大豆苷原对体外培养人胃癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的:了解二羟异黄酮对胃癌细胞有无促增殖与诱导凋亡作用。方法:以不同浓度的二羟异黄酮处理人胃癌细胞系MGC-803细胞。然后分别用MTT法测定细胞增殖情况、流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳测定细胞周期和细胞凋亡等。结果:MTT 结果显示:二羟异黄酮对胃癌细胞具有促进和抑制增殖的双相作用-在低浓度(0.1-1 μmol/L)时促进细胞生长,在较高浓度(10-100 μmol/L)时对细胞生长则有抑制作用。流式细胞术结果显示:癌细胞群阻滞在G1期,没有明显凋亡峰的出现;凝胶电泳也末检测到明显的DNA阶梯状条带。结论:二羟异黄酮对体外培养的胃癌细胞的生长有双相作用,较高浓度可抑制胃癌细胞的生长并使细胞阻滞在G1期,而无诱导细胞凋亡的作用。     

大蒜素对子宫颈癌Hela细胞增殖的影响

目的:探讨大蒜素对宫颈癌Hela细胞增殖的影响。方法:不同浓度的大蒜素作用于体外培养的Hela细胞,倒置显微镜下观察Hela细胞的形态学变化;采用MTT法检测大蒜素对Hela细胞增殖抑制能力,采用流式细胞术分析大蒜素对Hela细胞凋亡的影响。结果:MTT显示大蒜素能抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,并具有时间-剂量依赖性;流式细胞术测定结果显示50μg/ml浓度的大蒜素可明显诱导Hela细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在G2/M期。结论:大蒜素对人宫颈癌Hela细胞的生长有抑制作用,其抑制作用与诱导Hela细胞凋亡和阻抑细胞周期有关。     

枸杞多糖对人白血病细胞株凋亡的影响

目的 :　探讨枸杞多糖 ( LBP- X)对人白血病 HL- 60细胞凋亡的影响。方法 :　 LBP-X与 HL- 60细胞共培养 ,MTT法检测 LBP- X对 HL- 60细胞增殖的抑制作用 ;以 DPH为荧光探针检测细胞膜流动性的变化 ;用 Hoechst332 5 8染色在荧光显微镜下观察细胞核形态学变化 ;琼脂糖凝胶电泳法和流式细胞仪检测法定性定量检测细胞凋亡。结果 :　LBP- X2 0～ 1 0 0 0 mg/L呈剂量依赖性抑制 HL- 60细胞增殖 ,且可降低 HL- 60细胞膜的流动性 ;LBP- X作用 48h后 ,荧光显微镜下细胞核固缩、凝聚和断裂 ,出现浓染致密的颗粒块状荧光 ;DNA琼脂糖凝胶电泳可见明显的“DNA条带”;流式细胞仪分析图上出现凋亡峰。结论 :　 LBP- X对诱导人白血病 HL- 60细胞凋亡有一定作用。     

大蒜素影响子宫颈癌Hela细胞增殖的实验研究

目的探讨大蒜素对宫颈癌Hela细胞增殖的影响。方法不同浓度的大蒜素作用于体外培养的Hela细胞,倒置显微镜下观察Hela细胞的形态学变化,采用MTT法检测大蒜素对Hela细胞增殖抑制能力,流式细胞术分析大蒜素对Hela细胞凋亡的影响。结果 MTT显示大蒜素能抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,并具有时间-剂量依赖性;流式细胞术测定结果显示50μg/ml浓度大蒜素可明显诱导Hela细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在G2/M期。结论大蒜素对人宫颈癌Hela细胞增殖有抑制作用,其抑制作用与诱导Hela细胞凋亡和阻抑细胞周期有关。     

9-羧酸蒽对人髓性白血病细胞株HL-60凋亡的研究

目的　研究氯通道抑制剂 9-羧酸蒽 ( 9-AC)对人髓性白血病细胞株HL - 6 0的影响 ,并对相关机制进行探讨。方法　体外培养人白血病细胞株HL - 6 0 ,采用透射电子显微镜、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪等观察9-A对HL - 6 0细胞的作用。结果　在 5× 10 -4 mol/L 9-AC作用 48h后 ,细胞发生明显的改变。电镜下细胞形成典型的凋亡小体。DNA琼脂糖凝胶电泳出现特征性梯形条带。流式细胞仪分析表明 ,实验组HL - 6 0细胞出现明显的亚二倍体峰 -凋亡峰。结论　 9-AC具有明显的诱导白血病细胞HL - 6 0凋亡的作用。     

