硫化氢对幽门螺杆菌感染GES-I细胞CSE，NF-KB及lL-8mRNA表达的影响

目的：观察硫化氢（hydrogen sulfide,H2S）对幽门螺杆菌（Hpylori）感染的GES．1细胞CSE,NF—gB及IL．8mRNA表达及其形态学的影响,探讨其对Hpylori所致胃黏膜细胞炎症的作用及机制。方法：将GES．1细胞培养24hA分为对照组（不加Hpylori及NariS）、Hpylori组、NaHS组（又分为4个亚组,分别加入50,100,200或400umol／LNariS）和Hpylori＋NariS组（又分为4个亚组,分别加入Hpylori与50,100,200或400~tmol／LNariS）,每组分别培养3,6,及12h,用RT-PCR法检测各组GES-1细胞CSE,NF-kB及IL-8mRNA表达,并分析其相关性。结果：Hpylori组CSE,NF—gB及IL-8mRNA表达均较对照组增加／1（P〈0．05）,200umol／LNariS组和4008mol／LNariS组CSE表达较对照组降低（p〈o．05）;而NariS各组NF,KB和IL-8mRNA表达与对照组比较差异无统计学意义（P〉O．05）;NariS各组、Hpylori＋200um01／LNaHS组及Hpylori＋400umol／LNaris组CSE,NF—KB及IL-8m对弧表达均较Hpylori组降低（P〈0．05）;Hpylori组、Hpylori＋200umol／LNariS组及Hpylori＋4008mol／LNaHS组CSE,NF—KB及IL．8mRN．~达之间均呈正相关（P〈O．05）。结论：Hpylori诱导GES-1细胞NF．gB和IL-8mRNA表达,并上调CSEmRNA表达;200和400[tmol／LNaHS能抑NH．pylori感染诱导的GES—1细胞NF．KB和IL-8mRN朦达,改善Hpylori感染所致的细胞形态学变化,对细胞起保护作用。     

硫氢化钠对高浓度葡萄糖环境下原代人脐静脉内皮细胞的影响

目的 观察硫氢化钠(NaHS,外源性的H2S供体)对高浓度葡萄糖环境下原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的作用。方法 以0.125%胰酶和0.01%EDTA灌注法获得HUVECs,分别用5.5mmol/L葡萄糖、25mmol/L葡萄糖、25mmol/L葡萄糖+50μmol/L NaHS及50μmol/L NaHS处理72h,采用MTT法检测各组细胞的存活率,Western blot法检测H2S生成酶胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-Iyase,CSE)的变化。结果 MTT检测表明,25mmol/L葡萄糖组的HUVECs存活率比5.5mmol/L葡萄糖组下降28.37%(P<0.05),而50μmol/L NaHS和25mmol/L葡萄糖共同处理组的细胞存活率比25mmol/L葡萄糖组上升30.3%(P<0.05),50μmol/L NaHS组与5.5mmol/L葡萄糖组无明显差异(P>0.05)。与5.5mmol/L葡萄糖组相比,以25mmol/L葡萄糖处理72h后能使CSE蛋白的表达下降(P<0.05),而25mmol/L葡萄糖+50μmol/L NaHS 则能改善这种损害作用(P<0.05),CSE蛋白的表达比25mmol/L葡萄糖组增强。结论 高浓度葡萄糖降低人原代脐静脉内皮细胞的生长和存活率,减少CSE蛋白的表达,而NaHS能够减轻高浓度葡萄糖对CSE的作用。     

