RIM-19的表达对人子宫颈癌细胞移植瘤血管生成的影响

目的:通过裸鼠体内实验探讨GRIM-19对子宫颈癌细胞血管生成的影响。方法:采用western blot检测GRIM-19和VEGF的mRNA和蛋白水平表达情况。将HeLa/Control、HeLa/GRIM-19接种到裸鼠皮下检测荷瘤情况,利用免疫组化法计数微血管密度。结果:HeLa/GRIM-19细胞接种肿瘤生长速度明显减慢(P<0.01)。移植瘤蛋白检测发现GRIM-19表达升高,而VEGF的表达降低。HeLa/Control移植瘤的微血管密度是72±9.3/mm2,而HeLa/GRIM-19的微血管密度为32±4.7/mm2,两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论:GRIM-19表达可以抑制子宫颈癌细胞的微血管生成,可能是子宫颈癌治疗的新靶点。     

稳定表达GRIM-19的Hela细胞株的建立及其对STAT3的抑制作用

目的:建立Grim-19基因稳定表达的人子宫颈癌Hela细胞株,探讨Grim-19及其对下游基因STAT3表达的影响。方法:将构建好的质粒采用脂质体法转染人子宫颈癌Hela细胞株,经G418筛选,得到稳定表达Grim-19的Hela细胞株,并分别通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法(Western-blot)检测Grim-19及其下游基因STAT3的表达。结果:成功建立了高表达GRIM-19的Hela/Grim-19细胞株,并在mRNA与蛋白水平上均发现Grim-19在转染细胞中的高表达和其下游基因STAT3表达的明显下调。结论:上调子宫颈癌Hela细胞Grim-19的表达对STAT3的表达有抑制作用。     

IFITM1基因在HeLa细胞中的功能研究

目的:研究IFITM1基因转染对子宫颈癌HeLa细胞的影响,以及抑制子宫颈癌HeLa细胞生长的作用。方法:应用脂质体法介导IFITM1基因转染子宫颈HeLa细胞,用RT-PCR方法、免疫荧光法、MTT法及流式细胞术检测IFITM1基因转染HeLa细胞的生物学特性。结果:转染后的HeLa细胞:①RT-PCR检测及激光共聚焦显示重组质粒组中mRNA及蛋白表达含量明显高于对照组及空载体组,而对照组及空载体组蛋白表达无统计学差异。②MTT结果显示重组质粒组细胞存活率均明显低于空载体组及未转染HeLa细胞组,而后两组无统计学差异。③AnnexinV/PI双色流式细胞仪检测表明,重组质粒组的HeLa细胞凋亡水平明显高于空载体组和未转染HeLa细胞组,有统计学差异。结论:IFITM1蛋白与子宫颈鳞癌有着密切的关系,该基因可能是一种潜在的抑制子宫颈鳞癌发生的基因。     

Caveolin-1对宫颈癌细胞增殖和迁移能力的影响及其机制

目的探讨Caveolin-1对宫颈癌细胞增殖和迁移能力的影响及其机制。方法体外培养宫颈癌细胞株Hela,将细胞株分为实验组、阴性对照组和正常对照组,实验组为运用质粒转染技术建立过表达的稳定细胞株Hela/Caveolin-1,空载体细胞株Hela/pc DNA3.1作为阴性对照组,正常对照组为未转染的常规培养细胞。采用RT-PCR方法检测3组细胞中Caveolin-1的表达水平,MTT方法检测宫颈癌细胞增殖能力,Transwell细胞侵袭实验测定转染Caveolin-1后宫颈癌细胞的侵袭和迁移能力。结果 RT-PCR方法结果说明,Hela/Caveolin-1实验组中Caveolin-1的表达(5.82±0.19)明显高于阴性对照组(1.19±0.01)和正常对照组(1.32±0.06),且实验组Hela细胞的增殖和迁移能力显著减弱。结论 Caveolin-1与宫颈癌细胞的增殖和迁移能力有关。     

靶向Survivin的shRNA表达载体的构建和对宫颈癌Caski细胞Survivin表达的影响

[目的]探讨RNA干扰对Caski细胞Survivin基因表达的抑制作用. [方法]构建针对Survivin基因编码区和非编码区的两对短发夹状RNA真核表达载体,分别命名为pGenSurl、pGenSur2.以脂质体介导的转染方法将其导入宫颈癌Caski细胞株,采用荧光定量RT-PCR和western blot检测转染后24、48、72 h Survivin基因mRNA和蛋白质表达水平. [结果]成功构建Survivin基因shRNA真核表达载体pGenSur1、pGenSur2.与野生型Caski细胞、阴性对照相比,Caski/pGenSur1细胞和Caski/pGenSur2细胞中Survivin mRNA和蛋白表达随着干扰时间增加有显著性减少(P<0.01),72h到达最低值,mRNA抑制效率分别达到63.3%±1.44%和79.7%±2.12%,蛋白抑制效率达到64.2%±2.02%和79.4%±1.77%. [结论]靶向Survivin的shRNA质粒载体均可显著抑制宫颈癌Caski细胞内源Survivin的mRNA和蛋白的表达(P<0.01).     

