大鼠软骨非全层损伤模型的建立及活化细胞与整合素β_1表达关系的研究

目的探讨大鼠软骨非全层损伤模型的制备及术后细胞变化及细胞活化与整合素β_1表达的关系。方法 10周龄SD雄性大鼠45只,体质量300~400 g,随机分为手术组、假手术组和对照组,每组15只。手术组采用划痕法制造软骨非全层损伤模型;假手术组打开膝关节囊后直接缝合;对照组不行手术。术后1、7、14 d各组分别处死5只大鼠,取材行大体观察;并行HE、番红O组织学染色,评估并比较各组HE染色改良组织学评分及番红O染色灰度值;行Brd U、CD105免疫荧光染色和CD105/整合素β_1双标记染色,采用标准双盲法计数并比较各组各时间点CD105阳性细胞数。结果大体观察示手术组划痕周围软骨欠光滑,非透明,有软骨软化、纤维化改变,且随造模时间延长逐渐加重;假手术组和对照组软骨呈白色透明状,无软化、纤维化改变。HE染色示手术组在划痕周围细胞数增多,大小不等,排列分布不均;假手术组和对照组细胞大小均一,染色均匀,排列有序。手术组术后各时间点HE染色改良组织学评分均显著高于假手术组及对照组(P0.05),各组组内各时间点间比较差异均无统计学意义(P0.05)。番红O染色示手术组各时间点染色欠均匀,划痕周围区域着色较浅;假手术组和对照组各时间点染色均匀,无失染。术后各时间点各组间比较以及各组内各时间点间比较番红O染色灰度值,差异均无统计学意义(P0.05)。Brd U免疫荧光染色示手术组划痕周围细胞排列紊乱,分布不均;假手术组和对照组细胞排列分布均匀,无聚集现象。CD105免疫荧光染色示手术组划痕周围有较多阳性细胞聚集,细胞大小不一、分布不均;假手术组和对照组软骨层见少数阳性细胞,分布均匀。手术组术后各时间点CD105阳性细胞数均显著多于假手术组和对照组(P0.05);手术组内随时间延长CD105阳性细胞数逐渐增多,各时间点间比较差异均有统计学意义(P0.05)。CD105/整合素β_1双荧光标记染色示手术组划痕周围有双标阳性细胞聚集,假手术组和对照组各时间点均未观察到双标阳性细胞。结论通过划痕能够建立大鼠软骨非全层损伤模型,且损伤无法完全修复。划痕造成的软骨损伤周围存在活化细胞聚集现象,细胞的活化与软骨基质改变关系不大;这些活化细胞处于增殖活跃状态,可同时表达CD105和整合素β_1。     

2型糖尿病患者骨密度与胰岛素样生长因子-1、白介素-1β的相关性研究

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者骨密度(BMD)与胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、白介素-1β(IL-1β)水平的关系。方法选择2型糖尿病患者测定骨密度,并根据骨密度选取骨量正常组、骨量减少组、骨质疏松组各20例,另选取20例健康体检正常且骨量正常者作为对照组,测定IGF-1、IL-1β。结果(1)T2DM骨量减少组、骨质疏松组的IGF-1浓度低于T2DM骨量正常组及正常对照组(P0.005)(2)T2DM骨质疏松组的IL-1β浓度高于T2DM骨量正常组及正常对照组(P0.005),高于T2DM骨量减少组(P0.05)。结论2型糖尿病患者随着骨密度的下降,IGF-1逐渐减少,IL-1β逐渐增加,二者可能影响2型糖尿病患者骨密度的变化。     