菹草类胡萝卜素对Hela细胞增殖与凋亡的影响

目的研究菹草类胡萝卜素提取物(carotenoids extracts from Potamogeton crispus L.,CEPC)对人宫颈癌Hela细胞株增殖和凋亡的影响。方法采用MTT法、流式细胞术(FCM)、荧光倒置显微镜和激光共聚焦显微镜(LSCM)观察等手段,研究不同浓度受试物对Hela细胞增殖抑制、细胞周期阻滞、细胞形态学变化及胞内Ca2+浓度变化的影响。结果CEPC对Hela细胞增殖有明显的抑制作用;呈现G2/M期阻滞。荧光显微镜和LSCM观察到细胞核浓缩等典型的细胞凋亡形态特征。处理组细胞内Ca2+浓度显著升高。结论CEPC对Hela细胞有生长抑制作用,诱导细胞凋亡是这种作用的主要形式,胞内Ca2+浓度升高可能是细胞凋亡的作用机制之一。     

STAT3信号转导通路调控人宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡的机制

目的:探讨信号传导和转录激活因子3(Stat3)通路与人宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡的关系,明确以Stat3为靶向的信号传导通路调控Hela细胞增殖、凋亡的分子机制。方法:人宫颈癌Hela细胞用酪氨酸激酶(JAK)抑制剂AG490处理,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖;流式细胞仪(FCM)测细胞凋亡及细胞周期;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测JAK2、Stat3、磷酸化Stat3(p-Stat3)、CyclinD1、Survivin的表达。结果:人宫颈癌Hela细胞中Stat3、p-Stat3、JAK2呈阳性表达。AG490呈时间和剂量依赖的方式抑制Hela细胞的增殖,促进其凋亡(P<0.05)。Western blot检测显示p-Stat3、CyclinD1、Survivin的表达水平随作用剂量的增大而逐渐下降(P<0.05),Stat3的表达未见明显变化(P≥0.05)。结论:Stat3信号转导通路与宫颈癌Hela细胞的增殖、凋亡密切相关,可能通过其下游靶基因蛋白CyclinD1、Survivin发挥作用。阻断Stat3信号通路可能为宫颈癌的防治提供一种新的策略。     

莱菔硫烷抑制人胃癌SGC7901细胞增殖及其诱导凋亡分子流行病学研究

目的研究莱菔硫烷（sulforaphane,SFN）在体外对人胃癌细胞SGC7901的增殖抑制作用,探讨SFN诱导细胞凋亡的分子机理。方法以SFN和人胃癌细胞SGC7901为研究对象。采用四甲基偶氮唑盐比色法观察不同浓度SFN对细胞增殖的抑制影响,AO/EB双重染色法与透射电镜进行形态学变化观察,琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡状态下的DNA变化,RT-PCR检测细胞p21基因mRNA表达。结果 50～150μmol/L浓度范围的SFN对SGC7901细胞的增殖有明显的抑制作用。AO/EB染色结果显示SFN诱导SGC7901细胞凋亡发生形态学上改变。DNA琼脂糖凝胶电泳显示细胞经SFN（100μmol/L、150μmol/L）处理24 h后可见＂梯形＂DNA碎片条带。RT-PCR结果显示50μmol/L SFN能够诱导p21基因mRNA的表达增强。透射电镜观察到SFN作用SGC7901细胞48 h后出现核固缩等早期凋亡镜下改变。结论 SFN能抑制SGC7901细胞的增殖并诱导SGC7901细胞凋亡,可在翻译和转录水平上调p21的表达,其分子机理可能与调控p21基因存在关系。     

苦参碱诱导人喉癌细胞Hep-2凋亡的实验研究

目的 研究苦参碱对人喉癌细胞Hep-2的生长抑制作用及凋亡机制.结果 四甲基噻唑蓝(MTT)法测定苦参碱对细胞的抑制作用,荧光显微镜、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪技术(FCM)观察细胞周期及凋亡.结果 不同浓度苦参碱对Hep-2细胞有明显抑制作用,且呈时间依赖性及剂量依赖性;FCM检测结果 显示:S期细胞比例及凋亡率增高,G2/M期细胞比例下降,且呈剂量依赖性;形态学发现Hep-2细胞染色质凝聚,核碎裂,凋亡小体形成;DNA琼脂糖凝胶电泳显示典型的梯形条带.结论 苦参碱可能是通过将人喉癌细胞周期阻滞在S期,诱导喉癌细胞凋亡,抑制其增殖,发挥其抗癌功能.     

