兔眼晶状体上皮细胞的体外培养

目的 建立兔晶状体上皮细胞体外培养的模型。方法 采用组织块培养法,对兔眼晶状体前囊膜进行培养,并利用形态学检查方法和免疫组化技术鉴定。结果 组织块接种２４ｈ后即可见细胞生长,且保持上皮细胞形态,１ｗｋ左右细胞融合,在体外可传至７代,５代以后细胞呈成纤维细胞状,α－晶状体蛋白间接免疫荧光呈阳性反应。结论 成功地建立晶状体上皮细胞体外培养模型,可用于后发性白内障发病机制的研究。     

抗兔晶状体上皮细胞单克隆抗体的制备及特异性研究

目的 为防治白内障术后因晶状体上皮细胞增殖而产生的后发性白内障,制备抗家兔晶状体上皮细胞的单克隆抗体,从而更进一步以其为载体与细胞毒素偶联,特异性抑制晶状体上皮细胞生长而不损伤眼内其他组织。为防治后发性白内障奠定实验基础。方法：应用家兔晶状体上皮细胞与佐剂混合,免疫ＢＡＬＢ／ｓ小鼠,通过聚乙二醇（ＰＥＧ－４０００）使被免疫的小鼠脾细胞与同系小鼠骨髓瘤细胞融合。细胞融合之后龙过ＨＡＴ选择性培养液培养,用间接免疫荧光抗体法和免疫组化ＳＰ法检测杂交瘤细胞上清液中的抗体、筛选出呈阳性反应的杂交瘤细胞上清夜中的抗体,筛选出呈阳性反应的杂交瘤细胞,再经３次甲基纤维素克隆化培养以保证单克隆抗体的特性,最后将此单克隆抗体对人眼组织进行交叉反应。结果 被免疫的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞ＳＰ２／０通过ＰＥＧ－４０００融合后,经ＨＡＴ选     

核心蛋白多糖对兔晶状体上皮细胞增生的抑制作用

目的探讨核心蛋白多糖(Decorin)对兔晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)增生的抑制作用及其剂量-效应与时间-效应的关系,为药物防治后发性白内障提供新的选择。方法 MTT比色法分别测定不同浓度的Decorin(0.1mg·L-1、1.0mg·L-1、10.0mg·L-1)作用于LEC不同时间后的细胞生长抑制率;采用流式细胞技术测定细胞周期,用ELISA法检测各组培养液上清中TGF-β的水平,RT-PCR测定TGF-βmRNA的表达,免疫细胞化学观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)。结果 ELISA示每100万个细胞中对照组TGF-β含量为(427.24±41.34)ng,0.1mg·L-1、1.0mg·L-1和10.0mg·L-1Decorin组TGF-β的含量分别为(236.01±28.63)ng、(117.86±18.14)ng、(111.72±26.72)ng,与对照组比较差异均有显著统计学意义(均为P<0.01)。MTT比色法实验结果显示,作用24h对照组抑制率为(3.62±1.34)%,0.1mg·L-1、1.0mg·L-1和10.0mg·L-1Decorin组抑制率分别为(4.14±2.08)%、(12.93±2.47)%、(23.47±1.78)%,LEC生长抑制率增加,差异均有统计学意义(均为P<0.05);随着Decorin作用时间延长,生长抑制率增加,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。随药物浓度及作用时间延长,LEC出现明显的G0/G1期阻滞,G0/G1期细胞所占比例明显升高(P<0.05)。RT-PCR示Decorin组TGF-βmRNA表达明显减少,与MTT法检测结果呈现大致相同的趋势,免疫细胞化学观察,对照组α-SMA表达较多,细胞肥大,细胞质呈棕色,Decorin组α-SMA较少表达。Decorin表现出明显的抑制作用。结论 Decorin对LEC有抑制增生和诱导凋亡作用,且呈明显的剂量-效应与时间-效应关系,可望成为后发性白内障的防治药物。     

兔晶状体培养及其上皮细胞超微结构观察

探讨兔晶状体培养及其体外生长情况,试图找到一种简单,易行的实验方法,方法对４０只兔晶状体分３组进行体外培养。对生长３,５,７天的３组兔晶状体分别观察,并将其前囊制成透射电镜标本,对其上皮细胞的超微结构进行观察。     

