NF—кB信号传导途径对TNF—α诱导的SMMC—7721细胞凋亡的影响

背景与目的：已证明核因子кB（nuclear factor-кB,NF-кB)在免疫细胞激活,抗病毒,多种应激反应和细胞凋亡的调控等许多方面起着重要作用。本实验研究NF-кB信号传导途径对TNF-α诱导的肝癌细胞株SMMC-7721细胞凋亡的影响。方法：采用ELISA和免疫组化检测TNF-α对NF-к信号传导通路的激活作用,继而用TPCK（n-tosyl-Phe-chloromethylketone)阻断NF-кB的活化,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：（1）TNF-α能激活NF-кB信号传导通路;（2）TPCK能抑制TNF-α诱导的NF-кB活化;（3）TPCK抑制NF-кB活化后,能加强TNF-α诱导的细胞凋亡,结论：SMMC-7721细胞中NF-кB细胞传导途径参与了细胞的抗凋亡过程,在SMMC-7721细胞对TNF-α的细胞毒性作用耐受中起重要作用,抑制NF-кB信号传导途径可能在肿瘤治疗中有潜在的应用价值。     

NF-κB在TNF-α诱导的Hela细胞凋亡中的作用

目的：探讨核因子-κB(nuclear factorkappa B，NF-κB)对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)诱导的宫颈癌Hela细胞凋亡的影响。方法：培养宫颈癌Hela细胞。不同处理因素按指定时间作用后，RT一PCR检测NF-κB p65 mRNA的表达。免疫印迹和免疫组化检测NF-κB p65活性的变化，TUNEL法检测细胞凋亡。结果：静息状态下。在Hela细胞中NF-κB p65具有微弱活性水平。TNF-α诱导Hela细胞NF—κB活化与其诱导细胞凋亡明显相关，NF-κB p65单抗能显著抑制TNF-α(10ng／mL)诱导的Hela细胞NF-κB活化，抑制率为49．69％，并增强其诱导Hela细胞凋亡的作用，凋亡增加率为57．52％。结论：TNF-α在诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的同时活化NF-κB。NF-κB p65单抗可通过抑制NF-κB活化以增强TNF-α诱导Hela细胞凋亡的作用。     

NF-κB在TNF-α诱导的Hela细胞凋亡中的作用

目的探讨核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosisfactor-α,TNF-α)诱导的宫颈癌Hela细胞凋亡的影响。方法培养宫颈癌Hela细胞,不同处理因素按指定时间作用后,RT-PCR检测NF-κBp65mRNA的表达,免疫印迹和免疫组化检测NF-κB p65活性的变化,TUNEL法检测细胞凋亡。结果静息状态下,在Hela细胞中NF-κB p65具有微弱活性水平,TNF-α诱导Hela细胞NF-κB活化与其诱导细胞凋亡明显相关,NF-κB p65单抗能显著抑制TNF-α(10ng/mL)诱导的Hela细胞NF-κB活化,抑制率为49.69%,并增强其诱导Hela细胞凋亡的作用,凋亡增加率为57.52%。结论TNF-α在诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的同时活化NF-κB。NF-κB p65单抗可通过抑制NF-κB活化以增强TNF-α诱导Hela细胞凋亡的作用。     

汉防己碱对MCF-7细胞凋亡及Akt/NF-κB信号传导通路的影响

目的:探讨汉防己碱诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡的信号机制.方法:以MTT法测定不同浓度的汉防己碱(1、5和10 μmol/L)对MCF-7肿瘤细胞增殖抑制;流式细胞仪检测细胞凋亡;免疫印迹法分析AKT活化;细胞免疫化学染色检测NF-κB表达.结果:不同浓度汉防己碱对培养的乳腺癌细胞MCF-7生长有显著的抑制作用,有效的诱导凋亡,且呈剂量依赖性,各组MCF-7细胞生长抑制率分别为(34.04±2.06)%、(54.07±1.08)%和(70.29±1.05)%,与对照相比较差异均有统计学意义,P<0.01;各组细胞凋亡率分别为(15.21±2.13)%、(23.07±1.08)%和(30.35±1.06)%,与对照相比差异均有统计学意义,P<0.05.汉防己碱对细胞内总AKT激酶蛋白的表达没有影响,但抑制磷酸化AKT蛋白的表达;同时对细胞内NF-κB的表达有抑制作用.结论:汉防己碱诱导乳腺癌细胞凋亡的机制与Akt/NF-κB信号途径有关.     

