染料木苷对FFAs诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗的影响

目的观察染料木苷对游离脂肪酸(FFAs)诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗的影响。方法软脂酸诱导HepG2细胞胰岛素抵抗,给予不同浓度的染料木苷(1、2、4μmol/L)、罗格列酮(1μmol/L)干预,采用MTT法检测药物对细胞增殖的影响,以葡萄糖氧化酶法检测葡萄糖消耗量(GC),使用Western blot法检测肝细胞葡萄糖转运体1(GLUT1)蛋白的表达水平。结果不同浓度的染料木苷对HepG2细胞增殖无影响;与对照组比较,软脂酸作用24h后,HepG2细胞在胰岛素刺激下的GC降低,GLUT1表达减少(P0.05,P0.01);与模型组比较,染料木苷组HepG2细胞GC随浓度增加而明显提高,GLUT1蛋白表达明显增加(P0.05,P0.01)。结论染料木苷能改善软脂酸诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗。     

染料木黄酮诱导人白血病HL-60细胞凋亡的实验研究

[目的]研究染料木黄酮(Gen)在诱导白血病HL-60细胞凋亡时,对c-Myc和Bcl-2蛋白表达水平的影响,初步探讨Gen的抗肿瘤作用机制.[方法]HL-60细胞分别以终浓度0.1 mmol/L、0.5 mmol/L和1.0 mmol/L的Gen处理12 h后,再分别用碘化丙啶染色和异硫氰酸荧光素(FTTC)标记的抗体,用流式细胞仪(FCM)检测凋亡细胞和表达c-Myc或Bcl-2细胞的百分率.[结果]0.1～1.0 mmol/L浓度的Gen可诱导HL-60细胞凋亡,下调c-Myc和Bcl-2蛋白表达水平,且均呈剂量效应关系.[结论]下调HL-60细胞c-Myc和Bcl-2蛋白表达水平,可能是Gen诱导HL-60细胞凋亡的机制之一.     

染料木黄酮诱导膀胱癌T24细胞凋亡的实验研究

目的　研究染料木黄酮对人T2 4膀胱癌细胞的抑制作用和诱导凋亡作用 ,并探讨其作用机制。方法　将不同浓度的染料木黄酮作用于人T2 4膀胱癌细胞 ,用MTT法检测其有效作用浓度 ,分别采用透射电子显微镜、瑞氏染色、Hoechest332 5 8荧光染色、流式细胞仪观察和检测T2 4细胞凋亡情况。结果　MTT法测得染料木黄酮对T2 4细胞的IC50 值为32 80mg·L-1,浓度为 2～ 80mg·L-1的染料木黄酮具有诱导人T2 4膀胱癌细胞凋亡的作用 ,且随药物作用时间延长凋亡率逐渐增加。结论　染料木黄酮具有抗膀胱癌作用 ,其重要作用机制之一是诱导人T2 4膀胱癌细胞凋亡     

染料木素铬配合物对谷氨酸钠诱导的肥胖大鼠糖脂代谢的影响

目的:通过研究染料木素铬配合物(染料木素铬)对L-谷氨酸钠(MSG)诱导的肥胖大鼠糖代谢和脂代谢的影响,为开发治疗肥胖型2型糖尿病的新药提供依据。方法:采用MSG制备肥胖大鼠模型,将成模后的雌性大鼠(体质量超过对照组大鼠平均体质量的20%) 50只随机为模型组、二甲双胍(95 mg·kg^-1)组、低剂量(15 mg·kg^-1)染料木素铬组、中剂量(30 mg·kg^-1)染料木素铬组和高剂量(60 mg·kg^-1)染料木素铬组,另取10只正常大鼠设为对照组,按上述剂量灌胃给予受试药物,每日1次,连续4周。给药结束后取静脉血,采用氧化酶法检测大鼠血清中血糖(Glu)、甘油三脂(TG)和总胆固醇(TC)水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠血清中糖化血红蛋白(GHb)、胰岛素(INS)、一氧化氮合酶(NOS)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、内皮因子1 (ET-1)、前列环素2 (PGI2)、肿瘤坏死因子α (TNF-α)和白细胞介素6 (IL-6)水平。结果:与对照组比较,给药前后其余各组大鼠体质量明...     

