左、右归丸对去卵巢大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的 基于AMPK/mTOR信号通路探讨左、右归丸对去卵巢大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及作用机制.方法 将60只雌性大鼠随机分为六组,其中一组为空白对照(KB组);一组模拟手术过程,灌胃蒸馏水(SHAM组);其余四组进行卵巢切除术,分别灌胃蒸馏水(OVX组)、补佳乐(BJL组)、右归丸(YGW组)和左归丸(ZGW...     

左、右归丸及其拆方对去卵巢骨质疏松模型大鼠的比较研究

目的 观察左、右归丸及其拆方对去卵巢骨质疏松模型大鼠的影响,比较并探讨其对绝经后骨质疏松症的防治作用。方法 将90只大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、补佳乐组、左归丸组、右归丸组、共同药组、滋阴药组、补阳药组,每组 10只。通过去卵巢制备绝经后骨质疏松症大鼠模型,经12周药物治疗,取大鼠3、4、5节腰椎进行双能X线骨密度检测;称取大鼠子宫湿重,计算子宫指数;通过酶联免疫法检测血清碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase. ALP)、骨钙蛋白（Osteocalcin. OC)、 I型前胶原羟基端前肽(Procollagen type I carboxy-terminal propeplide,PICP)表达。结果 与对照组比较,模型组子宫指数、骨密度均有下降,ALP、OC、PICP水平显著升高(P <0. 05);与模型组比较,各治疗组子宫指数、骨密度有所提高,ALP、BGP、PICP 水平有不同程度降低(P <0.05),其中左归丸效果较好。结论 中医补肾方药对去卵巢骨质疏松大鼠具有防治效果,并在一定程度上可能起到抑制骨吸收,促进骨形成的作用;其中以滋阴补肾,填精益髓的代表方剂左归丸作用更加显著。     

右归丸通过PI3K/Akt/mTOR信号通路对膝骨关节炎模型鼠软骨组织保护作用的研究

目的研究右归丸对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型大鼠磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidyl inositol 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)信号通路的影响。方法采用改良Hulth法制备大鼠KOA模型,模型制备成功6周后用右归丸进行干预,灌胃2个月后取材。HE法观察各组大鼠软骨组织病理形态改变并进行Mankin评分,实时荧光定量PCR法检测各组大鼠软骨组织白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)和基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)的表达变化,Western blot法检测各组大鼠软骨组织磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidyl inositol 3-kinase,PI3K)、磷酸化的蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,pAkt)、磷酸化的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian target of rapamycin,pmTOR)和Beclin1的蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠软骨组织Makin评分明显升高,软骨组织IL-1β、MMP-3和MMP-13的基因表达均明显升高,软骨组织PI3K、pAkt和pmTOR的蛋白表达均明显升高(P0. 01);而模型组大鼠软骨组织Beclin1的蛋白表达明显降低(P0. 01);模型组关节软骨边缘严重破坏,软骨细胞排列紊乱。与模型组相比,右归丸组大鼠软骨组织Makin评分明显降低,软骨组织IL-1β、MMP-3和MMP-13的基因表达均明显降低,软骨组织PI3K、pAkt和pmTOR的蛋白表达均明显降低,Beclin1的蛋白表达明显升高(P0. 05或P0. 01),其软骨结构趋于正常,软骨细胞分布偶见不均,关节软骨表面欠光滑。结论右归丸可能是通过抑制IL-1β、MMP-3、MMP-13、PI3K、p Akt、pmTOR的表达和增强Beclin1的表达来达到治疗KOA的目的。     

