8-Br-cAMP可上调人视网膜母细胞瘤HX O-Rb44细胞抑癌基因的表达

目的 探讨８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对人网膜母细胞瘤ＨＸＯ－Ｒｂ４４细胞抑癌基因表达的效应，方法 应用ＲＮＡ斑点印迹技术检测细胞ｐ１６、ｐ２１ｗａｆｌ、ｗｐ５３、ｍｐ５３和Ｒｂ的ｍＲＮＡ、应用免疫组化斑点印迷技术检测细胞Ｐ１６、Ｐ２１ｗａｆｌ、ＰＲｂ、ｃｄｋ２、ｃｄｋ４和ＰＣＮＡ蛋白质表达的免疫反应（ＩＲ）。结果 在斑点印迹标本上，人ＨＸＯ－Ｂｂ４４细胞ｐ１６、ｐ２１ｗａｆｌ、ｗｐ５３及Ｒｂ的ｍＲＮＡ信号     

8—Br—cAMP对人视网膜母细胞瘤HXO—Rb44细胞癌基因的表达效应

目的 研究８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对培养的人视网膜母细胞瘤ＨＸＯ－Ｒｂ４４细胞癌基因表达的效应及其与该细胞生长的关系。方法 ｃ－ｆｏｓ ｍＲＮＡ,Ｎ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ及ｐ２１ｒａｓ ｍＲＮＡ均以原位杂交ＲＮＡ斑点印迹技术检测,对繁殖细胞核抗原,ｖ－Ｆｏｓ,Ｎ－Ｍｙｃ和Ｐ＾２１ｒａｓ蛋白表达的免疫反应性则采用免疫组化及收白质斑点印迹技术检测。     

一氧化氮在8-Br-cAMP对视网膜母细胞瘤细胞株影响中的作用

目的研究８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对人视网膜母细胞瘤ＨＸＯ－Ｒｂ４４细胞作用后产生一氧化氮（ＮＯ）的效应,以探讨ＨＸＯ－Ｒｂ４４细胞分化和凋亡的机制。方法应用原位杂交和 ＲＮＡ斑点印迹技术检测 ＮＯＳ ｍＲＮＡ及 Ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ;应用硝酸还原酶法检测ＮＯ的含量;应用蛋白斑点印迹技术检测一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）的酶活性;应用免疫细胞化学及蛋白质斑点印迹技术检测 ＮＳＥ的免疫反应性（ＩＲ）。结果 ＮＯＳ ｍＲＮＡ,ＮＯＳ酶活性,ＮＯ含量和 ＮＳＥ－ＩＲ均为实验组（ＥＧ）强于对照组（ＣＧ）（Ｐ＜０．０１）,而Ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ为ＥＧ弱于ＣＧ（Ｐ＜０．０５）,并在ＥＧ标本上可见ＨＸＯ－Ｒｂ４４细胞呈现神经样的突起。结论 ８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ可使 ＨＸＯ－Ｒｂ４４细胞生成 ＮＯ增加,促进 ＮＯＳ的酶活性和 ＮＯＳ ｍＲＮＡ的表达,提高ＮＳＥ－ＩＲ,并降低 Ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ的表达。结果表明,８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ具有促使 ＨＸＯ－Ｒｂ４４细胞向神经细胞分化并诱导该细胞凋亡的效应,提示ＮＯ可能参与此效应。     

视网膜母细胞瘤患者外周血树突状细胞的体外诱导扩增及鉴定

树突状细胞 (ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｌｓ ,ＤＣ)是目前发现的人体内功能最强的一类专职抗原提呈细胞 (ａｎｔｉｇｅｎｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇｃｅｌｌｓ,ＡＰＣ) [1] 。近年来 ,国外学者应用肿瘤抗原将ＤＣ致敏 ,体外诱导细胞毒性Ｔ淋巴细胞 (ｃｙｔｏｔｏｘｉｃＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ,ＣＴＬ)的产生 ,进行Ｔ淋巴细胞的过继免疫治疗 ,取得了令人鼓舞的结果[2 5] 。肿瘤抗原负载的树突状细胞疫苗既可提高肿瘤的免疫原性 ,又能有效激发抗肿瘤的细胞免疫反应有望成为肿瘤生物治疗的又一新兴手段。有研究表明视网膜母细胞瘤(ｒｅｔｉｎｏｂ…     

