阿托伐他汀抑制血管平滑肌细胞Cyr61的表达

目的 探讨阿托伐他汀对增殖的血管平滑肌细胞Cyr61的作用.方法 贴块法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,将培养的平滑肌细胞分为正常对照组、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)组和阿托伐他汀组.AngⅡ组将1μmol/L AngⅡ加入平滑肌细胞培养基,共培养180 min;阿托伐他汀组在AngⅡ刺激细胞前1h加入10 μmol/L阿托伐他汀到培养基中.采用RT-PCR及Western blot检测各组中各时点Cyr61 mRNA和蛋白表达.结果 AngⅡ组与正常对照组相比上调增殖的平滑肌细胞Cyr61mRNA和蛋白表达,阿托伐他汀组与AngⅡ组相比抑制AngⅡ刺激的Cyr61蛋白表达,尤其在30 min时点更加明显(P＜0.01).结论 阿托伐他汀抑制增殖的平滑肌细胞Cyr61的表达,为阿托伐他汀降脂外的抗动脉硬化作用增加新的理论依据.     

阿托伐他汀抑制血管平滑肌细胞增生的信号转导机制

目的：探讨三羟基三甲基戊二酰辅酶A抑制剂阿托伐他汀(atorvastatin）抑制血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的细胞内信号转导机制。方法：培养兔血管平滑肌细胞分组处理，设对照组，阿托伐他汀组、阿托伐他汀＋羟甲戊酸（MVA）组。以细胞计数，噻唑蓝比色法测定细胞增殖能力及线粒体脱氢酶（MD）活性。Wstern免疫印记定量蛋白激酶B表达水平，免疫沉淀，特异底物组蛋白H2Bγ^32P掺入量测定PKB活性，结果：阿托伐他汀（1 μmol/L）可显抑制细胞增殖活性，孵育72h后使细胞计数及MD活性分别较对照组减低26．3％，37．6％（均P＜0．01）。此作用可被胆固醇前体MVA完全逆转。阿托伐他汀对PKB蛋白表达无显影响。但是在浓度为0．05－1μm范围内可使PKB活性呈浓度依赖性降低（均P＜0．01）。结论：阿托伐他汀可能通过抑制PKB信号通路显抑制兔VSMC增殖，并且此作用与减少MVA的产生有关。     

阿托伐他汀对大鼠主动脉平滑肌细胞钙化的作用

目的:研究阿托伐他汀对体外大鼠主动脉平滑肌细胞钙化的作用.方法:采用组织块培养法体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞.细胞分为正常组(常规细胞培养液)、钙化组(加入10 mmol/L β-磷酸甘油,0.1μmol/L胰岛素及50 μg/L维生素C钙化培养基)和阿托伐他汀组(按终浓度加入10μmol/L阿托伐他汀,作用24 h后,再加入钙化培养基诱导细胞钙化),连续培养14 d.茜素红S染色观察钙结节计数并测定细胞钙沉积含量.采用四唑盐比色法(MTF)测量细胞增殖.结果:阿托伐他汀组钙结节计数为(4.3±1.9)%,较钙化组(7.4±3.8)%明显减少,统计学差异显著(P＜0.01);同时阿托伐他汀组细胞钙沉积含量为(0.163±0.053)mmol/g,较钙化组(5.745±0.021)mmol/g明显减少,统计学差异显著(P＜0.01).MTT检测钙化组细胞增殖为0.136±0.048,较正常组0.045±0.020明显增加(P＜0.01);阿托伐他汀组细胞增殖为0.038±0.010,较钙化组明显减少(P＜0.01).结论:阿托伐他汀对大鼠主动脉平滑肌细胞体外钙化有抑制作用.     

