结肠粘膜活检标本中固有层单个核细胞的分离及表型分析

为改进从粘膜活检标本中分离固有层单个核细胞的方法，并行初步表型分析，从８例溃疡性结肠炎，５例正常人和２２例大肠癌患者各取１０块结肠粘膜进行尖检，比较消化分离各因素对细胞产量的影响，并以双色荧光流式细胞术分析淋巴细胞各亚群的变化。结果显示：溃疡性结肠炎组固有层单个核细胞产量达１０＾６个，为政常人组及大肠癌的２倍，各组细胞活力〉９５％；其中，Ｔ，Ｂ细胞百分比在三组间无统计学上的差异，而溃疡性结肠炎ＣＤ     

溃疡性结肠炎结肠粘膜固有层淋巴细胞亚型的分布特征及其作用

目的 探讨溃疡性结肠炎免疫学发病新观点。方法 应用抗T淋巴细胞（CD45RO）、抗B淋巴细胞（CD20）、抗T辅助淋巴细胞（OPD4）以及抗巨噬细胞（CD68）表面抗原的单克隆抗体,通过免疫组织化学技术,对50例溃疡性结肠炎患者结肠粘膜活检标本（32例活动期,18例非活动期）及5例对照组进行了淋巴细胞亚型分析。结果 T淋巴细胞及T辅助淋巴细胞的数量在溃疡性结肠炎活动期均高于非期及对照组（P＜0.01）,而固有层内B淋巴细胞的数量在3组之间无显著性差异（P＞0.05）;巨噬细胞的数量在活动期高于非活动期及对照组（P＜0.01）。结论 T淋巴细胞尤其是T辅助淋巴细胞及巨噬细胞的活化与性结肠炎的活动密切相关,说明细胞免疫在溃疡性结肠炎免疫发病机制蝇占有相当的比重,参与溃疡性结肠炎活动期结肠粘膜的损伤,并已成为其免疫调节网络中重要的组成成分。     

IL-12对炎症性肠病患者外周血和肠黏膜固有层淋巴细胞激活和炎症介质分泌的影响

目的:探讨IL-12对炎症性肠病患者外周血和肠黏膜固有层淋巴细胞激活和炎症介质分泌的影响。方法:收集并分离15例克罗恩病、21例溃疡性结肠炎和13例结肠镜检正常者(对照)外周血单个核细胞(PBMC)及肠黏膜固有层单个核细胞(LPMC),体外培养并用IL-12刺激,培养12h、24h、48h后,用流式细胞仪测PBMC或LPMCCD69表达情况;培养48h后,收集细胞培养上清液并用ELISA检测干扰素(IFN)-γ、IL-2和肿瘤坏死因子(TNF)-α的水平。结果:IL-12刺激后炎症性肠病患者外周血T细胞表达高水平的CD69。克罗恩病患者的PBMC和LPMCCD69表达水平及IFN-γ、IL-2和TNF-α分泌水平较溃疡性结肠炎和对照者明显增高(P<0.05)。结论:IL-12能直接刺激炎症性肠病患者外周血和肠黏膜固有层淋巴细胞激活,并产生大量促炎症介质。     

哮喘患者外周血CD4~+和CD25~+调节性T细胞的变化及意义

目的探讨CD4+、CD25+调节性T细胞在哮喘发病机制中的作用,为哮喘的临床治疗提供新方法和新思路。方法分离哮喘患者和正常人外周血单个核细胞(PBMC),用流式细胞仪分析CD4+、CD25+调节性T细胞表型及其在外周血单个核细胞中的比例。结果哮喘组外周血CD4+、CD25+调节性T细胞占T淋巴细胞的百分比为(4.2±1.5)%,对照组(8.5±2.6)%,哮喘组明显低于对照组(P<0.05),两组CD4+、CD25+调节性T细胞表面表达的活化表型CTLA-4和CD69无显著性学差异(P>0.05)。结论CD04+和CD25+调节性T细胞参与了哮喘的发生。     

