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1.
两种人早孕绒毛滋养层细胞的原代培养方法   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:比较两种不同方法进行人早孕绒毛滋养层细胞原代培养的异同。方法:分别用组织块培养法和3种酶联合消化法(Ⅳ型胶原酶、低浓度胰酶及DNaseⅠ)、Ficoll 400梯度密度离心法对人早孕绒毛滋养层细胞培养。结果:两种方法进行早孕滋养层细胞的培养均获得成功,其生长率比较差异无显著性意义(P>0.05)。结论:组织块培养法简单易行,但细胞数量少,生长缓慢,难以完成后续实验;3酶联合消化、Ficoll 400梯度密度离心法相比较而言,可获得数量更多的活力好、纯度较高的具有不同分化功能的滋养层细胞,为进一步研究其侵袭、增殖能力等生理、病理作用提供了坚实的基础。  相似文献   

2.
目的建立快速、有效的绒毛滋养细胞体外培养的方法。方法采用0.25%胰酶和Ⅱ型胶原酶混合消化法消化绒毛组织,用胰蛋白酶消化传代体外培养,通过光镜对培养出的细胞进行形态评价;用细胞角蛋白和波形蛋白单克隆抗体检测细胞纯度。结果联合消化法的细胞生长迅速,接种6~8d可以传代,原代细胞生长时间明显缩短,所得细胞纯度达95%。结论联合消化法是一种较有效的人早孕绒毛滋养细胞培养方法。  相似文献   

3.
目的:从细胞凋亡的角度探讨输卵管妊娠破裂的发生机制。方法:对30例子宫肌瘤合并正常早孕切除子宫病例和40例输卵管妊娠破裂的病例的胚胎植入部位绒毛与蜕膜组织进行研究。用DNA缺口原位末端标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡;免疫组化S-P法检测bcl-2/bax基因蛋白表达率比值。结果:在正常早孕绒毛组织的细胞滋养细胞、合体滋养细胞中均可检出细胞凋亡,AI分别为(10.27±1.35)%、(11.28±2.43)%;而蜕膜组织的细胞凋亡较绒毛少见,AI为(9.75±1.25)%,但3者间细胞凋亡水平无相关关系(P>0.05)。输卵管组绒毛与蜕膜细胞凋亡均比早孕组少见,尤以合体滋养细胞中的凋亡为主,细胞滋养细胞和合体滋养细胞的AI分别为(7.29±1.24)%(P<0.05)、(8.13±1.39)%(P<0.05);而蜕膜组织的凋亡较早孕组明显增多,AI高达(38.23±2.65)%(P<0.01)。早孕组绒毛蜕膜间细胞凋亡水平差异无统计学意义(P>0.05);输卵管组蜕膜细胞凋亡水平明显高于绒毛,2者差异有统计学意义(P<0.01)。输卵管绒毛组比早孕组绒毛凋亡较低,而输卵管蜕膜组较早孕组蜕膜凋亡增高,但2种组织细胞凋亡无直线相关关系。正常早孕绒毛和蜕膜组织的bcl-2/bax比值分别为0.90±0.34、1.02±0.21,2者间差异无统计学意义(P>0.05),输卵管组绒毛和蜕膜组织的bcl-2/bax比值分别为1.05±0.19、0.43±0.22,2者间差异有统计学意义(P<0.05),与早孕组相比,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:Bc1-2和Bax蛋白在人早孕过程中及异位妊娠中参与了绒毛滋养层及蜕膜细胞的凋亡机制,在绒毛的发生、发育、胎盘形成和组织结构改建及功能完善等方面发挥着重要作用。同时也是异位妊娠破裂发生的一个重要机制;从分子水平为输卵管妊娠破裂提供了重要的理论依据。  相似文献   

