杀菌性/通透性增加蛋白(BPI)模拟肽体内拮抗内毒素作用的研究

本试验观察杀菌性/通透性增加蛋白(BPI)模拟肽对内毒素(LPS)攻击小鼠死亡的保护作用。以一个LD_(50)为LPS(20mg·kg~(-1))静脉注射攻击小鼠,分别于LPS攻击后20s内静脉注射不同剂量的BPI模拟肽;于LPS攻击前及攻击后不同时间内分别静脉注射5mp·kg~(-1)和10mg·kg~(-1)的BPI模拟肽,以观察BPI模拟肽对LPS攻击所致小鼠死亡的保护作用、BPI模拟肽对LPS攻击小鼠死亡保护作用的时效关系及BPI模拟肽对LPS攻击小鼠死亡的预防作用。结果表明BPI模拟肽对LPS所致小鼠死亡有明显的保护作用及预防作用,并有一定的量效关系及时效关系。从而可见BPI模拟肽,不仅保留了BPI特异性中和LPS的特性,而且对LPS攻击小鼠具有     

杀菌性/通透性增加蛋白模拟肽(BNEP)体内外中和内毒素的实验研究

目的 :观察杀菌性 /通透性增加蛋白模拟肽(BNEP)在体内、体外中和内毒素的能力。方法 :1 .BNEP与LPS结合的亲和力的测定 :应用生物传感器测定BNEP与LPS及LPS的活性中心LipidA结合的亲和力。 2 .体外中和作用 :将不同浓度的BNEP、多粘菌素B与定量的LPS 3 7℃孵育 3 0min ,分别应用生物传感器及动态比浊法鲎试验检测孵育后混合溶液中的LPS残余量。 3 .体内中作用 :NIH小鼠 1 5只随机分为生理盐水 (NS)、LPS、BNEP组 ,每组 5只。通过尾静脉给药 ,LPS组 :E .coliO5 5 .B5按 1 0mg/kg +等量生理盐水 ;BNEP组 :按BNEP 1 0…     

猪源杀菌性/通透性增加蛋白(BPI)体内外生物活性的研究

革兰氏阴性杆菌感染能导致机体严重的病理改变,包括发热、低血压、休克、DIC、ARDS、MOF甚至死亡。作为革兰氏阴性菌外膜主要成分的内毒素(LPS),近来被认为是导致革兰氏阴性菌脓毒症中最主要的介质,内毒素可触发一系列机体效应分子的释放(包括TNF、IL—6、IL—1等),这些效应分子可介导内毒素血症的致死效应。虽然有效的抗生素可杀灭大部分细菌,但抗生素在杀灭细菌的同时也促使内毒素的释放,使得革兰氏阴性菌脓毒血症的治疗更为棘手。因此寻找一种既能杀菌又能中和内毒素的制剂显得越发重要。杀菌性/通透性增加蛋白(BPI)就是一种既能杀菌又能中和内毒素的蛋白质,它存在于人、兔、牛等哺乳动物中性粒细胞(PMN)的嗜天青颗粒中。     

杀菌性/通透性增加蛋白的研究进展

内毒素是革兰氏阴性菌败血症、感染性休克发生和发展的主要因素,因此,抗内毒素治疗是治疗败血症、感染性休克的重要环节.杀菌性/通透性增加蛋白有较强的杀菌和中和内毒素作用,在抗内毒素治疗中有很好的应用前景.     

杀菌性/通透性增加蛋白的基础及临床研究进展

杀菌性/通透性增加蛋白(Bactericidal/permeabili-ty increasing protein,BPI)存在于人或哺乳动物中性粒细胞(PMN)嗜天青颗粒中,是机体抵抗细菌侵袭的具有抗菌作用的多肽家族的重要一员。需要说明的是尽管内源性抗菌物质存在于从原核细胞、植物和昆虫到哺乳动物的整个进化过程中,但是哺乳动物的抗菌物质只有少数在体内实验中证实确实有效。正因为     

小鼠BPI N端功能片段(muBPI_(25)蛋白)体外杀菌和中和内毒素作用研究

目的:建立胞内杀菌和体外中和内毒素实验模型,检测muBPI25目的蛋白对胞内寄生菌的抑杀作用和对内毒素的中和作用。方法:将pcDNA3.1(+)-muBPI36-259质粒导入RAW264.7细胞,用胞内寄生G+/G-菌感染上述细胞建立muBPI25目的蛋白胞内杀菌实验模型;将pSecTag2B-muBPI36-259与双荧光素酶报告基因质粒共转染RAW264.7细胞,建立体外检测muBPI25蛋白中和内毒素实验模型。结果:胞内杀菌实验模型证实muBPI25目的蛋白对G-伤寒杆菌具有抑杀作用;中和内毒素实验模型证实muBPI25目的蛋白对内毒素具有中和作用。结论:首次证实小鼠BPI N端功能片段,即muBPI25目的蛋白对G-菌具有抑杀作用,对其裂解产物内毒素具有中和作用。     