姜黄素通过Notch途径抑制人宫颈癌细胞株HeLa细胞增殖

目的:探讨姜黄素对人宫颈癌细胞株HeLa细胞体外增殖抑制及凋亡诱导作用及相关机制。方法:MTT法检测不同浓度姜黄素对HeLa细胞的增殖抑制作用;RT-PCR法检测HeLa细胞Notch1、Notch2、Jagged1、Bcl-2、Bax基因表达情况。结果:姜黄素对HeLa细胞具有增殖抑制作用,且呈时间-剂量依赖性。随着姜黄素剂量的增加,Notch1、Notch2、Bcl-2mRNA的表达逐渐下降,Bax mRNA的表达逐渐升高,Bcl-2/Bax亦逐渐减小,Jagged1mRNA无明显变化。结论:姜黄素可能通过Notch信号途径改变凋亡蛋白的表达,抑制HeLa细胞增殖。     

siRNA抑制IKCa1基因表达对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响

目的:研究siRNA(small interfering RNA)抑制钙激活性中电导钾离子通道(intermediate-conductance Ca2+-activated K+channels,IKCa1)表达对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响。方法:构建含有IKCa1基因的siRNA表达载体,脂质体法转染HeLa细胞,通过RT-PCR和Western Blot检测HeLa细胞IKCa1 mRNA和蛋白表达变化;WST-1检测细胞增殖能力;流式细胞仪分析HeLa细胞周期变化。结果:成功构建针对IKCa1基因的真核表达载体,所获表达载体转染HeLa细胞可使IKCa1mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05),并能有效抑制HeLa细胞增殖(P<0.05),使细胞周期停留在G0～G1期,S期细胞明显减少。结论:应用siRNA干扰技术能有效抑制IKCa1基因的表达,同时也可有效抑制宫颈癌HeLa细胞体外增殖活性。     

核干细胞因子的RNA干扰对胶质瘤U251细胞的影响

目的探讨U251细胞株中NS基因表达及被干扰后,U251细胞株在mRNA、蛋白表达水平及细胞增殖变化情况。方法考察U251细胞NS-mRNA和NS-protein的表达水平;合成人类NS基因siRNA片段;转染至U251细胞中,RT-PCR和Westernblot检测转染前后U251细胞中mRNA及蛋白表达水平;MTT检测细胞增殖率。结果 U251细胞NS-mRNA和NS-protein的表达分别为178.91%和97.55%;siRNA转染U251细胞后NS-mRNA抑制率60.79%,NS-protein抑制率94.00%;MTT结果显示干扰72h后细胞增殖抑制率为31.3%。结论 NS基因siRNA片段转染U251细胞后,NS基因表达被特异性沉默,细胞增殖受到抑制。     

钙激活性中电导钾离子通道在人子宫颈癌组织中的表达及其在细胞增殖中的作用

目的:研究钙激活性中电导钾离子通道(IKCa1)在宫颈癌组织中的表达变化及其在宫颈癌HeLa细胞增殖中的作用。方法:应用RT-PCR技术检测18例正常宫颈组织及15例宫颈癌组织中IKCa1 mRNA的表达;利用IKCa1通道的阻断剂(克霉唑)处理宫颈癌HeLa细胞,MTT法观察细胞增殖的变化。结果:宫颈癌组织中IKCa1 mRNA的阳性表达率及表达水平(分别为73.33%、1.14±0.45)明显高于正常宫颈组织(分别为11.11%、0.86±0.23),P<0.05。克霉唑以浓度和时间依赖的方式阻滞HeLa细胞增殖,抑制HeLa细胞的生长,降低IKCa1 mRNA的表达水平。结论:IKCa1的异常表达可能与宫颈癌的发生、发展密切相关,降低其表达可能抑制宫颈癌细胞的增殖和生长。     

苯丁酸钠对宫颈癌Hela细胞增殖及p21WAF1/CIP1和CDK7表达的影响

目的:探讨苯丁酸钠(SPB)在体外诱导宫颈癌Hela细胞生长抑制和细胞周期阻滞以及对p21WAF1/CIP1和CDK7基因表达的影响。方法:体外培养Hela细胞,应用MTT法检测苯丁酸钠对Hela细胞增殖的影响,流式细胞仪分析细胞周期的变化,半定量RT-PCR法检测细胞p21WAF1/CIP1和CDK7基因表达水平。结果:苯丁酸钠明显抑制Hela细胞增殖,呈时间-剂量依赖性;苯丁酸钠诱导Hela细胞周期阻滞于G0/G1期,使S期细胞数减少;苯丁酸钠促进抑癌基因p21WAF1/CIP1的表达,对CDK7基因的表达有抑制作用。结论:苯丁酸钠在体外抑制宫颈癌Hela细胞的增殖,使之阻滞于G0/G1期,可能与上调p21WAF1/CIP1基因表达、下调CDK7基因表达有关。     