4.
董枫  侯灵彤 《中国妇幼保健》2011,26(27):4235-4237
目的:探讨半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和胎盘生长因子(PLGF)在不明原因早期胚胎停止发育患者绒毛和蜕膜组织中的表达情况。方法:选择30例不明原因早期胚胎停育患者(研究组)和30例正常早期妊娠妇女(对照组)为研究对象,采用DNA缺口原位末端标记技术(TUNEL法)检测绒毛滋养细胞和蜕膜细胞的细胞凋亡情况;采用免疫组织化学SP法检测两组绒毛和蜕膜组织中Caspase-3和PLGF的表达水平。结果:①研究组绒毛滋养细胞的凋亡指数(50.16±5.18)%明显高于对照组(18.00±4.00)%(P<0.01),蜕膜细胞的凋亡指数(48.66±4.48)%也明显高于对照组(18.44±3.71)%(P<0.01);②Caspase-3在研究组绒毛组织中表达(0.425 8±0.044 2)明显高于对照组(0.304 3±0.040 1),P<0.01,其在蜕膜组织中的表达(0.417 5±0.051 5)亦明显高于对照组(0.310 7±0.034 2),P<0.01;PLGF在研究组绒毛(0.320 8±0.035 4)和蜕膜(0.317 7±0.021 6)组织中的表达均明显低于对照组(0.405 1±0.029 0,0.412 1±0.034 4),P均<0.01。结论:妊娠妇女胎盘组织内细胞凋亡比例增高,滋养细胞和蜕膜功能受损导致胎盘血管生成障碍可能是早期不明原因胚胎停育发生的基础。  相似文献   

5.
目的:研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和转化生长因子-β3(TGF-β3)在子痫前期患者胎盘组织中的表达及意义。方法:采用免疫组化方法和图像分析系统分别对20例正常孕妇(对照组)和46例子痫前期患者(子痫前期组,其中轻度16例、重度30例)胎盘组织中的HlF-1α和TGF-β3的表达进行分析。结果:①HIF-1α主要表达于胎盘绒毛滋养细胞和蜕膜细胞,与正常组胎盘组织(65.2±1.77)比较,子痫前期组HIF-1α的平均光密度(78.10±3.84)显著升高(P<0.05),重度子痫前期(81.49±1.81)显著高于轻度子痫前期(74.71±1.53)(P<0.05)。②TGF-β3主要表达于胎盘绒毛滋养细胞和蜕膜细胞,与正常组胎盘组织(63.55±2.10)比较,子痫前期组TGF-β3的平均光密度(75.34±3.73)显著升高,其中重度子痫前期(78.05±3.14)显著高于轻度子痫前期(72.64±1.79)。③子痫前期组HIF-1α和TGF-β3的表达呈正相关性(γ=0.351,P<0.05)。其中轻度子痫前期γ1=0.549,P<0.05。重度子痫前期γ2=0.577,P<0.05。结论:胎盘滋养细胞HIF-1α和TGF-β3表达升高可能与子痫前期的发病有关。  相似文献   

6.
目的:探讨KISS-1基因蛋白(metastin)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在妊娠滋养细胞病变(妊娠滋养细胞疾病和自然流产)中的表达及二者的相关性。方法:采用免疫组化S-P法分别检测20例正常早孕绒毛、25例自然流产绒毛、30例完全性葡萄胎、15例侵袭性葡萄胎和15例绒毛膜癌中KISS-1蛋白和MMP-9的表达。结果:KISS-1蛋白在自然流产绒毛中的表达高于正常早孕绒毛(P<0.05);侵袭性葡萄胎和绒毛膜癌中的表达显著低于完全性葡萄胎(P均<0.01);在侵袭性葡萄胎和绒毛膜癌中的表达与临床分期呈负相关。MMP-9在自然流产绒毛中的表达低于正常早孕绒毛(P<0.05);在完全性葡萄胎中的表达高于正常早孕绒毛(P<0.05);侵袭性葡萄胎和绒毛膜癌中的表达高于完全性葡萄胎(P均<0.05);在侵袭性葡萄胎和绒毛膜癌中的表达与临床分期呈正相关。在自然流产绒毛、侵袭性葡萄胎和绒毛膜癌中KISS-1蛋白表达和MMP-9表达均呈负相关。结论:KISS-1蛋白和MMP-9表达的变化可能参与了自然流产和妊娠滋养细胞疾病(葡萄胎、侵袭性葡萄胎和绒毛膜癌)的发生、发展过程,在此过程中两种基因存在着相互作用。  相似文献   