抗菌抗内毒素多肽拮抗内毒素作用的体内研究

目的：观察抗菌抗内毒素多肽对内毒素(LPS)攻击大鼠的保护作用。方法：以一个LD50的LPS(10mg/kg^-1)攻击大鼠,于LPS攻击后20秒内静脉注射抗菌抗内毒素多肽(5mg/kg^-1),在不同时相点采血,并测定大鼠血液中的TNT-α、IL-6浓度,以确定抗菌抗内毒素多肽对LPS攻击大鼠的保护作用。结果：抗菌抗内毒素多肽可明显降低LPS攻击大鼠血液中TNF-α、IL-6浓度。     

抗菌抗内毒素多肽小鼠体内拮抗内毒素作用的研究

目的：观察抗菌抗内毒素多肽对内毒素(LPS)攻击小鼠死亡的保护作用。方法：以一个LD50的LPS(20mg/kg)静脉注射攻击小鼠,分别于LPS攻击后20S内静脉注射不同剂量的抗菌抗内毒素多肽;于LPS攻击前及攻击后不同时间内分别静脉注射5mg/kg和10mg／kg的抗菌抗内毒素多肽,以观察抗菌抗内毒素肽对LPS攻击所致小鼠死亡的保护作用、抗菌抗内毒素肽对LPS攻击小鼠死亡保护作用的时效关系及抗菌抗内毒素肽对LPS攻击小鼠死亡的预防作用。     

BPI功能区合成肽体外杀菌能力的研究

本文研究BPI功能区合成肽体外杀菌能力。方法采用大肠杆菌J5、绿脓杆菌PA103,稀释成10~5cfu/ml,加入不同浓度的BPI合成肽。比较pH、菌量、血清蛋白对其杀菌能力的影响,同时观察细菌形态变化。结果表明BPI功能区片段与细胞作用0.5～2h杀菌力最强。酸性条件下杀菌活性增强;碱性条件下减弱;细菌浓度愈低杀菌力愈强;杀菌活性随血清浓度升高而增强。BPI合成肽与细菌作用5分钟,外膜出现轮廓模糊,30分钟见细菌裂解。结论:BPI功能区片段与BPI杀菌能力一致,其杀菌活性可能是通过与细菌外膜结合而发挥作用。     

杀菌性通透性增强蛋白对大肠杆菌脓毒症小鼠的保护作用

本文观察了ＢＰＩ对大肠杆菌脓毒症小鼠预后的影响及其可能机制。研究结果显示〉ＢＰＩ治疗组动物７２小时存活率明显高于生理盐水对照组；注菌后０．５，１ｈ，ＢＰＩ组血清内毒素水平明显低于生理盐水对照组；注菌后１．５ｈ，ＢＰＩ组血清ＴＮＦα峰值也明显低于ＮＳ对照组；但两组间血液细菌计数在注菌后０．５，１．５和３ｈ均明显差异。     

一种合成的新型内毒素结合肽突变体的体内外拮抗内毒素效应初步研究

目的设计构建新型内毒素结合肽突变体(mutant of endotoxin binding peptide,mEBP),并研究其体内外拮抗内毒素效应。方法采用F-moc固相合成法获得内毒素结合肽(endotoxin binding peptide,EBP)及其突变体mEBP;CCK-8法检测mEBP对RAW264.7细胞增殖的影响;ELISA法检测mEBP对内毒素(lipopolysaccharide,LPS)诱导的RAW264.7细胞分泌TNF-α和IL-6的影响;Western blot法检测mEBP对LPS诱导的RAW264.7细胞表达p-p38 MAPK的影响;中性红法测定mEBP对LPS诱导的RAW264.7细胞吞饮功能的影响。复制烧伤合并内毒素血症小鼠模型;检测mEBP对建模后6 h小鼠血浆中TNF-α、ALT和AST浓度的影响;检测mEBP对模型小鼠48 h生存率的影响。结果 mEBP无可见的细胞毒性;mEBP可降低LPS诱导的RAW264.7细胞分泌TNF-α和IL-6(P<0.05);抑制p-p38 MAPK信号通路的激活;抑制RAW264.7细胞的吞饮功能(P<0.01);mEBP预处理可明显降低烧伤合并内毒素血症模型小鼠血浆中的TNF-α、ALT和AST浓度(P<0.05),提高模型小鼠48h生存率。结论 mEBP和EBP均具有明显的拮抗内毒素活性,其中mEBP拮抗活性更强。     