NF-κB抑制剂对卡铂诱导卵巢癌细胞凋亡的影响

目的探讨NF—κB抑制剂（PDTC）对卡铂诱导卵巢癌细胞SKOV3凋亡的影响。方法采用免疫组织化学方法,观察了卡铂诱导下卵巢癌SKOV3细胞中NF-κB在细胞质和细胞核中的表达变化;采用凝胶迁移率变动试验（EMSA）法,检测卡铂作用下和卡铂与PDTC共同作用下NF—κB的活性;MTT和流式细胞仪分别检测2种情况下SKOV3细胞的生长情况和凋亡率。结果NF—κB在卵巢癌SKOV3细胞质中表达,卡铂诱导12h后卵巢癌SKOV3细胞质中的NF—κB转移至细胞核。EMSA实验结果表明,卡铂诱导后的卵巢癌SKOV3细胞NF—κB的活性增强,PDTC可以抑制此作用。PDTC预处理后可增强卡铂对卵巢癌SKOV3细胞的生长抑制作用。卡铂作用24h、48h后卵巢癌SKOV3细胞的凋亡率分别为6．7％、20．1％;卡铂＋PDTC作用24h、48h后卵巢癌SKOV3细胞的凋亡率为14．0％、32．7％,两者比较差异显著（P〈0．05）。结论卡铂能诱导NF—κB的活化,NF—κB的抑制剂可以增强卡铂诱导SKOV3细胞的凋亡,提高化疗疗效。     

NF-κB活化与肿瘤细胞对治疗的敏感性

不同类型的肿瘤细胞对化学药物、放射治疗、TNF-α治疗都表现出不同的敏感性.NF-κB作为Rel家族的一个成员,能够被电离辐射、细胞因子和化学因子激活.NF-κB活化后启动转录合成一些细胞因子和保护蛋白,能对细胞提供有益保护,增加其应激耐受性.在肿瘤治疗中,NF-κB活化影响肿瘤细胞对治疗的敏感性.通过抑制NF-κ活化,可提高放疗、化疗和TNF-α治疗肿瘤的疗效,用作肿瘤治疗的有效辅助手段.     

Bcl-2过表达对多柔比星诱导的膀胱癌细胞凋亡和NF-κB活化影响的观察

目的:探讨凋亡相关基因Bcl-2过表达对多柔比星(ADM)诱导的膀胱癌细胞凋亡和NF-κB活化的影响.方法:采用脂质体转染法将Bcl-2基因转入膀胱癌细胞,G418筛选获得抗性亚克隆细胞株,RT-PCR检测Bcl-2基因的表达.用6.25、12.5和25 μg/mL的ADM分别作用于细胞24 h,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测NF-κB活化情况.结果:建立分别稳定过表达Bcl-2基因和新霉素抗性基因(neo)的膀胱癌亚克隆株BIU87/Bcl-2和BIU87/neo,RT-PCR结果显示,BIU87/Bcl-2细胞的Bcl-2 mRNA水平明显高于BIU87/neo和BIU87细胞,F=63.107,P<0.01.经6.25、12.5和25 μg/mL ADM作用24 h后,BIU87/Bcl-2细胞凋亡率较BIU87/neo细胞明显降低,t=11.216,P<0.01.与BIU87/neo细胞相比,ADM作用24 h后BIU87/Bcl-2细胞胞质IκB明显减少,t=-0.255,P=0.018;而胞核NF-κB p65明显增多,t=2.088,P=0.049.结论:Bcl-2基因能够抑制ADM诱导的膀胱癌BIU87细胞凋亡,其抗凋亡作用涉及NF-κB活化.     

