Bak基因研究进展

Bak基因是从EBV传染的人类B细胞文库中克隆获得的一种基因,它可以调节细胞凋亡,是Bcl-2家族的一员,编码区含有Bcl-2高度同源的BH1、BH2及BH3结构域,该区是Bak与Bcl-2、Bcl-xl结合形成二聚体调节细胞凋亡的主要结构基础.     

Bak的基因研究进展

Bak基因是从EBV传染的人类B细胞文库中克隆获得的一种基因,它可以调节细胞凋亡,是Bcl-2家族的一员,编码区含有Bcl-2高度同源的BH1、BH2及BH3结构域,该区是Bak与Bcl-2、Bcl-xl结合形成二聚体调节细胞凋亡的主要结构基础。     

类风湿关节炎大鼠滑膜组织中凋亡因子Bcl-xl和Bcl-2及Bax的表达及意义

目的探讨Bcl-2家族成员Bcl-xl、Bcl-2及Bax在类风湿关节炎(RA)发病过程中的变化,从而进一步明确RA的发病机制。方法 16只雄性Wistar大鼠适应性饲养1周后随机分为正常对照组及胶原诱导的RA模型组,每组8只。在初次免疫后6周处死大鼠,应用免疫组化、RT-PCR及免疫印迹(Western blotting)法检测Bcl-xl、Bcl-2、Bax基因及蛋白质在RA模型组及正常对照组大鼠滑膜组织中的表达情况。结果 RA模型组大鼠滑膜组织Bcl-xl、Bcl-2 mRNA表达水平显著高于正常对照组(P<0.01);正常对照组大鼠滑膜组织可见微量的Bax mRNA阳性表达,但其表达水平仍显著低于RA模型组(P<0.05)。同时,在正常对照组大鼠滑膜组织Bcl-xl、Bcl-2及Bax蛋白质均有少量表达,但在RA模型组三者的表达水平发生了显著变化,其中Bcl-xl、Bcl-2表达水平显著增高(P<0.01),而Bax蛋白表达水平虽比RA模型组略有升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论在RA发病过程中抗凋亡因子Bcl-xl、Bcl-2呈明显高表达状态,而促凋亡因子Bax的基因及蛋白质水平升高幅度远远低于抗凋亡基因Bcl-xl及Bcl-2升高的水平,造成滑膜细胞增殖/凋亡失衡,促进了RA的发生发展。     

幽门螺杆菌对胃上皮细胞的凋亡作用

目的 研究幽门螺杆菌(Hp)对胃黏膜上皮细胞的凋亡作用。方法 10例Hp阴性的非溃疡性消化不良(NUD)患者,25例Hp相关性胃炎患者,以TUNEL法进行细胞凋亡的检测,免疫组织化学法检测凋亡调控蛋白Bcl-2,Bax,Bak等的表达。结果 与Hp阴性的NUD患者相比,Hp相关性胃炎患者胃黏膜上皮细胞的凋亡指数(AI)明显增加(19.66％vs 3.03％,P＜0.01),其促凋亡蛋白Bak,Bax蛋白的表达明显增加(47.07％ vs 16.63％ ＆ 42.6％ vs 13.8％,P＜0.01)。Bcl-2蛋白表达也与促凋亡蛋白呈现一致的变化(25.1％ vs 8.07％,P＜0.01)。AI与炎症积分无明显相关性(P＞0.05)。AI、Bak、Bax及Bcl-2蛋白之间具有显著相关性(P＜0.01)。结论 Hp诱导胃上皮细胞凋亡伴随着Bak蛋白表达增加,提示Bak蛋白在Hp诱导的胃上皮细胞凋亡中起了作用。     