左归丸防治去卵巢大鼠骨质疏松症的实验研究

目的探讨左归丸对去卵巢所致骨质疏松大鼠的防治作用。方法 手术切除大鼠双侧卵巢建立绝经后骨质疏松大鼠模型,用左归丸(高、中、低剂量)进行灌胃,120 d后,取大鼠左后肢股骨远端1/3做病理切片,光镜下观察骨组织形态学变化,测定骨小梁面积百分比(%Tb.Ar)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁分离度(Tb.Sp);采用双能X线骨密度仪测定右后肢离体股骨近端1/3骨密度(BMD);采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清骨钙素(BGP),用比色法测定血清抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)。结果切除大鼠双侧卵巢后,骨小梁明显紊乱,变细且较稀疏,缺少连接,断端增多,%Tb.Ar、Tb.Th显著降低,Tb.Sp明显升高,BMD下降,血清BGP及TRAP水平显著升高,统计学显示有显著性差异(P0.01);去卵巢大鼠灌服左归丸后,与模型空白组比较,左归丸各剂量组均能不同程度地改善骨小梁变化,增加BMD,降低血清BGP及TRAP,统计学显示有显著性差异(P0.01),各用药组之间比较无显著性差异(P0.05)。结论 左归丸对去卵巢所致绝经后骨质疏松大鼠有一定的防治作用。     

TWIST2通过调控FGF21介导的AMPK/mTOR通路诱导卵巢癌细胞氧化应激和凋亡

目的 探究TWIST2对卵巢癌细胞氧化应激和凋亡的作用及相关机制.方法 收集2018年6月至2019年10月在山东省妇幼保健院进行治疗的30例卵巢癌患者的癌组织和癌旁组织,将pcDNA3.1-TWIST2质粒(TWIST2组)和pcDNA3.1阴性对照质粒(阴性对照组)分别转染卵巢癌细胞(SK-OV-3和HO-8910...     

左、右归丸及其拆方对去卵巢大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的影响

目的研究左、右归丸及其拆方对去卵巢大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow stem cells,BMSCs)PPARγ、LPL、FABP4mRNA的影响。方法分别以空白对照组(CON)、模型组(OVX)、假手术组(SHAM)、左归丸组(ZGW)、右归丸组(YGW)、共同药组(GTY)、滋阴药组(ZYY)、补阳药组(BYY)和补佳乐组(BJL)共9组对BMSCs进行干预,MTT法检测各组BMSCs增殖情况;流式细胞仪鉴定BMSCs;用Q-PCR法检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome Proliferator-Activated Receptorγ,PPARγ),脂蛋白脂肪酶(lipoprotein,LPL),脂肪酸结合蛋白4(fatty acid binding protein 4,FABP4)mRNA的表达。结果左、右归丸及其拆方均可显著下调BMSCs PPARγ、LPL、FABP4mRNA的表达,其中YGW组可显著下调PPARγ、LPL、FABP4的mRNA(P0.05)。结论左、右归丸及其拆方均能抑制BMSCs的成脂分化,且"右归丸"抑制成脂分化的作用优于"左归丸",以及纯阳药及二者的共同药组。     

麻黄碱调控AMPK/NF-κB信号通路改善大鼠膝骨关节炎的实验研究

目的 探讨麻黄碱(Ephedrine)调控腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对大鼠膝骨关节炎(KOA)的影响。方法 建立KOA大鼠模型,将大鼠分为Sham组、KOA组、Ephedrine组(40.0 mg/kg)、Ephedrine(40.0 mg/kg)+Compound C组(0.2 mg/kg),药物分组干预后,分别检测大鼠膝关节宽度与疼痛阈值,番红O-固绿染色观察软骨组织病理变化并进行Mankin评分,ELISA法检测关节液TNF-α、IL-1β、COX-2水平,免疫组化检测软骨组织IL-1β、MMP-13蛋白表达,Western blot检测AMPK/NF-κB通路相关蛋白水平。结果 与Sham组比较,KOA组软骨组织损伤严重,膝关节宽度、Mankin评分、关节液TNF-α、IL-1β、COX-2水平及软骨组织IL-1β、MMP-13、p-NF-κB p65/NF-κB p65水平显著升高,疼痛阈值及软骨组织p-AMPK/AMPK水平显著降低(P<0.05);与KOA组比较,Ephedrine组软骨组织病理损伤减轻,膝关节宽度、Man...     