7.
目的:检测足月妊娠分娩发动前后孕妇蜕膜中NK细胞及CD4+CD25+T细胞的变化情况,探讨它们与分娩发动的关系。方法:对40例健康足月孕妇按临产情况分为足月未临产组和足月临产组,收集孕妇蜕膜组织,密度梯度离心法分离出淋巴细胞,流式细胞术(FCM)检测两组中NK细胞、CD4+CD25+T细胞含量。结果:足月临产组的蜕膜NK细胞占蜕膜淋巴细胞的(36.3±6.5)%,足月未临产组蜕膜NK细胞占蜕膜淋巴细胞的(33.9±3.0)%,差异无统计学意义;足月临产组的蜕膜NK细胞表面CDl6的表达明显高于足月未临产组,两者分别为(8.9±1.1)%与(4.6±0.9)%(P<0.05);足月临产组的蜕膜CD4+CD25+T细胞含量明显小于足月未临产组CD4+CD25+T细胞的含量,两者分别为(4.5±0.7)%与(9.1±1.0)%(P<0.05)。结论:足月妊娠分娩发动前、后蜕膜中的NK细胞及CD4+CD25+T细胞发生变化,推测NK细胞与CD4+CD25+T细胞可能参与了分娩发动。  相似文献   

8.
RhoC基因对宫颈癌细胞粘附和侵袭能力的影响   总被引:1,自引:1,他引:0  
目的:研究RhoC对宫颈癌细胞粘附、侵袭和迁移能力的影响。方法:以宫颈癌SiHa细胞株为研究对象,转入RhoC小干扰RNA抑制其表达,通过体外粘附实验、侵袭实验和迁移试验比较SiHa细胞粘附率、侵袭能力和迁移能力的变化。结果:转入RhoC小干扰RNA后,RhoC蛋白的表达明显下调,对细胞外基质的粘附率明显下降(P<0.01),体外侵袭能力和迁移能力明显下降,侵袭抑制率和迁移抑制率分别为(19.94±6.06)%和(19.16±5.26)%。结论:RhoC能明显促进宫颈癌的转移。  相似文献   

9.
目的 研究趋化因子CXCL12对卵巢癌细胞侵袭和转移的作用及机制.方法 采用RT-PCR检测20例上皮性卵巢癌组织、卵巢癌细胞株CAOV3、血管内皮细胞株HUVEC和20例正常卵巢组织中CXCL12的mRNA表达及卵巢癌腹膜后淋巴组织和输卵管平滑肌组织中CXCL12的表达,ELISA法检测20例卵巢癌患者腹水中趋化因子CXCL12表达水平,比较不同浓度CXCL12对CAOV3及HUVEC细胞迁移能力及其表面相关黏附分子表达水平的影响.结果 20例卵巢癌组织、卵巢细胞CAOV3、内皮细胞HUVEC、转移的淋巴组织中CXCL12mRNA相对表达量分别为2.41±1.05、1.92±1.17、1.73±1.12、1.68±1.13,而正常组未检出,各组比较有显著性差异(F=2.907,P=0.032).20例卵巢癌患者腹水中有19例检测到趋化因子CXCL12,检出率95.0%,CXCL12水平为(6 552.7±476.5)pg/mL.与对照组相比,CAOV3细胞经CXCL12处理后,与细胞外基质的粘附能力相对粘附率由(22.65±2.3)%上升至(51.47±2.7)%(t=4.696,P<0.05).卵巢癌细胞株CAOV3与内皮细胞HUVEC中,加入CXCL12处理后,经Tramswell法检测,结果显示细胞数显著增加(t值分别为3.326、3.897、3.215、3.168,均P<0.05),提示细胞的侵袭与迁移能力明显增强,其中浓度为100ng/mL的趋化活性最高,CAOV3 与HUVEC细胞趋化指数分别为4.0±1.5、4.3±1.7,对照组趋化指数分别为1.1±0.5、1.2±0.6,比较差异有统计学意义(t值分别为2.687、2.938,均P<0.05).结论 趋化因子CXCL12通过调控卵巢癌细胞的黏附、侵袭和转移能力,进而提高CAOV3、HUVEC细胞活性,参与卵巢癌细胞的侵袭和转移.  相似文献   

