温度和浓度对镉离子与人血清白蛋白结合作用的影响

目的运用荧光光谱法研究镉离子(Cd2+)与人血清白蛋白在不同温度、浓度下的相互作用。方法温度为298 K、304 K、310 K、314 K时,在HSA中逐步加入Cd2+,分别测定各条件下HSA及混合样品的荧光光谱。结果随着Cd2+浓度的增大,HSA发射峰略有红移,荧光强度降低;随着温度增高,HSA猝灭程度加大;温度从298 K升至310 K时,KSV逐步减小,结合常数、结合位点逐步增大,而当温度升高至314 K时,结合常数、结合位点数反而下降;反应中的焓变ΔH0、熵变ΔS0且吉布斯自由能变ΔG0。结论 Cd2+对HSA荧光猝灭机制可能为静态猝灭和动态猝灭同时存在。温度升高至310 K时,Cd2+与HSA的作用增强,两者之间的作用力主要为疏水作用,而到314 K时则表现出动态猝灭的特征。     

吖啶橙-罗丹明6G共振能量转移荧光猝灭法测定铅

目的根据吖啶橙和罗丹明6 G两分子间能够有效地发生荧光共振能量转移,建立一种检测铅离子的新方法。方法在表面活性剂SDS的存在下,吖啶橙和罗丹明6 G分子间发生荧光共振能量转移,使罗丹明6 G的荧光强度增大;加入铅离子后能对AO-R6 G体系的荧光产生猝灭作用,其荧光猝灭程度随着铅离子浓度的增大而增强,据此建立了检测Pb2+的新方法。结果当Pb2+浓度为2.0×10-7mol/L~3.0×10-6mol/L时,与荧光猝灭程度ΔF有良好的线性关系,线性回归方程为y=16.34x+42.79,相关系数(r)=0.998,检出限为6.06×10-8mol/L,相对标准偏差(RSD)为3.4%~5.3%,加标回收率为95.1%~96.5%。结论本方法操作简便、灵敏,可用于实际水样中铅含量的测定。     

稀土钐离子与人血清白蛋白的相互作用

目的:通过对稀土钐离子(Sm3+)和人血清白蛋白(HSA)的结合反应研究,进一步探讨Sm3+在生物体内与蛋白质相互作用的机理。方法:用荧光光谱、紫外-可见吸收光谱法研究了稀土金属离子与人血清白蛋白的相互作用。结果:Sm3+对HSA有荧光猝灭作用,属于静态猝灭,Sm3+与HSA反应生成了新的复合物,荧光猝灭发生了分子内的非辐射能量转移。Sm3+与HSA的结合常数Kb分别为4.12×105L.mol-1(298K)和2.26×105L.mol-1(318K),结合位点数n为1.24(298 K)和1.20(318 K)。结论:Sm3+和HSA之间有很强的结合作用,这为Sm3+在体内被蛋白质储存和转运提供了条件。     

荧光分光光度法研究可卡因与牛血清白蛋白之间的相互作用

目的:研究探讨可卡因与牛血清白蛋白之间的相互作用及相互影响的关系。方法:通过荧光分光光度法分析可卡因对牛血清白蛋白的荧光猝灭方式,并探讨两者之间的作用力。结果:可卡因对牛血清白蛋白的荧光猝灭方式具有一定的规律性,不同温度的反应常熟K为1.36×10L/mol(28℃)和6.18×10L/mol(36℃),结合点位数N为2,热力学参数为△H,△S,△G分别为165.45KJ/mol,611.70J/mol旸K,-18.20 KJ/mol(28℃),-22.54KJ/mol(36℃)。结论:可卡因对牛血清白蛋白的荧光猝灭机制是一种静态猝灭,两者之间是一种疏水的作用力。     

Ca~(2+) Mg~(2+)对柔红霉素结合心肌肌球蛋白影响的荧光法研究

利用荧光光谱法研究了生理pH下,Ca2+、Mg2+对柔红霉素(Daunorubicin,DNR)与心肌肌球蛋白(car-diac myosin,CM)结合作用的影响。求得20℃,cCa2+=2.0×10-3mol/L,cMg2+=1.2×10-3mol/L时,Ca2+-DNR-CM、Mg2+-DNR-CM和Ca2++Mg2+-DNR-CM的猝灭常数和结合常数分别为:1.280×105L/mol、1.469×105L/mol和2.237×105L/mol和1.165×105L/mol、1.274×106L/mol和1.848×103L/mol。结果表明:Ca2+、Mg2+对DNR-CM均有荧光猝灭作用,且混合离子能竞争性抑制DNR与CM的结合,而异常的Ca2+、Mg2+浓度增强了DNR对CM的荧光猝灭作用,导致其心脏毒性。     