HVHF及CVVHDF治疗MODS犬的疗效比较

目的:探讨高容量血液滤过(HVHF)和连续性静-静脉血液透析滤过(CVVHDF)对多脏器功能障碍综合征(MODS)犬治疗中的疗效。方法:采用二次打击建立犬MODS模型,18只犬随机分MODS组(n=6)、CVVHDF组(n=6)和HVHF组(n=6),CVVHDF组及HVHF组分别给予CVVHDF及HVHF治疗24 h;MODS组不给予治疗。于术前(T1),内毒素注射前(T2),内毒素注射完毕后0 h(T3)、3 h(T4)、6 h(T5)、9 h(T6)、12 h(T7)、18 h(T8),24 h(T9)留取血标本,ELISE法测定血浆中CD14、LPS、IL-1β、IL-4、HMGB-1、TGF-β浓度。MODS组、CVVHDF组及HVHF组建模后24 h处死前取肺、心、肝、肾、脑组织器官,Western Blot法检测各脏器组织CD14、HMGB-1蛋白表达。结果:CVVHDF及HVHF治疗后LPS、CD14、IL-1β、IL-4、HMGB-1浓度水平均进行性下降,在T6~T9显著低于MODS组(P0.01),而TGF-β浓度水平则进行性升高,在T5~T9显著高于MODS组(P0.01),治疗过程中CVVHDF及HVHF组间差异无统计学意义(P0.05)。CVVHDF及HVHF治疗后,各组织中CD14、HMGB-1蛋白表达均有所降低,其中CVVHDF组肝脏及脑组织CD14蛋白表达显著低于MODS组(P0.01),CVVHDF组肺脏、肾脏及脑组织HMGB-1蛋白表达显著低于MODS组(P0.01),HVHF组肺脏、心脏、肝脏及脑组织CD14蛋白表达显著低于MODS组(P0.01),HVHF组各脏器HMGB-1蛋白表达均显著低于MODS组(P0.01),CVVHDF组及HVHF组在各脏器CD14、HMGB-1蛋白表达差异未见统计学意义(P0.05)。结论:CVVHDF及HVHF均可削弱血循环中LPS、CD14、HMGB-1、IL-1β和IL-4等炎症介质的峰值浓度,重建免疫平衡,重建免疫系统内稳状态;均可下调肺脏、心脏、肝脏、肾脏及脑组织中CD14、HMGB-1蛋白表达,有效遏制过度的炎症反应,从而防治MODS。     

TGF—β1基因修饰诱导脂肪干细胞成软骨分化的实验研究

[目的]本研究通过选择对软骨细胞ECM合成具有促进作用的TGF-β1转染脂肪干细胞(ADSCs),观察转染后目的基因的稳定表达和对软骨细胞外基质(ECM)的两种重要组分:Ⅱ型胶原(type Ⅱ collage,ColⅡ)和aggrecan的合成,为构建新型的组织工程软骨提供实验依据.[方法]TGF-β1基因转染脂肪干细胞及阳性细胞克隆株的筛选;RT-PCR检测TGF-β1、纤连蛋白(fibronectin,FiN)、ColⅡ、Aggrecan的表达;Western-blot检测TGF-β1.[结果]RT-PCR结果显示:实验组(TGF-β1稳定转染组)的TGF-β1、FN、Col Ⅱ、Aggrecan的表达较空染组和正常对照组均明显增多(P＜0.01);Western blot检测实验组(TGF-β1稳定转染组)TGF-β1蛋白的表达较空染组和正常对照组均明显增多(P＜0.01).[结论]成功分离培养脂肪干细胞;以脂质体介导法将TGF-β1目的基因成功转染ADSCs,转染后成软骨分化的特异性细胞外基质增多,表明转染TGF-β1基因可以促使ADSCs向软骨细胞方向分化,从而为软骨组织工程提供新的思路和方法.     

