MNNG所致大鼠腺胃癌过程中腺胃、胰CGRP阳性细胞的免疫组织化学研究

目的　探讨大鼠腺胃、胰CGRP阳性细胞与其腺胃癌发生、发展的关系。方法　用N甲基 -N’ -硝基 -N亚硝胍 (MNNG) 2 0mg/kg给大鼠灌胃 ,每天一次 ,连续 10天 ,以诱导大鼠腺胃癌 (大鼠腺胃异倍体形成 )。第 2 5周时 ,用流式细胞仪测定大鼠腺胃幽门粘膜细胞DNA异倍体形成 ,用免疫组织化学ABC法观察了大鼠腺胃、胰CGRP阳性细胞的免疫组织化学变化 ,并对以上结果进行定性、定位、定量分析以及统计学处理。结果　在MNNG所致大鼠腺胃癌 (腺胃异倍体形成 )的过程中 ,其腺胃、胰CGRP阳性细胞的免疫组织化学反应增强 (P <0 .0 5,P <0 .0 1)。结论　胃、胰CGRP阳性细胞可能与MNNG所制大鼠腺胃癌的发生有关     

亚硒酸钠对MNNG诱导Wistar大鼠胃癌形成过程中肥大细胞与VEGF的影响

目的　探讨亚硒酸钠对MNNG诱导Wistar大鼠胃癌形成过程中肥大细胞与VEGF的影响。方法　用MNNG(2 0mg/kg)给大鼠灌胃 ,每天一次 ,连续 10天 ,以诱导大鼠胃癌形成。观察到实验的第 4 3周 ,用HE染色、病理诊断和AB PAS反应方法比较了硒在MNNG诱导Wister大鼠腺胃癌形成过程中的作用 ,用 0 2 5 %甲苯胺蓝(toluidineblueTBpH6 4 )染色显示肥大细胞 ,并进行计数。用免疫组织化学SP法研究在此过程中VEGF蛋白表达 ,并对其结果进行定性、定位、图像分析。结果　饮水中加入 2mg/L和 4mg/L的亚硒酸钠加重胃粘膜的糜烂、出血 ,促进胃粘膜的肠上皮化生 (P <0 0 5 ) ,更有意义的是在MNNG诱癌过程中发生了浆膜下平滑肌瘤 ,而且亚硒酸钠可以增加平滑肌瘤的发生率。肥大细胞计数各组之间无显著性差异。免疫组织化学结果显示 :VEGF阳性产物呈棕黄色 ,广泛分布在胃粘膜全层 ,主要分布在胃腺细胞的胞质内。图像分析结果显示 :实验对照组比正常对照组VEGF的平均光密度 (MOD)略有增高 (P >0 0 5 ) ,加硒各组VEGF的MOD比实验对照组也略有增高 (P >0 0 5 )。结论　在MNNG诱导Wistar大鼠胃癌形成过程中 ,亚硒酸钠并不能预防肿瘤发生 ,其机制与胃壁内的肥大细胞和VEGF表达无明显相关性。     

大鼠实验性胃癌的凝集素亲合组织化学研究

本文应用花生凝集素(PNA)对17例正常大鼠胃粘膜以及MNNG诱发的22例大鼠腺胃胃癌和14例异型增生胃粘膜进行了亲合组织化学研究。正常大鼠胃粘膜表面上皮不结合PNA;胃底腺PNA结合阳性率为89.6％;幽门腺PNA结合阳性率是17.6％,弥漫分布于腺上皮胞浆内;从界嵴循胃底腺至胃窦幽门腺的顺序观察,PNA结合反应显示逐渐减弱趋势;胃底腺颈、体和底部细胞的PNA结合反应也显示逐渐减弱,大鼠腺胃幽门部胃癌及异型增生腺体的PNA阳性率比正常胃粘膜的相应部位高,PNA结合反应主要沿癌变腺体的腔膜面分布或定位子细胞核上区。本实验结果表明大鼠正常胃粘膜PNA受体的分布具有一定的规律性,大鼠实验性胃癌模型表现有人类胃癌相似的病理生物学特征。     