环式磁棒摘出眼内异物

眼内异物磁棒接力摘出法 ,于 196 2年首先由张效房应用于临床[1] 。 1989年周开宁等予以改进 ,称为“套式磁棒”[2 ] 。作者试用环式磁棒摘出眼内异物 ,简便实用 ,报告如下 :器械设计 :材料为软铁棒 ,民用的铁丝即可 ,环部与磁棒用同一根铁丝制做而成 (图 1)。 (1)磁棒部 :长 4ｃｍ ,头端钝圆 ,表面极其光滑 ,其前端 2ｃｍ标有刻度 ,以便识别进入眼球内的深度 ,防止损伤眼内组织。磁棒直径分别为 1、1 5、2ｍｍ 3种 ,根据异物大小和磁性强弱选用。 (2 )环部 :环呈圆形 ,大小以能容纳食指为度 ,直径约 1 8～ 2 1ｃｍ ,环与磁棒部约成 30°夹…     

大鼠视网膜神经节细胞发育分化及免疫组织化学染色特征

神经节细胞是视网膜的主要组成成分,其轴突构成视神经,在视觉信号的传导过程中起重要作用。Thy1.1被认为是视网膜神经节细胞的标志物,不少研究报道利用Thy1.1抗体分离纯化并鉴定视网膜节细胞[1]。我们利用多种神经细胞特异抗体,检测分析不同发育时期的大鼠视网膜节细胞染色特征,为全面了解节细胞的生物学特征,对其正确识别和区分节细胞提供了新的实验证据和工具。1材料和方法选取纯种Spregue-Dawley(SD)及Wistar大鼠各3对进行繁殖,其子分别于出生后0、1、3d,1、2周,1、2、4、5、12个月时(每个时间点各3~5只)麻醉后处死,摘除双眼立即放入5…     

完全型杆细胞性单色视(附5例报告)

完全型杆细胞性单色视（ｃｏｍｐｌｅｔｅｒｏｄｍｏｎｏｃｈｒｏｍａｔｉｓｍ）又称典型的全色盲（ｔｙｐｉｃａｌａｃｈｒｏｍａｔｉｓｍ）或称锥体功能不良综合症（ｃｏｍｅｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎｓｙｎｄｒｏｍｅ）。临床上极为少见，约３０万人可有一个［１］，国外虽有较多的报道，但国内至今仅报告１０例。最近我们发现５例，现报道如下。１　临床资料本组完全性杆细胞性单色视共５例，其临床资料见表１。２　讨论本文报告５例（４个家系），均在出生后视力差、畏光在暗处可睁眼。眼球震颤，４例为水平性，１例为旋转性。５表１　…     

糖基化终产物对视网膜微血管周细胞内基质金属蛋白酶表达的影响

基质金属蛋白酶 (ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ,ＭＭＰｓ)可以维持基底膜结构和功能稳定[1] 。Ｇｒａｎｔ等[2 ] 报告 ,ＭＭＰｓ功能异常在糖尿病视网膜病变的发生、发展中起着十分重要的作用。为了解视网膜微血管周细胞的丧失与基底膜增厚的关系 ,我们检测了ＭＭＰｓ在体外培养的牛视网膜微血管周细胞(ｂｏｖｉｎｅｒｅｔｉｎａｌｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒｐｅｒｉｃｙｔｅｓ,ＢＲＰｓ)内的含量 ,同时观察糖基化终产物 (ａｄｖａｎｃｅｄｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎｅｎｄｐｒｏｄｕｃｔｓ,ＡＧＥｓ)对ＭＭＰｓ表达…     

视网膜定位联合液相铺片法用于感光细胞片层制备研究

制备高质量的感光细胞片层是取得良好视网膜移植手术效果的前提[1] 。为此 ,应首先做到以下几点 :(1)在准分子激光切削时 ,视网膜铺片必须平整 ;(2 )各视网膜植片切削深度应均一 ,即各植片在细胞成分构成上相同或接近 ;(3)激光切削要彻底 ,即整个感光细胞片层均能被全部切削。要达到以上要求 ,必须建立一套完整的视网膜定位、取材及铺片操作程序。笔者自行设计的视网膜定位联合液相铺片法技术 ,经实际应用效果满意。材料与方法一、材料1 视网膜来源 :采用北京市红星屠宰场新出生小牛视网膜。摘取小牛眼球置于冷生理盐水中保存 ,4ｈ内完成眼…     