精胺对辐射所致氧化损伤H9c2心肌细胞的影响研究

背景　恶性肿瘤的发病率不断上升,放疗所致的正常器官的辐射损伤难以避免,精胺是具有极高生物活性的一种多胺类物质,研究证明外源性精胺具有一定的活性氧清除剂作用,而心脏作为常见的辐射损伤器官,外源性精胺对辐射损伤的心肌细胞的影响研究较少。目的　探讨精胺对辐射所致氧化损伤H9c2心肌细胞的影响。方法　2018年12月至2020年12月,取对数生长期的H9c2心肌细胞加入精胺,分为100 μmol/L组、200 μmol/L组、400 μmol/L组,空白对照组为加等量不含药物的培养液,采用CCK8溶液计算各组细胞培养12、24、48 h的存活率。根据前期筛选结果将体外培养的H9c2心肌细胞分为空白对照组（单纯DMEM培养基）、单纯辐射组（单纯X线照射）、辐射+100 μmol/L精胺组及辐射+200 μmol/L精胺组;各组用医用直线加速器进行照射,X线照射后继续培养0、12、24、48 h,计算细胞凋亡率。使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,荧光显微镜拍摄各组细胞照射后状态,丙二醛（MDA）试剂盒检测各组细胞MDA水平,总超氧化物歧化酶（T-SOD）试剂盒检测各组细胞的SOD活性。结果　100 μmol/L组、200 μmol/L组、400 μmol/L组24 h细胞存活率高于12、48 h（P<0.05）。处理时间12 h：空白对照组细胞存活率高于100 μmol/L组、200 μmol/L组及400 μmol/L组（P<0.05）;100 μmol/L组、200 μmol/L组细胞存活率高于400 μmol/L组（P<0.05）。处理时间24 h：空白对照组细胞存活率高于100 μmol/L组、400 μmol/L组（P<0.05）;100 μmol/L组细胞存活率低于200 μmol/L组,高于400 μmol/L组（P<0.05）;200 μmol/L细胞存活率高于400 μmol/L组（P<0.05）。处理时间48 h：空白对照组细胞存活率高于100 μmol/L组、200 μmol/L组及400 μmol/L组（P<0.05）;100 μmol/L组细胞存活率低于200 μmol/L组,高于400 μmol/L组（P<0.05）;200 μmol/L组细胞存活率高于400 μmol/L组（P<0.05）。处理时间0 h：辐射+200 μmol/L精胺组、辐射+100 μmol/L精胺组细胞凋亡率高于空白对照组（P<0.05）;辐射+200 μmol/L精胺组、辐射+100 μmol/L精胺组细胞凋亡率高于单纯辐射组（P<0.05）;辐射+200 μmol/L精胺组细胞凋亡率低于辐射+100 μmol/L精胺组（P<0.05）。处理时间为12、24、48 h细胞凋亡情况同处理时间为0 h。空白对照组0 h细胞凋亡率低于12、48 h（P<0.05）,12 h细胞凋亡率低于24 h（P<0.05）,24 h细胞凋亡率低于48 h（P<0.05）。辐射+200 μmol/L精胺组24 h细胞凋亡率低于0 h、12 h和48 h（P<0.05）,12 h细胞凋亡率低于0、48 h（P<0.05）,24 h细胞凋亡率低于48 h（P<0.05）。辐射+100 μmol/L精胺组24 h细胞凋亡率低于0、48 h（P<0.05）,12 h细胞凋亡率低于0、48 h（P<0.05）。单纯辐射组0 h细胞凋亡率低于12、24、48 h（P<0.05）;12 h细胞凋亡率低于24、48 h（P<0.05）;24 h细胞凋亡率比48 h低（P<0.05）。处理时间为12 h时：空白对照组与辐射+200 μmol/L精胺组、辐射+100 μmol/L精胺组、单纯辐射组SOD活性、MDA水平比较,差异有统计学意义（P<0.05）;单纯辐射组比辐射+100 μmol/L精胺组细胞及辐射+200 μmol/L精胺组细胞SOD活性高,比辐射+100 μmol/L精胺组细胞MDA水平低（P<0.05）;辐射+100 μmol/L精胺组比辐射+200 μmol/L精胺组细胞SOD活性低、MDA水平高（P<0.05）。处理时间为24 h时：空白对照组与辐射+200 μmol/L精胺组、辐射+100 μmol/L精胺组、单纯辐射组SOD活性、MDA水平比较,差异有统计学意义（P<0.05）;单纯辐射组比辐射+100 μmol/L精胺组及辐射+200 μmol/L精胺组细胞SOD活性低,比辐射+200 μmol/L精胺组细胞MDA水平高（P<0.05）;辐射+100 μmol/L精胺组比辐射+200 μmol/L精胺组细胞SOD活性低、MDA水平高（P<0.05）。处理时间为48 h时：空白对照组与辐射+200 μmol/L精胺组、辐射+100 μmol/L精胺组、单纯辐射组SOD活性、MDA水平比较,差异有统计学意义（P<0.05）;单纯辐射组比辐射+200 μmol/L精胺组细胞SOD活性低、MDA水平高（P<0.05）;辐射+100 μmol/L精胺组比辐射+200 μmol/L精胺组细胞SOD活性低、MDA水平高（P<0.05）。给予X线照射24 h后,空白对照组H9c2心肌细胞形态呈长梭形,细胞核形态完整,染色均匀;辐射+200 μmol/L精胺组、辐射+100 μmol/L精胺组、单纯辐射组的H9c2心肌细胞出现不同程度的变化,如细胞形态变圆、细胞核碎裂、染色不均匀等,其中200 μmol/L精胺组的细胞形态最接近空白对照组细胞,变化程度较轻。结论　精胺对辐射导致的心肌细胞的氧化损伤具有保护作用,且其保护作用与浓度及时间有关,在一定浓度范围内高浓度精胺的保护能力更强,各浓度精胺处理24 h时的细胞保护能力最强。     