中药胃康宁对实验性胃癌PCNA、p53蛋白表达的干预作用

:【目的】了解胃康宁对大鼠实验性胃癌的防治作用及其可能的机制。【方法】Wistar雄性大白鼠 5 0只 ,用N 甲基 N' 亚硝基 N 硝基胍 (MNNG)限期饲饮法诱导大鼠腺胃发生腺癌 ,大鼠分为三组 :阳性对照组、胃康宁 1组 (WKN 1,防癌模型 )、胃康宁 2组 (WKN 2 ,治癌模型 ) ,用光镜、电镜观察大鼠胃粘膜细胞恶性表型 ,用免疫组化法观察增殖细胞核抗原 (PC NA)、突变型 p5 3蛋白表达。【结果】胃康宁能阻止大鼠胃粘膜细胞核异形性、胞核浓染、核浆比增大等恶性表型 ,能降低PC NA和突变型p5 3蛋白表达 (与对照组比较 ,WKN 1组P <0 0 0 1,WKN 2组P <0 0 0 1)。【结论】胃康宁对大鼠实验性胃癌具有良好的防治作用 ,此作用与降低PCNA、p5 3蛋白表达有关。     

新疆黄牛胃肠胰(GEP)系统中5种免疫活性内分泌细胞的分布及形态

应用 ABC 免疫组织化学方法对新疆地区黄牛的胃肠胰(GEP)系统中的5种免疫活性内分泌细胞的分布、密度和形态学进行了细微研究。其中包括胃泌素、胰高血糖素、内啡肽,抑胃多肽,5—羟色胺等免疫活性内分泌细胞。其中5—羟色胺免疫活性内分泌细胞在黄牛整个胃肠道均有分布;胰高血糖素免疫活性细胞不同程度分布在除升结肠外的所有胃肠道中;胃泌素免疫活性细胞则存在于胃及十二指肠前、中段;内啡肽免疫活性细胞仅在除十二指肠前段、盲肠和主肠中的其它肠段中见到;抑胃多肽免疫活性内分泌细胞则仅见于小肠。5种免疫活性内分泌细胞的形态大致相同,它们随所在部位不同而呈长梭形、锥形或不规则形,并以细胞顶部胞突伸向腺腔或以基底部胞突伸向旁邻细胞和基膜方向。胰中只见到5—羟色胺和胰高血糖素免疫活性阳性反应,这2种阳性细胞主要分布于胰岛上,偶而在胰腺腺泡之间有见,其形态不规则,都缺少较长的细胞突起。     

大鼠实验性胃癌菜豆凝集素亲合组织化学研究

本文采用ＡＢＣ亲合组织化学技术研究了５３例Ｗｉｓｔａｒ大鼠胃粘膜腺上皮的菜豆凝集素（ＰＨＡ）受体的分布，其中正常大鼠胃粘膜１７例，腺胃胃癌２２例，异型增生１４例。结果显示大鼠胃粘膜表面上皮不结合ＰＨＡ，胃底腺与幽门腺的结合阳性率各为８９．８％与２３．５％。结合反应从界嵴循胃底腺至胃窦幽门腺、从胃底腺的颈部到体部再到底部均呈逐渐减弱趋势，而幽门腺的颈部和体部腺上皮ＰＨＡ反应强度高于腺底部细胞。大鼠腺胃幽门部胃癌及异型增生腺体的结合阳性率及阳性强度均高于相应部位的正常胃粘膜，且阳性主要定位于癌变腺体的腔膜面或核上区胞浆。结果表明，大鼠正常胃粘膜ＰＨＡ受体的分布有一定的规律性，大鼠实验性胃癌表现有与人类胃癌相似的病理生物学特征。     

颅脑损伤大鼠胰岛素细胞、生长抑素细胞和血糖含量的变化

目的　探讨脑损伤后大鼠胰岛素细胞 (B细胞 )、生长抑素细胞 (D细胞 )及血糖含量的变化。方法　采用落体法致大鼠脑损伤 ;伤后 2 4h断头处死 ,用免疫组织化学和图像分析方法观察脑损伤后大鼠胰岛B、D细胞的变化 ,用生化分析仪测定血糖含量。结果　与对照组比较 ,脑损伤大鼠胰岛B细胞数量减少 ,平均光密度减弱 (P <0 .0 5 ) ,胰岛D细胞数量增多 ,平均光密度增强 (P <0 .0 5 ) ,血糖升高 (P <0 .0 1)。结论　脑损伤大鼠胰岛B细胞分泌胰岛素功能减弱 ,胰岛D细胞分泌生长抑素的功能增强     