黄芪水煎剂联合地西他滨、CAG方案治疗老年急性髓系白血病的临床研究

  目的  研究黄芪水煎剂联合地西他滨、CAG方案治疗老年急性髓系白血病(Acute myeloid leukemia,AML)的临床疗效及可能机制。  方法  将2018年1月至2021年7月河北省中医院收治的132例老年AML住院患者随机分成对照组和治疗组各66例。对照组予地西他滨联合CAG方案治疗,治疗组在对照组治疗基础上加用黄芪水煎剂,疗程均为12个月。治疗后观察2组临床疗效、支持治疗及不良反应发生情况,检测2组患者治疗前后免疫功能指标(CD3+、CD4+、CD8+、IgG、IgA、IgM)及凋亡相关指标(Bcl-2、Bax、Bak、Bcl-xl)mRNA表达水平变化情况。  结果  治疗后,治疗组总有效率高于对照组(P < 0.01),支持治疗及不良反应发生率低于对照组(P < 0.05,P < 0.01);2组患者CD3+、CD4+、CD8+细胞比例及IgG、IgA、IgM水平显著降低(P < 0.01),治疗组CD3+、CD4+、CD8+细胞比例低于对照组(P < 0.01);治疗组Bcl-2、Bcl-xl mRNA表达水平显著降低(P < 0.01),Bax、Bak mRNA表达水平明显升高(P < 0.01),对照组Bcl-2 mRNA表达水平明显降低(P < 0.01),Bax mRNA表达水平显著增加(P < 0.01);治疗组Bcl-2、Bcl-xl mRNA表达水平低于对照组,Bak mRNA表达水平高于对照组(P < 0.01)。Logistic回归分析结果显示:影响老年AML患者预后的独立危险因素主要包括年龄、未使用黄芪水煎剂联合地西他滨治疗、免疫功能低下以及不良反应(P < 0.01)。  结论  黄芪水煎剂联合地西他滨、CAG方案能显著改善老年AML患者临床疗效,改善机体免疫功能指标,其机制可能与调节凋亡相关因子表达有关。      

干扰素α、5-AZA-CdR对白血病细胞HL-60和K562的作用

 [目的]探讨细胞因子干扰素α（INFα）和甲基化抑制剂5-杂氮脱氧胞嘧啶核苷（5-AZA-CdR）对白血病细胞HL-60和K562的作用机制。[方法]1000U/mL INFα和不同剂量的5-AZA-CdR作用于HL-60和K562 48h,通过RT-PCR检测Xaf1和XIAP mRNA的表达,流式细胞技术检测Bcl-2家族成员、线粒体膜电位（Δψm）和细胞凋亡的情况。[结果]INFα和5-AZA-CdR使HL-60和K562 Xaf1 mRNA表达增加,且与5-AZA-CdR呈剂量依赖性,其中5-AZA-CdR（5μmol/L）的作用最明显;XIAP mRNA表达无变化。INFα使HL-60和K562 Bax表达增加,Bcl-2和Bcl-xl表达无改变;5-AZA-CdR降低HL-60 Bcl-2、Bcl-xl、Bax表达,增加K562 Bax表达,不影响K562 Bcl-2和Bcl-xl。INFα和5-AZA-CdR都能使线粒体膜电位降低、细胞凋亡增加。除细胞凋亡外INFα和5-AZA-CdR对HL-60和K562的Xaf1 mRNA、Bcl-2家族成员以及Δψm无协同作用。[结论]INFα和5-AZA-CdR促进HL-60和K562细胞凋亡,其作用机制可能与上调Xaf1 mRNA的表达,下调Bcl-2（Bcl-xl）/Bax和降低线粒体膜电位有关。     

姜黄素在急性髓性白血病HL-60细胞中对凋亡调控蛋白Bax、Bak、Mcl-1的影响

为了探讨姜黄素在诱导急性髓性白血病HL-60细胞凋亡时,Bcl-2基因家族成员是否参与了其调控过程。选用Bcl-2基因家族成员Mcl-1、Bax、Bak蛋白为研究对象,SABC法检测其表达状况;用流式细胞术测定DNA直方图中Sub-G1峰值、末端TdT酶标技术检测TUNEL细胞阳性率。发现当25μmol/L姜黄素分别处理HL-60细胞24h、36h、48h后,可使Mcl-1表达下调,Bax和Bak上调,呈时间依赖性。在各处理组,Mcl-1、Bax、Bak表达同对照组相比有显著差异(F值分别为3.443、8.328;P值分别为0.040、0.001)。结果表明Bcl-2基因家族成员确实参与了姜黄素诱导HL-60细胞凋亡的调控过程。     