苦参碱对HepG2细胞代谢水平和基因水平的影响

目的：观察苦参碱抑制HepG2细胞增殖时，代谢水平和基因水平的变化，以揭示苦参碱抑制HepG2细胞增殖的机制，方法：0-1.5g/L苦参碱作用HepG2细胞3d，免疫组化检测AFP、PCNA,wp53,Rb,N-ras,c-myc蛋白的表达，原位杂交法检测wp53,c-myc mRNA的表达，真彩色图像定量分析检测结果，Microsoft-Excel软件统计学处理结果，放免法检测cAMP,cGMP量的改变；亲和层析法分离肝癌GGT（HSGGT）并检测HSGGT和GGT酶活性。结果：苦参碱处理HepG2细胞后，与细胞代谢相关的指标发生变化；cAMP升高，cAMP/cGMP比值升高，AFP、PCNA、cGNP、GCT、HSGGT量均降低，与基因相关的指标发生变化；抑癌基因wp53,Rb表达增强，癌基因c-myc表达减弱，N－ras表达变化不明显，结论：一定浓度苦参碱处理HepG2细胞后，在代谢水平和基因水平上均抑制了HepG2的恶性增殖，表明苦参碱通过调节抑制癌基因和癌基因的表达，影响癌细胞的代谢从而抑制其增殖。     

染料木黄酮对顺铂诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的增敏作用

目的: 探讨染料木黄酮增强顺铂对人肝癌SMMC-7721细胞生长抑制、诱导凋亡及NF-κB表达的影响.方法: 采用MTT法、透射电镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪和免疫组化技术研究染料木黄酮,顺铂,染料木黄酮与顺铂联合3组药物处理肝癌细胞后生长抑制、形态学变化、诱导凋亡和对NF-κB表达的影响.结果: MTT法证实联合组对细胞抑制作用最强,作用24 ,48 h后(A570nm: 0.497±0.030→0.295±0.098,0.791±0.042→0.312±0.019,P<0.01).镜下可见细胞出现典型凋亡细胞形态学改变.流式细胞仪检测凋亡以联合组最强,细胞周期阻滞于G2/M期.免疫组化技术检测顺铂作用后NF-κB表达(64.9±5.4)%,联合组作用后(23.4±2.1)%(P<0.01).结论: 染料木黄酮通过抑制激活NF-κB表达,增强顺铂诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡.     

染料木黄酮诱导人卵巢癌HO-8910 细胞凋亡的实验研究

目的研究染料木黄酮对人HO-8910卵巢癌细胞的抑制效应和诱导凋亡作用,探讨其机制。方法将不同浓度的染料木黄酮作用于人HO-8910卵巢癌细胞,利用MTT法检测其有效作用浓度,分别采用瑞氏染色、TUNEL、流式细胞仪观察和检测HO-8910细胞凋亡情况。结果MTT法测得其IC50值为28.63 mg/L,浓度为8~128 mg/L的染料木黄酮具有诱导人HO-8910卵巢癌细胞凋亡的作用,且随药物作用时间延长凋亡率逐渐增加。结论染料木黄酮具有抗卵巢癌作用,其重要作用机制之一是诱导人HO-8910卵巢癌细胞凋亡。     