溃疡性结肠炎组织中树突细胞的分布与TNF-α的表达

目的 :研究在溃疡性结肠炎组织中树突细胞的分布与TNF -α的表达 ,探讨溃疡性结肠炎的炎症免疫发病机制。方法 :收集 4 8例溃疡性结肠炎 ,5 0例大肠癌旁正常结肠粘膜组织标本 ,用免疫组化法检测肠粘膜内树突细胞的分布和TNF -α的表达。结果 :溃疡性结肠炎活动期树突细胞阳性率为 90 .6 0 % ,明显高于非活动期 (6 2 .5 % )和对照组 (30 .0 % ) ,组间比较P均 <0 .0 5。活动期TNF -α的阳性率为 87.5 % ,高于非活动期 (5 6 .3% )和对照组 (2 6 .0 % ) ,P均 <0 .0 5 ,树突细胞阳性率与TNF -α阳性表达呈正相关。结论 :树突细胞和TNF -α在溃疡性结肠炎肠粘膜组织中的阳性表达率 ,随疾病活动性增高 ,提示炎症免疫在溃疡性结肠炎发病机制中起重要作用。     

IL-18对炎症性肠病患者外周血和肠黏膜固有层淋巴细胞增殖和炎症介质分泌的影响

目的:分析IL-18对炎症性肠病患者外周血和肠黏膜固有层T淋巴细胞增殖和促炎症细胞因子分泌的影响。方法:收集12例克罗恩病(CD)、25例溃疡性结肠炎(UC)患者和15例结肠镜检查正常者(对照)的肠黏膜组织,分离外周血单个核细胞(PBMC)和肠黏膜固有层单个核细胞(LPMC),体外培养并用IL-18刺激,48h后,利用ELISA检测上清液中干扰素(IFN)-γ、IL-2、IL-4、IL-5和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,采用3H-胸腺嘧啶掺入法检测LPMC的增殖情况。结果:IL-18刺激后,CD患者PBMC和LPMCIFN-γ、IL-2和TNF-α分泌水平高于UC和对照(P<0.05);CD患者的LPMC增殖率亦高于UC和健康对照。结论:IL-18可激活CD患者淋巴细胞的增殖,PBMC和LPMC分泌大量促炎症细胞因子,可能参与了CD的发病过程,体内阻断IL-18可能对CD患者免疫治疗有帮助。     

双歧三联活菌胶囊治疗溃疡性结肠炎的疗效及对CD4+CD25+调节性T细胞和IL-10的影响

目的 研究双歧三联活菌胶囊辅助治疗溃疡性结肠炎的疗效及对CD4+CD25+调节性T细胞和白细胞介素-10(IL-10)的影响.方法 将112例轻、中度溃疡性结肠炎患者分为观察组和对照组,每组56例.对照组采用常规治疗,观察组在常规治疗基础上加用双歧三联活菌胶囊.疗程6个月.比较两组治疗前后临床症状评分、结肠炎症评分、外周血CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+ T细胞百分比及IL-10水平的差异.结果 治疗前后两组临床症状及结肠黏膜炎症均较治疗前有明显改善(P<0.05),且观察组改善程度优于对照组(P<0.05).治疗后观察组外周血CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+ T细胞百分比、IL-10水平较治疗前升高(P<0.05),且高于对照组治疗后(P<0.05).结论 双歧三联活菌胶囊可辅助治疗溃疡性结肠炎,CD4+CD25+调节性T细胞和IL-10可能参与了溃疡性结肠炎的发生发展.     

