免疫透射比浊法检测降钙素原的方法学评价

<正>血清降钙素原(PCT)定量检测通常采用电化学发光免疫分析法和酶联免疫发光法,临床进行该项目检测时,往往要购进特殊仪器设备且试剂昂贵或者操作繁琐,不利于基层医院检测。随着免疫技术的进步,胶乳增强免疫透射比浊法检测PCT应运而生,按照医学实验室认可标准ISO15189和《临床实验室管理办法的要求》,实验室必须对选用的方法进行分析性能验证或评价,证实其性能能够达到临床检测所要求的质量后方可用于临床检测。对此,本研究对胶乳增强免疫法检     

补体Clq与系统性红斑狼疮疾病活动性的相关研究

目的 研究补体Clq与系统性红斑狼疮(systemic erythematosus,SLE)疾病活动的相关性.方法 用免疫透射比浊法测定60例SLE患者、40例其他风湿性疾病患者及30名健康对照者血清中补体Clq的水平,比较各组人群血清中Clq水平的差异,研究血清中Clq水平与系统性红斑狼疮疾病活动指数(systemic lupus erythematosus disease activity index,SLEDAI)的关系.结果 SLE组的血清Clq水平(152±30 mg/L)显著低于其他风湿性疾病患者(198±25 mg/L)及健康对照者(187±28 mg/L),P＜0.05; SLE活动期Clq水平(134±34 mg/L)明显低于SLE稳定期(162±25 mg/L),P＜0.05;补体Clq水平与SLE的活动性(SLEDA1评分)呈显著性负相关,r=0.453.结论 血清Clq水平在SLE中降低,血清Clq水平与SLE病情活动性相关.     

应用免疫透射比浊法测定免疫球蛋白方法学的建立

一 为建立免疫球蛋白及补体血清浓度的免疫透射检测方法。利用伊利康生物技术有限公司特种蛋白试剂在Olympus Au560上建立分析方法。此方法平均收回率为98.2％,批内变异系数≤3.0％,批间<5.0％,用卫生部临检中心提供的质控血清做比较,所有结果均符合此标准。免疫比浊测定具有灵敏、准确、稳定、特异、干扰少的特点,可以做为免疫球蛋白血清浓度的非放射性常规方法。     

IgM特异性激活补体Clq类循环免疫复合物的检测

目的：建立检测IgM特异性激活Clq类循环免疫复合物（IgG/Clq-TCIC）的捕捉法ELISA。方法：以羊IgM抗人Clq为包被抗体，HRP－羊抗人IgM为检测抗体，采用捕捉法ELISA检测IgM/Clq-TCIC,并通过阻断试验、替代试验、重复性试验进行方法学论证。结果：最佳包被浓度为15μg/ml，标本稀释度为1：75，酶标抗体浓度为1：800。结论：本法敏感度高、特异性强、重复性好，对研究经典途径激活补体类循环免疫复合物具有重要意义。     

免疫透射比浊法检测视黄醇结合蛋白的方法学探讨

目的探讨免疫透射比浊分析法检测视黄醇结合蛋白（RBP）的有效性。方法采用方法学评价指标对免疫透射比浊法检测RBP进行评价。结果免疫透射比浊法检测RBP批内、日间CV分别为5.08%、6.02%,平均误差5.67%,线性相关系数r为0.989,平均回收率为105.9%;胆红素（100μmol/L）、甘油三酯（5mmol/L）对RBP的干扰分别为1.24mg/L、0.85mg.L。结论免疫透射比浊法检测RBP是一种精密度好、准确度高,反应线性良好、实用、快速,且能全自动化检测的分析方法,值得临床推广。     

免疫透射比浊法CRP检测试剂盒的性能评价

目的 评价日本（ITARON）CRP试剂盒检测C反应蛋白（CRP）的可靠性。方法分别用ITARON试剂盒与西班牙BioSystems试剂盒、德国Human试剂盒同时对50例临床标本进行检测，并通过线性试验、准确性试验、重复性试验对IATRON试剂进行评价。结果IATRON与其它两种进口试剂的相关系数均为0．998，差异无显著性（P〉0．05）；用IATRON试剂盒检测二种质控物的相对误差分别为3．33％及0．29％；重复性试验显示批内变异系数为2．48％，批间变异系数为2．72％；线性试验显示检测浓度在10mg／dl以内呈良好线性。结论 IATRON试剂测定CRP浓度具有较好的精密度，结果准确可靠，其性能符合临床使用要求。     