Rab25基因siRNA对人卵巢癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:通过RNA干涉抑制Rab25在人卵巢上皮性癌的过表达,观察Rab25基因siRNA对卵巢癌细胞增殖及诱导凋亡的效果。方法:构建针对Rab25基因的siRNA重组质粒,稳定转染A2780细胞,通过RT-PCR检测Rab25的表达;MTT法观察细胞增殖,绘制细胞生长曲线;Hoechst33258荧光染色和透射电子显微镜观察细胞凋亡的形态学变化。结果:成功构建Rab25的siRNA,稳定转染靶细胞后可显著降低Rab25的表达,细胞生长速度减慢、增殖能力下降;荧光显微镜和电镜观察到细胞胞质浓缩、核凝聚、核碎裂和凋亡小体形成。结论:Rab25基因的siRNA能抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,为卵巢癌基因治疗开辟新途径。     

异黄酮对PC-3细胞凋亡的诱导作用

目的 :　通过观察染料木素 (genistein,GS)、大豆甙元 (daidzein,DA)和黄豆黄素(glycitein,GL)对前列腺癌细胞 (PC- 3 )凋亡的影响 ,探讨通过膳食途径预防前列腺癌发生危险性的可行性。方法 :　将 PC- 3细胞在 RPMI1 6 4 0培养液 (含 1 0 %小牛血清 )中采用开放式单层贴壁培养。实验设溶剂对照及三种受试物各三个剂量组 ,采用流式细胞术 ,DNA凋亡片段凝胶电泳和细胞 HE染色法分析三种常见异黄酮类物质对 PC- 3细胞凋亡的影响。结果 :　与对照组相比 ,流式细胞仪分析结果表明 ,5 0μ mol/L GS、75μ mol/L DA和 75μ mol/L GL对 PC- 3细胞处理 72 h,二倍体细胞 (G1期细胞 )相对减少 ,亚二倍体细胞峰 (即细胞凋亡率 )逐渐增多 ,即凋亡细胞比例逐渐增多 ;DNA凋亡片段凝胶电泳和细胞苏木素染色结果也显示 ,三种受试物能够诱导 PC- 3细胞凋亡 ,且这种作用存在剂量 -效应关系。结论 :　异黄酮类化合物染料木素、大豆甙元和黄豆黄素均具有诱导 PC- 3细胞凋亡的作用 ,这一结果提示 ,该类物质是可通过诱导细胞凋亡而发挥其抗肿瘤作用的。     

硒和维生素E对白血病细胞凋亡及c-Myc基因表达的影响

目的 :　研究 Se和 VE对白血病细胞凋亡及 c- Myc基因表达的影响。方法 :　体外培养白血病细胞株 HL- 6 0、K5 6 2 ,培养时分别添加 Se(8μmol/L)和 VE(1 0 0 μmol/L)。利用 DNA凝胶电泳技术及 Northern杂交技术检测细胞凋亡和癌基因表达。结果 :　Se和 VE均能诱导白血病细胞 HL- 6 0和 K5 6 2细胞凋亡。VE(1 0 0 μmol/L)能够抑制 HL- 6 0细胞中 c- Myc基因的表达 ,结果有显著性 ;VE却不能抑制 K5 6 2细胞内 c- Myc基因的表达。相反 ,Se(8μmol/L)不能够抑制 HL-6 0细胞中 c- Myc基因的表达 ,却能抑制 K5 6 2细胞内 c- Myc基因的表达 ,结果有显著性。结论 :　抑制 c- Myc基因的表达 ,诱导白血病细胞凋亡是 Se、VE抑制白血病细胞增殖的重要途径之一。对于髓系和非髓系白血病细胞 ,Se与 VE对 c- Myc基因的表达的影响迥然不同 ,提示二者的作用机制是不同的。     