MNNG诱发大鼠腺胃粘膜癌变过程的形态定量研究

目的：探索大鼠腺胃正常粘膜与异型增生和腺癌的形态定量参数指标,探讨大鼠实验性胃癌与人类胃癌形态变化的异同性。方法：利用HPIAS－1000型图象分析系统对大鼠腺胃正常粘膜与由MNNG诱发粘膜异型增生及腺癌进行形态定量研究。结果：大鼠腺胃粘膜与不典型增生细胞核八项形态定量指标经统计学处理比较：其中核面积,核周长,核等效直径,核体积,核长径,核形状因子六项指标（P＜0．01）;核短径、核长短径比（P＞0．05）差异无显著性。大鼠腺胃异型增生与腺癌细胞核八项形态定量指标比较,核面积,核周长,核等效直径,核体积,核长径,核形状因子六项形态定量参数指标差异有高度显著性。结论：大鼠腺胃粘膜癌变与人类胃粘膜癌变有同样的形态学改变过程。     

乙酰胆碱、胃泌素、生长抑素对大鼠胃酸分泌调节的实验形态学研究

目的 探讨神经-内分泌改变对胃酸分泌的影响及致胃粘膜损伤的机制。方法 Wistar大鼠15只,正常对照组、应激组、胆碱酯酶抑制剂处理组各5只。应激组采用寒冷捆缚刺激,实验前后分别测定血压及胃酸变化。用药组静脉注射胆碱酯酶抑制剂,最后切断胃迷走神经,测胃酸三次;分别处死动物后在胃底、胃小弯侧胃体、胃幽门及十二指肠取材固定,应用组织化学方法显示胆碱酯酶阳性神经成分,应用免疫组化PAP法检测胃泌素细胞(G细胞)和生长抑素细胞(D细胞),切片在光镜下对比观察。结果 用药组胆碱酯酶AchE活性降低,乙酰胆碱降解减少,胃泌素释放增多使胃酸及生长抑素相应释放增多,G、D细胞消耗性减少。迷走神经干切断后,胃神经节细胞及神经干数量减少,胃泌素释放减少,胃酸、生长抑素释放亦相应降低。应激组胃神经节细胞及神经干呈强阳性染色,胃酸、胃泌素(Gas)、生长抑素(SS)释放增多,G、D细胞消耗性减少。结论 迷走神经兴奋与胃泌素、生长抑素浓度增加呈正相关,副交感神经刺激胃酸分泌;心理应激致植物神经功能紊乱在胃粘膜损伤中有很重要的作用,胃酸是应激性胃粘膜损伤发展的重要原因之一。     

热盐水致大鼠萎缩性胃炎胃粘膜组织细胞增殖与凋亡的实验研究

目的　研究热盐水灌胃导致的大鼠萎缩性胃炎胃粘膜组织中的凋亡细胞及增殖细胞表达状态 ,以探讨长期热咸饮食与慢性萎缩性胃炎发生的关系。方法　采用脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口末端标记 (TUNEL)技术及免疫组织化学染色技术。细胞凋亡时DNA含量分析采用流式细胞检测技术。结果　①TUNEL检测细胞凋亡显示 :在热盐水所致的大鼠萎缩性胃炎中凋亡细胞数明显增多 ,在粘膜全层均可见到 ,呈弥漫性分布。萎缩性胃炎中凋亡细胞指数显著高于正常大鼠胃粘膜 (P <0 .0 5) ;②免疫组化法检测显示 :增殖细胞核抗原 (PCNA)在热盐水灌胃所致的萎缩性胃炎中的表达率显著高于正常胃粘膜 (P <0 .0 5) ;③流式细胞检测显示 :萎缩性胃炎时 ,在G0 /G1峰前可见一个亚G0 /G1峰 ,也即凋亡细胞峰出现 ,而在正常胃粘膜时未显示亚G0 /G1峰。结论　热盐水灌胃可导致大鼠胃粘膜组织细胞增殖和细胞凋亡异常 ,其在热盐水所致的大鼠萎缩性胃炎发生中起重要作用。     

MNNG诱导大鼠胃癌模型的建立

目的 通过构建动物模型，为进一步研究胃癌转移及其生长过程中的一系列生物学表现提供实验材料。方法 根据饲养的不同阶段在饮水和饲料中添加MNNG喂养Wistar雄性大鼠，定期取材，HE染色，观察鉴定。结果 MNNG喂饲24周可见胃黏膜内癌；40周可见黏膜下层及肌层浸润癌。结论 阶段口服MNNG混合法可成功诱发Wistar大鼠胃腺癌。     