冬虫夏草通过抗氧化抗炎抑制细胞凋亡改善顺铂肾损伤

目的:观察顺铂(cisplatin,CP)小鼠肾损伤后肾组织氧化应激、炎症及细胞凋亡情况以及冬虫夏草干预的影响,探讨冬虫夏草的肾保护作用机制。方法:用腹腔注射cisplatin的方法建立顺铂肾损伤模型,28只8周龄C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、CP组、冬虫夏草组、冬虫夏草+CP组,每组7只。72 h后处死小鼠,检测各组小鼠血清尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr),肾组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA),HE染色观察小鼠肾小管间质病理变化,TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡情况; ELISA的方法测定组织中TNF-α、IL-1β、IL-6。结果:与对照组及冬虫夏草相比,CP组与冬虫夏草+CP组小鼠的BUN、Scr及肾组织MDA水平增高(P0.01),肾组织SOD降低(P0.01),肾小管病理半定量计分显示小管间质损伤明显加重(P0.01),TUNEL阳性细胞表达增多(P0.01),TNF-α、IL-1β、IL-6明显增加(P0.01);与CP组相比较,冬虫夏草+CP组的血清BUN、Scr及肾组织MDA水平下降(P0.01),肾组织SOD上升(P0.05),肾小管病理半定量计分显示冬虫夏草+CP组较CP组小管间质损伤明显改善(P0.01),TUNEL阳性细胞表达明显减少(P0.01),TNF-α、IL-1β、IL-6明显减少(P0.01)。结论:顺铂肾损伤肾组织中MDA明显增高,SOD活性降低,TNF-α、IL-1β、IL-6及凋亡细胞显著增加,提示顺铂至急性肾损伤与其诱导氧化应激、炎症及细胞凋亡有关。冬虫夏草干预后肾组织中MDA明显降低,SOD活性升高,TNF-α、IL-1β、IL-6及凋亡细胞显著减少,提示冬虫夏草可能通过抑制氧化应激、炎症及肾小管上皮细胞凋亡而达到肾保护作用。     

补骨脂素对去势雌鼠E2、ERβ、TNF-α、IL-17的影响

目的观察补骨脂素对去势雌鼠E_2、ER_β、TNF-α、IL-17的影响,探讨补骨脂素防治绝经后骨质疏松的机理。方法选取3月龄雌性SD大鼠72只,随机分为假手术组、模型组、戊酸雌二醇对照组、壮骨止痛胶囊对照组、补骨脂素高剂量组、补骨脂素低剂量组,每组12只。除假手术组外,其它大鼠造成双侧去卵巢骨质疏松症病理模型,术后5d拆线后开始给药,连续13周。最后一次给药后次日取血标本采用ELISA检测血清中雌激素(E_2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-17(IL-17)的含量。提取左股骨组织mRNA样本进行RT-PCR反应检测骨组织TNF-α、ER_β、IL-17基因的表达。取右股骨脱钙切片免疫组化检测ER_β表达。结果模型组去势雌鼠血清E_2水平显著低于假手术组(P0.01)。壮骨止痛胶囊显著升高血清E_2水平(P0.01),补骨脂素高剂量组血清E_2水平显著高于模型组(P0.01),补骨脂素低剂量组血清E_2水平与模型组相比无统计学差异(P0.05)。模型组血清TNF-α、IL-17水平及股骨TNF-α、IL-17mRNA表达显著高于假手术组(P0.01),股骨ER_β显著低于假手术组(P0.05)。戊酸雌二醇组血清TNF-α、IL-17水平及股骨TNF-α、IL-17mRNA表达显著低于模型组,股骨ER_β显著高于模型组(P0.05)。壮骨止痛胶囊组血清TNF-α、IL-17水平显著低于模型组(P0.05),股骨TNF-α、IL-17mRNA表达非常显著低于模型组(P0.01),而股骨ER_β显著高于模型组(P0.05)。补骨脂素高剂量组血清TNF-α水平及股骨TNF-αmRNA表达显著低于模型组(P0.05),而血清IL-17水平及股骨IL-17mRNA表达非常显著低于模型组(P0.01),股骨ER_β显著高于模型组(P0.05)。补骨脂素低剂量组血清TNF-α水平显著低于模型组(P0.05),但其股骨TNF-αmRNA表达与模型组相比无统计学差异,而血清IL-17水平及股骨IL-17mRNA表达显著低于模型组(P0.05),股骨ER_β与模型组相比没有统计学差异。结论补骨脂素可通过提高去势雌鼠血清E_2水平和股骨ER_β水平,降低去势雌鼠骨组织TNF-α、IL-17基因表达和血清TNF-α、IL-17水平发挥抗绝经后骨质疏松症作用。     