荧光法研究曲克芦丁和人血清白蛋白的相互作用

[目的]研究曲克芦丁（Troxerutin）与人血清白蛋白（HsA）的相互结合作用。[方法]以HSA为荧光剂,Troxerutin为荧光猝灭剂,在激发波长为220nm,发射波长为345nm下测定两者结合后的荧光强度,推测其猝灭机理;分别测定相同浓度的HSA的荧光发射光谱图和的紫外可见吸收光谱图,来推断两者结合的作用力类型。[结果]Troxerutin与HSA的相互作用为静态猝灭过程,平衡常数K0（25℃）=6．18×10^5L／mol、K0（37℃）=3．76×10^5L／mol,供体（HSA）与受体（Troxerutin）间的作用距离r=4．66nm。Troxerutin和HSA的作用力类型为疏水作用力。[结论]通过两种分析方法清楚的研究了曲克芦丁与血清白蛋白的相互作用。     

水中微囊藻毒素-RR的量子点荧光猝灭快速测定法

目的建立水中微囊藻毒素-RR(MC-RR)的量子点(QDs)荧光猝灭法快速测定法。方法在p H 7.17、反应温度37℃,Cd Se-Cd S量子点浓度2.0 mg/ml条件下,将Cd Se-Cd S量子点与MC-RR单克隆抗体共价连接,形成QDs-MC-RR单克隆抗体生物共轭体。加入含MC-RR水样,测定生物共轭体的荧光强度,根据体系荧光强度与浓度的关系,求出水样中MCRR的含量。结果 MC-RR浓度在0.24~4 nmol/L的线性范围内,所得QDs-MC-RR体系的回归方程为(F0-Fn)/F0=0.110 3c+0.022 93,r=0.994 6,呈较好的线性关系,且符合Lambert-Beer公式。方法的检出限为2.4×10-10 mol/L,RSD为4.2%~9.4%,加标回收率在84.0%~90.7%之间。结论该方法具有操作更为简便快速,检测成本低,易于推广普及的优点,可以满足实际水样中MC-RR的检测需要。     

水中痕量镉(Ⅱ)的荧光素-曙红Y能量转移荧光猝灭测定法

目的建立水中痕量镉(Ⅱ)的荧光素-曙红Y能量转移荧光猝灭测定法。方法取0.50ml的水样置于5.0 ml的比色管中,分别加入1×10-4mol/L荧光素溶液0.30 ml,1×10-5mol/L曙红Y溶液0.10 ml,BR缓冲液(pH 6.5)0.50 ml,定容后在502 nm处测定溶液荧光强度(F)值,以内标法定量。结果在3.43×10-7~1.246×10-5 mol/L的线性范围为,该方法所得镉(Ⅱ)的线性回归方程为ΔF=14.221+546.81×10-5c,r=0.999 5。该方法的检出限为1.03×10-8 mol/L,平均回收率为94.53%~98.15%,RSD为2.44%~4.67%。结论该方法操作简便、灵敏、选择性好,适用于水中镉(Ⅱ)的测定。     

基于铅离子-苯基荧光酮-TritonX-100体系的氡荧光猝灭检测新方法

目的研究铅离子对苯基荧光酮-Triton X-100体系的荧光猝灭特性,建立基于子体铅的氡无辐射危害荧光猝灭检测新方法。方法用0.2%HAc溶液采集氡辐射的子体铅。在Tris-HAc缓冲介质中,Pb~(2+)与PF形成配位物,经非离子表面活性剂Triton X-100敏化,体系发生灵敏的荧光猝灭效应,ΔF与Pb~(2+)浓度呈良好的线性关系,与氡的辐射强度之间具有良好的数学定量关系。据此,建立氡的荧光猝灭检测新方法。结果 Pb~(2+)浓度为1.44 ng/ml~300 ng/ml时,铅离子-苯基荧光酮-Triton X-100体系ΔF与ρ之间呈现良好的线性关系,标准曲线的回归方程为ΔF=8.78ρ+82.02,相关系数(r)=0.999 1,检出限为0.43 ng/ml。氡辐射强度[D,×10~3(Bq·h)/m~3]为8.76、17.90、56.49、66.38时,氡样品测定溶液的ΔF值与D值之间呈现良好的线性关系,回归方程为ΔF=10.37D+365.25,r=0.990 6。结论本方法灵敏、准确,操作简单,在无辐射危害的条件下可检测放射性气体氡。     