亚硒酸钠对大鼠胃癌形成和胰岛 B、D细胞的影响及机制

目的探讨亚硒酸钠对大鼠胃癌形成和胰岛B、D细胞的影响及机制.方法用MNNG(20 mg/kg)给大鼠灌胃,每天一次,连续10天,以诱导大鼠胃癌形成.用HE染色与AB-PAS染色方法观察硒对MNNG诱导Wistar大鼠胃癌形成的影响;用免疫组织化学SP法显示胰岛内胰岛素细胞(B细胞)、生长抑素细胞(D细胞),并对其结果进行图像分析和统计学处理.结果饮水中加入2 mg/L和4 mg/L的亚硒酸钠加重了胃粘膜的糜烂、出血,促进了胃粘膜的肠上皮化生,高硒组比实验对照组(P<0.01),出现了浆膜下平滑肌瘤,增加了平滑肌瘤的发生率.B细胞的面数密度(NA)各组之间没有显著性差异(P>0.05),但平均光密度(MOD)低硒组比正常对照组和实验对照组显著升高(P<0.01).D细胞的面数密度实验对照组和加硒各组比正常对照组显著降低(P<0.01),但是MOD值各组之间没有显著性差异(P>0.05).结论在MNNG所致胃癌的过程中,饮水中加入2 mg/L、4 mg/L亚硒酸钠不能降低大鼠胃癌的发生;其机制可能与亚硒酸钠的胰岛素模拟作用有关.     

MNNG诱发大鼠腺胃粘膜不典型增生与 高分化腺癌形态定量分析

目的探寻大鼠腺胃粘膜不典型增生与高分化腺癌的形态定量参数指标,探讨大鼠实验性胃癌与人类胃癌形态定量指标的异同性。方法利用HPIAS-1000型图象分析系统对以MNNG诱发的大鼠腺胃粘膜不典型增生及高分化腺癌进行形态定量研究。结果大鼠腺胃粘膜不典型增生与高分化腺癌8项形态定量参数指标经统计学处理比较,其中核面积、核周长、核等效直径、核体积、核长径,核形状因子8项形态定量指标（P<0.01）有高度显著性差异,而核短径和核长短径比值（P>0.05）无显著性差异。结论这些形态定量参数指标对区别大鼠腺胃粘膜不典型增生与高分化腺癌有一定价值,形态定量参数指标也是随着癌前病变、癌的顺序逐渐递增;大鼠腺胃粘膜上皮癌变与人类胃粘膜上皮癌变有着相似的形态学变化过程。     

一种新的与细胞分化相关的基因在不同组织及细胞系中表达与定位

为改进胃癌模型的制作,在高盐饲料条件下,比较了小剂量甲基硝基亚硝基胍(MNNG)持续给药及高剂量灌胃在诱发大鼠胃癌的类型、造模周期及成功率上的差异。将66只大鼠随机分三组,1组给予含盐8％的高盐饲料20周,其中前17周同时自由饮用添加100 mg/LMNNG的消毒自来水;2组先给予正常饮食饮水,于造模第1和第14天按200 mg/kg给予MNNG灌胃,然后在灌胃第3天起予每周用饱和氯化钠灌胃两次持续三周共6次,第4周起给予高盐饲料,正常饮水直至20周末;1、2组均于第21周起改为正常饮食饮水,第35周末处死取材,其中1组在第20周时取10只处死取材;3组大鼠给予正常饮食,35周一并处死。所有标本常规制石蜡切片HE染色。结果显示,高盐饲料加小剂量MNNG持续给药能较特异地诱导大鼠胃腺癌,诱癌周期短,仅35周,诱癌成功率高达90％,肿瘤多位于胃窦小弯侧及幽门部,大剂量MNNG灌胃加高盐饲料可较特异地诱发大鼠前胃鳞癌,诱癌率为68.4％。因此高盐饲料配合小剂量持续给药是较好的诱导胃腺癌的造模方法。     