贲门癌患者外周血T淋巴细胞亚群及细胞因子表达的变化

目的 观察贲门癌手术患者机体免疫状态的变化.方法 采用流式细胞术检测97例贲门癌患者T淋巴细胞亚群(Th1、Th2、CD3+、CD4+、CD8+细胞),采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验( ELISA)检测血清中白细胞介素(IL)-2、干扰素(IFN)-γ、IL-4、IL-10、可溶性白细胞介素-2受体R(sIL-2R)和肿瘤坏死因子(TNF)-β水平.结果 贲门癌患者术前外周血Th1/Th2细胞比值(0.43±0.13)较正常对照组(0.58±0.12)降低(P＜0.05),其Th1细胞表达的IL-2、IFN-γ等细胞因子水平低于正常对照组;Th2细胞表达的IL-4、IL-10细胞因子水平高于正常对照组(P＜0.05).T细胞介导的细胞免疫及血清sIL-2R和TNF-β水平与肿瘤TNM分期相关,其特征为:CD3+、CD4+细胞减少(P＜0.05),而CD8+细胞增加(P＜ 0.01);CD4 +/CD8+细胞比值下降(P＜0.01),血清sIL-2R和TNF-β水平升高(p＜0.05) 贲门癌根治术后1个月CD3+、CD4+细胞回升,CD8+细胞回降,同时血清sIL-2R和TNF-β水平降低(P＜0.01).结论 贲门癌患者外周血Th1/Th2细胞比值降低,细胞因子表达失衡,患者存在免疫功能抑制.     

IL-1β抑制硬膜外瘢痕形成的作用与机制研究

[目的]研究白介素1β(IL-1β)对成纤维细胞合成基质金属蛋白酶3的作用及机制,以探讨IL-1β对硬膜外瘢痕形成的影响。[方法]将NIH3T3细胞随机分为3组,分别为IL-1β组、IL-1β+SB202190(p38MAPK特异性阻断剂)组和对照组,各组经无血清培养20h后,IL-1β组加入10ng/ml的IL-1β、IL-1β+SB202190组用10μmol/L的SB202190预作用1h后加入10ng/ml的IL-1β,对照组直接加2%血清。各组细胞培养24h后收集细胞,采用RT-PCR和Western blotting检测MMP-3的表达。[结果]IL-1β组MMP-3表达较对照组明显增加(P0.01);IL-1β+SB202190组MMP-3的表达较IL-1β组明显减少(P0.01),但与对照组无明显差异(P0.05)。[结论]IL-1β可促进NIH3T3细胞MMP-3的合成,可能对硬膜外瘢痕的形成有一定的抑制作用,而p38通路在IL-1β抑制瘢痕形成过程中起到重要的作用。     

脾动脉缩窄对门静脉高压大鼠脾脏iNOS表达及Th1/Th2平衡的影响

目的 观察脾动脉缩窄对肝硬化门静脉高压大鼠脾脏iNOS、Th1/Th2型细胞因子表达的影响,并探讨机制.方法 肝硬化门静脉高压大鼠随机分3组(n=10):假手术组(SOG)、脾动脉缩窄术组(SAC)和脾动脉结扎术组(SAL);正常大鼠10只行假手术作为对照组(NCG).免疫组化法测脾脏iNOS表达,RT-PCR法测脾脏IFN-γ、IL-4mRNA表达,对iNOS与IFN-γ、IL-4表达量作相关分析.结果 SOG脾脏iNOS明显高于NCG(P＜0.01),SAC和SAL明显低于SOG(P＜0.01).SOG脾脏IFN-γmRNA和IFN-γ/IL-4明显低于NCG(P＜0.01),IL-4mRNA明显高于NCG(P＜0.01);SAC脾脏IFN-γmRNA高于SOG(P＜0.05),SAC和SAL脾脏IL-4mRNA低于SOG(P＜0.05),而IFN-γ/IL-4高于SOG(P＜0.05).iNOS与IFN-γ负相关(r=-0.672,P＜0.01),与IL-4正相关(r=0.634,P＜0.01).结论 脾动脉缩窄术后门静脉高压大鼠脾脏iNOS表达降低,IFN-γ/IL-4升高,脾脏Th1/Th2失衡改善可能与术后iNOS表达降低有关.     