杀菌/通透性增强蛋白对腹腔感染脓毒症大鼠的治疗作用

目的：探讨杀菌／通透性增强蛋白（ＢＰＩ）对腹腔感染脓毒症大鼠的治疗作用及其机制。方法：腹腔感染脓毒症模型采用盲肠结扎穿孔法,分别在盲肠结扎穿孔后即刻和１２ｈ腹腔内注射ＢＰＩ各２．５ｍｇ／ｋｇ或等容量生理盐水,血浆内毒素采用鲎试验显色定量测定法。结果：９１）ＢＰＩ治疗组动物存活时间明显长于生理盐水组;（２）ＢＰＩ治疗组动物平均动脉压,左室收缩压,心室等容收缩压,左室压力最大上升和下降速率等虽有一定下     

杀菌/通透性增加蛋白N端片段在原核细胞中的表达及其临床应用的初步探讨

目的：构建编码杀菌，通透性增加蛋白(BPI)N端片段基因原核表达载体，并在大肠杆菌中表达重组蛋白。方法：采用RT-PCR技术，从人外周血中性粒细胞的总RNA中扩增BPI蛋白N端片段cDNA编码区基因，DNA序列分析鉴定；将测序证实的BPI蛋白N端片段编码区基因PCR产物直接克隆于原核表达载体pBAD／Thio-TOPO中，再次测序鉴定；通过在大肠杆菌中以L-阿拉伯糖进行诱导表达，然后以SDS-PAGE、Westerm blot对表达的重组蛋白进行分析。重组蛋白经初步纯化处理后，进行生物学活性检测。结果：RT-PCR扩增出一个835bp的DNA片段，DNA测序表明为所需目的基因。限制性内切酶酶切和DNA序列分析表明，BPI蛋白N端片段正确克隆到大肠杆菌表达载体pBAD／Thio-TDPO中，SDS-PAGE和Wester blot结果表明在大肠杆菌中成功表达了BPI蛋白N端片段。对该蛋白进行初步活性测定显示其可与BPI单克隆抗体结合并具有杀灭耐药铜绿假单胞菌的活性。结论：成功构建了BPI蛋白N端片段编码区基因原核表达载体，并在大肠杆菌中进行了表达，表达的重组蛋白具有一定的生物活性。     

杀菌/通透性增加蛋白基因Glu216Lys多态性与中国汉族人群炎症性肠病无关

 目的：探讨杀菌/通透性增加蛋白（BPI）基因Glu216Lys多态性与中国汉族人群炎症性肠病（IBD）发病及各种临床特征的相关性。方法：纳入286例确诊的汉族IBD患者［173例克罗恩病（CD）和113例溃疡性结肠炎（UC）］及年龄、性别匹配的332名健康人进行病例对照研究。采用引物介导的限制性分析PCR方法检测基因分型;应用单因素分析和Logistic回归模型分析该位点多态性对IBD发病及临床特征的影响。结果：CD和UC病例组与正常对照组间Glu216Lys基因型和等位基因频率差异均无统计学意义（均P>0.05）;进一步分析Glu216Lys与CD和UC的临床特征关系,差异均无统计学意义（P>0.05）。结论：BPI基因 Glu216Lys多态性与中国汉族人群IBD发病和临床特征无明显相关。IBD的遗传易感性具有种族差异性。     

内毒素致兔急性肺损伤及1,6-二磷酸果糖的拮抗作用

目的：研究内毒素（ET）致大耳白兔急性肺损伤（ALI）过程中的氧化应激反应；探讨1，6-二磷酸果糖（FDP）对氧化损伤的拮抗作用。 方法： 大耳白兔随机分为对照组（A组）、ET致伤组（B组）、ET致伤＋FDP干预组（C组）。经静脉一次性注射ET复制兔ALI模型。各组分别于0 h、0.5 h、2 h、4 h及6 h等不同时点测定呼吸频率、心率、血压、血气分析和血常规；于6 h点处死动物，测定肺组织中脂质过氧化物（LPO）的含量和超氧化物歧化酶（SOD）的活性，并行肺组织病理学观察。 结果： 静注ET后，B组动物与A组相比较，出现呼吸频率和心率增快、血压和血氧分压降低、外周血白细胞（WBC）计数下降、肺组织LPO含量增高及SOD活性降低，肺组织出现明显的病理损害。C组动物肺损伤轻于B组，相应指标好于B组。 结论： 氧化应激反应能力的相对不足和氧化损伤在ALI发病过程中起了重要作用；FDP可抑制氧化损伤、改善氧化应激反应能力，对ET所致的兔ALI有一定的拮抗作用。     

内毒素结合肽模拟肽P11的体外活性研究

目的 对从噬菌体展示随机肽库筛选获得的内毒素结合肽模拟肽进行体外拮抗内毒素活性鉴定.方法 采用FMOC固相合成法化学合成内毒素结合肽模拟肽P11,并进行拮抗内毒素活性和细胞毒性测定.结果 亲和ELISA检测显示P11与LPS有较高的亲和力,通过生长曲线和流式细胞学分析细胞周期显示P11对人U937细胞生长无明显影响.流式细胞检测显示P11呈剂量依赖性抑制FITC-LPS与人外周血单核细胞(PBMC)结合.细胞因子生成抑制实验显示10 μg/ml P11可显著抑制LPS诱导PBMC和U937细胞TNF-α mRNA转录和蛋白表达.结论 体外活性鉴定结果表明化学合成的模拟肽P11可抑制LPS诱导的炎性反应.     