雷帕霉素对血管平滑肌细胞增殖影响的实验研究

 【目的】观察雷帕霉素（rapamycin）对体外培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞（SMC）增殖的作用。【方法】组织贴块法体外原代培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞，取对数生长期细胞（第6-10代）用作实验，MTr法检测不同浓度雷帕霉素对平滑肌细胞增殖的效果，并用RT-PCR法检测其对平滑肌细胞增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）mRNA表达情况的影响。【结果】①MTT法检测显示雷帕霉素呈剂量依赖性抑制体外培养的大鼠平滑肌细胞增殖，各组吸光值似）分别为：对照组0．902±0．106；0．1ng／mL组0．873±0．079；1ng／mL组0．797±0．046；10ng／mL组0．692±0．061；100ng／mL组0．624±0．075。方差分析差异有显著性。F=28．85，P〈0．001；两两比较1ng／mL以上浓度组与对照组间差异均有显著性，不同浓度间差异显著。0．1ng/mL组与对照组相比差异无显著性。②RT-PCR显示雷帕霉素以浓度依赖模式抑制大鼠平滑肌细胞PCNA-mRNA合成。各组校正后光密度值分别为：对照组219．35±7．20；0．1ng／mL组212．39±6．56；1ng/mL组113．15±10．09；10ng／mL组97．17±12．25；100ng／mL组84．38±8．66。方差分析F=195．49，P〈0．001。两两比较与MTT检测相同。【结论】雷帕霉素呈剂量依赖性显著抑制大鼠平滑肌细胞的增殖，1ng／mL时即可明显起效。雷帕霉素有望成为治疗内支架术后再狭窄的理想药物之一。     

阿托伐他汀对血管平滑肌细胞增殖和血红素氧化酶1表达的影响

目的探讨阿托伐他汀对血管平滑肌细胞增殖的影响及对血红素氧化酶1（HO-1）表达的作用。方法采用酶消化法分离大鼠血管平滑肌细胞。取4－6代细胞用于实验,胰岛素样生长因子1（IGF-1）刺激血管平滑肌细胞增殖,以不同浓度（0、0.01、0.1、1和10μmol/L）阿托伐他汀、10μmol/L阿托伐他汀＋锌原卟啉Ⅸ（ZNPPⅨ）进行干预。采用四唑盐（MTT）比色法观察细胞的增殖。逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）半定量分析细胞HO-1 mRNA的表达。结果IGF-1可促进血管平滑肌细胞增殖,与空白组比较,IGF-1组细胞计数明显增加（P〈0.01）,随着阿托伐他汀浓度的提高,血管平滑肌细胞计数逐渐减少（P〈0.01）,加入ZNPPⅨ后血管平滑肌细胞增殖恢复。空白组和IGF-1组血管平滑肌细胞HO-1有少量表达,随着阿托伐他汀浓度的增加,HO-1的表达增强,呈剂量依赖性。与空白组和IGF-1组比较,0.01μmol/L组HO-1增加不明显,0.1μmol/L组HO-1开始有较明显增加,10μmol/L组HO-1表达达高峰（P〈0.01）。结论阿托伐他汀可抑制血管平滑肌细胞的增殖和诱导HO-1的表达。诱导HO-1表达是阿托伐他汀抑制血管平滑肌细胞增殖的机制之一。     

雷帕霉素对大鼠血管平滑肌细胞起始识别复合物1 mRNA表达的影响

目的观察血管平滑肌细胞(VSMC)起始识别复合物1(ORC1)mRNA在雷帕霉素作用下的表达变化。方法采用组织块贴壁法获得VSMC并用免疫细胞化学法鉴定,含体积分数10%血清的培养基培养。血清饥饿法饥饿细胞24 h使其同步化。将雷帕霉素加入含体积分数10%血清的培养基(终浓度为10 nmol.L-1)中继续培养细胞,分别于0 h、3 h、6 h、9 h、12 h、15 h、18 h、21 h、24 h收集细胞,采用反转录-聚合酶链反应技术法检测各时间点ORC1 mRNA的表达(内参为β-actin)。用Quantity One软件计算各时间点ORC1 mRNA与内参的光密度比值,并作统计学分析。结果各时间点ORC1与β-actin光密度比值均有显著性差异(F=410.170,P=0.001)。雷帕霉素作用3～12 h ORC1 mRNA的表达持续升高(与0 h比较,P<0.05),12～18 h逐渐下降(与0 h比较,P依次为0.001,0.001,1.000),18～24 h与0 h比较,无统计学差异(P依次为1.000,0.986,1.000)。结论VSMC的ORC1 mRNA表达随雷帕霉素作用时间呈动态变化。     