前列腺液中IL-1β、IL-8、TNF-α、PGE2浓度变化及临床意义

目的 探讨慢性前列腺炎患者前列腺液中IL-1β、IL-8、TNF-α、PGE2的浓度变化与慢性前列腺炎类型、发病机制、症状和前列腺液白细胞计数的关系.方法 以Meares-Stamey法行尿液、前列腺按摩液(EPS)细菌培养,结合前列腺液常规检查和NIH-CPSI评分,将100例慢性前列腺炎患者分为细菌组(Ⅱ型11例)、非细菌组(Ⅲa型66例)、前列腺痛组(Ⅲb型23例).放射免疫法测定患者和20例正常对照者前列腺液中IL-1β、IL-8、TNF-α、PGE2含量,比较结果并进行相关分析.结果 Ⅱ型前列腺炎患者EPS中IL-1β、IL-8、TNF-α、PGE2检测值明显高于Ⅲa型、Ⅲb型及对照组(P＜0.01),Ⅲa型明显高于Ⅲb型及对照组(P＜0.05),Ⅲb型与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).前列腺炎患者IL-1β与TNF-α、PGE2水平成正相关(r=0.563,r=0.826;P＜0.01).EPS中白细胞计数与IL-8水平成正相关(r=0.547,P＜0.01),与IL-1β、TNF-α、PGE2水平无相关性;IL-1β、PGE2水平与NIH-CPSI疼痛不适症状评分成正相关(r=0.506,P＜0.01);IL-1β、IL-8、TNF-α、PGE2水平与NIH-CPSI评分无相关性(P＞0.05).结论 慢性前列腺炎患者前列腺液IL-1β、IL-8、TNF-α、PGE2表达增高,并参与前列腺的炎症反应,其水平可作为慢性前列腺炎的诊断依据之一,对慢性前列腺炎分型可能有一定临床意义.     

丙泊酚对内毒素性急性肺损伤大鼠血清TNF-α、IL-1β及IL-10的影响

目的探讨内毒素性急性肺损伤(ALI)大鼠用丙泊酚后处理对血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β和IL-10影响。方法雄性SD大鼠96只,随机均分为四组,每组24只。脂多糖(LPS)致伤组(B组)、丙泊酚低剂量治疗组(C组)和丙泊酚高剂量治疗组(D组)经尾静脉注射LPS 5 mg/kg制作ALI模型;之后生理盐水对照组(A组)和B组泵入生理盐水,C、D组分别注射丙泊酚2、4 mg/kg后再分别泵入4、8 mg.kg-1.h-1。分别在制模后1、2、3、4 h抽取动脉血测定TNF-α、IL-1β及IL-10的水平。结果制模后各时点A组大鼠TNF-α、IL-1β和IL-10含量均明显低于其它三组(P<0.05或P<0.01)。制模后1、2 h B组TNF-α、IL-1β和IL-10含量明显高于C、D组(P<0.01),C组IL-1β和IL-10含量明显高于D组(P<0.05或P<0.01)。制模后3、4 h B组IL-1β和IL-10含量仍明显高于C、D组(P<0.01),C组显著高于D组(P<0.01)。结论丙泊酚可以显著抑制ALI大鼠血清TNF-α、IL-1β及IL-10上升的程度。     

银杏叶提取物对重症急性胰腺炎大鼠脑组织中IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平的影响

目的观察银杏叶提取物(ginkgo biloba extract,GBE)对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠胰腺及脑组织中IL-1β、IL-6及TNF-α表达水平的影响,探讨SAP脑损害的发病机理及GBE对脑损害的治疗效果。方法 54只Winstar大鼠随机分为正常对照组、模型组及治疗组3组,每组18只。正常对照组开腹仅翻动胰腺;治疗组及模型组采用胰腺被膜下注射5%牛黄胆酸钠法制作SAP模型,每隔8 h分别于腹腔内注射GBE和生理盐水。制模后6、12及24 h时段各组取材,测定血清淀粉酶值,光镜下行胰腺组织病理评分,免疫组化法测定胰腺和脑组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平。结果血清淀粉酶值及胰腺组织病理评分值治疗组较模型组降低(P<0.01)。24 h与6及12 h时段比较,胰腺组织中IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平,在模型组增高(P<0.05或P<0.01),在治疗组无明显变化(P>0.05);脑组织中IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平,在模型组增高(P<0.05或P<0.01),在治疗组降低(P<0.05或P<0.01)。同时段比较,IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平治疗组均较模型组降低(P<0.01)。结论 SAP时胰腺和脑组织中IL-1β、IL-6及TNF-α的表达明显增加,GBE对SAP时胰腺及脑组织中IL-1β、IL-6和TNF-α有抑制清除作用。     