过表达GCNF对HeLa细胞生物学行为的影响

目的:将成功构建的人pcDNA3.1-GCNF真核表达载体瞬时转染宫颈癌HeLa细胞,观察GCNF基因对HeLa细胞生物学功能的影响。方法:将重组质粒pcDNA3.1-GCNF转染HeLa细胞,通过MTT比色法、基质胶黏附实验和Transwell侵袭试验对转染后HeLa细胞增殖、黏附和侵袭力进行分析。结果:成功获得瞬时转染的pcDNA3.1-GCNF HeLa细胞,转染目的基因组(0.239±0.014)与转染空质粒组(0.198±0.020)及未转染组(0.204±0.012)相比,细胞增殖最快(P<0.05)。转染目的基因后细胞粘附、侵袭力未见明显改变。结论:GCNF基因促进了体外培养的宫颈癌HeLa细胞增殖,但对HeLa细胞粘附、侵袭力没有明显的影响。     

NaHS抑制宫颈癌细胞增殖的初步机制

目的:探讨NaHS对子宫颈癌细胞增殖的影响及其机制。方法:首先将子宫颈癌HeLa细胞分成对照组和不同剂量的NaHS处理组,并采用MTT法检测细胞存活率和流式细胞仪检测细胞凋亡率。使用不同浓度的格列本脲预先处理HeLa细胞30 min,再用400μmol/L的NaHS处理24 h,探讨NaHS抑制子宫颈癌细胞增殖的初步机制。结果:不同剂量的NaHS处理组能明显抑制HeLa细胞增殖而促进HeLa细胞凋亡;格列本脲预先处理可以部分阻断这种作用。结论:NaHS抑制子宫颈癌细胞增殖可能与ATP敏感性钾通道有关。     

丹参酮ⅡA对人卵巢癌细胞SKOV3增殖与凋亡的影响

目的:探讨丹参酮ⅡA(TanⅡA)对人卵巢癌细胞SKOV3的生长抑制和诱导凋亡作用及其可能机制。方法:培养人卵巢癌细胞SKOV3,经TanⅡA作用后,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定丹参酮ⅡA对人卵巢癌细胞SKOV3的增殖抑制作用;流式细胞术检测细胞周期;RT-PCR检测Survivin与Smac/DIABLO mRNA表达水平;免疫荧光细胞化学检测Survivin蛋白及Smac/DIABLO蛋白的表达。结果:1.0～10.0μg/ml TanⅡA对人卵巢癌细胞SKOV3具有生长抑制作用,并具有时间-剂量依赖性。实验组较对照组G1/G2期细胞数量增多,而S期细胞数量减少(P<0.05)。随着TanⅡA干预浓度的增加和作用时间的延长,Survivin mRNA的表达受到明显抑制(P<0.05),而Smac/DIABLO mRNA的表达明显上调(P<0.05)。Survivin蛋白及Smac/DIABLO蛋白均表达于SKOV3细胞,其表达多定位于细胞质中,偶见于细胞核。结论:TanⅡA对人卵巢癌细胞SKOV3具有生长抑制和诱导凋亡作用,其作用机制可能是通过抑制人卵巢癌细胞SKOV3 Survivin和促进Smac/DIABLO的表达而实现的。     

Survivin基因沉默对胰腺癌细胞Patu8988增殖及其对吉西他滨敏感性的影响

目的研究Survivin基因沉默对人胰腺癌Patu8988细胞增殖和对化疗药物吉西他滨敏感性的影响。方法设计合成Survivin的siRNA序列,Lipofectamine^TM 2000转染入Patu8988细胞。采用RT．PCR和Western blot检测Survivin在干扰后mRNA和蛋白的表达情况,利用流式细胞仪检测细胞周期。通过MTY法和细胞克隆形成试验法观察Survivin基因沉默后Patu8988细胞对吉西他滨的敏感性。结果Survivin基因沉默48h后,Patu8988细胞的Survivin基因和蛋白表达明显降低,基因表达分别为：对照组：0．78±0．03,空白组：0．82±0．06,实验组：0．52±0．05;蛋白表达分别为：对照组：0．77±0．21,空白组：0．77±0．26,实验组：0．57±0．03,差异有统计学意义（P〈0．05）。细胞周期被阻滞在G0／G1期,S期细胞数减少,其差异有统计学意义（P〈0．05）。Survivin基因沉默组细胞对吉西他滨的敏感性显著性增强。结论Survivin特异性siRNA能显著沉默Patu8988细胞Survivin基因,抑制细胞增殖,并增强Patu8988细胞对吉西他滨的敏感性。