木黄酮对小鼠胰岛β细胞膜电位的影响

目的 :观察长期降低蛋白酪氨酸激酶活性对胰岛 β细胞的影响 .方法 :原代培养的小鼠胰岛 β细胞被 0 .1mmol·L-1 木黄酮 (蛋白酪氨酸激酶抑制剂 )处理 1 2h .采用穿孔式全细胞记录方法记录胰岛 β细胞膜电位的变化 .结果 :在 2mmol·L-1 葡萄糖条件下以及 0 .2mmol·L-1 二氮嗪(KATP通道开放剂 )的作用下 ,木黄酮处理组细胞的静息电位均较对照组明显升高 .在 1 5mmol·L-1 葡萄糖的刺激下 ,小鼠正常胰岛 β细胞经短暂的潜伏期后发生去极化 ,爆发动作电位 ,而木黄酮处理组细胞的去极化潜伏期明显延长 ,动作电位幅度明显减弱 ,动作电位间期的膜电位明显抬高 .结论 :木黄酮长期处理可损害小鼠胰岛 β细胞对葡萄糖的反应 ,提示蛋白酪氨酸激酶活性降低可能是胰岛 β细胞功能障碍的重要原因 .     

染料木黄酮对叔丁基过氧化氢诱导的内皮细胞凋亡的抑制作用

目的 研究染料木黄酮(genistein,Gen)对叔丁基过氧化氢(tert-butyl hydroperoxide,t-BHP)诱导的人血管内皮细胞株EA.hy926凋亡的保护效应并探索其相关分子机制.方法 以t-BHP建立氧化应激损伤体外模型,设立空白对照组、Gen和t-BHP处理组,CCK-8法、流式细胞仪检测Gen对内皮细胞活力、凋亡的影响;Western blot法检测Gen对内皮细胞Caspase-3表达和PPARγ蛋白表达的影响;免疫细胞化学法检测Gen对细胞PPARγ表达定位.结果 t-BHP能明显抑制EA.hy926生长,至最大浓度240 μmol/L时,抑制率达到(93.66±4.66)%,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0 05),半数抑制浓度(IC50)约为100 μmol/L;Gen(5～5 000 nmol/L)能显著抑制t-BHP诱导的内皮细胞凋亡,并呈明显的剂量-效应关系,500 nmol/L预处理组总凋亡率为(12.20±1.28)%,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);Gen能够显著激活PPARγ蛋白的表达,并诱导其核易位.结论 Gen对t-BHP诱导的内皮细胞凋亡有保护效应,其保护效应可能与PPARγ的活化有关.     

siRNA of ADAM17 gene induces apoptosis, proliferation inhibition and enhances the effects of genistein on HepG2 cells

Objective:To investigate the effects of siRNA of ADAM17 gene and genistein on apoptosis and the inhibition of proliferation in HepG2 cells in an attempt to seek an effective therapy for hepatocellular carinoma. Methods:Cells were divided into control groups and experimental groups and siRNA was used to silence the ADAM17 gene, alone and in combination with genistein. Cells were harvested at several time periods and assessed for proliferation and apoptosis. Proliferation was assayed by MTT at 24, 48, 72 and ...     

重组P_(53)基因在HepG-2中的表达及作用

为进一步探索正常Ｐ５３ 对肿瘤细胞增殖的抑制作用,本文用磷酸钙 ＤＮＡ共沉淀法,将本室构建的ＰＸＴ１ Ｐ５３ 真核表达细胞转移至ＨｅｐＧ ２ 肝癌细胞系内,经斑点杂交技术和间接免疫荧光技术证实,外源性Ｐ５３ 基因已在ＨｅｐＧ ２ 细胞中稳定表达,导入的Ｐ５３基因亦能抑制ＨｅｐＧ ２ 肝癌细胞系增殖并诱导其凋亡。实验结果提示正常Ｐ５３ 基因可成为治疗不同肿瘤的重要靶分子之一。     

重复加热对肝癌HepG2细胞增殖及细胞周期蛋白D1的影响

目的探讨多次热疗后残存下来的HepG2细胞增殖速度的变化及与此相关的可能原因。方法HepG2细胞43℃加热，每次80分钟，每天两次，共10个循环后，分析细胞倍增时间，检测细胞周期及细胞周期素D1的表达。结果热处理后的HepG2细胞增殖加快，细胞周期中S期和G2期的比率增高，细胞周期素D1的表达增强。结论热处理后的HepG2细胞增殖加快与其完成DNA复制而进入分裂的细胞比率高、细胞周期素D1的表达增强有关。     

siRNA of ADAM17 gene induces apoptosis, proliferation inhibition and enhances the effects of genistein on HeoG2 cells