血红素加氧酶-1对心跳骤停复苏大鼠神经功能的影响

目的 探讨血红素加氧酶-1(HO-1)对心跳骤停复苏大鼠神经功能的影响.方法 雄性SD大鼠65只,随机分为四组:心跳骤停复苏组(Ⅰ组,20只)、氯化高铁血红素组(Ⅱ组,20只)、锡原卟啉组(Ⅲ组,20只)和假手术组(Ⅳ组,5只).Ⅰ组在心跳骤停后进行标准的心肺复苏直至恢复自主循环( ROSC);Ⅱ和Ⅲ组分别在心跳骤停前12h或1h经腹腔注射15 mg/kg的氯化高铁血红素或30 μmol/kg锡原卟啉Ⅸ,并进行心肺复苏;Ⅳ组不进行窒息心跳骤停.记录心跳骤停复苏各组的复苏参数,于ROSC后4d对各组进行神经功能缺陷评分(NDS),随后断头取脑,计数海马CA1区存活神经元数、TUNEL阳性细胞数及caspase 3阳性细胞数.结果 心跳骤停复苏各组的复苏参数差异无统计学意义.与Ⅳ组比较,Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组NDS评分明显升高(P＜0.05);与Ⅰ组比较,Ⅱ组NDS评分显著降低(P＜0.05).海马CA1区染色显示:与Ⅳ组比较,Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组存活神经元数显著减少,TUNEL阳性细胞数和caspase 3阳性细胞数明显增加(P＜0.05);与Ⅰ组比较,Ⅱ组TUNEL阳性细胞数和caspase 3阳性细胞数减少(P＜0.05).结论 诱导HO-1的表达可改善心跳骤停复苏后大鼠的神经功能,其机制可能与改善海马CA1区神经元的存活,抑制神经元凋亡有关.     

慢病毒介导白介素-1β siRNA对脊髓钝挫伤大鼠运动功能的影响

目的 :观察白介素-1β(IL-1β)小干扰RNA(si RNA)对脊髓钝挫伤(spinal cord contusion,SCC)大鼠运动功能的影响,并探讨其相关机制。方法:98只雌性SD大鼠随机分为4组:假手术组(Sham组)、单纯SCC组(SCC组)、空载体组(Vector组)和慢病毒干扰组(IL-1βSH组)。IL-1βSH组和空载体组术前48h在拟损伤脊髓节段局部注射IL-1βsi RNA或空载体。Sham组大鼠只剥离椎板不实施SCC,其余3组大鼠均造成T10SCC。每组各取大鼠5只,于术前当天以及术后1d、3d、5d、7d、14d采用Basso BeattieBresnahan(BBB)评分评估大鼠后肢运功功能。Sham组术后28d处死大鼠,取T10段脊髓,用实时荧光定量聚合酶链式反应技术(qRT-PCR)检测IL-1β和γ-突触核蛋白(SNCG)mRNA相对表达水平。SCC组于术后6h、12h、1d、3d、5d、7d、14d取损伤段脊髓,检测IL-β和SNCG mRNA相对表达水平。Vector组和IL-1βSH组在术后7d取损伤段脊髓检测SNCG mRNA相对表达水平;在术后3d、7d、28d行心脏灌注、固定损伤脊髓,用免疫组织化学染色技术观察SNCG的免疫阳性细胞计数,并测定平均积分光密度(IOD)值。应用GeneMANIA分析IL-1β和SNCG的理论关系。结果:Sham组各时间点BBB评分均为21分,SCC后,SCC组评分各时间点均显著低于Sham组(P0.05),IL-1βSH组评分在3d、5d、7d、14d时均显著高于Vector组(P0.05)。SCC组术后6h、12h、7d时IL-1βmRNA表达量较Sham组显著性上调(P0.05),SNCG mRNA表达量较Sham组显著性下调(P0.05)。术后7d,IL-1βSH组SNCG mRNA表达水平显著高于Vector组(P0.05)。IL-1βSH组损伤脊髓前角SNCG免疫阳性细胞数和IOD值在术后3d、7d、28d均优于Vector组,差异具有统计学意义(P0.05)。GeneMANIA分析发现IL-1β和SNCG通过Cfd存在亚细胞定位关系。结论:IL-1βsi RNA可改善SCC大鼠后肢运动功能,上调SNCG蛋白和mRNA的表达,这可能与调节神经元可塑性、抑制线粒体凋亡途径有关。     