NF-κB在脂肪酸合酶抑制剂诱导人结肠癌LoVo细胞凋亡中的作用

目的　探讨NF-κB在脂肪酸合酶抑制剂(FASI)诱导人结肠癌LoVo细胞凋亡中的作用。方法　FASI—浅蓝菌素处理大肠癌LoVo细胞株,四唑盐比色试验(MTT法)、片断DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪及荧光染色(AO/EB)等方法检测细胞调亡,用凝胶电泳迁移率法(EMSA)检测NF-κB活性。结果　LoVo细胞在FASI作用下,细胞增殖被阻遏,并呈现剂量效应关系。同时诱导细胞发生凋亡。FASI对人成纤维细胞增殖无明显影响。NF-κB在不同浓度浅蓝菌素(10-9～10-5)处理LoVo细胞12h后,可抑制NF-κB活性,其抑制程度呈剂量依赖性递减。结论FASI可能通过抑制LoVo细胞内源性脂肪酸合成,诱发细胞凋亡来阻遏LoVo的增殖。NF-κB可能参与FASI诱导人结肠癌LoVo细胞凋亡中的信号转导。     

NF-κB、IκB与肿瘤细胞凋亡

细胞核因子κＢ又称κ基因结合核因子(ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒκｇｅｎｅｂｉｎｄｉｎｇ,ＮＦκＢ),是1种广泛存在于细胞中的具有多向性调节作用的蛋白质分子,参与调控细胞激酶、趋化因子、生长因子、细胞粘附因子及早期反应的蛋白质分子基因的转录,其活性受到1个强抑制物ＩκＢ的抑制。近年来研究结果表明:ＮＦκＢ能介导广泛的生物学作用,参与多种疾病的发生发展过程。ＮＦκＢ在细胞凋亡中有一定的作用。1　ＮＦκＢ和ＩκＢＮＦκＢ是1种转录因子,有着广泛的生物学作用。1986年Ｓｅｎ等[1]最初发现ＮＦκＢ是1种与免疫球蛋白κ轻链…     

NF-κB p65对人非霍奇金淋巴瘤细胞凋亡调控的研究

目的:研究NF-κB p65对人非霍奇金淋巴瘤(NHL)细胞凋亡的作用及其调控机制。方法:以NF-κB p65抑制剂quinazoline(QNZ)处理人NHL细胞,采用Annexin-Ⅴ染色方法检测肿瘤凋亡水平的变化,蛋白质印迹法检测各细胞系中Survivin蛋白及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Cleaved Caspase-3的表达水平;进一步应用实时定量PCR方法检测Survivin mRNA水平。结果:NF-κB p65抑制剂QNZ能够诱导NHL细胞的凋亡(P<0.05),具有时间-剂量依赖性。10nmol/L QNZ作用72h后Namalwa、Ramos和Raji细胞凋亡率分别为(13.5±2.7)%、(16.4±2.8)%和(15.8±2.5)%。抑制NF-κB p65的表达能够显著下调淋巴瘤细胞中Survivin蛋白的表达水平,10nmol/L QNZ作用72h后Namalwa、Ramos和Raji细胞中Survivin蛋白表达为0.58±0.06、0.54±0.03和0.51±0.09。同时,凋亡相关蛋白Bcl-2表达减低而Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达增加,Bcl-2与Bax蛋白比值明显降低,与对照组相比差异均有统计学意义,P<0.05。预处理QNZ后3种NHL细胞Survivin mRNA均不同程度下降,随浓度增加其作用更为明显,P<0.05。结论:抑制NF-κB p65能够诱导NHL细胞凋亡,其机制可能与下调Survivin蛋白表达水平及对凋亡相关蛋白Bcl-2家族的调节有关。     