免疫透射比浊法检测降钙素原的实验评价

目的对免疫透射比浊法定量测定降钙素原的方法进行实验评价。方法实验评价包括精密度、线性、回收实验及干扰实验。结果该方法测定降钙素原线性良好(y=1.152x-0.0452,r=0.999),批内CV5%,批间CV10%;回收率平均97.7%;对胆红素、血红蛋白及三酰甘油具有较好的干扰能力。结论该方法简便、快速,便于自动化检测,适合临床使用。     

一种国产免疫蛋白补体试剂盒的评价

目的：降低免疫球蛋白,补体检测成本,寻找合格的国产试剂,方法：将奥博公司ＩｇＧ,ＩｇＡ,ＩｇＭ,Ｃ３,Ｃ４试剂盒与Ｂｅｃｋｍａｎ公司原装进口试剂盒进行比较,所用仪器为Ｂｅｃｋｍａｎ公司Ａｒｒａｙ Ｓｙｓｔｅｍ,检测原理为速率散射比浊法。结果：奥搏公司生产的ＩｇＧ,ＩｇＡ,ＩｇＭ,Ｃ３,Ｃ４试剂可用Ｂｅｃｋｍａｎdisplay structure     

免疫透射比浊法模拟实验设计

免疫学分析技术越来越多地应用于临床化学分析.免疫比浊法特异性强、反应速度快、操作简单,可在自动分析仪上批量检测,是目前临床使用最多的方法学之一.医学检验常用免疫透射比浊法(或免疫散射比浊法)测定体液中载脂蛋白、免疫球蛋白、补体以及一些微量的特殊蛋白质(如C反应蛋白、前清蛋白、抗胰蛋白酶、β2微球蛋白等).由此,免疫比浊分析技术成为医学检验专业学生必须掌握的技能之一.然而,临床开展的免疫透射比浊分析项目,由于分析试剂主要是为上机操作设计的,不适合手工操作,加上试剂价格昂贵.中等卫生学校难以开展免疫比浊分析技术的实践教学.为此,我们设计了免疫透射比浊法模拟实验,并应用于教学.获得满意的效果.     

免疫增强透射比浊法测定超敏C-反应蛋白的方法学评价

目的：对免疫增强透射比浊法在全自动生化分析仪上测定超敏C-反应蛋白(Hs-CRP)的方法进行评价。方法：检测该方法的分析范围、最低检测限、精密度、抗干扰能力及参考范围。结果：免疫增强透射比浊法测定Hs-CRP的分析范围为0．125～12．5mg／L，最低检测限为0.115mg／L，批内、批间精度分别为0．89％和0．90％；本实验室Hs-CRP的参考范围为0．20～2．60mg／L。结论：免疫增强的透射比浊法在全自动生化分析仪上测定Hs-CRP的方法具有敏感性高、稳定性好、方便快速的优点，适宜于在临床推广应用。     

应用NCCLS EP10-A2对自建生化检测系统进行初步性能评价

目的对自建生化检测系统进行初步性能评价。方法依照NCCLS制定的EP10-A2文件,使用自建体系测定血清肌酸激酶(CK)、总胆固醇(Tch)、尿素(Urea)、无机磷(Pi)等四个项目,计算其偏差、总不精密度,及其截距、斜率、非线性、互染率、漂移性,并进行t检验。结果CK、Tch低值、中值、高值偏差及总不精密度均在允许范围内;Urea、Pi低值偏差超过允许偏倚,中值、高值偏差及总不精密度均在允许范围内。CK截距、斜率、非线性、互染率、漂移性均无显著性差异。Tch、Pi截距有显著性差异,Urea斜率有显著性差异;Tch、Urea、Pi非线性、互染率、漂移性均无显著性差异。结论使用自建生化检测体系测定CK、Tch、Urea、Pi,总不精密度均小于1/3 CLIA’88 TEa,互染率较低,稳定性较好;但Urea、Pi低值与标准检测体系存在一定的差距,准确度有待改善。     

血管紧张素转移酶紫外分光光度法的方法学评价

目的初步评价血管紧张素转移酶检测试剂盒性能。方法依据临床和实验室标准协会颁布的《定量临床检验方法的初步评价,批准指南第2版(EP10-A2)》提供的方法,按特定的顺序连续测定低、中、高浓度的质控品5d,对该试剂盒检测方法的性能进行初步评价。结果血管紧张素转移酶低、中、高浓度的质控血清的靶值分别为49、89.5、130U/L时,按特定的顺序连续测定5d,没有离群值。线性回归方程为y=0.879x+8.45,相关系数为0.9964;绝对偏差分别是0.64、1.26、-9.6U/L;总不精密度(CV%)分别为4.39%、2.26%、1.39%。结论血管紧张素转移酶检测试剂盒检测方法的线性、总变异和抗交叉污染能力均达到EP10-A2文件的标准,符合临床应用要求。高值的偏差提示超出可接受范围,需要进一步进行评估。     