Ephrin-B1在大鼠脊髓损伤的表达

[目的]探讨红细胞生成素诱导肝癌细胞株配体-B1 (Ephrin-B1)在大鼠脊髓损伤的表达变化.[方法]将60只成年Wistar大鼠分正常组、假手术组、伤后3、7、14 d及28 d组.假手术组大鼠不损伤脊髓,损伤组大鼠采用Allen's氏打击法损伤T10脊髓.分别在各个时间点取材,免疫荧光和Western Blot检测Ephrin-B1蛋白表达情况.[结果]免疫荧光结果显示Ephrin-B1在正常、假手术和损伤脊髓的灰质和白质中均有表达,但在损伤脊髓组织中表达较高,脊髓组织中的星形胶质细胞表达Ephrin-B1.Western Blot显示损伤组比对照组Ephrin-B1蛋白含量显著增加(P＜0.01),从伤后3d开始持续到伤后28 d;伤后14 d蛋白含量达到高峰,明显高于对照组及伤后其他组(P＜0.01);伤后28 d蛋白含量较14 d减少(P＜0.01),与伤后7d相比无显著性差异(P＞0.05).[结论]Ephrin-B1在大鼠脊髓损伤后表达升高,伤后14d表达升高显著,表达于脊髓的星形胶质细胞.     

新城疫病毒对肿瘤浸润淋巴细胞的作用

目的探讨新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)对肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)的作用.方法将6例原发性肝癌癌块进行处理,分离出TIL,每例等分成3份,分别加入HA效价为1∶160 NDV液20 μl(NDV组)、终浓度为1000 u/ml的rIL-2(rIL-2组)和0.9%的生理盐水20 μl(对照组),置37℃、5% CO2恒温箱中培养.以流式细胞仪计数CD3、CD4和CD8细胞; 用ELISA法检测NDV组和对照组上清液IL-2、IFN-γ和TNF-β含量.结果配对资料显示,NDV组CD3、CD4明显高于对照组(P＜0.01)和rIL-2组(P＜0.01,P＜0.05),3组CD8无明显差异; NDV组IL-2、IFN-γ和TNF-β明显高于对照组(分别为P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05).结论 NDV对TIL有直接激活作用.     

CD4+T淋巴细胞在IgA肾病中致病作用机制研究

目的探讨CD4~+ T淋巴细胞在IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)中致病作用机制。方法选取2017年8月至2018年8月于复旦大学附属闵行医院肾脏科住院治疗且经首次肾活检证实为IgAN患者作为IgAN组(45例),另外纳入我院体检中心体检健康者作为健康对照组(49例),采集健康对照组和IgAN组患者治疗前后的外周血液样本,分离制备外周血淋巴细胞、单核细胞及血清。采用ELISA检测外周血清CD4~+ T淋巴细胞因子,包括γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、白介素(interleukin,IL)-4、IL-17、IL-21、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)。采用流式细胞仪检测CD4~+ T细胞的分布比例。采用RT-qPCR及Western blot检测JAK/STAT信号通路各信号分子的表达水平。结果 IgAN组血清IL-4、IL-17、TGF-β1、IL-21水平高于健康对照组(P0.05);而IFN-γ水平与健康对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。使用激素治疗1月后,IgAN组外周血清IL-4、IL-17、TGF-β1、IL-21水平均显著低于治疗前(P0.01)。与健康对照组比较,治疗前IgAN组患者Th2及Treg细胞在T细胞中占比显著升高(P0.05),而Th1的占比在两组受试者之中差异无统计学意义(P0.05)。RT-qPCR及Western blot结果表明,治疗前IgAN组JAK1、JAK3、STAT3和STAT6表达水平显著高于正常对照组(P0.05),而STAT5表达水平显著低于正常对照组(P0.05),两组JAK2、TYK2、STAT1和STAT4表达水平比较差异无统计学意义(P0.05)。结论 CD4~+ T细胞亚群失调可能参与IgAN患者的发病机制,与JAK/STAT信号通路表达失衡有关。因此,CD4~+ T细胞因子(IL-4、IL-17、TGF-β1和IL-21)可能成为治疗IgAN的新靶点和监测IgAN病情的无创生物标志物。     