Objective:To investigate the effects of siRNA of ADAM17 gene and genistein on apoptosis and the inhibition of proliferation in HepG2 cells in an attempt to seek an effective therapy for hepatocellular carinoma. Methods:Ceils were divided into control groups and experimental groups and siRNA was used to silence the ADAM17 gene, alone and in combination with genistein. Cells were harvested several time periods and assessed for proliferation and apoptosis. Proliferation was assayed by MTT at 24, 48, 72 and 96 hours following treatment and apoptosis was assessed by flow cytometric analysis at 48 hours. Results:In siRNA groups, proliferation of cells was significantly inhibited compared to the control groups at 24, 48 and 72 hours(P< 0.05), and apoptosis was significantly increased at 48 hours(P< 0.01);In genistein groups, proliferation was inhibited at 24, 48, 72 and 96 hours, and the apoptosis ratio was significantly a further significant decrease of proliferation and increase in apoptosis compared with either treatment alone. Conclusion:The ADAM17 gene could be an effective target, and genistein couM be a useful agent, in the treatment of hepatocellular carcinoma, siRNA of ADAM17 gene and genistein both inhibited HepG2 cells proliferation and promoted apoptosis, and further, the combination of these treatments had a greater effect than either treatment alone.     

龙葵碱对人肝癌HepG2细胞N-乙酰基转移酶活性的影响

目的探讨龙葵碱对HepG2细胞N-乙酰基转移酶(NAT)活性的影响。方法采用HPLC方法,以2-氨基芴(2-AF)为底物,以2-AF被NAT乙酰化为2-乙酰氨基芴(2-AAF)的量来反应NAT的活性。结果龙葵碱能显著降低HepG2完整细胞NAT的活性;龙葵碱能够降低HepG2细胞质内NAT的活性,作用具有剂量依赖性。结论龙葵碱通过抑制HepG2细胞NAT的活性发挥细胞毒作用。     

金雀异黄素对高糖培养下大鼠系膜细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨金雀异黄素对体外高糖条件下大鼠系膜细胞(MC)增殖及凋亡的影响.方法:对照组:低糖DMEM培养液(不含金雀异黄素),实验组:高糖DMEM培养液(含0,1,5,10,30,50 μmol/L金雀异黄素),各组分别培养12,24,36,48 h.氮蓝四唑盐(MTT)法检测MC的增殖情况,DNA琼脂糖电泳、末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法、流式细胞术3种方法检测细胞凋亡情况.结果:10,30,50μmol/L金雀异黄素作用24 h可明显诱导细胞凋亡(P＜0.05),而0,1,5 μmol/L作用不显著.随着金雀异黄素浓度的增加,凋亡比例增加;同一浓度的金雀异黄素随着作用时间的延长,凋亡比例亦增加.结论:一定浓度的金雀异黄素在体外高糖培养条件下,可抑制大鼠MC增殖,促进其凋亡,且与其浓度和作用时间有关.     

过氧化氢对人肝癌细胞株HepG2增殖的促进作用

目的:探讨低剂量过氧化氢(H2O2)对人肝癌细胞株HepG2的促增殖作用及该作用与NF-κB和细胞周期的关系. 方法: 不同剂量H2O2直接作用于培养的HepG2细胞;20 μmol/L NF-κB抑制剂(PDTC)预处理细胞2 h, 50 μmol/L的H2O2作用HepG2细胞;50 μmol/L H2O2分别作用于G1, G2/M, S期细胞,MTT法测定细胞增殖活性. 结果: 50 μmol/L的H2O2具有明显的促进HepG2细胞生长的作用,此作用可以被PDTC抑制;50 μmol/L的H2O2可以明显的促进G1期HepG2细胞生长. 结论: 低剂量H2O2可诱导HepG2细胞增殖,该过程可能包含依赖NF-κB的信号途径的参与;H2O2诱导HepG2细胞增殖在细胞周期的不同时相效应敏感性不同,主要诱导G1期细胞增殖.     