柔毛霉素,骆驼蓬总碱防治兔后发性白内障的实验研究

为探索柔尾霉素（ｄａｕｎｏｒｕｂｉｃｉｎ,ＤＮＲ）、骆驼蓬总碱（ｔｏｔａｌａｌｋｌｏｉｄｏｆＨａｒｍａｌｉｎｅ,ＴＡＨ）对兔后发性白内障形成的影响及对兔眼的毒性作用。于兔晶体囊外摘除（ｅｔｒａｃａｐｓｕｌａｒｌｅｎｓｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ）术中分别注入０．１ｍｌ的ＴＡＨ（０．２ｍｇ／ｍｌ）、ＤＮＲ（０．２ｍｇ／ｍｌ）,观察兔晶体后囊混浊,眼内压的变化等;并观察术后组织病理学和超微结构的变化。结果显示     

维拉帕米对人晶状体上皮细胞整合素表达的抑制作用

目的研究钙通道阻滞剂维拉帕米对人晶状体上皮细胞（LECs）株SRA01/04整合素表达的影响。方法对人LECs株SRA01/04进行培养并传代,分别以0.02、0.04、0.08mmol/L的维拉帕米作用于SRA01/0424h,经流式细胞仪检测SRA01/04各整合素的阳性表达率。结果整合素α2、α3、α5、β1、β2在人LECs株SRA01/04中呈阳性表达,维拉帕米对其表达具有抑制作用,并随药物浓度的增加而逐渐增强（P〈0.05）。结论钙通道阻滞剂维拉帕米对LECs整合素的表达具有抑制作用,可能阻碍整合素介导的LECs黏附、移行和增生,有望成为防治后发性白内障的有效药物。     

小牛晶状体上皮细胞传代培养的细胞学特性

目的 通过建立小牛晶状体上皮细胞的传代培养,观察晶状体上皮细胞的离体生长特性。方法 组织块接和培养;用计数法及ＭＴＴＩ地测细胞生长曲线;绘制细胞分裂指数曲线。结果 采用组织块培养法晶状体上皮细胞原代及传代培养生长良好;ＭＴＴ及细胞计数法所测细胞生长过程基本一致;细胞分裂指数曲线显示细胞在培养第５天达分裂高峰。结论组织块法是晶状体上皮细胞离体培养的较好方法;晶状体上皮细胞具有较好的离体生长能力;ＭＴ     

体外培养兔晶状体上皮细胞胞间通讯的研究

目的　应用荧光淬灭后恢复 (fluorescenceredistributionafterphotobleaching,FRAP)技术研究兔晶状体上皮细胞胞间通讯 ,以及地塞米松和肝素对兔晶状体上皮细胞胞间通讯的影响。方法将体外培养兔晶状体上皮细胞接种于 96孔板 ,培养 2 4h后分别加入地塞米松 (浓度分别为 10、10 0、30 0mg/L)和肝素 (浓度分别为 1× 10 5、2× 10 5、4× 10 5U/L)。各组加入药物后 ,于 37℃继续培养 48h ,以羧基荧光素乙酰乙酸盐 ( 6 carboxyfluoresceindiacetate,CFDA)作荧光染色。以激光扫描仪 (ACASUltima)进行光淬灭并测定平均荧光恢复速率 (meanfluorescenceredistributionrate ,MFRR)。结果　地塞米松组 ,细胞内荧光淬灭后 ,平均荧光恢复速率 ( % /min)分别为 :对照组 0 375± 0 2 36 ,10mg/L组0 491± 0 2 39,10 0mg/L组 0 96 6± 0 44 7,30 0mg/L组 0 984± 0 379(F =2 6 0 7,P <0 0 5 ) ;肝素组 ,平均荧光恢复速率 ( % /min)分别为 :对照组 0 375± 0 2 36 ,1× 10 5U/L组 0 6 94± 0 491,2× 10 5U/L组1 0 97± 0 5 0 4,4× 10 5U/L组 1 0 82± 0 5 0 1(F =19 0 1,P <0 0 5 )。提示地塞米松和肝素可增强兔晶状体上皮细胞间的通讯 ,其作用与二者剂量有关。结论　应用FRAP技术证实兔晶状体上皮     

细胞因子与晶状体上皮细胞

白内障是世界范围内的主要致盲眼病 ,后囊混浊是白内障囊外摘出术和晶状体超声乳化术的主要并发症。而术后残留的晶状体上皮细胞增生迁徙 ,并分泌胶原和基底膜样物质是形成后囊混浊的主要原因之一 [1 ,2 ] 。目前认为细胞因子在细胞生长的调控及在晶状体上皮细胞的增生中起重要作用。它们具有抑制或增殖的功能 [3 ] 。本文就细胞因子对晶状体上皮细胞作用的研究进展作一综述。1　细胞因子细胞因子是一组可溶性的蛋白质 ,具有多种细胞调节活性 [4]。它是血液和组织自身形成的多肽物质 ,通过把愈合所必须的物质聚集到创伤部位 (趋化性 )和诱导…     