10.
目的:探讨细胞滋养细胞分泌的瘦素(leptin)对自身的生长和侵袭能力的影响。方法:①用RT-PCR及荧光定量PCR方法检测细胞滋养细胞瘦素的表达以及瘦素对其分泌功能的影响。②应用MTT法、体外培养Transwell侵袭模型及运动模型检测瘦素对细胞滋养细胞生长、侵袭及运动能力的影响。结果:①细胞滋养细胞有瘦素mRNA的表达,10ng/ml的瘦素可以显著促进细胞滋养细胞继续分泌瘦素,差异有显著意义(P<0.01);②不同浓度瘦素处理24h及24h后,细胞滋养细胞生长受到抑制,而24h内瘦素可促进滋养细胞侵袭及运动,500ng/ml的瘦素对细胞滋养细胞侵袭及运动的促进作用与对照组比较差异有显著性意义(P<0.05)。结论:细胞滋养细胞分泌的瘦素可以抑制自身的生长,但能增强自身的侵袭及运动。  相似文献   

11.
ObjectiveHyperglycosylated human chorionic gonadotropin (hCG) is a variant of hCG made by cytotrophoblast cell. Here we examine the role of hyperglycosylated hCG in placenta growth and invasion.MethodsJEG-3 choriocarcinoma cells and term cytotrophoblast monolayer culture were prepared. The effect of supplemental hyperglycosylated hCG and hCG was investigated. Growth of these cells was examined by increase in cell number. Invasion was investigated using Matrigel basement membrane cells. The proportion of cell invading Matrigel was determined.ResultsTerm cytotrophoblast cell and JEG-3 choriocarcinoma cells grew to 5 427±834 cells (109%) and 7 114±553 cells (142%). With the supplementation of hyperglycosylated hCG, they grew significantly wider to 7 633±177 cells (142%) and 10 315±1 477 cells (206%). With the supplementation of hCG they diminished to 4 227±769 cells (78%) and 5 620±657 cells (79%). Term cytotrophoblast cell and JEG-3 choriocarcinoma cells penetrated Matigel membranes to (40.0±10.0)% and (46.0±9.8)%. Hyperglycosylated hCG significantly enhanced penetration to (76.0±13.0)% and (84.0±6.6)%. hCG diminished penetration to (32.0±9.1)% and (32.0±4.5)%.ConclusionsHyperglycosylated hCG enhances both cytotrophoblast growth and cytotrophoblast cell invasion. hCG minimally suppresses growth and invasion.  相似文献   

12.
目的:通过对胎儿生长受限患者的胎盘组织细胞凋亡和增殖指数的测定,从细胞增殖与凋亡的角度阐述导致胎儿生长受限发生、发展的病理机制。方法:研究对象来自于2007年2月~2009年2月在该院分娩的胎儿生长受限患者31例(FGR组)和正常足月分娩30例(对照组)的胎盘组织。应用TUNEL法及SP法定量测定各种细胞的凋亡指数及增殖指数。结果:两组胎盘各细胞成分均有凋亡发生,细胞凋亡在两组中均以蜕膜细胞和合体滋养细胞为主。胎儿生长受限组〔合体滋养细胞凋亡指数(36.4±9.2)%,蜕膜细胞凋亡指数(40.2±7.5)%〕与对照组相比〔合体滋养细胞凋亡指数(23.3±5.0)%,蜕膜细胞凋亡指数(28.4±8.2)%〕凋亡明显增多,差异有统计学意义(P0.01)。在胎儿生长受限组细胞滋养细胞内有一定量的增殖细胞核抗原表达〔细胞滋养细胞增殖指数(25.1±5.9)%〕,和对照组相比〔细胞滋养细胞增殖指数(17.2±5.8)%〕细胞增殖明显,差异有统计学意义(P0.01)。结论:在胎儿生长受限及正常晚孕的胎盘中均存在凋亡现象。胎儿生长受限患者胎盘中合体滋养细胞及蜕膜细胞凋亡较正常晚孕明显增多,且细胞滋养细胞表现为明显增生,这可能是引起FGR发生、发展的重要病理过程。  相似文献   