锰致PC12细胞凋亡作用及与p-Erk关系

目的以鼠嗜铬神经瘤细胞(PC12)为模型,筛选锰对神经细胞增殖抑制作用的时间及剂量,观察锰作用下PC12细胞的细胞形态学、生化指标改变和磷酸化的胞外信号调节激酶(p-Erk)的表达。方法用200、400、600、800μmol/L MnCl₂的培养液,分别作用对数生长期PC12细胞1、2、3、4 d后,四甲基偶氮塞唑蓝(MTT)筛选锰的细胞毒性剂量;透射电镜观察细胞形态学变化;琼脂糖凝胶电泳检测MnCl₂对PC12细胞基因组DNA的影响。免疫印迹法(western blot)检测p-Erk。结果 MTT显示200～800μmol/L MnCl₂作用1、2、3、4 d对PC12有显著的抑制作用,呈剂量和时间依赖趋势,600μmol/L MnCl₂作用4 d对PC12的抑制率50%;600μmol/L MnCl₂作用4 d电镜可见细胞凋亡,同样条件下细胞DNA碎片化;Western blot显示600μmol/L MnCl₂作用1、2、3、4 d可见p-Erk2逐渐降低,其中作用2 d时较对照降低75%(n=3,P<0.05),200、400、600μmol/L MnCl₂分别作用4 d时,p-Erk亦逐渐降低,当400μmol/L MnCl₂作用4 d时较对照明降低78%(n=3,P<0.01);使用Erk通路MEK1/2特异性阻制剂PD98059实验结果表明:锰可能通过MEK1/2磷酸化下游的Erk,下调p-Erk。结论锰对PC12细胞的毒性作用可能是通过关闭胞外信号调节激酶ErK通路诱导细胞凋亡。     

姜黄素对人宫颈癌SiHa细胞株增殖、凋亡和COX-2表达的影响

目的:体外研究中药姜黄素(Cur)对子宫颈癌SiHa细胞的增殖抑制和诱导凋亡的作用及与环氧合酶(COX-2)表达的关系。方法:以不同浓度的姜黄素(10～30μmol/L),分12～72 h四个时间点处理SiHa细胞,光镜观察细胞形态变化;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率;用DNA梯状电泳(DNA ladder)检测凋亡的发生;Western blot检测COX-2蛋白的表达;用放射免疫法检测细胞PGE2释放水平。结果:姜黄素可抑制SiHa细胞增殖,作用呈明显的时效和量效关系,差异有统计学意义(P<0.01);姜黄素可诱导SiHa细胞凋亡,DNA ladder呈梯状条带;姜黄素可明显抑制COX-2的表达,差异有统计学意义(P<0.01),并呈浓度依赖性;姜黄素明显抑制SiHa细胞PGE2释放水平,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:姜黄素体外对SiHa细胞具有增殖抑制作用和促进凋亡作用,其机制可能与抑制COX-2蛋白表达、降低PGE2释放水平有关。     

IL-12联合DDP对人卵巢癌HO-8910细胞周期及增殖的影响

目的:探讨IL-12联合化疗药物顺铂(DDP)对人卵巢癌HO-8910细胞周期及增殖的影响,并阐明其抑制肿瘤细胞增殖的机理。方法:取对数生长期的人卵巢癌HO-8910细胞株分为对照组、单独使用DDP组、单独使用IL-12组及IL-12联合DDP组。按作用时间(0、24、48、72、96、120 h)和DDP浓度(0、2、4、8、16、32μmol/L)不同,采用MTT比色法分别测定IL-12单独或联合应用DDP对人卵巢癌HO-8910细胞的影响,绘制细胞生长曲线和计算细胞增殖抑制率。根据细胞生长曲线评价肿瘤细胞的增殖速度,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡的变化,倒置显微镜和电镜观察细胞形态学改变。结果:单独应用DDP或IL-12时,其抑制率在96 h分别为28.93%和29.12%,而IL-12联合DDP在48 h抑制率为27.45%。HO-8910、HO-8910+DDP和HO-8910+IL-12细胞生长抑制曲线随时间延长而升高,在第96 h开始升高(P<0.01),而加入IL-12+DDP细胞的生长抑制曲线则从第48 h就开始升高,72 h达高峰(P<0.05);流式细胞仪检测显示,处于G1/G2期的HO-8910+IL-12+DDP细胞明显减少,而G2/M、S期细胞明显增多;电镜结果显示,HO-8910+IL-12+DDP细胞存在内质网扩张,线粒体空泡化,溶酶体增生,部分细胞可见染色质边集等凋亡前期改变。结论:IL-12联合DDP能抑制人卵巢癌HO-8910细胞增殖,有效地诱导细胞凋亡,增强DDP对肿瘤的治疗作用,为临床卵巢癌患者的治疗提供理论依据。     