MNNG所致大鼠胃粘膜癌变过程中肾上腺皮质组化研究

目的　探讨大鼠胃粘膜癌变过程中肾上腺皮质功能的变化。方法　用甲基硝基亚硝基胍（ＭＮＮＧ）给断乳１ｗｋ 的雄性Ｗｉｓｔａｒ 大鼠,连续灌胃１０ ｄ 制成胃癌模型。用组织化学和图像分析方法观察肾上腺皮质的变化。结果　胃粘膜癌变大鼠肾上腺皮质束状带和网状带细胞内脂滴含量降低（ Ｐ＜ ０．０１） ,３β－ 羟基类固醇脱氢酶（３β－ ＨＳＤ） 的活性增强（Ｐ＜０ ．０１）。结论　在ＭＮＮＧ诱发大鼠胃粘膜癌变过程中,肾上腺皮质类固醇激素,特别是糖皮质激素的合成增强。     

HGPRT基因突变技术在检测化学诱变剂中的应用

本研究用Ｎ－甲基Ｎ＇－硝基亚硝基胍（ＭＮＮＧ）和苯并芘（Ｂ（ａ）Ｐ）诱导了中国仓鼠Ｖ７９细胞毒性和次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶（ＨＧＰＲＴ）基因突变。结果表明，ＭＮＮＧ（０．７３５ｍｇ，Ｌ－１）和Ｂ（ａ）Ｐ（１ｍｇ·Ｌ－１）引起细胞存活率分别为７４．１％和７７．８％。阴性对照如空白对照、Ｓ９对照和溶剂对照的细胞自发突变频率低于０．４３×１０－５。ＭＮＮＧ和Ｂ（ａ）Ｐ＋Ｓ９诱发Ｖ７９细胞６－巯基鸟嘌呤抗性ＨＧＰＲＴ突变频率分别为１．１７×１０－５和１．３４×１０－５，比溶剂对照高４．９０和３．３５倍（Ｐ＜０．０１和Ｐ＜０．０５）。提示ＭＮＮＧ和Ｂ（ａ）Ｐ对Ｖ７９细胞呈细胞毒性和遗传毒性效应。     

慢性萎缩性胃炎胃窦G细胞计数和分泌动态

对27例萎缩性胃窦炎和13例萎缩性胃体炎进行胃窦G细胞计数,血清和胃窦组织胃泌素浓度测定研究,萎缩性胃窦炎初期先有胃窦G细胞数减少,随着病变加重,G细胞数进一步减少,出现血清和胃窦组织胃泌素浓度降低,且与病变程度成比例,因此临床上血清胃泌素检测可作为了解胃窦萎缩程度的一个重要指标。萎缩性胃体炎高胃泌素血症原因是胃窦G细胞的增生或/和分泌功能亢进,后者似更重要。同时伴有胃窦萎缩者,推测有十二指肠G细胞增生和分泌亢进因素参与。     

罗格列酮通过下调环氧化酶-2、血管内皮生长因子的表达预防MNNG诱导大鼠胃癌发生

目的研究证实过氧化酶体增殖因子活化受体γ（PPAR-γ）配体罗格列酮（RSG）具有预防化学致癌剂N-甲基-N’-硝基-亚硝基胍（MNNG）诱导大鼠胃癌发生的作用,本研究拟探讨罗格列酮预防大鼠胃癌形成的可能机制。方法采用RT—PCR及免疫组化法检测罗格列酮处理后大鼠胃癌组织环氧化酶-2（COX-2）、血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）mRNA及蛋白的表达。结果MNNG诱癌组14例大鼠胃癌组织VEGF、COX-2mRNA的表达明显高于癌旁组织（P〈0．01）,而MMP-9的表达在大鼠胃癌及癌旁组织中差异无统计学意义（P〉0．05）,RSG处理组（15例）大鼠胃癌组织VEGF、COX-2mRNA的表达明显低于MNNG诱癌组大鼠胃癌组织,免疫组化显示MNNG诱癌组大鼠胃癌组织COX-2阳性物质主要分布在癌细胞胞浆或沿核膜周边,在间质的血管内皮细胞、成纤维细胞及单核细胞中亦可见阳性表达;VEGF阳性细胞主要位于癌细胞胞浆内,血管内皮细胞也有阳性表达。罗格列酮处理后大鼠胃癌组织的COX-2阳性细胞分布与MNNG诱癌组胃癌组织相似,而VEGF阳性细胞主要位于癌细胞胞浆内,血管内皮细胞未见明显VEGF表达。结论罗格列酮可下调大鼠胃癌组织COX-2及VEGF的表达,促进肿瘤细胞凋亡、减少肿瘤血管生成可能是罗格列酮预防大鼠胃癌发生的机制之一。