13.
益生菌和酸奶对乳糖不耐受者的作用研究   总被引:7,自引:0,他引:7  
目的:研究益生菌和酸奶对乳糖不耐症(lactoseintolerance,LI)者的作用及其机制。方法:以经乳糖负荷试验筛选的乳糖不耐受者11名为对象,持续摄入益生菌(含B.longum)和酸奶(含L.bulgaricus,S.thermophilus,B.animalis)14d进行补充研究。试验分3个阶段,第1阶段为基值阶段1w,第2阶段为补充阶段2w,第3阶段为补充后阶段1w。在第2阶段前后1d分别进行双标稳定同位素13C-lactose/2H-glucose负荷试验,分析受试者摄入底物后6h呼气H2浓度值,以及血浆13C-glucose和2H-glucose浓度,并计算乳糖消化指数(lactosedigestionindex,LDI),乳糖消化量和口—结肠转运时间(orocecaltransittime,OCTT)。整个实验期间共收集5次粪便样本,分析β-半乳糖苷酶活性。结果:在第2阶段补充结束后个体LI症状评分显著低于补充前(7.09±5.50vs16.09±10.03,P<0.05);LDI、乳糖消化量、OCTT和各时间点呼气H2浓度在补充前后无显著性改变;粪便β-半乳糖苷酶活性在补充第1w即开始升高,补充第2w显著高于基值(147.6±165.8IUvs77.3±77.2IU,P<0.05)。结论:持续摄入益生菌和酸奶具有明显改善乳糖不耐受症状的作用,其原因可能与结肠β-半乳糖苷酶活性的增加有关。  相似文献   

14.
目的:探讨胰岛素生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)对人早孕滋养细胞的迁移和侵袭力的影响。方法:采用原代培养人早孕滋养细胞,划痕实验检测不同IGF-Ⅱ浓度(0μg/L,10.5μg/L,26.5μg/L,52.5μg/L,112.5μg/L)对滋养细胞迁移力的影响,Ma-trigel侵袭试验分析不同浓度IGF-Ⅱ对滋养细胞的侵袭力的影响。结果:IGF-Ⅱ可以明显促进原代培养的人早孕滋养细胞的迁移和侵袭力,并随着药物浓度和时间的增加而增强,各组间有显著性差异。结论:IGF-Ⅱ可明显促进人早孕滋养细胞的迁移和侵袭能力,可能在绒毛外滋养细胞的入侵和胚胎着床过程中具有重要作用。  相似文献   

15.
大鼠肾细胞分离制备及培养方法的比较   总被引:5,自引:0,他引:5  
目的比较胶原酶消化法、胰蛋白酶消化法和胶原酶、胰蛋白酶两步消化法(简称两步消化法)对大鼠肾细胞分离效果及细胞产量的影响,以及不同培养基(MEM、RPMI1640)、鼠龄(乳鼠、成年鼠)对细胞产量、质量、增殖率和乳酸脱氢酶(LDH)漏出量的影响。方法分别对两组Wistar大鼠(乳鼠和成年鼠)用三种不同的消化方法制备大鼠肾组织细胞悬液,分别在MEM培养液和RPMI1640培养液中原代培养,培养48小时之后第一次传代,观察细胞质量,计算细胞产量,MTT法检测传代细胞24~48小时之间的增殖率,生化分析仪检测传代细胞第1~7天培养液中LDH漏出量。结果胶原酶消化法和两步消化法的肾细胞产量显著高于胰蛋白酶消化法(P<0.01),两步消化法的细胞质量优于胶原酶消化法,MEM培养液和RPMI1640培养液对细胞产量、增殖率和LDH漏出量的影响均无显著性差异,乳鼠的肾细胞产量显著高于成年鼠(P<0.01)。结论两步消化法对于肾细胞的分离制备尤为适合,MEM培养液和RPMI1640培养液均适于肾细胞的培养,乳鼠比成年鼠更适合肾细胞的制备。  相似文献   