水中镉的聚乙烯吡咯烷酮纳米银荧光增强测定法

目的建立水中镉离子的聚乙烯吡咯烷酮纳米银荧光增强测定法。方法在水样中加入1.6×10~(-5) mol/L聚乙烯吡咯烷酮纳米银溶液2.0 ml、磷酸盐缓冲溶液(pH 5.8)0.2 ml、聚乙二醇0.3 ml,25℃反应10 min后,在激发波长337 nm,发射波长380 nm处进行荧光测定。结果在2.0×10-6～2.2×10~(-5) mol/L范围内,所得镉离子的回归方程为ΔF=2.720 3x-1.076 3,r=0.997 8。该方法的检出限为1.2×10~(-6) mol/L;平均回收率为91.3%～103.5%,RSD为0.6%～2.2%。结论该方法具有简便快速,灵敏度和精密度较高的优点,适用于水样中镉离子的检测。     

人血清白蛋白荧光猝灭法测定水环境中Cu(Ⅱ)

〔目的〕建立环境水样Cu(Ⅱ )的分析新方法。〔方法〕人血清白蛋白荧光猝灭法。〔结果〕根据Cu(Ⅱ )在pH=7.43的KH2 PO4 -Na2 HPO4 缓冲溶液中对HSA荧光的猝灭效应 ,建立了HSA荧光猝灭法测定Cu(Ⅱ )的分析新方法。在实验最适条件下Cu(Ⅱ )浓度在 0 .13 -6.0 0 μg/ml范围内有良好的线性关系 (r =0 .997)。方法检出限 3 8ng/ml;相对标准偏差 6.4%-1.5 %;样品加标回收率 94.5 %-10 1.0 %。〔结论〕方法简便 ,特异 ,灵敏度高。可直接用于环境水样中Cu(Ⅱ )的测定。     

N-乙酰半胱氨酸激活蛋白激酶B通路减轻镉诱导的睾丸间质细胞凋亡

目的 探究N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine, NAC)基于蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称AKT)通路对镉诱导小鼠睾丸间质细胞凋亡的调控机制。方法 将小鼠睾丸间质细胞(TM3)分为对照组、镉染毒组(Cd, 5、10、20、30、40和50μmol/L)、NAC组(NAC,500μmol/L)及NAC+镉染毒组(500μmol/L NAC+20μmol/L Cd),其中NAC+Cd染毒组先用NAC预处理30 min,再联合镉染毒24 h。CCK8测定细胞存活率,Hoechst染色检测细胞形态,流式细胞仪分析细胞凋亡率,同时测定丙二醛(malondialdehyde, MDA)、谷胱甘肽(glutathione, GSH)含量,Western blot免疫印迹法分别检测AKT蛋白、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2, Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein, Bax)的表达水平。结果 镉可抑制TM3细胞增殖且存在剂量-效应关系。细胞形态观察发现,随着镉染毒浓度的增加,细胞缩...     

PAN-Rh6G能量转移荧光猝灭法测定水样中痕量镉(Ⅱ)

目的：根据能量转移荧光猝灭程度,建立一种荧光猝灭法测定环境水样中痕量镉的新方法.方法：在无水乙醇介质中,Cd^2＋与1-（2-吡啶偶氮）-2-萘酚（PAN）形成PAN-Cd^2＋配合物,其吸收光谱与罗丹明6G（Rh6G）的发射光谱有效重叠,发生能量转移,使Rh6G荧光猝灭,从而建立了痕量镉的荧光猝灭测定新方法.结果：在优化实验条件下,在31～800 ng/ml浓度范围内,Rh6G荧光猝灭程度与PCd^2＋呈现良好的线性关系（r=0.9999）.方法的检出限为9.0 ng/ml.结论：方法灵敏、快速、简便,用于环境水样中痕量镉的测定,结果满意.     

基于修饰碳量子点的铜离子荧光生物传感平台构建

目的构建基于氨基硫脲修饰碳量子点测定生物样品中铜离子的荧光探针。方法通过化学反应将氨基硫脲修饰到碳量子点表面,修饰后的碳量子点其荧光可以被铜离子猝灭,根据加入铜离子前后碳量子点荧光强度的变化可测定样品中的铜离子。结果相对于其他金属离子,该探针对Cu2+有特殊选择性,Cu2+可使其荧光最大猝灭率达68.7%。且当Cu2+浓度在0~0.40μmol/L范围内时,浓度与荧光强度的变化值呈良好线性关系,检测限为3.47 nmol/L。将其用于人发及血液中铜离子检测,测定结果和原子吸收分光光度法结果差异无统计学意义。加标回收率为94.7%~103.7%,RSD2.9%。结论该方法具有绿色、操作简单、快速、特异性好、灵敏度高、无需大型仪器等优点,适用于生物样品中铜离子的测定。     