硫化氢对氧应激下大鼠肝星状细胞的收缩和黏附作用

目的 探讨硫化氢(H2S)含量的变化对氧应激下大鼠肝星状细胞(HSC)收缩和黏附作用影响.方法 将HSC分为空白组(B组,HSC-T6);对照组(C组,HSC-T6+ 500μ mol/L FeN-TA);NaHS组(N组,N1:HSC-T6+500μmol/L FeNTA+100μmol/L NaHS;N2:HSC-T6+500μmol/L FeNTA+200μmol/L NaHS;N3:HSC-T6 +500μmol/L FeNTA+ 300μ mol/LNaHS;N4:HSC-T6 500μmol/L FeNTA+ 400μmol/LNaHS);GLBN组(G组,G1:HSC-T6+ 500μmol/L FeNTA+ 200 μmol/LGLBN;G2:HSC-T6+ 500μmol/L FeNTA+ 400μmol/LGLBN).应用500 μmol/L次氮基三乙酸铁(FeNTA)制备氧应激模型.采用聚硅酮膜法直观检测氧应激模型大鼠肝星状细胞收缩情况、甲苯胺兰染色法测定细胞黏附率、Boyden Chamber小室法测定HSC跨膜迁移数量.给予不同浓度的外源性H2S供体NaHS和KATP通道阻断剂格列本脲(GLBN),在不同刺激条件下,观察上述指标.结果 HSC被NaHS处理后可见聚硅酮膜由于细胞收缩而引起明显皱纹,能够明显促进HSC收缩,而且随H2S浓度的升高和作用时间的延长,HSC收缩程度增强,这些作用能够被格列本脲阻止.加入200、400 μmol/L H2S的HSC黏附抑制率分别为62.4％、81.7％,与对照组相比有显著差异;100、200、300、400 μmol/L 4种不同浓度NaHS的HSC细胞迁移数量为6.43×103、8.85×103、11.34×103、14.86×103,与对照组(2.52×103)比较存在显著差异.结论 H2S在氧化应激下能促进HSC的收缩.H2S通过抑制细胞黏附、增加HSC跨膜迁移数量发挥细胞保护作用.     