多焦视网膜电图与多焦视诱发电位检测的原理和临床应用

一、多焦视网膜电图 (ｍｕｌｔｉ ｆｏｃａｌＥＲＧ ,ｍＥＲＧ)的产生1877年Ｄｅｗａｒ首先记录了人眼对视刺激的电反应。1941年 ,Ｒｉｇｇｅｓ把接触镜电极引入到记录视网膜电图中(ｅｌｅｃｔｒｏｒｅｔｉｎｏｇｒａｍ ,ＥＲＧ) ;Ｋａｒｐ应用这种方法首次记录了视网膜色素变性中独特的ＥＲＧ反应。Ｓｕｔｔｅｒ和Ｔｒａｎ[1] 在 1992年发明了一种多焦ＥＲＧ系统 ,同时刺激视网膜的多个部位 ,独立采集每一处的反应情况[2 ] ,用地形图的方式直观显示视网膜各部位的反应情况。ｍＥＲＧ同时记录大量局部视网膜的反应 ,可以在短时间内发现细微…     

逆行鼻泪管钻切置管术

下泪道 (泪囊和鼻泪管 )疾病是眼科常见病 ,主要表现为溢泪。治疗上方法众多。作者参考刘东辉[1] 、刘东光[2 ] 、宋俊林[3 ] 、黄海平[4 ] 等报道的治疗方法 ,于 1998年 1月～ 2 0 0 0年 1月2年间 ,自制简易鼻泪管钻切刀 ,逆行钻切鼻泪管狭窄或阻塞处 ,并放置引流管治疗。经观察效果满意。临床资料 :6 2例 6 2眼。男 9例 ,女 5 3例。年龄 36～ 74岁 ,平均 47岁。病程最长 2 0年 ,最短 3月。材料 :取直径 2～ 3ｍｍ穿刺针头 (2 0号～ 30号针头 ) ,去尖 ,截出 4～ 5ｍｍ长一段 ,两端磨平 (鼻泪管钻切刀 )。钝头 7号 ,9号腰穿针。直径 0 5ｍ…     

Bcl-2基因在人角膜上皮细胞中的表达和对细胞凋亡的调控

目的： 探讨 ｂｃｌ２ 基因对人角膜上皮细胞生存过程的影响。方法： 用反转录聚合酶链式反应检测ｂｃｌ２ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 在人角膜上皮细胞中的表达情况。用荧光显微镜、电镜、流式细胞仪观察 ｂｃｌ２ 单克隆抗体对细胞凋亡发生的影响。结果： 用反转录聚合酶链式反应获得 ３３２ｂｐ 的扩增带。荧光显微镜观察， 十个随机视野， 实验组与对照组凋亡细胞比例分别为 ３１２％ 和１７９％ （ｕ 检验， Ｐ＜ ００１）。流式细胞仪检测的结果接近光镜下的结果， 凋亡细胞比例分别为 ３２４％ 和 １９８％ 。电镜下可见典型的凋亡细胞。结论：人角膜上皮细胞有 ｂｃｌ２ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 的表达， ｂｃｌ２ 基因产物具有阻止人角膜上皮细胞凋亡发生的作用。     

细胞凋亡与角膜疾病

Doh1man等 [1 ] 30年以前发现 ,前基质层的角膜细胞在上皮损伤后消失 ,当时被认为是由于机械损伤引起的组织暴露于周围环境及渗透压改变引起的。Cam pos等 [2 ] 于 90年代初在这一研究基础上 ,发现上皮损伤后角膜细胞的消失是由细胞程序性死亡 (PCD)即凋亡引起的。凋亡是生物体在进化过程中去除不需要的细胞 ,而同时不释放降解酶引起周围组织细胞损伤的自身调节过程。凋亡与机体发育、体内环境稳定、感染、损伤和疾病的病理生理变化都密切相关。1　细胞凋亡与大泡性角膜病变大泡性角膜病变时 ,角膜细胞经常破坏并穿过 Bowman膜 ,形成上皮…     

老年黄斑变性患者线粒体基因及表达产物的研究

老年黄斑变性 (ａｇｅ ｒｅｌａｔｅｄｍａｃｕｌａｒｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ,ＡＭＤ)是当前严重的老年性致盲眼病之一。新近研究表明 ,老年性疾病的发生与发展涉及细胞质中线粒体ＤＮＡ (ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌＤＮＡ ,ｍｔＤＮＡ)突变及其参与编码的电子传递链酶复合物活性[1] ,我们通过检测ＡＭＤ患者ｍｔＤＮＡ突变和电子传递链酶复合物活性 ,探讨ＡＭＤ发病与线粒体基因及其表达产物的关系。一、对象与方法1 对象 :选择湿性ＡＭＤ患者 2 6例 ,年龄 (6 4 6± 5 6 )岁 ;干性ＡＭＤ患者 10例 ,年龄 (6 3 9± 9 3)岁 ;另选正常对…     