小鼠杀菌性或通透性增强蛋白片段BPI_(889-1497)在大肠杆菌的表达及其抗血清的制备

<正>英国科学家Weiss等[1]1978年首次发现并描述了杀菌性或通透性增强蛋白(bactericidal/permeability increasing protein,BPI)。成熟的BPI蛋白由456个氨基酸组成,相对分子质量(Mr)大约56 000。BPI蛋白最早在人中性粒细胞的嗜苯胺蓝颗粒中分离得到[2]。研究表明,BPI在人中性粒细胞中占较大比重,其含量可以达到细胞总蛋白的0.15%～1.00%,     

杀菌/渗透增强蛋白功能区抗菌肽与内毒素亲和性的SPR技术检测

目的:研究杀菌/渗透增强蛋白(BPI)不同功能区抗菌肽与内毒素(LPS)结合的能力.方法:设计、合成来自杀菌/渗透增强蛋白N端不同功能区的3段抗菌肽,分别为BPI22-36、BPI85-99和BPI147-161,将其固定于CM5蛋白质芯片上,使用表面等离子共振(SPR)仪检测3种抗菌肽与LPS和类脂A(Lipid A)相互作用的情况.结果:3种抗菌肽中,BPI147-161与LPS和Lipid A结合的能力最强,BPI85-99次之,但BPI22-36与其不结合;BPI147-161与Lipid A的亲和常数KA为1.12×106L/mol,相比,多黏菌素B(PMB)的亲和常数KA为5.58 ×106L/mol.结论:来自杀菌/渗透增强蛋白的抗菌肽BPI147-161能有效地中和内毒素,这可能为败血症休克的治疗提供一种新的策略.     

原发性胆汁性肝硬化PDC-E2特异性T细胞拮抗性模拟肽的筛选

目的筛选可拮抗原发性胆汁性肝硬化（PBC）中PDC-E2165-174特异性CTL功能的模拟肽.方法以自身抗原表位PDC-E2165-174（LLAEIETDKA）为原型肽,采用丙氨酸突变扫描法,通过亲和力分析及其对PDC-E2165-174特异性CTL细胞毒性和分泌细胞因子等功能的抑制效应,从中筛选拮抗性模拟肽.结果8条模拟肽中,5号位突变的模拟肽（I5A）显示与HLA-A＊0201分子高亲和力,5名PBC患者PDC-E2特异性CTL对其负载的T2细胞的杀伤率均小于10%,并且I5A也未能诱导PBC患者PDC-E2特异性CTL产生IFN-γ.在原型肽的存在下,I5A可抑制PDC-E2165-174 CTL细胞毒性和分泌IFN-γ,随着模拟肽浓度增加,抑制效应越强,在10 μmol/L浓度时可以明显抑制PDC-E2165-174 CTL的细胞毒活性和分泌IFN-γ的能力.结论模拟肽I5A（LIAEAETDKA）可能是PDC-E2165-174特异性CTL的一个拮抗性多肽,其抑制效应并不是其能竞争结合靶细胞上的HLA-A＊6201分子,而是对TCR的一种拮抗作用,为将来设计以TCR为基础的特异性免疫治疗提供实验依据.     

黄连对细菌内毒素解毒作用研究(摘要)

本文以细菌内毒素为材料,模拟临床急性感染性疾病的“热症”模型,观察黄连(Coptis chincnsis Fwnch)对细菌内毒素解毒作用,以探讨其“清热解毒”的药理基础。实验结果表明:一、对内毒素所致大鼠死亡有保护作用,当大鼠腹腔注射内毒素,36小时内可使动物死亡45.5％,在注射内毒素后立即口服黄连煎剂,则可保护动物无一支死亡。二、对内毒素中毒大鼠血象观察,动物在内毒索攻击后2小时白细胞总数下降,24小时白细胞总数骤增,48小时又开始下降。黄连组与对照组相比,24小时内有促进白细胞升高的趋势,而48小时又比对照组下降更显著接近正常。黄连对白细胞分类无明显影响。三、对内毒素中素动物糖代谢的影响:由于内毒素引起组织细胞酵解能力增强及加速肝糖元分解,导致