补体C1q与系统性红斑狼疮疾病活动性的相关研究

目的研究补体Clq与系统性红斑狼疮（systemic erythematosus,SLE）疾病活动的相关性。方法用免疫透射比浊法测定60例SLE患者、40例其他风湿性疾病患者及30名健康对照者血清中补体Clq的水平,比较各组人群血清中Clq水平的差异,研究血清中Clq水平与系统性红斑狼疮疾病活动指数（systemic lupus erythematosus disease activity index,SLEDAI）的关系。结果 SLE组的血清Clq水平（152±30mg/L）显著低于其他风湿性疾病患者（198±25mg/L）及健康对照者（187±28mg/L）,P〈0.05;SLE活动期Clq水平（134±34mg/L）明显低于SLE稳定期（162±25mg/L）,P〈0.05;补体Clq水平与SLE的活动性（SLEDA1评分）呈显著性负相关,r=-0.453。结论血清Clq水平在SLE中降低,血清Clq水平与SLE病情活动性相关。     

心肌肌钙蛋白I酶联荧光免疫定量检测方法的方法学评价

目的初步评价心肌肌钙蛋白I(cTnI)的酶联荧光免疫定量测定方法的临床应用性能。方法依据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)颁布的《定量临床检验方法的初步评价;批准指南(EP10-A)》提供的方法,按特定的顺序连续5d测定高、中、低浓度标准品中的cTnI,对MINIVIDAS测定cTnI的方法进行初步评价。结果当标准品中的cTnI浓度为0.602μg/L、7.911μg/L、15.22μg/L时,cTnI测定的回归方程为Y=1.02X-0.12,相关系数r2=0.9999;绝对偏差分别是-0.06μg/L、-0.09μg/L、0.18μg/L;总不精密度分别是7.22%、2.17%、1.62%。结论MINIVIDAS酶联荧光免疫定量测定cTnI方法的检测性能符合临床应用要求。     

自建新检测系统ALT测定的精密度和正确度评价

目的通过对自建新检测系统与参考系统ALT测定进行精密度和正确度评价,探讨自建新检测系统ALT测定结果的随机误差和系统误差,是否达到临床可接受标准。方法参照CLSI的EP5-A2和EP9-A2文件,以德灵全自动生化分析仪检测系统作为参考系统,自建新检测系统作为待评系统,分别用质控品和新鲜标本进行精密度评价和正确度评价。结果精密度评价:自建新检测系统天间不精密度和批内不精密度分别小于1/3和1/4允许误差;正确度评价:两个检测系统相关性良好,系统误差在临床允许误差范围内。结论自建新检测系统的误差达到临床可接受标准,检测结果具有可比性。     

应用NCCLS Ep9-A2对两种血糖仪的血糖检测结果进行比较

目的:通过对强生SureStep稳步系统血糖仪和拜安康TM血糖监测仪进行比对,评价两种血糖仪检测血糖结果的一致性。方法:按照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP9-A2文件的要求,以强生SureStep血糖分析仪为比较仪器,拜安康TM血糖分析仪为待评仪器,两台血糖仪分别测定44例患者静脉全血的血糖值,并对两仪器进行方法比对和偏倚估计。结果:强生和拜安康的血糖结果具有较好的相关性,其回归式方程为 ,相关系数。两种血糖仪器测定结果的预期偏倚在Xc为2.8mmo1/L、7.0mmo1/L和11.2mmol/L时分别是0.178、-0.435和-1.408,预期偏倚95%的可信区间包含了规定的可接受偏倚。结论:强生和拜安康两种血糖仪测定静脉血样本时,测定结果的预期偏倚可以接受。检测血糖可以在强生和拜安康两种血糖仪上任意检测。     

应用抗人Clq单克隆抗体亲和层析柱分离人血清中Clq的研究

本文报道了一种以抗人Cl_q单克隆抗体亲和层析柱分离人血清中Cl_q的方法。该法简便快速,可于24～48小时内完成。Cl_q产量约为7～10mg/100ml血清。该制剂经双向扩散及免疫电泳试验,未发现免疫球蛋白污染;SDS-PAGE分析表现典型的Cl_q亚单位结构;经红细胞凝集和胶乳凝集试验测定,其生物学活性比较好。抗人Cl_q单克隆抗体Sepharose 4B柱反复使用10余次,4℃冰箱保存将近一年仍保持活性。     