原子力显微镜观测甲状腺相关眼病患者外周血T细胞

目的 应用原子力显微镜(AFM)对甲状腺相关眼病(TAO)患者外周血T细胞的膜表面进行观测,比较与正常T细胞的异同.方法 采用病例对照研究方法,选择42例TAO患者作为TAO组,根据病情将其分为活动期组(18例)和静止期组(24例),另外选择92例正常人作为正常组.经免疫磁珠法分离得到外周血T细胞,细胞培养进一步将T细胞纯化.流式细胞分析法对T细胞进行鉴定并检测其纯度,AFM原位扫描细胞样品.3组AFM观测数据采用单因素方差分析和Dunnett-t检验.结果 3组T细胞在形态上均呈现较为规则的圆形;正常组T细胞直径约在7～8μm,高度在600～850 nm之间;而TAO急性期T细胞直径偏大,约在9～11 μm之间,表面的凹凸不平较明显,可见颗粒状突起及凹陷,边缘还可观察到有细微的树枝状突起分布;静止期T细胞直径略小,约在8～10μm之间,而膜表而凹凸不平的程度介于其他两组之间.平均粗糙度、峰数、平均峰值高度、平均低谷高度、表面积差值指标在3组中有所不同(F=28.809,58.213,169.789,35.933,121.325;P<0.05),而峰数、表面积差值则存在两两差异(P=0.047,0.002).结论 应用AFM可观测到TAO患者外周血T细胞与正常T细胞膜表而的超微结构有所不同,而且TAO活动期和静止期的T细胞形态上也有差别.     

原子力显微镜观测甲状腺相关眼病患者外周血T细胞

目的 应用原子力显微镜(AFM)对甲状腺相关眼病(TAO)患者外周血T细胞的膜表面进行观测,比较与正常T细胞的异同.方法 采用病例对照研究方法,选择42例TAO患者作为TAO组,根据病情将其分为活动期组(18例)和静止期组(24例),另外选择92例正常人作为正常组.经免疫磁珠法分离得到外周血T细胞,细胞培养进一步将T细胞纯化.流式细胞分析法对T细胞进行鉴定并检测其纯度,AFM原位扫描细胞样品.3组AFM观测数据采用单因素方差分析和Dunnett-t检验.结果 3组T细胞在形态上均呈现较为规则的圆形;正常组T细胞直径约在7～8μm,高度在600～850 nm之间;而TAO急性期T细胞直径偏大,约在9～11 μm之间,表面的凹凸不平较明显,可见颗粒状突起及凹陷,边缘还可观察到有细微的树枝状突起分布;静止期T细胞直径略小,约在8～10μm之间,而膜表而凹凸不平的程度介于其他两组之间.平均粗糙度、峰数、平均峰值高度、平均低谷高度、表面积差值指标在3组中有所不同(F=28.809,58.213,169.789,35.933,121.325;P<0.05),而峰数、表面积差值则存在两两差异(P=0.047,0.002).结论 应用AFM可观测到TAO患者外周血T细胞与正常T细胞膜表而的超微结构有所不同,而且TAO活动期和静止期的T细胞形态上也有差别.     

原子力显微镜观测甲状腺相关眼病患者外周血T细胞

目的 应用原子力显微镜(AFM)对甲状腺相关眼病(TAO)患者外周血T细胞的膜表面进行观测,比较与正常T细胞的异同.方法 采用病例对照研究方法,选择42例TAO患者作为TAO组,根据病情将其分为活动期组(18例)和静止期组(24例),另外选择92例正常人作为正常组.经免疫磁珠法分离得到外周血T细胞,细胞培养进一步将T细胞纯化.流式细胞分析法对T细胞进行鉴定并检测其纯度,AFM原位扫描细胞样品.3组AFM观测数据采用单因素方差分析和Dunnett-t检验.结果 3组T细胞在形态上均呈现较为规则的圆形;正常组T细胞直径约在7～8μm,高度在600～850 nm之间;而TAO急性期T细胞直径偏大,约在9～11 μm之间,表面的凹凸不平较明显,可见颗粒状突起及凹陷,边缘还可观察到有细微的树枝状突起分布;静止期T细胞直径略小,约在8～10μm之间,而膜表而凹凸不平的程度介于其他两组之间.平均粗糙度、峰数、平均峰值高度、平均低谷高度、表面积差值指标在3组中有所不同(F=28.809,58.213,169.789,35.933,121.325;P<0.05),而峰数、表面积差值则存在两两差异(P=0.047,0.002).结论 应用AFM可观测到TAO患者外周血T细胞与正常T细胞膜表而的超微结构有所不同,而且TAO活动期和静止期的T细胞形态上也有差别.     