IL-21及其受体表达与溃疡性结肠炎分级的相关性

目的探讨溃疡性结肠炎（UC）患者炎性反应严重程度分级与IL-21及其受体表达之间的关系。方法收集34例UC患者（包括轻度组10例、中度组8例、重度组6例、缓解组10例）和30例健康成人外周血标本,分离血清和外周血单个核淋巴细胞（PBMC）,双抗夹心法ELISA检测血清IL-21水平,流式细胞仪检测外周血CD4^＋、CD8^＋T细胞、B细胞和NK细胞IL-21R的表达。结果UC患者血清IL-21水平及外周血CD4^＋、CD8^＋T细胞、B细胞和NK细胞IL-21R表达水平与健康对照比较显著升高（P〈0．01）,并且与病情严重程度有一定相关性。结论IL-21及其受体IL-21 R在UC肠黏膜炎症病变过程中起着重要作用,可能参与了肠道黏膜组织免疫损伤过程。     

溃疡性结肠炎患者CD4~+CD25~+调节性T细胞的表达及意义

目的溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种病因及发病机制迄今尚未完全明确的累及肠道的慢性非特异性炎症,近年来,研究发现免疫异常与其发病密切相关。通过分析UC患者外周血和肠黏膜中CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)及其特异性标志物Foxp3的表达特点,探讨CD4+CD25+Treg和Foxp3在UC发病机制中的作用。方法 20例UC活动期患者,15例健康体检者作为正常对照组,分别抽取外周静脉血和经电子肠镜活检肠黏膜组织,以流式细胞术检测外周血单个核淋巴细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)和肠固有层单个核细胞(lamina propria mononu-clear cell,LPMC)中CD4+CD25+T细胞和CD4+T细胞比例,应用免疫组化方法检测肠黏膜中Foxp3的表达,并检测血清中IL-10的水平。结果 UC患者外周血中CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞比例明显低于正常对照组(P<0.05),肠黏膜CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞比例和Foxp3+T细胞表达明显高于正常对照组(P<0.05),两组PBMC和LPMC中CD4+T细胞比例无明显差异(P>0.05),两组血清IL-10水平无显著差异(P>0.05)。结论 CD4+CD25+Treg在UC的发病机制中起重要作用,外周血Treg数量减少可能是疾病发生的重要因素。     

OX40在溃疡性结肠炎中的表达及意义

目的：研究溃疡性结肠炎（UC）患者OX40分子的表达,以及CD4＋OX40＋T细胞的免疫表型和免疫学功能.方法：从活动性UC患者肠粘膜标本中分离和纯化粘膜固有层CD4＋T细胞（LP-CD4＋T）.用FACS多参数分析法测定OX40在不同的CD4＋T细胞上的表达.用ELISA BrdU（5-溴脱氧尿嘧啶）法测定LP-CD4＋T细胞的增生程度以及不同刺激剂对它们增生程度的影响.结果：UC病变部位LP-CD4＋T细胞表达OX40明显高于健康对照者外周血、UC患者外周血CD4＋T细胞以及UC患者非病变部位CD4＋T的表达.LP-CD4＋OX40＋T细胞表达淋巴细胞活化标记CD25、CD38、CD45RO和HLA-DR均明显高于LP-CD4＋OX40-T细胞的表达（P＜0.01）.抗OX40单抗可明显增强病变部位LP-CD4＋T细胞的增生反应.相反,抗OX40L单抗则能明显抑制病变部位LP-CD4＋T细胞的增生.结论：OX40在UC患者病变部位的LP-CD4＋T细胞上表达明显增加,LP-CD4＋OX40＋T细胞是一类在原位被特异性抗原激活后扩增的T细胞,它们在UC的免疫病理机制中起重要作用.抗OX40L能够抑制其增生反应,可能是一种有效治疗UC的新方法.     