POKemon和NF-κB p65在肝癌细胞中的信号调控

目的:旨在探讨原癌基因POKemon和核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB) p65在肝癌细胞中的信号调控作用.方法:采用实时荧光定量-PCR(real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR)和蛋白质印迹法分别检测POKemon、NF-κB p65 mRNA和蛋白在肝癌细胞株HepG2和SMMC7721及人胚胎肝细胞LO2中的表达情况;随后应用小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)法依次分别抑制POKemon和NF-κB p65在肝癌细胞中的表达,观察二者在肝癌细胞中的变化,并应用FCM法检测对肝癌细胞凋亡的影响.结果:POKemon和NF-κB p65在肝癌细胞HepG2和SMMC7721中的表达量明显高于人胚胎肝细胞LO2;特异性针对POKemon基因的siRNA抑制POKemon的表达后,NF-κB p65在HepG2和SMMC7721细胞中的表达量也明显下降,转染前后分别为2.12±0.14vs 1.37±0.11和2.08±0.16vs 1.35±0.13,差异有统计学意义(P＜0.05),且肝癌细胞凋亡明显增加分别为(5.07±0.46)％vs (39.65±3.75)％和(5.71±0.83)％vs (33.21±3.66)％,差异有统计学意义(P＜0.05);特异性针对NF-κB基因的siRNA抑制NF-κB p65的表达后,POKemon在HepG2和SMMC7721细胞中的表达则无明显变化,其表达量转染前后分别为1.86±0.12vs 1.90±0.13和1.91±0.11 vs 1.85±0.11,差异无统计学意义(P＞0.05),但明显提高HepG2和SMMC7721细胞的凋亡率,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:原癌基因POKemon可通过调控NF-κB p65的表达而阻遏肿瘤细胞凋亡,促进肝癌的发生、发展.     

5-氟尿嘧啶诱导结肠癌细胞凋亡与NF-κB活化及uPA表达的关系

目的 研究5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导人结肠癌细胞(HCT116)凋亡与核转录因子-κ B(NF-κ B)活化以及尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)表达的关系,并观察吡咯烷二硫氨基甲酸盐(PDTC)抑制NF-κ B活化对5-Fu诱导结肠癌细胞凋亡及uPA表达的影响.方法 采用流式细胞仪Annexin V-FITC法检测结肠癌细胞HCT116凋亡;采用免疫组织化学方法半定量分析HCT116细胞NF-κB及uPA表达的动态变化.结果 5-Fu在诱导HCT116细胞凋亡的同时有NF-кB活化,1μmol/L PDTC能显著增加5-Fu诱导HCT116细胞凋亡及抑制5-Fu诱导的HCT116细胞NF-κB活化作用(P＜0.05),uPA变化与NF-κB一致.结论 5-Fu在诱导HCT116细胞凋亡的同时活化了NF-κ B,uPA表达亦随之增强;PDTC在抑制5-Fu诱导的HCT16细胞NF-κB活化的同时增强了5-Fu诱导细胞凋亡的作用,uPA表达也相应下降.     

NF-κB的活性对TRAIL诱导肿瘤凋亡的影响研究进展

0 引言`` 1986年,Sen等~([1])首先从B淋巴细胞核中检测到一种蛋白因子,它能与免疫球蛋白κ轻链基因增强子_κB序列(5'-CGATITCC-3)特异结合,并促进κ链基因表达,将之命名为核转录因子κB(nuclearfactor-kappa B,NF-κB).此后研究表明,NF-κB是一种普遍存在的转录因子,能与调控免疫应答、炎性反应、细胞生长分化凋亡等所需的许多细胞因子、黏附分子等基因的启动子或增强子的κB位点特异性结合,启动和调节这些基因的转录,在机体的免疫应答、炎性反应、细胞生长分化和凋亡等方面起重要作用.     

TRAIL对原代卵巢癌细胞增殖、凋亡及核 因子κB的影响

 目的 观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TNF-related apoptosis inducing- ligand; TRAIL）对原代卵巢癌细胞生长的抑制和诱导肿瘤细胞凋亡效应,以及细胞核因子κB(NF κＢ)激活和转运的影响。方法 来源于12例病人原代卵巢癌细胞,给予TRAIL 0、5、10、20、50、100μg/L分别作用24、48、72和96h,运用MTT比色法检测原代卵巢癌细胞生长、增殖情况;细胞免疫荧光法检测原代卵巢癌细胞凋亡和细胞内NF κB激活－转运情况。结果 TRAIL对原代卵巢癌细胞的生长抑制呈剂量依赖性,浓度大于20μg/L时抑制率增辐减慢;浓度相同时对癌细胞的抑制呈时间依赖性,72h后抑制率上升减缓;肿瘤细胞凋亡率随TRAIL作用时间延长而增加,5μg/L 24h、96h凋亡率分别是（28±1.18）%、（55±4.12）%;肿瘤细胞凋亡率也呈剂量依赖性;TRAIL作用后原代卵巢癌细胞质和胞核中NF κB表达增加。结论 TRAIL抑制原代卵巢癌细胞的增殖和生长,并诱导癌细胞的凋亡;激活癌细胞质中NF κB向细胞核内转运。     

