%(P＞0.05)、27.67%±0.18%(P＜0.01)、30.33%±0.83%(P＜0.01).结论免疫效应蛋白基因导入NK细胞,可增强NK细胞的杀伤活性.     

卵巢肿瘤患者自然杀伤细胞活化性受体NKG2D与其配体MICA表达的初步研究

目的:研究卵巢癌、良性卵巢肿瘤患者外周血NK细胞表面活化性受体NKG2D的表达及局部组织中相应配体MICA的表达情况,并结合临床病理因素分析探讨宿主NK细胞受体NKG2D在抗卵巢癌中的作用及其与肿瘤免疫逃逸的关系。方法:对4 2例卵巢癌、2 3例良性卵巢肿瘤及2 0例正常妇女,采用流式细胞术检测外周血NK细胞NKG2D的表达状况,RT PCR技术检测在上述部分相应组织标本中MICA的表达。结果:恶性、良性卵巢肿瘤患者及正常人外周血NK细胞NKG2D的表达水平分别为( 94 2 3±6 0 2 ) %、( 98 70±0 98) %、( 98 6 1±1 5 9) % ,恶性组与另两组之间比较,差异有统计学意义(P <0 0 5 ) ;相应配体MICA在卵巢癌组织中的表达率较良性卵巢肿瘤中明显增高,差异有统计学意义(P <0 0 1) ;在卵巢癌病人是否绝经、不同组织类型、分化程度、手术分期及是否淋巴转移等各组临床病理情况下,其表达率未见明显差异(P >0 0 5 )。结论:卵巢恶性肿瘤患者外周血NK细胞活性降低,其活化性受体NKG2D表达的下降是NK细胞活性下降的原因之一。NKG2D的配体MICA的基因表达可能与卵巢癌的恶性转化有一定的相关性,卵巢癌的免疫逃逸可能与NKG2D表达下调及其配体MI CA的表达升高有关     

人类红细胞的NK增强因子的鉴定

NK细胞是一类与免疫监视有关的一类淋巴细胞,也是造血的重要调节细胞.RBC是外周血中主要的细胞成分,占全血容量的50%.文章作者以前的研究发现在RBC存在的情况下,NK细胞能明显提高其对肿瘤细胞的细胞毒活性.文章研究了对NK细胞的活性有提高作用的红细胞成分.从健康供血者采血经密度梯度离心分离PBL和RBC,PBL用于NK活性检测作为效应细胞.RBC用蒸馏去离子水低渗破坏,20000g离心15分钟,将细胞膜与细胞溶质分开.NK活性检测为标准4小时~(51)Cr释放     

用~(125)IUdR标记K562细胞法检测乙型肝炎患者外周血中的NK细胞活性

本文用~(125)IUdR 标记的K 562细胞作为靶细胞,检测 29例病毒性乙型肝炎患者(急性期17例、慢迁肝7例、无症状 HBsAg 携带者3例和肝硬化2例)外周血中自然杀伤(NK)细胞的活性。结果发现40例正常对照组的NK活性平均值±SD 为35.24±12.24％;5例急性早期患者显著升高(P<0.001);7例慢迁肝患者明显降低(P<0.05);9例恢复期和 3例无症状 HBsAg携带者均在正常范围内。以上结果与中岛悦朗和Serdengerti的报道相符,但与另些作者的资料有差异。我们认为NK活性在病程初期升高和在慢性期降低与干扰素的生成和乙肝病人早期肝损害有关,与若干种其他病毒性疾病中所见的规律相仿。     