新辅助同步放化疗对直肠癌微环境浸润免疫细胞的影响

目的 检测新辅助同步放化疗（CRT）前后直肠癌组织中肿瘤浸润免疫细胞数量和表型的变化,并分析它们与患者临床病理参数之间的相关性。方法 采用免疫组织化学染色ElivisionTM Plus法,检测20例直肠癌患者新辅助CRT前后的活检标本和术后病理标本组织中CD3、CD4、CD8、CD56、Foxp3蛋白的表达水平。结果 新辅助CRT后直肠癌肿瘤组织中CD3（21.8% vs 48.8%,P<0.001）、CD4（16.5% vs 42.2%,P<0.001）、CD8（8.3% vs 33.4%,P<0.001）和CD56（0 vs 7.6%,P=0.012）的表达均较前升高;Foxp3（26.0% vs 15.3%,P=0.005）表达较前下降;CD4/CD8（2.7 vs 5.1）比值较前无明显变化。多因素分析显示新辅助CRT后CD3（HR= 0.16,P=0.028）、CD8（HR= 0.03,P=0.001）阳性细胞的增加与患者术后无复发生存期正相关。结论 直肠癌新辅助CRT后肿瘤组织中CD3、CD4、CD8、CD56阳性浸润免疫细胞比例较治疗前明显增加,Treg淋巴细胞比例则明显下降,CD3、CD8阳性T淋巴细胞数量增加的患者其术后无复发生存期延长。     

AIDS患者胃黏膜CD4~+T淋巴细胞与HIV感染关系的初步分析

目的探讨AIDS患者胃黏膜CD4^＋T淋巴细胞的丢失、重建与HIV感染的关系。方法对35例AIDS患者胃黏膜组织冰冻切片和PBMC涂片采用核酸原位杂交方法及免疫组化双重染色,观察CD4^＋T淋巴细胞的HIV感染情况。结果①高效抗逆转录病毒治疗（HAART）治疗1～4年后,AIDS患者胃黏膜单个核细胞（MMC）中CD4^＋T细胞计数仍然低于对照组[（37.44±18.00]%vs（50.35±3.41）%]（P〈0.01）;但PBMC中CD4^＋T细胞计数与对照组无显著性差异[（42.70±10.66）%vs（51.00±6.60）%]（P〉0.05）。②未治疗组与治疗〈1年组胃黏膜MMC中CD4^＋T细胞HIV阳性率无显著性差异[（2.76±1.92）%vs（1.88±1.56）%]（P〉0.05）;治疗1～4年组则明显低于未治疗组[（0.54±0.49）%vs（2.76±1.92）%（P〈0.01）;三组AIDS患者PBMC中CD4^＋T细胞HIV感染率均具有显著性差异[（19.44±8.17）%vs（9.76±6.98）%vs（4.95±8.26）%]（P〈0.05）。结论相对于外周血,AIDS患者胃黏膜免疫重建可能是不完全的。AIDS患者胃黏膜CD4^＋T细胞HIV感染在胃黏膜CD4^＋T细胞的丢失与重建延迟过程中可能并非发挥主要的作用。     

原发性肝癌患者肿瘤转移与T细胞亚群及其细胞因子的相关性分析

目的 探讨原发性肝癌患者肿瘤转移与T细胞亚群及其细胞因子的相关性.方法 2014年1月至2016年1月前瞻性收集原发性肝癌患者97例,根据患者是否发生转移,将患者分为转移组和非转移组,其中转移组38例,非转移组59例.所有患者均取得手术标本,使用流式细胞仪测定肝癌组织、癌旁组织和外周血CD4+、CD8+T细胞比例,同时使用酶联免疫吸附试验测定外周血中白细胞介素(IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和γ-干扰素(IFN-γ)水平.结果 与非转移组相比,转移组患者肝癌组织中CD4+T细胞比例显著升高(P=0.002);CD8+T细胞显著降低(P=0.015).两组患者癌旁组织中CD4+T细胞比例差异无统计学意义P=0.328).转移组患者癌旁组织中CD8+T细胞比例显著高于非转移组(P=0.021).两组患者外周血中CD8+T细胞比例差异无统计学意义(P=0.362).转移组患者外周血CD4+T细胞比例显著低于非转移组(P=0.032).与非转移组比较,转移组患者外周血IL-6水平显著降低(P=0.012);IL-10水平显著升高(P=0.006);TNF-α水平显著降低(P=0.000);IFN-γ水平显著降低(P=0.035).结论 原发性肝癌患者肿瘤转移存在明显的T细胞亚群和细胞因子平衡失调.     