苏林酸在NF-κB对人乳腺癌TNF-α诱导细胞凋亡增敏中的相关作用

目的 探讨苏林酸在NF-κB对人乳腺癌TNF-α诱导细胞凋亡增敏中的相关作用。方法 取对数生长期的人乳腺癌细胞系MCF-7,加入苏林酸,使其终浓度分别为0.5mmol/L和1.0mmol/L,并设不加苏林酸的对照组进行培养;苏林酸处理48h后进行MTT、流式细胞实验和Western blot法检测,分析苏林酸对肿瘤细胞生长的作用与相关机制。结果 0.5mmol/L和1.0mmol/L苏林酸分别刺激MCF-7细胞48h后,对应的MCF-7细胞的增殖抑制率为(29.17±1.23)%、(38.15±1.51)%,对照组为(1.15±0.02)%(P＜0.05)。与对照组相比,0.5mmol/L和1.0mmol/L苏林酸作用后均可导致滞留在G₀~G₁期的MCF-7细胞显著增加(P＜0.05);0.5mmol/L和1.0mmol/L苏林酸作用后MCF-7细胞的凋亡率明显增加(P＜0.05);0.5mmol/L和1.0mmol/L苏林酸作用后TNF-α的相对表达量分别为2.09±0.67、1.18±0.09,明显低于对照组的7.42±0.56(P＜0.05)。结论 苏林酸具有一定抗人乳腺癌细胞生长的作用,能促使细胞周期G₀~G₁期延长,提高细胞凋亡增敏作用,其作用机制可能与抑制TNF-α活性有关。     

TNF-α诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及调控Bcl-2蛋白的表达

细胞有增殖、分化和凋亡3方面的特性.在维持正常组织的生长平衡过程中,细胞增殖、分化与凋亡3者相互协调,共同调节,其中细胞周亡(apoptosis)对细胞衰老与更新、保持细胞数目的相对恒定方面起着重要作用.肿瘤不仅是增殖和分化异常的疾病,同时也是凋亡异常的疾病,治疗肿瘤就是杀伤和清除肿瘤细胞,诱导肿瘤细胞凋亡是治疗肿瘤的一条有效途径,临床上用的化疗、放疗和热疗等方法的作用机制之一就是引发肿瘤细胞凋亡.肿瘤坏死因子(TNF)是一种由活化的巨噬细胞或单核细胞分泌的具有多种生物学效     

核因子-κB中介的TNF-α与胃癌细胞侵袭力的相关性

目的 探讨肿瘤坏死闪子(TNF-α)诱导胃癌细胞侵袭力的相关机制.方法 体外培养人胃癌细胞株SGC-7901,采用免疫组化方法检测其在TNF-α不同浓度、时间诱导下的NF-κB活性、uPA蛋白表达强度;采用噻唑蓝(MTT)比色法检测SGC-7901细胞在不同浓度的TNF-α、PDTC(吡咯烷二硫代氨基甲酸盐,NF-κB特异性抑制剂)孵育下的细胞增殖情况;构建侵袭小室,检测不同浓度TNF-α对SGC-7901细胞侵袭力影响,并用PDTC预先处理细胞后.检测其对细胞侵袭力的改变.结果 随着TNF-α浓度的增加和时间延长,SGC-7901细胞NF-κB活性明显增强,90 min为高峰;TNF-α明显上调SGC-7901细胞中的uPA蛋白表达水平;一定范围浓度的TNF-α、PDTC对SGC-7901细胞增殖无明显影响;随着TNF-α浓度增加SGC-7901细胞侵袭数也随之增加,具有明显浓度依赖性(TNF-α5、10、20 μg//L vs 0μg/L,84.33±3.786、108.33±6.110、121.330±4.163 vs 63.330±4.933,F=126.282,P＜0.001),PDTC明显抑制TNF-α诱导的SGC-7901细胞侵袭力(42.330±4.041 vs 63.330±4.933,F=126.282,P＜0.05).结论 TNF-α能够增强胃癌细胞的侵袭力,可能是通过NF-κB信号转导路径,激活uPA等蛋白水解酶而实现的.     