姜黄素对原代急性髓性白血病细胞凋亡及调控蛋白Mcl—1、Bax、Bak表达的影响

为探讨姜黄素诱导急性髓系白血病（AML）原代细胞凋亡的作用及其机制,采用流式细胞术作细胞周期分析并检测Sub-G1峰值,SABC法检测Bcl-2家族Mcl,Bax和Bak蛋白表达。结果显示姜黄素不影响初治AML原代细胞周期进展,但使Sub-G1峰值升高（P＜0．05）。在初治AML原代细胞,同样处理可下调Mcl-1表达、上调Bax和Bak表达,且结果有显著性差异,提示姜黄素可诱导初治AML患者原代细胞凋亡,Bcl-2基因家族成员参与姜黄素诱导白血病细胞凋亡。     

干扰素α、5-AZA-CdR对白血病细胞HL-60和K562的作用

[目的]探讨细胞因子干扰素α（INFα）和甲基化抑制剂5-杂氮脱氧胞嘧啶核苷（5-AZA-CdR）对白血病细胞HL-60和K562的作用机制。[方法]1000U/mL INFα和不同剂量的5-AZA-CdR作用于HL-60和K562 48h,通过RT-PCR检测Xaf1和XIAP mRNA的表达,流式细胞技术检测Bcl-2家族成员、线粒体膜电位（Δψm）和细胞凋亡的情况。[结果]INFα和5-AZA-CdR使HL-60和K562 Xaf1 mRNA表达增加,且与5-AZA-CdR呈剂量依赖性,其中5-AZA-CdR（5μmol/L）的作用最明显;XIAP mRNA表达无变化。INFα使HL-60和K562 Bax表达增加,Bcl-2和Bcl-xl表达无改变;5-AZA-CdR降低HL-60 Bcl-2、Bcl-xl、Bax表达,增加K562 Bax表达,不影响K562 Bcl-2和Bcl-xl。INFα和5-AZA-CdR都能使线粒体膜电位降低、细胞凋亡增加。除细胞凋亡外INFα和5-AZA-CdR对HL-60和K562的Xaf1 mRNA、Bcl-2家族成员以及Δψm无协同作用。[结论]INFα和5-AZA-CdR促进HL-60和K562细胞凋亡,其作用机制可能与上调Xaf1 mRNA的表达,下调Bcl-2（Bcl-xl）/Bax和降低线粒体膜电位有关。     

BH3-only蛋白与凋亡

BH3-only蛋白（bcl-2 homology domain only proteins）是Bcl-2蛋白家族中启动和调节细胞凋亡的重要成员，能识别不同的细胞刺激形式并被活化，其活性受转录和／或翻译后修饰的调节。BH3-only蛋白通过抑制Bcl-2抗凋亡成员的活性或激活Bax／Bak样促凋亡成员的活性来调节细胞凋亡，在组织发育、维持内环境稳定、防止自身免疫病和肿瘤的发生中有着极其重要的作用。本主要就BH3-only蛋白对凋亡的调控研究作一综述。     

凋亡调节蛋白的表达与K562／VCR多药耐药性的关系

目的探讨K562/VCR细胞中凋亡调节蛋白表达的变化与其多药耐药性(MDR)的关系。方法通过免疫细胞化学法和免疫印迹法(westernblot)对凋亡调节蛋白Bcl-2、Bcl-X     