干燥综合征唇腺免疫病理研究

目的 探讨CIM＋CD25＋调节性T细胞在干燥综合征（SS）患者唇腺组织的表达。方法 用免疫组织化学的方法对31例唇腺石蜡组织的连续切片进行CIM、CD25、CD68、CD8和Foxp3染色。结果 唇腺组织免疫组化染色显示25例SS患者唇腺中浸润的淋巴细胞中,CIM＋T细胞占大多数,两组均无CD25和FOXP3的表达。结论SS患者唇腺中缺乏CIM＋CD25＋调节性T细胞;调节性T细胞在SS的发病机制中起重要作用。     

内镜下多点活检鉴别诊断克罗恩病和溃疡性结肠炎的临床价值

目的 探讨在克罗恩病（CD）和溃疡性结肠炎（UC）的鉴别诊断中内镜下多点活检的临床意义。方法 回顾性分析2019年3月—2022年3月在徐州医科大学附属淮安医院就诊的47例CD患者（CD组）及53例UC患者（UC组）的临床资料,并收集其内镜下活检病理切片。比较两组临床资料、实验室指标、临床表现、内镜下表现及内镜下活检病理学诊断结果。结果 CD组与UC组的性别构成、发病年龄、病程、血小板计数、红细胞沉降率比较,差异无统计学意义（P>0.05）。UC组腹泻率、血便率高于CD组,发热率、贫血率及肠外表现率低于CD组（P <0.05）。两组内镜下表现中,UC组乙状结肠病变、直肠病变、病变连续分布、环行溃疡构成比高于CD组（P <0.05）,回盲部病变、升结肠病变、病变节段分布、纵行溃疡、结节样增生、阿弗他溃疡、鹅卵石征构成比低于CD组（P <0.05）。两组内镜下活检病理学诊断结果中,UC组黏膜结构表面不规则、绒毛样表面、腺体萎缩、腺体分枝、腺体扭曲或不规则,黏膜表面上皮糜烂或变扁、黏液细胞数量减少,急性隐窝炎、隐窝脓肿、固有层中性粒细胞数量增多构成比高于CD组（P &...     

双歧三联活菌胶囊治疗溃疡性结肠炎的疗效及其对CD4+CD25+调节性T细胞和IL-10的影响

目的 探讨双歧三联活菌胶囊辅助治疗溃疡性结肠炎(UC)的临床疗效及其对CD4+CD25+调节性T细胞和IL-10的影响.方法 选取溃疡性结肠炎患者87例,采用随机数表法分为观察组45例和对照组42例.对照组给予抗生素及5-氨基水杨酸制剂奥沙拉嗪钠胶囊进行常规对症治疗,观察组在常规对症治疗基础上加用双歧三联活菌胶囊治疗.比较两组患者治疗前后的结肠炎症评分、CD4+CD25+调节性T细胞和IL-10变化及临床疗效.结果 治疗后观察组的总有效率为86.67%,明显高于对照组的69.05%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗前两组结肠症状评分比较差异无统计学意义(P>0.05),治疗后观察组结肠症状评分明显低于对照组,差异有显著统计学意义(P<0.01);治疗前两组CD4+CD25+调节T细胞占CD4+T细胞比例及IL-10水平值比较差异均无统计学意义(P>0.05),治疗后观察组CD4+CD25+调节T细胞占CD4+T细胞比例及IL-10水平均明显高于对照组,差异均有显著统计学意义(P<0.01).结论 歧乳杆菌三联活菌胶囊辅助治疗UC患者疗效确切,且CD4+CD25+调节性T细胞比例及IL-10水平均有明显升高,在改善患者肠道内微生物平衡中具有显著作用,值得推广应用.