阿托伐他汀对老年大鼠心肌衰老相关指标的影响

目的通过在体动物实验的方法,观察老年大鼠心肌丙二醛、脂褐素、衰老特异性β半乳糖苷酶水平的变化及阿托伐他汀干预对上述因素的影响。方法 20个月龄的Wister大鼠90只,随机分为老年对照组、大剂量阿托伐他汀处理组[10 mg/（kg.d）]和小剂量阿托伐他汀处理组[1 mg/（kg.d）],每组30只。另有30只3个月龄的Wister大鼠作为青年对照组。阿托伐他汀组每天给予相应剂量的药物灌胃处理,共4个月。对照组给予相同体积的生理盐水灌胃。灌胃4个月后,留取大鼠心肌标本,采用相应的试剂盒分别检测各组大鼠心肌丙二醛、脂褐素、衰老特异性β半乳糖苷酶等指标变化情况。结果①青年对照组大鼠心肌衰老相关指标的检测结果为：丙二醛为（50.9±11.1）（nmol/mg）/prot,脂褐素为（326.7±39.5）（U/mg）/prot,衰老特异性β半乳糖苷酶为（2.1±0.3）个/HP;老年对照组大鼠检测结果为：丙二醛为（98.5±16.3）（nmol/mg）/prot,脂褐素为（504.8±40.3）（U/mg）/prot,衰老特异性β半乳糖苷酶为（51.9±13.7）个/HP;老年对照组大鼠的丙二醛、脂褐素及衰老特异性β半乳糖苷酶含量均显著高于青年对照组（P〈0.01）。②小剂量阿托伐他汀组检测结果为：丙二醛为（77.4±14.0）（nmol/mg）/prot,脂褐素为（428.1±33.5）（U/mg）/prot,衰老特异性β半乳糖苷酶为（37.9±12.9）个/HP;大剂量他汀组的检测结果为：丙二醛为（64.3±15.8）（nmol/mg）/prot,脂褐素为（394.1±29.6）（U/mg）/prot,衰老特异性β半乳糖苷酶为（28.3±8.8）个/HP;大小剂量阿托伐他汀组上述指标的含量均显著低于老年对照组（P〈0.01）,且大剂量组的效果更为显著（P〈0.01或P〈0.05）。结论老年大鼠心肌的丙二醛、脂褐素、衰老特异性β半乳糖苷酶水平显著增加,而阿托伐他汀干预可显著抑制这一趋势。     

阿托伐他汀与雷米普利联用对血管内皮功能的影响

目的观察阿托伐他汀与雷米普利联用对血管内皮功能的影响。方法155例住院病人在口服肠溶阿司匹林100mg、苯磺酸氨氯地平5mg每日1次及倍他乐克25mg每日2次的基础上随机分为4组治疗。一般治疗组（A组,38例）继续基础治疗;阿托伐他汀组（B组,38例）、雷米普利（C组,38例）和阿托伐他汀与雷米普利联合治疗组（D组,41例）在此基础上分别给予阿托伐他汀10mg每日1次、雷米普利5mg每日1次、阿托伐他汀10mg和雷米普利5mg每日1次,疗程6个月。分别于治疗前和治疗后6个月应用多普勒超声测量肱动脉内径和血流量,比较治疗前与治疗后肱动脉加压前后的血管内径和血流量变化百分率,以此作为评价血管内皮功能的参数。结果治疗后B组、C组、D组与A组相比,D组与B、C组相比肱动脉内径及血流量的变化在加压后有显著的改变,差异有统计学意义（F=553．17、385．90,q=17．77～56．50,P〈0．01）;B组治疗后肱动脉内径及血流量的变化在加压后和C组相比无统计学差异（q=1．58、0．45,P〉0．05）。结论阿托伐他汀和雷米普利均能有效改善血管内皮功能,且两者联合应用作用更为明显。     