Bcl—2、Bcl—XL、Bax、Bak在急性白血病细胞中的表达及其临床意义

目的观察凋亡调节蛋白的表达与急性白血病化疗效果的关系。方法用免疫细胞化学法对36例急 性白血病患者(初治敏感组11例,复发难治组25例)白血病细胞中凋亡词节蛋白Bcl-2、Bcl-XL、Bax、Bak的表达 进行分析。结果抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-XL的平均阳性细胞率复发难治组为(41.68±14.39)％和(35.96± 9.95)％,初治敏感组为(15.64±8.51)％和(12.91±8.63)％,两组间差异有显著性意义(P＜0.01)。促凋亡蛋 白Bax、Bak的平均阳性细胞率复发难治组为(25.28±15.49)％和(15.53±10.64)％,初治敏感组为(21.55± 12.58)％和(13.23±8.36)％,两组间差异无显著性意义(P＞0.05)。Bcl-2、Bcl-XL、Bax、Bck对36例急性白血病 缓解率影响的Logistic回归分析表明,Bcl-XL是其中降低急性白血病缓解率的最重要因素。结论Bc1-2、Bcl-xL 在急性白血病MDR发生中起调节作用,并且Bcl-XL可能比Bcl-2更为更要。     

Bak在细胞凋亡期间对线粒体形态学的影响

目的:探讨Bak基因在细胞凋亡线粒体信号传导中的作用以及与Bax基因之间的相互关系。方法:应用Bax/Bak双重基因敲除的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)和Hela细胞进行基因重构,细胞按不同基因型（野生型、Bax敲除和Bak敲除、双重基因敲除)分组,并通过共转染方式导入目的基因。细胞凋亡的处理条件：细胞在无葡萄糖缓冲液的培养基中,在含10 mmol•L^-1叠氮钠或1 μmol•L^-1十字孢碱（STS）或20 μmol•L^-1顺铂条件下培养,并诱导细胞凋亡。应用共聚焦显微镜和免疫荧光及免疫印记技术分析细胞凋亡、线粒体碎裂和细胞色素C释放情况,综合评价Bak基因在细胞凋亡和线粒体碎裂中的作用。结果:Hela细胞内线粒体碎裂和细胞色素C释放百分率分别与细胞凋亡有关联（P<0.01）;MEF细胞在Bak基因缺失（Bak^-/-）时,应用化学诱 导剂导致的细胞凋亡率(17.9%)明显低于野生型MEF细胞(71.3%)（P<0.01);且Bax和Bak基因两者协同作用可以增强细胞凋亡发生率;当pEGFP-Bak重新导入Bax^-/-/Bak^-/-MEF细胞,线粒体破碎百分率从43.7%增加到76.4%,pEGFP-Bak组细胞凋亡率明显高于pEGFP-Bax组（P<0.05);应用不同的化学诱导剂均可以得到同样的结果;且Bcl-2不能够明显阻止Bak诱导的细胞凋亡。结论:Bak基因明确诱导线粒体碎裂和细胞色素C释放,导致细胞凋亡,其诱导细胞凋亡的效果明显大于Bax基因,并且其作用独立于Bax基因功能之外。     

The Experimental and Clinical Study on the Effect of Curcumin on Cell cycle Proteins and Regulating kProteins of Apoptosis in Acute Myelogenous Leukemia

Because anti- cancer drugs can induce apopto-sis of both carcinoma cells and normal cells,peoplewant to find a new high effect and low cytotoxinone.Curcumin( C12 H3 6O5,Fw364.5 ) derives fromcurcumin longa linn and contains a main activity ofcurcuma.It has excellent effect of anti- cancer andpreventing cancer.FDA in USA has recommendedit into a new candidated drug which is used in the2 1 th century[1] .The anti- cancer role of curcuminmay be two aspectes:( 1 ) It controls developmentproces…     