原子力显微镜观测甲状腺相关眼病患者外周血T细胞

目的 应用原子力显微镜(AFM)对甲状腺相关眼病(TAO)患者外周血T细胞的膜表面进行观测,比较与正常T细胞的异同.方法 采用病例对照研究方法,选择42例TAO患者作为TAO组,根据病情将其分为活动期组(18例)和静止期组(24例),另外选择92例正常人作为正常组.经免疫磁珠法分离得到外周血T细胞,细胞培养进一步将T细胞纯化.流式细胞分析法对T细胞进行鉴定并检测其纯度,AFM原位扫描细胞样品.3组AFM观测数据采用单因素方差分析和Dunnett-t检验.结果 3组T细胞在形态上均呈现较为规则的圆形;正常组T细胞直径约在7～8μm,高度在600～850 nm之间;而TAO急性期T细胞直径偏大,约在9～11 μm之间,表面的凹凸不平较明显,可见颗粒状突起及凹陷,边缘还可观察到有细微的树枝状突起分布;静止期T细胞直径略小,约在8～10μm之间,而膜表而凹凸不平的程度介于其他两组之间.平均粗糙度、峰数、平均峰值高度、平均低谷高度、表面积差值指标在3组中有所不同(F=28.809,58.213,169.789,35.933,121.325;P<0.05),而峰数、表面积差值则存在两两差异(P=0.047,0.002).结论 应用AFM可观测到TAO患者外周血T细胞与正常T细胞膜表而的超微结构有所不同,而且TAO活动期和静止期的T细胞形态上也有差别.     

原子力显微镜观测甲状腺相关眼病患者外周血T细胞

目的 应用原子力显微镜(AFM)对甲状腺相关眼病(TAO)患者外周血T细胞的膜表面进行观测,比较与正常T细胞的异同.方法 采用病例对照研究方法,选择42例TAO患者作为TAO组,根据病情将其分为活动期组(18例)和静止期组(24例),另外选择92例正常人作为正常组.经免疫磁珠法分离得到外周血T细胞,细胞培养进一步将T细胞纯化.流式细胞分析法对T细胞进行鉴定并检测其纯度,AFM原位扫描细胞样品.3组AFM观测数据采用单因素方差分析和Dunnett-t检验.结果 3组T细胞在形态上均呈现较为规则的圆形;正常组T细胞直径约在7～8μm,高度在600～850 nm之间;而TAO急性期T细胞直径偏大,约在9～11 μm之间,表面的凹凸不平较明显,可见颗粒状突起及凹陷,边缘还可观察到有细微的树枝状突起分布;静止期T细胞直径略小,约在8～10μm之间,而膜表而凹凸不平的程度介于其他两组之间.平均粗糙度、峰数、平均峰值高度、平均低谷高度、表面积差值指标在3组中有所不同(F=28.809,58.213,169.789,35.933,121.325;P<0.05),而峰数、表面积差值则存在两两差异(P=0.047,0.002).结论 应用AFM可观测到TAO患者外周血T细胞与正常T细胞膜表而的超微结构有所不同,而且TAO活动期和静止期的T细胞形态上也有差别.     

原子力显微镜观测甲状腺相关眼病患者外周血T细胞

目的 应用原子力显微镜(AFM)对甲状腺相关眼病(TAO)患者外周血T细胞的膜表面进行观测,比较与正常T细胞的异同.方法 采用病例对照研究方法,选择42例TAO患者作为TAO组,根据病情将其分为活动期组(18例)和静止期组(24例),另外选择92例正常人作为正常组.经免疫磁珠法分离得到外周血T细胞,细胞培养进一步将T细胞纯化.流式细胞分析法对T细胞进行鉴定并检测其纯度,AFM原位扫描细胞样品.3组AFM观测数据采用单因素方差分析和Dunnett-t检验.结果 3组T细胞在形态上均呈现较为规则的圆形;正常组T细胞直径约在7～8μm,高度在600～850 nm之间;而TAO急性期T细胞直径偏大,约在9～11 μm之间,表面的凹凸不平较明显,可见颗粒状突起及凹陷,边缘还可观察到有细微的树枝状突起分布;静止期T细胞直径略小,约在8～10μm之间,而膜表而凹凸不平的程度介于其他两组之间.平均粗糙度、峰数、平均峰值高度、平均低谷高度、表面积差值指标在3组中有所不同(F=28.809,58.213,169.789,35.933,121.325;P<0.05),而峰数、表面积差值则存在两两差异(P=0.047,0.002).结论 应用AFM可观测到TAO患者外周血T细胞与正常T细胞膜表而的超微结构有所不同,而且TAO活动期和静止期的T细胞形态上也有差别.