阿托伐他汀减轻博莱霉素诱导的肺纤维化及其机制

目的 研究阿托伐他汀对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化的调节作用及其机制.方法 雄性Wistar大鼠32只随机分为阿托伐他汀干预组(A组)、博来霉素组(B组)及正常对照组(C组)大鼠气管内灌注博来霉素5 mg/kg建立肺纤维化模型,A组在博莱霉素后给予阿托伐他汀灌胃10 mg/(kg·d),分别于第7、28天处死一半,病理学观察肺泡灸及肺纤维化程度,生化法测定肺组织羟脯氨酸含量,ELISA法检测肺泡灌洗中IFN-y、IL-4的浓度,比较组间变化.结果 与C组相比,B组大鼠出现明显的肺泡炎及纤维化,而阿托伐他汀可显著减轻肺纤维化程度.BALF中,B组IL-4升高而IFN-y降低,阿托伐他汀干预可部分逆转这种变化.结论 阿托伐他汀可能通过调节Th1/Th2平衡而减轻博菜霉素诱导的大鼠肺纤维化.     

硫化氢联合阿托伐他汀钙对血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的 观察硫化氢联合阿托伐他汀钙对血管平滑肌细胞凋亡的影响.方法 培养兔血管平滑肌细胞（VSMCs）3～8代,分为对照组、硫化氢组、阿托伐他汀钙组以及硫化氢联合阿托伐他汀钙组（简称联合干预组）,共4组,分别给予相应干预,TUNEL法检测VSMCs的凋亡情况.结果 VSMCs凋亡率：与对照组相比,硫化氢组、阿托伐他汀钙组以及联合干预组VSMCs的凋亡率均增加（P＜0.01）;与硫化氢组相比,联合干预组VSMCs凋亡率增加（P＜0.01）,阿托伐他汀钙组VSMCs凋亡率减少（P＜0.01）.结论 硫化氢、阿托伐他汀钙以及两者联合均可促进VSMCs的凋亡,其中以两者联合效果最为明显,硫化氢的作用强于阿托伐他汀钙.     

切应力作用下与血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的形态学

目的：观察生理切应力作用下与血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的抗应力能力。方法：应用内皮细胞与血管平滑肌细胞联合培养模型和流动腔系统,以倒置相差显微镜及电镜观察生理切应力作用下的联合培养的内皮细胞的形态及超微结构。结果：０．２ｍＮ／ｃｍ＾２和０．４ｍＮ／ｃｍ＾２切应力作用２４ｈ,绝大多数内皮细胞均沿切应力方向发生重排,细胞内肌动蛋白微丝形成与切应力方向平行的应力纤维。２４ｈ后,内皮细胞未见明显脱落。结论：联合培养条件下,内皮细胞重排程度与切应力大小有关。切应力越大,重排程度越高,提示内皮细胞抗应力能力增强。     

切应力作用下与血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的前列环素分泌变化

目的：研究切应力作用下与血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的抗凝血功能。方法：应用流动腔系统,对与平滑肌细胞联合培养的同皮细胞施加生理大小的切应力,以放免分析法检测内皮细胞分泌ＰＧＩ２的变化。结果：ＰＧＩ２峰值释放速率及稳定释放速率随切应力的增大而增高,峰值释放速率的衰减常数（ｔ１／２）随切应力的增大而减小。结论：切应力作用下,与平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的抗凝血功能增强。     

改良组织块贴壁法培养大鼠主动脉平滑肌细胞及鉴定

目的以简捷、高效的方法获取原代和传代的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC),为进一步的科学研究提供实验材料。方法采用改良的组织块贴壁法培养原代大鼠VSMC,2.5 g.L-1胰蛋白酶消化传代,并用相差显微镜、电镜、荧光显微镜及激光共聚焦显微镜对细胞进行鉴定。结果95%的组织块接种成活,相差显微镜下细胞呈典型的"峰-谷"状生长,胞体长梭形;电镜下可见粗、细肌丝沿细胞长轴平行排列;荧光显微镜及激光共聚焦显微镜检测α-肌动蛋白可见细胞胞浆内呈阳性显色,细胞核不显色。结论本方法培养VSMC简便、易操作,获得的细胞纯度和成活率较高。     