β-catenin和Bcl-2、Bax蛋白在皮肤基底细胞癌中的表达和意义

目的：探讨皮肤基底细胞癌（basal cell carcinoma,BCC）中β-catenin和Bcl-2、Bax蛋白的表达与BCC发生发展的关系。方法：采用免疫组化方法检测BCC组织切片中β-catenin和Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果：48例BCC标本中β-catenin蛋白的异常表达率为91.67%,Bcl-2、Bax蛋白的表达率分别为89.58%、62.5%,且Bcl-2与Bax蛋白的表达呈负相关。结论：β-catenin和Bcl-2、Bax蛋白的异常表达在BCC的发生、发展中起重要作用。     

香叶木素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及周期阻滞的机制研究

目的 研究香叶木素对人肝癌HepG2细胞的增殖、凋亡及周期阻滞的影响并揭示其分子机制.方法 MTT方法检测不同浓度香叶木素对肝癌HepG2的细胞活力的影响;流式细胞术检测不同浓度香叶木素处理对HepG2细胞周期阻滞及细胞凋亡的作用;Western blot检测香叶木素处理对细胞p53、Bcl-2、Bax、Cleaved-cas-pase3、Cleaved-caspase8、Cleaved-PARP、Bak、cdc2、cyclinB1、p21等细胞周期调节或细胞凋亡相关蛋白表达的调节.结果 香叶木素能显著抑制人肝癌HepG2细胞的增殖并且诱导细胞凋亡(P<0.05);流式细胞术对细胞周期检测示:香叶木素处理HepG2细胞,使G0/G1期细胞比例显著降低,而G2/M期细胞比例显著升高(P<0.05).香叶木素可下调HepG2细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2、cdc2、cyclinB1的蛋白表达,上调p53、p21、Bax、Bak,Cleaved-caspase3、Cleaved-caspase8、Cleaved-PARP等促凋亡蛋白.结论 香叶木素在体外实验能通过激活p53/Bcl-2细胞凋亡通路抑制人肝癌HepG2细胞的增殖及促进细胞凋亡,同时通过上调p53、p21下调cdc2、cyclinB1诱导细胞G2/M周期阻滞.     

胃癌组织中凋亡相关基因Survivin、Bax、p53的表达及其相关性研究

目的探讨凋亡抑制基因生存素蛋白（Survivin）在胃癌组织中表达的临床意义，及其与Bax、p53蛋白表达的相关性分析。方法应用免疫组织化学链酶亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法（SABC法），检测25例正常胃黏膜组织及100例胃癌组织中的Survivin、Bax、p53的表达。结果25例正常胃黏膜组织中Survivin呈阴性表达，而100例胃癌组织中81例呈阳性表达，阳性率为81．0％，差异有统计学意义（P〈0．01）。Survivin基因表达与胃癌组织分化程度、临床分期及淋巴结转移呈正相关。Bax在胃癌组织中的表达率（17．0％）显著低于正常胃黏膜组织中的表达（48．0％），P〈0．01；胃癌组织中Bax与Survivin蛋白表达呈负相关P〈0．05；Survivin与p53蛋白表达呈正相关，P〈0．05。结论胃癌组织中Survivin高表达导致凋亡抑制在胃癌的发生发展中可能起重要作用。Survivin基因的异常表达提示胃癌预后不良。p53基因突变导致凋亡异常可能与其对Survivin表达调控失识关系更为密切，Bax表达下调与Survivin表达上调可能共同在胃黏膜癌变和癌变后的恶性演进过程中起重要作用，三者联合检测有望作为预警胃癌发生和转移的病理生物学标志。     

高浓度葡萄糖诱导HepG-2细胞的凋亡及其调控的相关机制

目的 探讨高浓度葡萄糖诱导HepG-2细胞的凋亡及其调控的可能机制.方法 用含不同浓度葡萄糖的DMEM处理HepG-2细胞,分为正常组(糖浓度为5.5 mmol/L)和高浓度葡萄糖组(糖浓度分别为25、40、100、150、200 mmol/L ),采用MTT、Hoechst染色法观察细胞的增殖和凋亡状况; Weste...