左归丸通过FNDC5/Wnt3a/β-catenin通路治疗绝经后骨质疏松症的机制研究

目的 对左归丸治疗绝经后骨质疏松症（postmenopausal osteoporosis,PMOP）的机制进行研究。方法 通过体外实验制备左归丸低、中、高剂量对应的含药血清,对培养的MC3T3-E1进行药物干预,分为空白对照组、成骨诱导组（OGI组）、OGI+左归丸低、中、高浓度组;对培养的MC3T3-E1细胞进行FNDC5转染后成骨诱导,分为空白对照组、OGI+转染组、OGI+转染+左归丸低、中、高浓度组。对上述细胞培养液进行ALP活力检测及染色。在体内实验中将野生型小鼠随机分为野生型对照组、野生型卵巢切除（OVX）组、野生型治疗组,将FNDC5基因敲除(KO)小鼠随机分为KO对照组、KO-OVX组、KO治疗组,采用OVX方式造模,给予治疗组小鼠灌胃左归丸12周。12周灌胃结束后检测各组股骨骨密度（bone mineral density, BMD),HE染色股骨切片,ELISA检测血清E2、PINP、Irisin含量,实时荧光定量PCR检测FNDC5、Runx2、OPN、OCN、OSX mRNA表达,Western Blot检测FNDC5、Wnt3a、β-catenin蛋白表达。结果 左归丸含药血清增加了MC3T3-E1的ALP表达,FNDC5转染后ALP表达下降;左归丸可以显著改善野生型小鼠OVX术后导致的BMD降低及股骨骨小梁损害,缓解E2、PINP、Irisin表达降低,而对于KO小鼠无显著差异;左归丸抑制了OPN的表达,提高了Runx2、OSX、OCN的mRNA表达。对比KO-OVX组,KO治疗组的OPN、Runx2、OSX、OCN等均没有明显差异。左归丸可以上调Wnt3a和β-catenin的表达,当FNDC5被敲除后这种上调效果被显著抑制。结论 左归丸可能通过FNDC5/Wnt3a/β-catenin通路治疗PMOP。     

右归丸对骨性关节炎模型大鼠TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的分析右归丸对骨性关节炎大鼠TGF-β1/Smads信号通路的影响。方法将64只成年SD大鼠利用随机数字表法分为4组,每组15只。正常组不做任何处理;模型组、右归丸组、抑制剂组采用经典的Hulth法建立膝骨性关节炎模型,造模6周后,右归丸组灌服20 g/(kg·d)的右归丸;抑制剂组腹腔注射100μg/(kg·d)的TGF-β1/Smads信号通路抑制剂SB431542,同时灌服20 g/(kg·d)的右归丸;模型组灌服等剂量的生理盐水,连续给药8周。末次给药24 h后取关节软骨组织,制作病理切片观察软骨病理改变,采用ELISA法检测软骨组织中肿瘤坏死因子α与白细胞介素1β水平,免疫组化染色观察软骨组织中Ⅱ型胶原蛋白与基质金属蛋白酶13(MMP-13)阳性表达,采用RT-PCR法检测软骨组织中TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达,采用Western blot检测软骨组织中TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达。结果与模型组比较,抑制剂组软骨组织Mankin评分降低(P0.05),软骨组织中肿瘤坏死因子α与白细胞介素1β水平降低(P0.05),Ⅱ型胶原蛋白阳性表达升高(P0.05),MMP-13阳性表达降低(P0.05),TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达升高(P0.05),TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达升高(P0.05)。与抑制剂组比较,右归丸组软骨组织Mankin评分降低(P0.05),软骨组织中肿瘤坏死因子α与白细胞介素1β水平降低(P0.05),Ⅱ型胶原蛋白阳性表达升高(P0.05),MMP-13阳性表达降低(P0.05),TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达升高(P0.05),TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达升高(P0.05)。结论右归丸对骨性关节炎大鼠软骨组织具有保护作用,其作用机制可能与TGF-β1/Smads信号通路有关。     