Different responses of cell cycle between rat vascular smooth muscle cells and vascular endothelial cells to paclitaxel

Summary： Although previous reports showed dmg-eluting stent （DES） could effectively inhibit neointima formation, in-stent restenosis （ISR） remains an important obstacle. The purpose of this study was to investigate different effects of paclitaxel on proliferation and cell cycle regulators between vascular smooth muscle cells （VSMCs） and vascular endothelial cells （VECs） of rats in vitro. The cultured VSMCs and VECs of rats from the same tissues were examined by using immunohistochemistry, flow cytometry and Western blotting in control and paclitaxel-treated groups. The results showed paclitaxel could effectively inhibit proliferation of VSMCs and VECs. However, as compared with VECs, prolif- eration of VSMCs in paclitaxel-treated group decreased less rapidly. The percentage of cells in G0-G1 and G2-M phases was reduced, and that in S phase increased after treatment for 72 h. The expression of cyclin D1 and B1, p27 and PCNA in VSMCs of paclitaxel-treated group was up-regulated, but that of p21 down-regulated as compared with VECs. It is concluded that there are significant differences in the expression of cell cycle regulators and proliferation rate between paclitaxel-treated VSMCs and paclitaxel-treated VECs, suggesting that the G1 S checkpoint regulated by paclitaxel may play a critical role in the development of complications of DES, which provides new strategies for treatments of ISR.     

胰岛素对大鼠血管平滑肌细胞表型转化的影响

目的:探讨胰岛素对体外培养的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)表型转化的影响.方法:用酶消化法分离大鼠VSMC,采用免疫组织化学法检测胰岛素作用后VSMC肌动蛋白(α-SM actin),RT-PCR 检测胰岛素作用后VSMC中bFGF、TGF-β、PDGF、matrix Gla和OPN各目的基因mRNA相对表达水平.结果:胰岛素组VSMC的3H-TdR掺入值比对照组升高47％(P<0.01), VSMC α- SM actin免疫组化结果显示对照组的α-SM actin比胰岛素组染色深.而matrix Gla和OPN在培养的VSMC中mRNA的表达量,胰岛素组明显高于对照组(P<0.05),同时bFGF、TGF-β、PDGF的表达胰岛素组也明显高于对照组(P<0.05).并可明显见到细胞骨架F-actin、G-actin重新分布.结论:在合成表型的matrix Gla和OPN表达量明显高于收缩表型,而合成表型的α- SM actin表达量明显低于收缩表型.提示胰岛素对VSMC的表型转化起了一定作用.胰岛素在促进了VSMC增殖的同时,伴有VSMC由收缩型转变为合成型及细胞骨架F-actin、G-actin重新分布.     

大鼠主动脉平滑肌细胞的体外培养和观察

目的 建立大鼠主动脉平滑肌细胞体外培养模型，为动脉粥样硬化等心血管疾病的发病机制的研究提供了重要手段。方法 将大鼠主动脉翻转，两端结扎，用0.1%胶原酶消化血管内皮细胞，剩余血管剪成小块均匀种植于培养瓶底，加入DMEM培养液培养，观察血管平滑肌细胞的生长，结果 平滑肌细胞48h后贴壁生长，早期呈多角形，以后呈梭形伸展，胰酶消化后平滑肌细胞可传6－7代。结论 此方法简单易行，是获得血管平滑肌细胞的一种可靠方法。     

切应力作用下联合培养的血管内皮细胞血管假性血友病因子的含量变化

目的：研究切应力对与血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的抗凝血和粘附的影响。方法：对与平滑肌细胞联合培养的内皮细胞施加生理范围的切应力,用免疫组化及图像分析法检测内皮细胞的血管假性血友病因子（ｖＷＦ）含量。结果：联合培养的内皮细胞ｖＷＦ的变化与切应力大小及作用时间有关,随切应力增大,胞内ｖＷＦ含量逐渐减少,且切应力作用的第１小时减少的最快。结论：生理范围的切应力作用,可能减少与平滑肌细胞联合培养的内皮细胞的ｖＷＦ表达,或促使ｖＷＦ短时释放加快,有利于增强抗凝血功能及内皮细胞的粘附。