年龄对人细胞毒性T淋巴细胞和自然杀伤细胞中穿孔素表达的影响

目的　通过研究健康儿童、成人和老年人外周血淋巴细胞 (PBL)中细胞毒效应分子穿孔素 (PFP)的表达水平的变化 ,了解细胞毒性T细胞 (CTL )的杀伤活性随年龄增长而下降的分子机制。方法　利用抗人PFP、抗人CD3和抗人CD5 6单克隆抗体 (mAb) ,采用单标记免疫组化染色法 ,检测外周血单个核细胞 (PBMC)中PFP的表达。采用双标记免疫组化染色法 ,检测上述细胞表面标志CD3或CD5 6的表达和细胞内PFP的表达。结果　儿童组、成人组及老年组PBL中表达PFP阳性细胞的百分率 (% ) ,分别为 (2 6 .4± 2 .7) % ,(2 1.6± 3.2 ) %和 (13.4± 2 .0 ) % ,老年组明显下降 ,与其他两组相比较P <0 .0 0 1。 3个年龄组CD3+ T细胞表达PFP的阳性率 (% ) ,分别为 (30 .1± 4 .8) %、(2 1.4± 7.3) %和 (18.8± 4 .2 ) % ,随年龄的增长而显著下降。3个年龄组CD5 6 +NK细胞PFP的表达差别不显著。结论　健康人PBL中PFP的表达随年龄增长而递减 ,CD3+ T细胞亚群PFP表达水平的下降尤其显著。这可能是老年人CTL杀伤活性下降的重要原因之一     

细胞毒效应的DNA荧光测定法测定恶性肿瘤患者外周血NK细胞活性

本文根据溴化乙锭(EB)可特异地与双链DNA嵌合产生荧光反应的特性,建立了细胞毒效应的DNA荧光测定法。本法的主要特点是通过测定效应细胞和靶细胞作用后残留靶细胞DNA的荧光强度和对照靶细胞的DNA荧光强度,分析效应细胞对靶细胞的杀伤效应。研究结果表明,人外周血淋巴细胞与人红白血病K562靶细胞按不同的效靶比例共同培养20小时后,未损伤的残留靶细胞DNA的荧光强度和对照靶细胞DNA的荧光强度的比值与效应细胞的杀伤效应呈负相关性。本文检测了34例正常人和30例恶性肿瘤患者外周血淋巴细胞的NK细胞活性,其平均值分别为51.96±6.62%和25.02±10.83%两者之间有非常显著的差异(P<0.01),表明用DNA荧光测定法检测NK细胞对K562靶细胞的杀伤活性具有较高的敏感性。     

实时定量PCR检测正常人外周血T细胞和胸腺细胞中sjTRECs水平

目的了解正常人外周血T细胞和胸腺细胞中信号结合T细胞受体删除 DNA环(sjTRECs)的含量,从而推测正常人中幼稚T细胞的含量和胸腺的输出功能. 方法利用实时定量PCR和TaqMan方法检测11例正常人外周血单个核细胞、7例儿童和3例成人胸腺细胞DNA中sjTRECs的水平. 结果正常人中sjTRECs含量分别为8.83±4.81/1000个外周血单个核细胞;27.31±3.23/1000个成人胸腺细胞和170 .29 ±59.52/1000个儿童胸腺细胞. 结论 sjTRECs水平与年龄有关,正常人外周血中每1000个单个核细胞中约含4.5个幼稚T细胞.     

消化道肿瘤浸润淋巴细胞的提取、培养及表型分析

用机械分离、酶解聚和非连续密度梯度离心方法从28例消化道肿瘤制取肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)单细胞悬液。每克湿重瘤组织细胞得率为20.78±9.82×10~6(6.09～78.40×10~6),淋巴细胞占67.29±11.78％。相同方法自17例肿瘤区域淋巴结中得到的细胞为38.08±17.42×10~6/每克淋巴结,淋巴细胞占82.08±8.48％。在含高浓度rIL-2中培养时、区域淋巴结淋巴细胞(RNL)增殖力最强,PBL的增殖反应发生最早,但扩增时间短。免疫荧光标记流式细胞仪分析,患者淋巴细胞CD4比例减少,CD8增加,CD4/CD8显著降低,CD25~+细胞增加。经rIL-2培养后,T细胞(CD2~+,CD3~+)增加,多数样本以CD8生长为主,对照组以CD4生长为主。CD25~+细胞逐渐增加。TIL、RNL、PBL中Tac抗原最高表达率分别达36.8％、44.2％、20.6％。     

肾移植术后使用环孢霉素患者抗感染免疫平衡的监测

作者对47例肾移植术后使用环孢霉素(CsA)患者的免疫状态同感染的关系进行了前瞻性研究,正常人外周血OKT3,OKT4,OKT8细胞值为71.50±7.29,50.87±6.05,26.52±4.84。OKT4/OKT8比值为1.95±0.20。移植术后OKT3,OKT4,OK-T8细胞值和OKT4/OKT8比值均明显下降;分别为38.15±18.42,20.60±10.19,17 35±9.84和1、19±0.25(P<0.01)。其中术后发生明显感染患者的OKT4细胞值和OKT4/OKT8比值较术后未感染组明显降低     