葛根素通过NF-кB信号通路调节破骨细胞的分化

目的探索葛根素抑制破骨细胞分化的实验研究。方法 RAW264.7细胞经sRANKL+M-CSF诱导7 d后向破骨细胞分化;WST-1检测不同浓度的葛根素对破骨细胞增殖活性的影响;TRAP染色检测葛根素对破骨细胞分化的影响;Osteoassay surface Mltiple well plate检测破骨细胞吸收活性;免疫荧光检测葛根素对NF-кB通路核心蛋白p65细胞核内转移的影响;Western blot检测葛根素对p65表达的影响。结果葛根素(10~(-8)mol/L)作用3 h后破骨细胞的增殖活性明显抑制,葛根素抑制破骨细胞的分化和吸收活性,免疫荧光检测显示葛根素抑制p65的细胞核内转位及p65的磷酸化。结论葛根素通过NF-кB信号通路抑制破骨细胞的分化。     

消肿止痛合剂对大鼠膝骨性关节炎软骨中AMPK/mTOR信号通路影响的实验研究

目的观察消肿止痛合剂对大鼠膝骨性关节炎软骨中LC3、Beclin1、caspase-9、单磷酸腺苷活化蛋白激酶(p-AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达的影响,探讨消肿止痛合剂干预膝骨性关节炎(knee osteoarthritis,KOA)形成的作用机制。方法将80只Wistar大鼠随机分为4组:观察组(消肿止痛合剂组)、对照组(硫酸氨基葡萄糖片组)、模型组、假手术组,每组20只,除假手术外,其余3组通过改良Hulth法行膝骨关节炎造模。药物连续干预8周后,取各组大鼠膝关节软骨,采用ELISA方法检测血清中白细胞介素-6 (IL-6)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、环氧化酶-2(COX-2)水平,实时荧光定量聚合酶链式反应检测各组软骨中LC3、Beclin1、caspase-9 mRNA的表达情况,蛋白质印迹法(Western blot)检测各组软骨细胞中pAMPK、mTOR蛋白的表达。结果与假手术组比较,模型组IL-6、MMP-3、COX-2水平明显升高,下调LC3、Beclin1、p-AMPK的表达量,上调caspase-9、mTOR的表达量,差异有统计学意义(P0. 05);与模型组比较,观察组、对照组降低IL-6、MMP-3、COX-2水平,显著上调LC3、Beclin1、p-AMPK的表达量,下调caspase-9、mTOR的表达量,差异有统计学意义(P0. 05);其中观察组优于对照组,差异有统计学意义(P0. 05)。结论消肿止痛合剂对KOA关节软骨损伤的保护可能与AMPK/mTOR信号通路相关。     

Demonstration of the Optic Pathway in Sellar/Juxtasellar Tumours with Visual Disturbance on MR Imaging

Summary  Objective. To prospectively compare the demonstration of the intracranial optic pathway in patients with sellar/juxtasellar tumours and with clinical evidence of visual disturbance using either spoiled gradient recalled acquisition in steady state (SPGR) or conventional spin echo (CSE) T1-weighted imaging.  Materials and Methods. We studied 108 patients with sellar/juxtasellar tumours presenting visual disturbance. Visualization of the optic pathway (nerves, chiasm, tracts) was compared between CSE T1-weighted coronal image and SPGR coronal image. In 18 patients, SPGR imaging was performed before and after administration of Gd-DTPA and visualization of the optic pathway was compared.  Results. On CSE T1-weighted coronal images of 108 patients with visual disturbance, the rates for visualization of the optic nerves, chiasms and tracts were 50%, 77.8% and 89.8% respectively. In contrast, on SPGR coronal image the rates were 80.6%, 96.3% and 92.6% respectively. The rates of visualization of the optic pathway were greater in non-enhanced that in those with enhancement. The rates of visualization in patients with recurrent tumours were less than those in patients with primary tumours. The rate of visualization of optic nerves in patients with meningioma was less than in patients with pituitary adenoma, craniopharyngioma or Rathke cleft cyst.  Conclusion. The rate of visualization of optic pathway structures on SPGR imaging (without enhancement) is greater than that on CSE T1-weighted imaging. It is important to understand the accurate position of the optic pathways with using new MR modality especially in surgical planning for lesions around the sella turcica.