不同类型白内障晶状体上皮细胞密度分析

目的 研究人晶状体上皮细胞密度与白内障类型的关系,探讨晶状体上皮细胞病变对白内障发病的意义。方法 随机收集60例白内障手术患者的晶状体前囊膜,固定后铺片,行HE染色后测定上皮细胞密度。按不同类型白内障进行分组,分析晶状体上皮细胞密度与白内障类型及患者年龄以及性别的关系。结果 先天性白内障组晶状体上皮细胞密度最高,平均(4316.63±479.65)个·mm~(-2),平均年龄(9.88±8.16)岁;其次为外伤性白内障组,平均细胞密度(3899.81±537.00)个·mm~(-2),平均年龄(29.43±19.66)岁;并发性白内障组平均细胞密度(3838.46±454.72)个·mm~(-2),平均年龄(54.22±7.63)岁;老年性白内障组平均细胞密度(3740.45±526.33)个·mm~(-2),平均年龄(67.39±11.08)岁。老年性白内障晶状体上皮细胞密度50～59岁组、60～69岁组、70～79岁组、80岁以上组均数间差异无显著性意义,男女患者间差异无显著性意义。结论 白内障晶状体上皮细胞密度与白内障类型有关;老年性白内障晶状体上皮细胞密度与患者年龄及性别无明显相关。     

苦参碱对体外培养的兔晶状体上皮细胞的影响

目的探讨苦参碱（matrine,Mat）对体外培养的兔晶状体上皮细胞（rabbit lens epithelial cell,RLEC）的影响。方法MTT测定0.5g·L^-1、1.0g·L^-1、1.5g·L^-1的Mat分别作用RLEC12h、24h、36h、48h、72h后细胞增生的情况,流式细胞术检测不同浓度的Mat分别作用RLEC6h、12h、24h、48h、72h后增生细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）的表达。结果MTT法结果表明,经0.5g·L^-1Mat处理RLEC12h、24h、36h、48h、72h后,细胞增生抑制率分别为11.64%、20.47%、35.42%、45.82%、52.04%;经1.0g·L^-1Mat处理后分别为27.37%、41.01%、49.99%、63.26%、70.80%;而经1.5g·L-1Mat处理后分别为46.98%、64.36%、73.09%、81.64%、89.32%.随着作用时间的延长和浓度的增加,Mat对rhEGF诱导的RLEC增生的抑制率逐渐增大,呈明显的剂量-效应关系和时间-效应关系。流式细胞术检测表明,Mat能明显抑制体外培养的RLEC内PCNA蛋白表达,也呈明显的时间-效应关系和剂量-效应关系。结论Mat能有效抑制体外培养的RLEC增生和RLEC内PCNA的表达。     

Effect of Liposome—Encapsulated Total Alkaloid of Harmaline on Rabbit Lens Epithelial Cells：Experimental Study on the Prevention of Posterior Capsule Opacification

Purpose: To investigate whether liposome encapsulated total alkaloid of Harmaline (TAH) as a therapeutic agent is beneficial to prevention of posterior capsular opacifi-cation (PCO).Methods: Liposome-encapsulated TAH was prepared by modified freeze-thawing method. 0. 1ml of liposome-encapsulated TAH (0. 2mg/ml) was injected into the capsular bag during extracapsular lens extraction (ECLE) of each eye in total 10 rabbit eyes. Blank liposome or balance salt solution (BSS) was used as control. Slit-lamp examination and histopathological examination was used to evaluated capsule opacifica-tion. Intraocular pressure (IOP) , density and morphology of corneal endothelia cells, the amplitude and latency of b wave of ERG were measured.Results: The inflammatory response was mild both in TAH treated and the control group. PCO formation occurred in the control group 2 weeks postoperatively, but the posterior capsule was clear in TAH treated eyes. 4 weeks and 8 weeks after operation, PCO occurred both in TAH treated     

p21和p27在兔晶状体上皮细胞中的表达

目的:研究细胞周期蛋白激酶抑制因子p21和p27蛋白在不同年龄段兔晶状体上皮细胞（lens epithelial cells,LECs）中的表达规律。方法:分别取10,20,30周龄兔晶状体前囊膜组织,采用RT-PCR和Western-blot检测该组织中p21和p27的mRNA水平和蛋白水平。结果:兔晶状体前囊膜组织中p21与p27的mRNA水平和蛋白水平相似,青年最高,老年次之,中年最低。p21和p27在青年、中年及老年兔LECs中的表达水平有差异（P<0.05）。结论:p21和p27在兔LECs周期调控过程中可能起着平衡作用,对防止PCO的研究具有一定参考价值。     