白介素1β在升主动脉瘤和Debakey Ⅰ型胸主动脉夹层中的表达研究

目的 探讨白介素1β( interleukin-1β,IL-1β)在Debakey Ⅰ型胸主动脉夹层(TAD)和升主动脉瘤(ATAA)中的表达情况.方法 TUNEL染色、免疫组织化学染色、Western blot、实时定量PCR分别检测11例TAD,10例ATAA及7例正常主动脉标本的IL-1β、MMP-9、p38和JNK蛋白及中膜细胞凋亡在主动脉中膜中的表达和定位,并分析IL-1β的表达与中膜平滑肌细胞凋亡、MMP-9、p38和JNK蛋白表达的关系.结果 TAD和ATAA组中膜细胞凋亡较对照组高(P＜0.01).IL-1β的表达在正常组、TAD组、TAA组中逐渐升高(P＜0.01).MMP-9在TAD和ATAA组中的表达较对照组明显升高(P＜0.01).TAD组中,IL-1β与MMP-9和p38的表达呈正相关(P ＜0.01);TAA组中,IL-1β和细胞凋亡呈正相关(P＜0.01).结论 IL-1β在Ⅰ型主动脉夹层和升主动脉瘤中高表达,可能通过上调MMP-9的表达和(或)增加中膜细胞凋亡起作用,作用的信号传导通路可能是p38而非JNK信号转导通路.     

血红素加氧酶-1对心肺复苏诱发大鼠脑水肿发生的影响

目的 探讨血红素加氧酶-1(HO-1)对心肺复苏诱发大鼠脑水肿发生的影响.方法 雄性SD大鼠40只,随机分为4组(n=10):假手术组(S组)、心肺复苏组(CAR组)、氯化高铁血红素组(H组)和锡原卟啉组(SnPP组).CAR组、H组和SnPP组进行窒息性心跳骤停后行心肺复苏,H组预先12 h经腹腔注射氯化高铁血红素15 mg/kg,SnPP组预先1 h经腹腔注射锡原卟啉Ⅸ30 μmol/kg.各组于恢复自主循环(ROSC)后1 h和6 h时断头取脑组织,测定脑皮质、海马和脑干含水量,测定HO-1和水通道蛋白4(AQP4)mRNA表达.结果 与S组比较,CAR组和SnPP组皮质和海马含水量增加,海马AQP4 mRNA表达上调,H组HO-1 mRNA表达上调,SnPP组HO-4 mRNA表达下调(P<0.05);与CAR组比较,H组皮质和海马含水量降低,皮质及海马AQP4 mRNA表达下调,HO-1 mRNA表达上调(P<0.05),SnPP组T_2时皮质及海马AQP4 mRNA表达上调,HO-1 mRNA表达下调(P<0.05),各组脑干含水量比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 HO-1活性增高可减轻大鼠心肺复苏早期脑水肿,其机制可能与下调AQP4的表达有关.     

骨髓间质干细胞经静脉移植对大鼠脊髓损伤后TNF-α、IL-1β mRNA表达的影响

目的研究大鼠骨髓间质干细胞(MSCs)经静脉移植对脊髓损伤(SCI)后肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)表达的影响。方法运用改良Allen法制备大鼠脊髓外伤性截瘫模型,假手术组6只,损伤组84只随机分为对照组和rMSCs移植组。对照组和rMSCs移植组、假手术组于损伤后10min经尾静脉分别注射PBS1ml和rMSCs单细胞PBS悬液1ml。移植后3h、6h、12h、24h、3d、7d、14d,应用RT-PCR方法检测损伤大鼠脊髓TNF-α、IL-1βmRNA表达变化情况。结果对照组和rMSCs移植组损伤脊髓TNF-α、IL-1βmRNA表达较假手术组有明显增加(P0.05);rMSCs移植组与对照组比较,TNF-α、IL-1βmRNA表达受到明显抑制(P0.05)。结论 rMSCs静脉移植后能改变脊髓损伤区的微环境,使损伤脊髓局部的TNF-α、IL-1β表达程度降低。这可能是减少脊髓继发性损伤,促进损伤大鼠运动功能恢复的机制之一。