16.
中央性前置胎盘手术中阿氏切口的临床应用研究(Ⅱ)   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的:探讨阿氏切口(随机胎盘边缘切口)在手术治疗中央性前置胎盘(Complete Placenta Previa CPP)中的临床应用效果。方法:选择2004年6月~2007年6月间的CPP患者92例,其中59例采用阿氏切口的手术方法(新法组)行剖宫产术,33例采用非阿氏切口手术(旧法组),45例非CPP原因行剖宫产者(普通组)进行比较,观察手术中的出血量、术中输血量、手术时间、术后病率等。结果:采用阿氏切口的CPP患者手术时的出血量为(351±152)ml,没有因为手术的原因输血。CPP患者非阿氏切口手术的病人术时出血量为(465±284)ml,术中输血者9例,与用阿氏切口组相比,输血人数和输血量有显著的统计学差异(P<0.001)。非CPP患者的术时出血量为(285±142)ml,与旧法组相比有统计学差异(P<0.05)。CPP患者非阿氏切口手术的病人手术时间(70±25)min明显长于另外两组(45±14)min和(49±17)min(P<0.05)。结论:阿氏切口可以有效地减少CPP患者术时的出血,在术前可以有目的设计好切口,术中不会伤及胎盘和脐带,不因手术而输血,不延长手术时间,术后恢复良好,可以有效提高CPP手术的预见性及可支配性。  相似文献   

17.
赵阳  刘贝  李蕾  钟进义 《卫生研究》2013,42(1):107-109,113
目的研究明日叶查尔酮对2型糖尿病大鼠肝脏葡萄糖转运体2(Glut2)和骨骼肌葡萄糖转运体4(Glut4)蛋白表达的影响。方法制造2型糖尿病大鼠模型,随机分成高、中、低剂量组和糖尿病对照组,分别每日灌胃给予30、10、5和0mg/kg BW明日叶查尔酮。各组以高脂饲料喂养4周后,用葡萄糖氧化酶法检测空腹血糖;放射免疫法检测血清胰岛素含量;免疫组化法检测葡萄糖转运体蛋白表达水平。结果经图像分析,高剂量组肝脏和骨骼肌葡萄糖转运体蛋白表达平均光密度值分别为(0.036±0.0030)和(0.063±0.0139),均较糖尿病对照组显著升高(P<0.05)。高剂量组空腹血糖和胰岛素水平分别为(12.3±1.64)mmol/L和(25.65±3.34)μIU/ml,均较糖尿病对照组显著性降低(P<0.05)。结论明日叶查尔酮可上调2型糖尿病大鼠肝脏葡萄糖转运体2和骨骼肌葡萄糖转运体4蛋白表达水平,降低空腹血糖和胰岛素水平,改善糖尿病胰岛素抵抗状况。  相似文献   

18.
The effectiveness of semen preparation using the migration-sedimentation (MS) method was evaluated, and compared to density gradient centrifuge and swim-up combination (DGC+SU). Sperm selection using MS is based on motility, thus, deleterious effects for which centrifugation has been blamed, are believed to be avoided. Normozoospermic male patients who had more than 10% forward progressive motile sperm in their ejaculate were included in the study. Spermatozoa selected by two different methods were investigated and compared according to sperm motility, concentration, morphology, vitality, DNA fragmentation, and presence of persistent histones. The concentration and motility of sperm in the MS group was improved when compared to the DGC+SU group, but the difference between groups was not significant. The proportion of sperm with normal morphology was found to be 12.19 ± 6.45% vs. 10.67 ± 5.44%, vitality rate was 74.09 ± 16.65% vs. 70.45 ± 16.78%, DNA fragmentation rate was 3.91 ± 3.96%, vs. 2.95 ± 3.33%, presence of persistent histone proportion was 10.59 ± 13.40%, vs. 8.86 ± 7.89% in DGC+SU and MS groups respectively, without significance. The simple technique avoids centrifuge-based damage.  相似文献   

19.
The objective of this study was to investigate the digestion and absorption of egg white-derived angiotensin I-converting enzyme (ACE)-inhibitory peptide TNGIIR in human intestinal Caco-2 cell monolayers. Results showed that the digestion of TNGIIR to simulated gastrointestinal enzymes and brush border membrane peptidases were 5.87% ± 1.92% and 17.17% ± 0.64%, respectively (p?app) of TNGIIR from the apical to basolateral side in Caco-2 cell monolayers was determined to be (4.92?±?0.40) × 10?6 cm/s, indicating that TNGIIR can transport across Caco-2 cell monolayers in intact form. In addition, only cytochalasin D, a disruptor of tight junctions (TJs), changed TNGIIR transport rate significantly (p?via TJs.  相似文献   

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