重型肝炎病人血浆对体外培养HepG2细胞生长和解毒功能的影响

目的了解重型肝炎病人血浆(severe-hepatitis plasma,SHP)对HepG2细胞生长和解毒功能的影响,为保持生物人工肝反应器内肝细胞活性研究提供实验依据.方法复苏培养HepG2细胞,通过细胞总蛋白含量和细胞周期测定、形态变化观察了解SHP对细胞生长的影响,从细胞周期角度探讨这种影响的机制.同时,通过谷胱甘肽含量检测了解SHP对细胞解毒功能的影响.结果①SHP培养HepG2细胞总蛋白合成显著下降(F=46.852,P＜0.01),浓度越高下降幅度越大,形态观察细胞细小,明显稀疏;终止SHP培养,换用普通培养液后细胞仍有LDH漏出,24 h时高出对照组近1倍;细胞生长周期测定发现SHP培养的HepG2细胞S期所占比例比对照组增高,第1天差异非常显著(F=92.239,P＜0.01),第3天只有100%SHP组增幅差异非常显著(多重比较P＜0.01).②各种浓度SHP培养的HepG2细胞谷胱甘肽含量第1天均显著升高(F=10.097,P＜0.01),但第3天开始下降;不同浓度间GSH含量差异显著(F=8.097,P＜0.05).结论SHP抑制HepG2细胞生长,短时间内可促进HepG2细胞解毒,但随时间延长解毒功能耗竭.     

白藜芦醇抑制HepG2细胞生长和对细胞间隙连接通讯的影响

目的研究白藜芦醇对人肝癌细胞HepG2的生长抑制作用以及对细胞间隙连接通讯（GJIC）的影响。方法利用MTT法观察白藜芦醇对HepG2细胞的生长抑制作用。流式细胞仪检测细胞周期的时相分布，使用荧光探针5＇-CFDA／AM标记细胞．采用荧光漂白后重恢复技术（FRAP）和共聚焦显微镜技术观察白藜芦醇对HepG2细胞间隙连接通讯的影响。结果不同浓度的白藜芦醇处理细胞不同时间后，HepG2细胞的生长增殖明显受到抑制，抑制率最高达92．1％，各处理组间比较均有显著性差异（F=18．532，P〈0．05）；细胞周期分析显示，白藜芦醇能诱导HepG2细胞在S期停滞．抑制细胞DNA的合成并可诱导细胞凋亡：另外，白藜芦醇有恢复HepG2细胞间隙连接通讯的功能，且随浓度增加而增加。结论白藜芦醇可抑制HepG2细胞增殖，使细胞停滞于S期，并能诱导细胞凋亡；白藜芦醇还有恢复HepG2细胞间隙连接通讯功能的作用，提示此作用可能是白藜芦醇抑制HepG2细胞增殖和抗肿瘤作用的机制之一。     

携目的基因的靶向超声微泡对肝癌HepG2细胞增殖活性的影响

目的 制备一种靶向肝癌HepG2细胞的载单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶(HSV-TK)基因超声微泡,并考察其体外寻靶能力及对HepG2细胞的增殖抑制作用.方法 用机械振荡法制备超声微泡,生物素-亲和素桥连方式构建靶向载HSV-TK超声微泡.检测其一般特性,并进行体外实验检测其对HepG2细胞增殖的影响.结果 靶向载HSV-TK超声微泡可较多地聚集在HepG2细胞表面,通过检测增殖细胞核抗原(PCNA)及噻唑蓝(MTT)法,发现载基因靶向微泡组的增殖能力明显下降,细胞凋亡明显增加,细胞侵袭实验表明载基因靶向微泡组(22.18±2.01)较对照组及载基因非靶向微泡组明显减少,对HepG2细胞增殖及侵袭能力有较好的抑制作用.结论 携目的基因靶向超声微泡对肝癌HepG2细胞在体外有较好抑制效果.