用CLSIEP方案评价总胆红素试剂分析性能

目的通过应用CLSIEP方案分别对国产和进口总胆红素（TBil）试剂的分析性能评价,了解国产总胆红素试剂分析性能能否满足临床需要。方法在同一台全自动生化分析仪上,同时测定试剂准确度、精密度、最低检测限、线性范围、干扰试验、方法比对实验、稳定性观察等7项技术指标。结果两种试剂准确度测定,其相对偏差≤±10％;批间变异系数〈4．0％;国产TBil试剂线性范围0．5—865．0μmol／L,进口试剂线性范围0．4—869．0μmol／L;国产TBil试剂的最低检测限为0．5μmol／L,进口试剂的最低检测限为0．4μmol／L;方法比对实验结果Y=1．0069X＋0．9366．R0=0．9993;抗干扰能力无明显差异;试剂稳定性相近。结论国产总胆红素试剂与进口试剂的分析性能差异无统计学意义。能满足临床实验室的需要。     

EP2受体介导的前列腺素E2影响胆管细胞癌细胞HuCCT1细胞间黏附因子-1表达和侵袭的研究

目的:探讨前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)通过EP2受体影响人胆管细胞癌细胞HuCCT1细胞间黏附因子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的表达及癌细胞的侵袭能力?方法:用PGE2?EP1~4四种受体激动剂(17-phenyltrinor Prostaglandin E2?Butaprost?Sulprostone和Prostaglandin E1 Alcohol)?EP2受体抑制剂AH6809?腺苷酸环化酶(AC)抑制剂SQ22536和蛋白激酶A(PKA)抑制剂H89处理HuCCT1细胞,通过Western blot?划痕试验等方法检测ICAM-1的蛋白表达水平以及HuCCT1细胞侵袭能力的变化?结果:PGE2明显提高HuCCT1细胞ICAM-1蛋白的表达水平,5 μmol/L PGE2处理HuCCT1细胞24 h后,ICAM-1蛋白表达水平与对照组相比上升了66.17%(P < 0.05),并呈浓度依赖性和时间依赖性;5 μmol/L PGE2处理HuCCT1细胞24 h后,HuCCT1细胞的侵袭能力较对照组增强了43.29%(P < 0.01)?10 μmol/L EP1~4受体激动剂处理HuCCT1细胞24 h后,ICAM-1蛋白的表达水平与对照组相比明显增高,其中EP2受体激动剂上升了257.88%(P < 0.05),10 μmol/L EP2受体激动剂处理HuCCT1细胞24 h后,HuCCT1细胞的侵袭能力较对照组增强了56.99%(P < 0.01);10 μmol/L EP2受体抑制剂AH6809处理后ICAM-1蛋白的表达水平与PGE2组相比下降了49.14%(P < 0.05),细胞侵袭能力下降了52.06%(P < 0.01)?25 μmol/L AC抑制剂SQ22536?10 μmol/L PKA抑制剂H89处理HuCCT1细胞后,ICAM-1蛋白的表达水平较EP2受体激动剂处理组分别下降了72.87%(P < 0.05)和80.78%(P < 0.05)?结论:PGE2可通过EP2受体激活cAMP-PKA信号转导通路上调HuCCT1细胞ICAM-1的表达,从而促进HuCCT1细胞的侵袭转移?     

BCG对变态反应性鼻炎小鼠的TH细胞免疫影响研究

目的:观察BCG对变态反应性鼻炎小鼠的TH细胞免疫的影响并探讨其机制.方法:30只昆明小白鼠随机分为对照组,变态反应性鼻炎组及于预组,干预组造模前及后5d分别以BCG皮内注射干预,造模2周后采用流式细胞仪分析测定外周血Th1/Th2细胞之比,ELISA试荆盒IL-4、IL-10、IFN-γ水平.绪果:造模组外周血中IL-4、IL-10较正常对照组明娃升高,而IFN-γ水平降低(P<0.05);与造模组相比,治疗组外周血中IL-4、IL-10水平下降,IFN-γ水平升高(P<0.05);造模组外周血Th1/Th2比值较正常对照组下降(P<0.05);与造模组比较,干预组Thl/Th2比值升高(P<0.05).结论:Th1/Th2失平衡足变成性鼻炎发病的疆要机理,BCG能调节变态反应性鼻炎小鼠的T细胞免疫,干预变廊性鼻炎的发病.