甘糖酯对囊袋法培养的兔晶状体上皮细胞增生的抑制作用

目的应用甘糖酯（PGMS）抑制囊袋法培养的兔晶状体上皮细胞（LECs）的增生和移行能力,探讨其对后发性白内障的预防和治疗作用。方法健康纯种白兔30只模拟白内障囊外摘出术（ECCE）建立兔LECs体外培养的囊袋模型,将制备好的囊袋浸泡于不同质量浓度的PGMS中分别作用不同时间。实验组分别用0.2、0.4、0.8g/LPGMS浸泡晶状体囊袋,作用时间分别为2、5、10min,空白对照组晶状体囊袋不用PGMS浸泡。囊袋置于含质量分数5%胎牛血清的DMEM培养液中培养。7d后以囊膜细胞覆盖率作为评价指标,观察兔LECs增生、移行情况;应用苏木精-伊红染色法进行组织病理学检查,观察LECs的形态及其与晶状体囊袋的结合情况;透射电镜下观察后囊膜上LECs的超微结构。结果对照组在培养的第3天可见LECs呈铺路石样生长,第7天后囊膜LECs的覆盖率达100%;各实验组LECs的覆盖率较对照组明显下降（P〈0.05）。实验组随着PGMS质量浓度的增加和作用时间的延长,细胞增生、移行的速度明显减慢,其中质量浓度为0.8g/L,作用时间5min和10min组显著抑制兔LECs生长,与对照组和0.2g/LPGMS培养组比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。病理组织学检测表明0.4g/L及0.8g/LPGMS作用2min组晶状体后囊膜LECs数目较对照组和0.2g/LPGMS组明显减少,细胞与囊膜连接不紧密。透射电镜下可见对照组和0.2g/LPGMS组LECs结构完整;0.4g/L及0.8g/LPGMS组可见细胞内有较多溶酶体,细胞质空泡样变性等退行性改变。结论 PGMS对囊袋培养的兔LECs的增生、移行的抑制作用呈质量浓度及时间依赖性。     

兔眼IOL术后基质金属蛋白酶抑制因子在虹膜、晶状体上皮细胞的表达

目的　探讨白内障囊外摘出及人工晶状体植入术后基质金属蛋白酶抑制因子 (TIMPs)在虹膜、晶状体上皮细胞的表达和TIMPs对后囊膜混浊的形成及纤维化的影响。方法　取 2 5只健康成年家兔 ,均一只眼行晶状体囊外摘出及人工晶状体植入术 ,另一眼作为对照组。每 5只兔眼为一组 ,分别于术后 1、3、7、14、3 0d取出虹膜和晶状体上皮细胞 ,用RT PCR和反向酶谱分析法检测各标本中的TIMPsmRNA和蛋白质的表达 ,并用羟脯氨酸试剂盒检测晶状体囊膜羟脯氨酸量的变化。结果　在正常虹膜、晶状体上皮细胞组织均有TIMP 1、 2、 3和 4mRNA的表达 ,而无相对蛋白质活性的表达 ;术后第 1d ,TIMP 1、 2、 3和 4mRNA即出现明显升高 ,其中术后第 7d ,TIMP 1和 2mRNA的表达量为最大 ,此后逐渐下降 ,术后第 3 0d的表达量仍高于对照组 (P <0 0 5 ) ;TIMP 3mRNA轻度升高 ,TIMP 4mRNA则轻度下降 ;羟脯氨酸的含量于术后 1、3、7d和 14d明显低于术后 3 0d(P <0 0 5 )。结论　TIMPs可能是抑制白内障囊外摘出及人工晶状体植入术后细胞外基质降解的主要因素 ,还可能是后囊膜混浊的形成和纤维化的重要原因之一。     