硫化氢对离体大鼠胰腺腺泡细胞炎症因子表达的影响

目的 以雨蛙素刺激的大鼠胰腺腺泡细胞为体外急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)模型,研究硫化氢(H2S)对AP时胰腺腺泡细胞炎症因子表达的影响及机制.方法 分离25只SD大鼠胰腺腺泡细胞,用雨蛙素(10-7 mol/L)诱导体外AP模型,用不同浓度NaHS(5、10、20、40 μmol/L)及不同时间(10、30、60 min) NaHS(5μmol/L)处理,Real-time PCR检测炎症因子mRNA水平.再用CSE抑制剂PAG处理,Real-time PCR检测炎症因子mRNA水平及CSE mRNA水平.进一步用NF-κB抑制剂BAY 11-7082处理后,Real-time PCR检测炎症因子mRNA水平,Western blot检测浆内IκBα及核内NF-κBp65的蛋白表达.结果 当5μmol/L NaHS预处理60 min时,TNF-α水平(14.70±1.10)、IL-1β水平(14.42±0.83)显著低于雨蛙素组(P＜0.05),IL-10水平(12.20 ±0.55)显著高于雨蛙素组(P＜0.05);CSE抑制剂PAG预处理60 min后,TNF-α水平(37.38 ±0.89)、IL-1β水平(24.45 ±0.76)显著高于雨蛙素组(P＜0.05),CSE水平(0.14±0.03)、IL-10水平(0.14 ±0.03)显著低于雨蛙素组(P＜0.05);NF-κB抑制剂BAY 11-7082预处理30 min,TNF-α水平(9.17±0.96)、IL-1β水平(2.90 ±0.17)显著低于雨蛙素组(P＜0.05),IL-10水平(40.00±1.00)显著高于雨蛙素组(P＜0.05),并且胞浆内IκBα(0.90 ±0.01)的降解及细胞核内NF-κBp65 (0.70 ±0.04)的蛋白表达明显低于雨蛙素组(P＜0.05).结论 小剂量H2S供体NaHS在雨蛙素孵育的胰腺腺泡细胞中具有一定抗炎作用,且该作用是通过抑制NF-κB通路从而抑制腺泡细胞表达促炎因子实现的.     

洛伐他汀对TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞MCP-1和IL-10表达的影响

目的：观察洛伐他汀(LVT)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激人脐静脉内皮细胞(HUVECs)后单核细胞趋化蛋白-1 (MCP-1)和白细胞介素-10 (IL-10)表达的影响,探讨其抗动脉粥样硬化(AS)的可能机制。方法：体外常规培养HUVECs,分为对照组,用含10% FBS的RPMI 1640培养液培养;TNF-α处理组,用含10% FBS的RPMI 1640培养液+TNF-α (20 μg/L) 处理;应用活性氧检测试剂盒检测活性氧含量;LVT干预组,用含10% FBS的 RPMI 1640 培养液+TNF-α (20 μg/L)+LVT (10 μmol/L) 处理。实时定量RT-PCR方法检测各组细胞MCP-1和IL-10 mRNA的表达;Western blotting方法检测各组HUVECs内MCP-1、IL-10和NF-κB蛋白表达。结果：与对照组相比较,TNF-α处理组ROS含量明显增高 (P<0.05);与TNF-α处理组比较,LVT干预组ROS含量明显降低(P<0.05);与对照组比较,TNF-α处理组MCP-1和NF-κB mRNA及蛋白表达水平明显增高(P<0.05),而IL-10 mRNA和蛋白的表达水平明显降低(P<0.05);与TNF-α处理组比较,LVT干预组细胞MCP-1和NF-κB mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05),而IL-10 mRNA和蛋白表达水平明显增高(P<0.05)。结论：LVT抑制HUVECs中TNF-α诱导的MCP-1 mRNA和蛋白上调,增强IL-10蛋白表达。LVT可能通过NF-κB途径对抗炎症反应从而防止AS的形成。
     

硫化氢后处理对缺氧/复氧损伤心肌的保护及其机制

目的:探讨硫化氢(H2S)后处理对H9C2细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制。方法:细胞随机分为:正常对照组(con)、缺氧/复氧组(H/R)、NaHS后处理组(H/R+NaHS)、CSE阻断剂干预组(H/R+PAG)。倒置显微镜、流式细胞仪检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR检测胱硫醚-!-裂解酶(CSE)mRNA表达;Western blotting检测p50ATF6、GRP78蛋白表达。结果:H/R组CSE mRNA表达较对照组明显降低(P<0.01);H/R+NaHS组CSE mRNA表达较H/R组明显升高(P<0.01)。H/R组p50ATF6、GRP78表达较对照组明显升高(P<0.01);NaHS后处理后p50ATF6和GRP78表达较H/R组升高(P<0.05);给予PAG后,p50ATF6、GRP78表达较H/R组降低(P<0.01)。结论:H2S后处理对H9C2细胞缺氧/复氧损伤具有保护作用,其机制可能与H2S可活化ATF6,上调GRP78表达,降低内质网应激有关。     