宫颈癌患者外周血T淋巴细胞及NK细胞的检测及其临床意义

为探讨宫颈癌患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞活性检测的临床意义,采用流式细胞仪测定宫颈癌患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞活性,以正常人作对照分析。结果表明,宫颈癌患者外周血CD3＋、CD3＋CD4＋、NK细胞数量及CD3＋CD4＋/CD3＋CD8＋比值较正常对照组均明显下降（P〈0.05）,而CD3＋CD8＋细胞水平显著升高。外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞数量的改变与宫颈癌临床病理分期有关,分期越晚,CD3＋细胞、CD3＋CD4＋细胞、CD3＋CD4＋/CD3＋CD8＋细胞比值及NK细胞数量越低,CD3＋CD8＋细胞水平越高;Ⅰ、Ⅱ期宫颈癌患者与Ⅲ、Ⅳ期患者之间有显著差异（P〈0.05）。实验结果提示,宫颈癌患者细胞免疫功能低下,且临床病理分期越晚,其免疫功能越低,检测T淋巴细胞亚群、NK细胞可用于宫颈癌患者的免疫监测。     

子宫内膜异位症患者γδ＋T细胞及NK细胞的功能分析

目的 分析子宫内膜异位症患者γδ＋T细胞和天然杀作细胞（NK）功能的变化,以及探讨患者腹腔液对正常人γδ＋T细胞细胞和自然杀伤细胞（NK）功能的影响。方法 采用免疫荧光细胞检测及细胞毒活性检测法,分析22例子宫内膜异位症患者外周血、腹腔液中γδ＋T细胞细胞及NK细胞的表型与功能。结果 子宫内膜异位症（疾病组）患者外周血、腹腔液中CD56^ 细胞与正常对照组相比较无明显差异,而疾病组腹腔液中的γδ＋T细胞及NK细胞的功能低于外周血及正常对照组。疾病组的腹腔液对正常人外周血γδ＋T细胞及NK细胞的功能具有负调节作用。结论 子宫内膜异位症患者的γδ＋T细胞及NK细胞的功能低下,处于被抑制状态,提示患者的腹腔液中,可能在γδ＋T细胞细胞及NK细胞的功能抑制因子。     

139例恶性肿瘤患者外周血自然杀伤细胞活性的研究

本研究采用细胞介导微量细胞毒测定法检测139例恶性肿瘤患者和355例健康个体外周血自然杀伤细胞(NK细胞)对用~(125)IUdR标记的K562靶细胞的细胞毒直接杀伤效应。结果表明,肿瘤患者NK细胞活性显著低于健康个体,其中,肝胆肿瘤和晚期肿瘤患者NK活性降低尤为显著,临床治愈者NK活性恢复到正常人水平。不同临床阶段肿瘤患者经过肿瘤手术切除以及药物加放射线治疗好转者NK活性均显著升高。健康个体随着年龄增长NK活性下降,说明非特异免疫监视能力减弱与肿瘤的发生、发展关系密切。     

慢性肺心病患者NK细胞活性及其对IL-2、IFN-γ的反应

本文检测30例慢性肺心病患者外周血NK细胞活性,并探讨重组人IL-2、IFN-γ在体外对患者NK细胞活性的影响。结果发现肺心病患者NK细胞活性明显低于正常对照组(p<0.01),且在急性加重期NK细胞活性下降更为显著,IL-2、IFN-γ在体外能明显提高肺心病患者的NK细胞活性。     

人类NK细胞年龄相关的变化2.某些亚群选择性增多

已经发现,多数健康老年人的外周血淋巴细胞在体外呈现较高的NK 活性,而对PWM 的增殖反应降低。NK 是一异质性群体,因而作者又进一步观察随年龄增大NK各亚群的变化。研究对象为124名健康志愿者(20～94岁),其中青年(<40岁)和老年(>80岁)平均年龄分别为28.4±0.5岁和84.8±0.8。常规分离外周血淋巴细胞、计数,然后用免疫荧光抗体Anti-Leu7和Anti-Leu-11a 检测,荧光显微镜计数各种细胞。~(51)Cr 释