镉通过类雌激素样作用促进人乳腺癌MCF-7细胞增殖

[目的]研究镉对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及雌激素受体(estrogen receptor,ER)蛋白表达水平的影响及其可能机制。[方法]用1×10~(-6)、1×10~(-7)、1×10~(-8)、1×10~(-9)、1×10~(-10)、1×10~(-11) mol/L的17β-雌二醇(后称雌激素)培养不同来源的A、B两株MCF-7细胞4 d,应用CCK8法筛选敏感细胞株并确定雌激素促细胞增殖作用最强的浓度。用1×10~(-6)、1×10~(-7)、1×10~(-8)、1×10~(-9)、10~(-10)、1×10~(-11) mol/L的镉溶液染毒敏感细胞株,确定镉促进细胞增殖的最大浓度。设置阴性对照组(去雌激素培养液)、实验组(1×10~(-8) mol/L镉)、阳性对照组(1×10~(-9) mol/L雌激素),通过克隆形成实验检测镉对MCF-7细胞集落形成能力的影响。利用ER抑制剂(ICI182780)初步探讨镉致细胞增殖的可能机制,增设实验抑制剂组(1×10~(-8) mol/L镉+1×10~(-7) mol/L ER抑制剂)、阳性抑制剂组(1×10~(-9) mol/L雌激素+1×10~(-7) mol/L ER抑制剂),通过CCK8法、流式细胞术和Western blot分别检测各组的细胞增殖率、细胞周期S期比例和ER表达水平。[结果]实验所用B株MCF-7细胞为雌激素敏感细胞株,且当雌激素浓度为1×10~(-9) mol/L时,对MCF-7细胞的促进增殖作用[(203.55±36.65)%]最大(P0.001)。与阴性对照组(100%)相比,1×10~(-8)~1×10~(-10) mol/L镉溶液可促进MCF-7细胞增殖[(163.78±31.90)%~(176.88±10.06)%](P0.001)。1×10~(-8) mol/L镉可促进细胞集落形成(P0.05),增加细胞S期比例(P0.001),提高细胞ER蛋白表达水平(P0.001)。与实验组相比,加入ER抑制剂能够抑制镉对MCF-7细胞的促增殖作用[由(135.17±23.96)%降至(107.66±7.64)%](P0.01),抑制镉诱导的细胞S期比例增加[由(24.17±0.53)%降至(12.36±0.43)%](P0.001),拮抗镉诱导的ER表达增加[由(56.19±3.67)%降至(38.84±1.04)%](P0.05)。[结论]镉可以促进人乳腺癌细胞MCF-7增殖和ER表达,这种作用可被ER抑制剂所抑制,提示镉可能具有雌激素样作用。     

荧光猝灭法测定人尿中的1-羟基芘

目的建立人尿中1-羟基芘(1-OHP)荧光猝灭法的测定方法。方法在p H值为4.5的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液中,1-OHP与鱼精蛋白-金纳米簇(PRT-Au NCs)反应,通过荧光猝灭程度(ΔF)得到标准曲线,对1-OHP进行定量。结果在最佳实验条件下,测定值为1.03 nmol/L～62.80 nmol/L时,1-OHP与ΔF有良好的线性关系,线性回归方程为ΔF=577.91+17.89 c(10-9mol/L),R2为0.998 5,方法检出限为0.309 nmol/L,人尿样中1-OHP的加标回收率为94.39%～104.52%。结论本法简便、快速、灵敏,所用仪器设备简单,易于推广,提高金纳米簇传感系统的灵敏度,可用于人尿中1-OHP的检测,为评价人体在多环芳烃(PAHs)下的暴露情况提供数据支持。     