雷帕霉素对莱菔硫烷诱导人结肠癌细胞UGT1A同工酶及CYP3A4表达的调控

目的 以人结肠癌Caco-2细胞为模型,观察雷帕霉素 (Rapa) 对莱菔硫烷 (SFN) 诱导葡萄糖醛酸转移酶(UGT) 1A1、UGT1A8、 UGT1A10及细胞色素P450 (CYP) 3A4的调控,探讨Rapa对SFN化学预防效应的影响。方法 实验分为对照组、10nmol/L Rapa组、25μmol/L SFN组和25μmol/L SFN+10nmol/L Rapa组。透射电镜观察细胞超微结构,Western blotting法测定微管相关蛋白1轻链3 (LC3) 和核因子E2 P45相关因子2 (Nrf2) 的表达,实时荧光定量PCR法测定UGT1A1、UGT1A8、UGT1A10及CYP3A4 mRNA的表达,免疫荧光法观察Nrf2的核内转位。结果 透射电镜观察到10nmol/L Rapa组、25μmol/L SFN组和25μmol/L SFN+10nmol/L Rapa组细胞中自噬体及自噬溶酶体的形成;与对照组相比,25μmol/L SFN组、25μmol/L SFN+10nmol/L Rapa组可诱导LC3-II蛋白及UGT1A1、UGT1A8、UGT1A10 mRNA的表达增加,诱导Nrf2蛋白的表达及核内转位增强,且25μmol/L SFN+10nmol/L Rapa组的作用更显著;而10nmol/L Rapa组、25μmol/L SFN组和25μmol/L SFN+10nmol/L Rapa组中,CYP3A4 mRNA的表达均受到抑制。结论 Rapa可协同增强SFN对Caco-2细胞自噬效应的诱导;Rapa可能通过上调Nrf2信号通路,使SFN诱导 UGT1A1、UGT1A8和UGT1A10表达增加,进而增强SFN的化学预防效应,同时未影响SFN对CYP3A4转录抑制效应。     

软骨中硫化氢含量及其对白介素1β诱导的软骨细胞基质金属蛋白酶13表达的抑制作用

目的：研究关节液及关节软骨中硫化氢（hydrogen sulfide,H2S）及其合成酶的含量和变化,以及H2S对白介素1β（interlukin-1β,IL-1β）诱导的软骨细胞人基质金属蛋白酶-13（matrix metalloproteinase 13,MMP-13）表达的影响。方法：收集在北京大学第一医院行膝关节手术（关节镜手术或膝关节置换术）患者的关节液及废弃的关节软骨,用亚甲基蓝法检测关节液H2S的含量;从废弃的关节软骨中分离出相对正常的软骨细胞,用H2S分子探针方法检测软骨细胞中的内源性H2S,用免疫细胞化学方法检测软骨细胞中H2S合成酶胱硫醚-β-合成酶（cystathionine beta-synthase,CBS）、胱硫醚-γ-裂解酶（cystathionine gamma-lyase,CSE）、巯基丙酮酸硫转移酶（3-mercaptopyruvate sulfurtransferase,MPST）;用Western blot法检测H2S合成酶CBS、CSE、MPST在不同退变程度的软骨组织中的含量。培养相对正常的人软骨细胞至第三代,分为4组：（1）对照组：不加任何药物;（2）IL-β组：单加5 μg/L的IL-1β;（3）IL-1β+H2S组：提前0.5 h加200 μmol/L的NaHS,再加5 μg/L的IL-1β;（4）H2S组：单加200 μmol/L的NaHS。Western blot法检测各组细胞MMP-13蛋白、总核因子κB p65（nuclear factor κB p65,NF-κB p65）及磷酸化NF-κB p65蛋白的含量,Real-time PCR检测各组细胞MMP-13基因的转录情况。结果： 退变膝关节的关节液中H2S含量为(14.3±3.3) μmol/L,Outerbridge分级3级软骨组织中CSE表达量显著高于Outerbridge分级1级软骨组织中的表达量（1.67±0.09 vs. 1.26±0.11,P＜0.01）,而CBS与MPST的表达量差异无统计学意义（P＞0.05）。IL-1β组MMP-13的表达较正常对照组明显升高,且差异具有统计学意义（1.87±0.67 vs. 0.22±0.10,P＜0.05）, IL-1β+H2S组MMP-13的表达较IL-1β组明显降低,且差异具有统计学意义（0.55±0.11 vs. 1.87±0.67,P＜0.05）,H2S组MMP-13的表达较正常对照组差异无统计学意义。 Real-time PCR方法测量了药物干预实验中各组细胞MMP-13基因转录情况,结果显示IL-1β组MMP-13基因转录较正常对照组明显升高,且差异具有统计学意义（31.40±0.31 vs. 1.00±0.00,P＜0.05）, IL-1β+H2S组MMP-13基因转录较IL-1β组明显降低,且差异具有统计学意义（24.41±1.28 vs. 31.40±0.31,P＜0.05）, H2S组MMP-13基因转录较正常对照组无显著性变化。IL-1β组总p65含量较正常对照组明显升高,且差异具有统计学意义（2.13±0.08 vs. 0.73±0.08,P＜0.05）, IL-1β+H2S组总p65含量较IL-1β组明显降低,且差异具有统计学意义（1.24±0.13 vs. 2.13±0.08,P＜0.05）, H2S组总p65含量较正常对照组无显著性变化;IL-1β组磷酸化p65含量较正常对照组明显升高,且差异具有统计学意义（1.30±0.13 vs. 0.19±0.04,P＜0.05）, IL-1β+H2S组磷酸化p65含量较IL-1β组明显降低,且差异具有统计学意义（0.92±0.26 vs. 1.30±0.13,P＜0.05）,H2S组磷酸化p65含量较正常对照组无显著性变化。结论： H2S参与了软骨退变,起到部分抑制细胞外基质降解酶MMP-13的作用,从而实现对软骨细胞外基质的保护。     