5-Fu诱导结肠癌细胞凋亡与NF-κB活化及uPA表达的关系

 [摘要] 目的 研究5-氟尿嘧啶（5-Fu）诱导结肠癌细胞HCT116凋亡与核转录因子-κB (NF-κB) 活化以及uPA表达的关系，并观察吡咯烷二硫氨基甲酸盐（PDTC）抑制NF-κB活化对5-Fu诱导结肠癌细胞凋亡及uPA表达的影响。方法 采用流式细胞仪Annexin Ⅴ-FITC法检测结肠癌细胞HCT116凋亡;采用免疫组织化学方法半定量分析HCT116细胞NF-κB及uPA表达的动态变化。结果 5-Fu在诱导HCT116细胞凋亡的同时有NF-κB活化，1umol/LPDTC能显著增加5-Fu诱导HCT116细胞凋亡及抑制5-Fu诱导的HCT116细胞NF-κB活化作用(P<0.05), uPA变化与NF-κB一致。结论5-Fu在诱导HCT116细胞凋亡的同时活化了NF-κB，uPA表达亦随之增强；PDTC在抑制5-Fu诱导的HCT116细胞NF-κB活化的同时增强了5-Fu诱导细胞凋亡的作用，uPA表达也相应下降     

CPNE5的A结构域对肿瘤坏死因子α诱导核因子κB活化的影响

[目的]研究CPNE5的A结构域(AD)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)激活核因子κB(NF-κB)转录活性的调控作用。[方法]用PCR法扩增AD序列,将其构建EGFP-N1载体上,在真核细胞中表达融合蛋白AD-GFP。以连有κB序列和表达水平受κB序列调控的荧光素酶基因的质粒为报告基因载体,将EGFP-N1、AD-GFP质粒分别与报告基因共转染到HEK293细胞中,经TNF-α处理后,用双荧光素酶报告基因系统测定荧光素酶的活性,检测它们对NF-κB转录活性的影响。[结果]构建了AD-GFP质粒;A结构域能够显著抑制NF-κB转录活性(P<0.05);AD对NF-κB转录活性的抑制具有剂量依赖性。[结论]CPNE5的A结构域能够剂量依赖性抑制NF-κB的转录激活活性。     

Gambogic Acid通过影响NF-κB信号通路诱导A549细胞凋亡

目的:研究Gambogic Acid（GA）对人非小细胞肺癌A549细胞系中NF-κB信号通路的影响及其对细胞凋亡的促进作用。方法:Western blot法和共聚焦显微镜成像技术检测GA对NF-κB的信号通路的影响,MTT及流式细胞（FCM）术检测GA对A549细胞的促凋亡作用。结果:Western blot发现GA能显著抵抗TNF-α诱导导致的IκB磷酸化水平上升及IκB的降解;共聚焦显微镜成像进一步发现GA有效阻止了NF-κB入核;MTT结果显示GA能显著抑制A549细胞的增殖,当药物浓度为5.0μmol/L时抑制率可达到（93.5±6.5）％（P<0.05),IC50值为1.2±0.4 μmol/L;凋亡检测结果显示A549细胞在0.0、0.5、1.0、2.0、3.0及5.0 μmol/L药物处理下细胞凋亡率分别是（6.0±0.7）%、（15.5±2.3）%、（35.0±3.6）%、（43.5±2.7）%、（43.0±3.8）%及（53.7±2.6）%（P<0.05);结论:实验表明,GA能有效地抑制A549细胞增殖和诱导其凋亡,其机制可能是通过影响NF-κB信号通路而发生作用。