黄绿青霉素对人血管内皮细胞凋亡和DNA损伤的作用

目的:观察黄绿青霉素(CIT)对血管内皮细胞凋亡和DNA损伤的作用.方法:体外原代培养人脐静脉内皮细胞,给予浓度分别为1umo1/L、2umol/L、5upmol/L、1Oumol/L的CIT毒素,处理时间为48h.光镜观察细胞生长形态,MMT法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,单细胞凝胶电泳法分析CIT对内皮...     

双酚A等化学物对耗尽内源性雌激素诱导T47D细胞凋亡的影响

目的　在乳腺癌细胞株T4 7D细胞内采用雌激素耗尽的方法诱导其发生凋亡 ,然后观察对 壬基酚 (n 4 noniphenol,NP)、双酚A (bisphenolA ,BisA )和邻苯二甲酸酯二丁酯(dibutylphthalate ,DBP)对这种凋亡的影响 ,探讨环境雌激素是否能够抑制雌激素耗尽所诱导的细胞凋亡作用。方法　T4 7D细胞在达克尔培养液 (DMEM ,含 10 %小牛血清 )中进行常规传代培养 ,于实验前 4d将细胞用磷酸盐缓冲盐水洗涤后改为在无酚红DMEM培养 ,目的是耗尽细胞内源性雌激素。实验设溶剂对照、雌激素对照 (E2 )、抗雌激素他莫昔芬 (TAM)对照及 3个试验组 ,采用流式细胞术 ,琼脂糖凝胶电泳和HE染色镜检观察环境雌激素对雌激素耗尽所诱导的细胞凋亡的影响。结果　流式细胞仪分析结果表明 ,雌激素耗尽能够诱导T4 7D细胞发生凋亡 ,凋亡率为 34 5 % ,此时往培养液中分别加入 32× 10 -7mol/LNP和 32× 10 -7mol/LBisA ,对细胞处理 72h ,可显著抑制细胞凋亡作用 (凋亡率分别变为 2 0 1%和 16 5 % ) ;琼脂糖凝胶电泳显示 ,细胞凋亡特有的DNA ladder消逝 ;HE染色镜检表明 ,细胞出现活跃核分裂相。加入 5× 10 -7mol/LTAM可加重细胞的凋亡现象 (细胞凋亡率为 5 5 6 % )。结论　NP和BisA均可抑制雌激素耗尽所诱导的T4 7D细胞的凋亡作用 ;     

β-胡萝卜素对白血病HL-60细胞凋亡及细胞周期分布的影响

目的：　探讨β－胡萝卜素抑制白血病细胞增殖的机制。方法：　体外培养白血病细胞株ＨＬ－６０,培养时添加１０μｍ ｏｌ／Ｌ、５０μｍ ｏｌ／Ｌ、１００μｍ ｏｌ／Ｌβ－胡萝卜素作用２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ 后,用台盼蓝拒染法进行活细胞计数,绘制细胞生长曲线;应用流式细胞术分析细胞周期分布,同时利用流式细胞术结合ＤＮＡ 凝胶电泳检测白血病细胞凋亡。结果：　细胞生长曲线显示１０～１００μｍ ｏｌ／Ｌ的β－胡萝卜素均对白血病细胞株ＨＬ－６０ 有显著性抑制作用,且呈剂量效应关系。流式细胞术结果显示５０μｍ ｏｌ／Ｌ的β－胡萝卜素处理ＨＬ－６０ 细胞２４ｈ 后,出现Ｓ期阻滞,并诱导５．５９％ 的细胞凋亡。ＤＮＡ 凝胶电泳结果同样显示β－胡萝卜素能够诱导白血病ＨＬ－６０ 细胞凋亡。结论：　β－胡萝卜素对于髓系白血病细胞株ＨＬ－６０ 细胞的增殖具有显著性抑制作用,其机制可能是干扰的白血病细胞ＤＮＡ代谢;β－胡萝卜素诱导白血病细胞凋亡也是其抑制白血病的重要途径之一。