幽门螺杆菌外膜蛋白cagL基因的克隆、表达及其对IL-8 mRNA表达的影响

目的:克隆表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H.pylori)NCTC11637菌株cagL基因,并探讨其对IL-8 mRNA表达的影响.方法:设计cagL引物,应用PCR扩增目的基因片段,TA克隆后测序分析, 用信息学软件分析其物理化学特性,并构建表达载体cagL-PET28a(+)转化E.coli BL-21(DE3),IPTG诱导表达, 镍亲和层析纯化,SDS- PAGE及蛋白质印迹鉴定表达蛋白.纯化蛋白与细胞GES-1共培养,提取细胞总RNA,RT-PCR检测细胞IL-8mRNA表达.结果:测序分析表明cagL编码成熟肽的碱基序列为654 bp,编码217个氨基酸,与基因库公布的其他H.pylori菌株的基因序列同源性为96%～98%,氨基酸同源性为 97%～99%,软件预测显示有多个明显的具有抗原活性的结构域;表达蛋白的相对分子质量约为32 000,蛋白质印迹检测融合蛋白具有良好的抗原活性;重组蛋白作用于GES-1细胞后,可诱导细胞因子 IL-8 在 mRNA 水平上的表达.结论:CagL蛋白可刺激GES-1细胞IL-8 mRNA的表达.     