LY294002联合奥曲肽对bFGF诱导的兔晶状体上皮细胞增殖的影响

目的　探讨ＬＹ２９４００２联合奥曲肽对碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ｂＦＧＦ）诱导的兔晶状体上皮细胞（ｌｅｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ,ＬＥＣｓ）增殖的影响。方法　兔眼ＬＥＣｓ经原代和传代培养后,共分为４组:空白对照组、增殖对照组、实验药物组、增殖药物组。空白对照组使用仅含无血清ＤＭＥＭ培养;增殖对照组使用加ｂＦＧＦ（１０ｍｇ·Ｌ－１）的无血清ＤＭＥＭ;实验药物组培养时在不加ｂＦＧＦ增殖的情况下分别单独应用１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１ＬＹ２９４００２、单独应用１０－９ｍｏｌ·Ｌ－１奥曲肽和联合应用１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１ＬＹ２９４００２与１０－９ｍｏｌ·Ｌ－１奥曲肽来培养;增殖药物组在加ｂＦＧＦ增殖的情况下分别单独应用１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１ＬＹ２９４００２、单独应用１０－９ｍｏｌ·Ｌ－１奥曲肽和联合应用１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１ＬＹ２９４００２和１０－９ｍｏｌ·Ｌ－１奥曲肽进行细胞培养,每组重复５次。各组分别培养４８ｈ。ＭＴＴ比色法测定吸光度（Ａ值）分析各组细胞的生长抑制率,流式细胞仪检测各周期细胞的百分率。结果　增殖对照组与空白对照组相比,吸光度Ａ值升高（Ｐ＜０．０５）;实验药物组中各组分别与空白对照组相比,吸光度Ａ值均有不同程度下降（均为Ｐ＜０．０５）;增殖药物组中各组分别与增殖对照组相比,吸光度Ａ值明显下降（均为Ｐ＜０．０５）;生长抑制率与吸光度Ａ值趋势相同。经流式细胞仪分析,实验药物组中联合用药组与两个单独用药组相比Ｇ０／Ｇ１期细胞比例增高,Ｓ期细胞比例降低（均为Ｐ＜０．０５）;增殖药物组中,联合用药组与两个单独用药组相比也出现Ｇ０／Ｇ１期细胞比例增高,Ｓ期细胞比例降低（均为Ｐ＜０．０５）。结论　ＬＹ２９４００２联合奥曲肽较单独用药对ＬＥＣｓ的增殖抑制作用更强。这为临床筛选药物防治后发性白内障提供依据。     

苦参碱体外对兔晶状体上皮细胞细胞周期的影响

目的:研究苦参碱(matrine,Mat)体外对兔晶状体上皮细胞细胞周期的影响。方法:将0.5,1.0和1.5g/L的苦参碱作用于体外培养的兔晶状体上皮细胞,通过流式细胞仪检测其细胞周期各时相的百分比。结果:不同浓度梯度的苦参碱作用体外培养的兔晶状体上皮细胞72h后,与对照组及各浓度的Mat组之间相互比较,随着苦参碱浓度增高,G0-G1期细胞数量明显增加(P<0.05),S期细胞明显减少(P<0.05),呈明显的剂量-效应关系。结论:苦参碱能明显抑制体外培养的兔晶状体上皮细胞的增殖活性和细胞有丝分裂。     

Inhibitory effect of propylene glycol mannate sulfate on growth of rabbit lens epithelial cells in vitro

AIM: To investigate the inhibitory effect of rabbit lens epithelial cell (RLEC) survival and growth by propylene glycol mannate sulfate (PGMS) on the rabbit capsular bag in vitro. · METHODS: Capsular bags were prepared from rabbit eyes after extracapsular cataract extraction (ECCE) and incubated in 0.2, 0.4, 0.8g/L PGMS in 2, 5, 10 minutes incubation periods. After treatment, the capsular bags were cultured for 7 days in Dulbecco minimum essential medium (DMEM) supplemented with 50mL/L fetal calf serum (FCS). The specimens were examined with light microscopy and transmission electron microscopy (TEM). Capsular bags without receiving PGMS only served as controls. · RESULTS: PGMS inhibited the proliferation of RLEC in the manner of concentration and time dependent. At the threshold protocol of incubation in PGMS at 0.8g/L for 5 or 10 minutes, proliferative activity of cells were largely arrested and nearly no RLEC was seen on the posterior capsule (P < 0.05). Control group had no effect on structure and proliferative activity of RLEC, and the growth proceeded rapidly so that the posterior capsule were totally covered by a confluent monolayer of cell by the end of 7 days. Under TEM, the cells in the control group were tightly arrayed with clearly defined cellular boundary and structure; while cellular deformity and undefined intracellular structure could be seen in the 0.4g/L and 0.8g/L experimental groups. · CONCLUSION: PGMS can effectively inhibit the proliferation of RLEC.