聚L-缬氨酸修饰电极差分脉冲伏安法测定自来水中锌和镉

目的制备聚L-缬氨酸(L-Val))修饰电极,并用于自来水中锌离子和镉离子的快速测定。方法于pH值为5.5的Na_2HPO_4-NaH_2PO_4缓冲液中,用循环伏安法(CV)将L-Val电聚合修饰至玻碳电极(GCE)表面,制得聚L-缬氨酸修饰电极(PL-Val/GCE),并用CV法、电化学阻抗法(ESI)对制备的电极性能进行表征。将PL-Val/GCE作为工作电极,建立了差分脉冲伏安法(DPV)测定水中痕量的Zn~(2+)和Cd~(2+)。结果在最佳的条件下,Zn~(2+)和Cd~(2+)的氧化峰电位分别为-1.184 V和-0.872 V。Zn~(2+)峰电流在(5.0×10~(-9)～2.0×10~(-5))mol/L的浓度与其浓度呈良好线性关系,Cd~(2+)峰电流在(5.0×10~(-9)～1.5×10~(-7))mol/L和(2.5×10~(-7)～1.0×10~(-5))mol/L的浓度与其浓度呈良好线性关系。Zn~(2+)和Cd~(2+)的检测限均为2.0×10~(-9) mol/L。Zn~(2+)和Cd~(2+)在自来水样品中的平均回收率在90.0%～105.8%;连续平行测定3次RSD均4.4%。结论该方法灵敏度高、检测速度快、准确性高,适用于自来水中的Zn~(2+)和Cd~(2+)的测定。     

邻苯二甲酸二乙基己酯和镉对大鼠睾丸

研究邻苯二甲酸二乙基己酯[BF](DEHP)及镉(Cd)对大鼠睾丸巨噬细胞(TM)[BFQB]分泌细胞因子IL-1β的影响? 方法 利用贴壁法提取大鼠睾丸巨噬细胞?以0.1%二甲基亚砜(DMSO)为对照组,用50 μg/ml脂多糖(LPS)作为激活剂,以1 μmol/L?10 μmol/L?100 μmol/L的DEHP或CdCl2单独及各自半量联合处理,作用24 h后用ELISA法检测上清液中细胞因子IL-1β的含量;用CCK8法测定各浓度DEHP或CdCl2单独处理对细胞活性的影响? 结果 LPS可明显促进巨噬细胞分泌细胞因子IL -1β;0.5 μmol/L DEHP+0.5 mol/L Cd和5 μmol/L DEHP+5 μmol/L Cd联合染毒可显著抑制细胞分泌功能,但IL-1β分泌量仍明显高于对照组,并介于两单独作用组之间;50 μmol/L DEHP+50 μmol/L Cd的联合处理可非常显著抑制细胞分泌功能,与对照组相比差异无统计学意义?随着剂量增加,DEHP或Cd单独作用都能抑制细胞分泌功能和细胞活性,但对两者抑制程度存在较大差异? 结论 DEHP和Cd联合处理抑制大鼠TM分泌IL-1β表现出一定交互作用,对细胞活性的抑制可部分解释DEHP和Cd对细胞分泌功能的抑制效应?     

四氢呋喃与牛血清白蛋白相互作用的荧光光谱法研究

目的研究四氢呋喃（tetrahydrofuran,THF）与牛血清白蛋白（bovine serum albumin,BSA）相互作用的机制,探讨温度对其反应的影响。方法移取的BSA于石英比色皿中,搅拌混合均匀,避光静置,分别在25℃（298 K）、29℃（302 K）、33℃（306 K）、37℃（310 K）下以280 nm为激发波长,在LS-55荧光分光光度计上扫描280~500 nm波长范围内的发射光谱。结果不同温度下的结合猝灭常数（Ksv）为（3.466~6.317）×104L/mol,猝灭常数随温度的升高而减小。结论四氢呋喃对BSA的猝灭作用是属于静态猝灭。     

邻苯二甲酸二乙基己酯和镉对大鼠睾丸巨噬细胞分泌IL-1β的影响

目的研究邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)及镉(Cd)对大鼠睾丸巨噬细胞(TM)分泌细胞因子IL-1β的影响。方法利用贴壁法提取大鼠睾丸巨噬细胞。以0.1%二甲基亚砜(DMSO)为对照组,用50μg/ml脂多糖(LPS)作为激活剂,以1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L的DEHP或Cd Cl2单独及各自半量联合处理,作用24 h后用ELISA法检测上清液中细胞因子IL-1β的含量;用CCK8法测定各浓度DEHP或Cd Cl2单独处理对细胞活性的影响。结果 LPS可明显促进巨噬细胞分泌细胞因子IL-1β;0.5μmol/L DEHP+0.5μmol/L Cd和5μmol/L DEHP+5μmol/L Cd联合染毒可显著抑制细胞分泌功能,但IL-1β分泌量仍明显高于对照组,并介于两单独作用组之间;50μmol/L DEHP+50μmol/L Cd的联合处理可非常显著抑制细胞分泌功能,与对照组相比差异无统计学意义。随着剂量增加,DEHP或Cd单独作用都能抑制细胞分泌功能和细胞活性,但对两者抑制程度存在较大差异。结论 DEHP和Cd联合处理抑制大鼠TM分泌IL-1β表现出一定交互作用,对细胞活性的抑制可部分解释DEHP和Cd对细胞分泌功能的抑制效应。