幽门螺杆菌及其相关细胞因子对胃上皮细胞凋亡的调控及相关机制

目的研究幽门螺杆菌（Hp）及其相关细胞因子对胃上皮细胞凋亡的影响,以探讨Hp的致病机理。方法以人胃永生化上皮细胞株（GES-）和人胃癌细胞株（AGS）作为研究对象。流式细胞术检测Hp毒力菌株（NCTC11637）单独及分别联合Hp相关细胞因子[白细胞介素（IL）-1β、IL-8及IL-10]对两种细胞系凋亡的影响;检测IL-1β、IL-8及IL-10对外源性Fas配体（FasL）诱导的两种细胞系凋亡的影响。逆转录-聚合酶链反应检测Hp及其相关细胞因子（IL-1β、IL-8及IL-10）对两种细胞系FasmRNA基础表达水平的影响。结果（1）Hp能诱导GES-1和AGS细胞凋亡增加113．0％和47．0％（均P〈0．05）;IL-1β、IL-10能抑制Hp诱导的GES-1（29．6％、25．8％）和AGS（19．7％、21．1％）细胞凋亡（均P〈0．05）;IL-8能增强Hp诱导的GES-1细胞凋亡（19．9％,P〈0．05）。（2）Hp能上调GES-1和AGS细胞FasmRNA基础表达水平（89．0％和36．0％,P〈0．05）;IL-1β、IL-10对两种细胞FasmRNA基础表达无显著影响（P〉0．05）;IL-8能上调GES-1（33．0％）细胞FasmRNA基础表达（P〈0．05）。（3）IL-1β、IL-10能抑制FasL诱导的GES-1（30．3％、32．5％）和AGS（44．2％、51．5％）细胞凋亡（P〈0．05）;IL-8能增强FasL诱导的GES。1细胞凋亡（100％,P〈0．05）。结论Hp可通过上调Fas受体表达直接介导胃上皮细胞凋亡。Hp相关细胞因子IL-8可能通过上调Fas受体表达来增强Hp诱导的胃上皮细胞凋亡;IL—1β和IL-10可能通过其他机制来抑制Hp诱导的胃上皮细胞凋亡。     

CX3CR1参与NF-κB在脊髓水平调控大鼠炎性痛的研究

目的：观察鞘内注射核因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC) 对单关节炎（monoarthritis,MA）模型大鼠痛阈值和脊髓中CX3C趋化因子受体-1（CX3C chemokine receptor 1,CX3CR1)表达的影响。方法：48只成年雄性Sprague-Dawley大鼠鞘内置管成功后,随机分为4组,即sham组（假手术组）、MA组（单关节炎组）、PDTC预处理组及PDTC后处理组,每组大鼠均为12只。鞘内置管5 d后制作MA模型。Sham组：左侧踝关节腔内注射50 μL生理盐水,鞘内注射10 μL生理盐水;MA组：左侧踝关节腔内注射50 μL完全弗氏佐剂（complete Freund’s adjuvant,CFA）,鞘内注射10 μL生理盐水;PDTC预处理组：鞘内注射10 μL PDTC (100 μmol/L),30 min后左侧踝关节腔内注射50 μL CFA;PDTC后处理组：左侧踝关节腔内注射50 μL CFA,30 min后鞘内注射10 μL PDTC (100 μmol/L)。于术前及术后不同时间点测定痛阈值,用免疫组织化学法观察L5脊髓节段小胶质细胞的表达情况,并在鞘内注射后第1,3,5,7天取L4-L5脊髓膨大节段检测NF-κB mRNA和CX3CR1 mRNA的表达。结果：与MA组相比,sham组、PDTC预处理组及PDTC后处理组的大鼠同侧后肢各时间点痛阈值明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与MA组相比,PDTC预处理组及PDTC后处理组大鼠的L5脊髓节段的小胶质细胞数量明显减少,脊髓中CX3CR1 mRNA和NF-κB mRNA的表达均明显减少,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论：鞘内注射NF-κB抑制剂PDTC可以缓解CFA所致MA模型大鼠的痛觉异常。其机制可能与NF-κB信号通路通过调节CX3CR1的表达而参与炎性痛的发生、发展有关。     

载脂蛋白嵌合模拟肽通过NF-κB途径抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞炎症反应

目的：探讨载脂蛋白嵌合模拟肽Ac-hE-18A-NH2对氧化型低密度脂蛋白(oxidized LDL,ox-LDL)刺激下巨噬细
胞肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达的影响及其作用机制。方法：Ox-LDL刺激RAW264.7巨噬细胞,
给予不同浓度的模拟肽Ac-hE-18A-NH2(1~100 μg/mL)干预,收集细胞,测定巨噬细胞TNF-α的分泌和mRNA表达水平。
Western印迹检测ATP结合盒转运蛋白A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)及P-IκB蛋白浓度。EMSA检测核因
子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)活性。结果：Ox-LDL刺激使RAW264.7巨噬细胞TNF-α 分泌和mRNA表达明显增强,细
胞内胆固醇蓄积,促进IκB磷酸化,并激活NF-κB。Ac-hE-18A-NH2浓度依赖性地降低TNF-α 分泌及mRNA表达,上调
ABCA1 mRNA和蛋白的表达,减少细胞内胆固醇含量,抑制NF-κB活化,并抑制IκB磷酸化。相同的实验条件下及作
用浓度,D-4F对于TNF-α 分泌的抑制作用不如Ac-hE-18A-NH2。结论：Ac-hE-18A-NH2能抑制ox-LDL诱导的RAW264.7
巨噬细胞TNF-α分泌和mRNA表达,IκB/NF-κB-TNF-α信号通路是其中作用途径之一。Ac-hE-18A-NH2的抗炎作用优于
apoA-I模拟肽D-4F。     

硫化氢对高肺血流性肺动脉高压大鼠血管炎症反应的调节作用

目的 探讨硫化氢(H2S)对高肺血流性肺动脉高压大鼠血管炎症反应的调节作用.方法 44只雄性SD大鼠,随机分为4周对照组(7只)、4周分流组(7只)、4周分流+炔丙基甘氨酸(PPG)组(8只)、11周对照组(7只)、11周分流组(7只)及11周分流+硫氢化钠(NaHS)组(8只).采用右心导管测定肺动脉平均压(mPAP),应用免疫组织化学方法检测肺动脉内皮细胞炎症分子细胞间黏附分子1(ICAM-1)、核因子-кB信号转导通路关键分子核因子-кB p65和核因子-кB抑制蛋白(IкBα)的表达,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血浆及肺组织ICAM-1、白细胞介素8(IL-8)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)含量.结果 4周分流组大鼠血浆和肺组织中ICAM-1、IL-8及MCP-1含量均明显高于4周对照组大鼠(P<0.05或P<0.01);4周分流+PPG组大鼠mPAP,中、小型肺动脉内皮细胞ICAM-1和核因子-кB p65蛋白表达均显著高于4周分流组(P<0.05或P<0.01),而中、小型肺动脉内皮细胞IкBα蛋白表达均低于4周分流组(P<0.05),肺组织ICAM-1含量,血浆IL-8含量和肺组织MCP-1含量均高于4周分流组[(27.3±5.0) μmol/g蛋白vs(21.9±2.1)μmol/g蛋白,(148±29)μmol/L vs(118±23)μmol/L,(12.9±1.1)μmoL/g蛋白vs(10.2±1.4)μmol/g蛋白,P<0.05或P<0.01].11周分流组大鼠mPAP高于11周对照组(P<0.01),大、中、小型肺动脉内皮细胞ICAM-1和核因子-кB p65蛋白表达均高于11周对照组(P<0.05或P<0.01),但IкBα蛋白表达低于11周对照组(P<0.05或P<0.01),血浆和肺组织中ICAM-1、IL-8及MCP-1均高于11周对照组(均P<0.01);11周分流+NaHS组mPAP明显低于11周分流组[(23.2±3.0)mm Hg vs(27.5±1.9)mm Hg,1 mm Hg=0.133 kPa,P<0.05],大、中、小型肺动脉内皮细胞ICAM-1和核因子-кB p65蛋白表达均低于11周分流组(P<0.05或P<0.01),而中、小型肺动脉内皮细胞IкBα蛋白表达高于11周分流组(均P<0.05),血浆和肺组织中ICAM-1以及IL-8均低于11周分流组[(124±11)μmol/L vs(154±20)μmol/L、(19.9±2.5)μmol/g蛋白vs(23.9±3.6)μmol/g蛋白,(92±11)μmol/L vs(121±17)μmol/L、(15.0±1.7)μmol/g蛋白vs(19.0±3.9)μmoL/g蛋白,均P<0.01],肺组织MCP-1也低于11周分流组[(10.8±1.6)μmol/g蛋白vs(13.5±1.4)μmol/g蛋白,P<0.01].结论 H2S可通过抑制高肺血流性肺动脉高压大鼠血管炎症反应拮抗肺动脉高压形成.H2S的抗血管炎症效应可能通过上调肺动脉内皮细胞IкBα的表达,降低核因子-кB p65的表达,进而抑制相关炎症因子的表达来实现.