冬虫夏草对糖尿病对比剂肾病大鼠肾细胞中线粒体凋亡途径的影响

目的:探讨冬虫夏草对糖尿病对比剂肾病(contrast-induced nephropathy, CIN)大鼠肾细胞中线粒体凋亡途径的影响。方法:大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,各组大鼠分别给予相应剂量冬虫夏草和生理盐水灌胃连续7 d,第8天大鼠经尾静脉注射碘克沙醇建立CIN模型,收集标本测定BUN、Scr、NGAL、KIM-1、NO、SOD、MDA和T-AOC,荧光定量PCR和WB法检测Caspase-3、Caspase-9、Bax和Bcl-2基因和蛋白水平,Tunel法检测肾细胞凋亡情况,HE染色法观察肾组织病理变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠BUN、Scr、NGAL、KIM-1和MDA水平升高、NO、SOD和T-AOC水平降低,Caspase-3、9和Bax表达升高、Bcl-2及Bcl-2/Bax比值降低,肾凋亡细胞明显增多;肾细胞出现空泡、坏死等表现。与模型组比较,低剂量组Scr和MDA含量降低,Caspase-3和Bax表达降低,而Bcl-2和Bcl-2/Bax比值升高,中、高剂量组Scr、BUN、NGAL、KIM-1和MDA水平降低、NO和SOD含量升高,Caspase-3、9和Bax表达降低、Bcl-2与Bcl-2/Bax比值均升高,高剂量组大鼠肾凋亡细胞明显减少,且肾小管病理性改变减少。结论:冬虫夏草可增强糖尿病CIN大鼠抗氧化应激能力,调控线粒体凋亡途径,减少肾细胞凋亡,保护肾损伤,高剂量冬虫夏草疗效更佳。     

灯盏花素对大鼠肾脏缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响

目的探讨灯盏花素对大鼠肾脏缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响。方法 48只健康雄性SD大鼠,随机分为假手术组、缺血再灌注组、硝苯地平组、灯盏花素组。肾脏缺血60min再灌注24h,检测大鼠血清尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)水平,TUNEL法检测大鼠肾组织细胞凋亡情况,免疫组化方法检测肾组织Bax和Bcl-2蛋白表达。结果与假手术组比较,缺血再灌注组大鼠血清BUN和Cr浓度增高(P0.05),肾细胞凋亡指数升高,Bax蛋白表达明显上调(P0.05),Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax比值明显下降(P0.05)。与缺血再灌注组比较,灯盏花素组血清BUN和Cr水平降低(P0.05),肾细胞凋亡指数降低,Bax蛋白表达下调,Bcl-2蛋白表达上调,Bcl-2/Bax升高(P0.05)。结论灯盏花素可以抑制大鼠肾脏缺血再灌注细胞凋亡,其机制可能与改变Bax和Bcl-2蛋白的表达有关。     

慢性肾衰竭营养不良大鼠骨骼肌细胞凋亡及中药的干预实验

目的:观察慢性肾衰竭(chronic renal failure,CRF)营养不良大鼠骨骼肌细胞凋亡情况,及中药肾衰养真胶囊对其的影响。方法:SD雄性大鼠,采用5/6肾切除同时予4%酪蛋白饮食制作CRF营养不良大鼠模型,随机分为正常组,模型组,中药组和西药组。治疗4周后,检测肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、白蛋白(Alb)、血红蛋白(Hb),TUNEL法检测骨骼肌细胞凋亡率,Western Blot检测骨骼肌细胞凋亡蛋白酶3(Caspase-3)活性片段(Cleaved Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2基因相关蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白水平。结果:模型组大鼠骨骼肌细胞凋亡率明显增加(P0.01),Cleaved Caspase-3和Bax表达均显著增加(P0.01),Bcl-2表达显著下降(P0.01)。中药干预后,CRF营养不良大鼠骨骼肌细胞凋亡率显著减少(P0.01),Cleaved Caspase-3和Bax表达均显著下降(P0.01),Bcl-2表达显著增加(P0.01),同时大鼠Alb、Hb显著升高(P0.01)。结论:Caspase-3依赖的细胞凋亡可能参与了CRF营养不良骨骼肌蛋白的降解,并诱导了骨骼肌萎缩。中药肾衰养真胶囊可能通过下调Cleaved Caspase-3和Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达,抑制骨骼肌细胞凋亡,从而改善CRF营养不良。     

夹脊电针对ALS-SOD1G93A小鼠腰髓运动神经元细胞凋亡及Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的影响

目的:通过观察夹脊电针对肌萎缩侧索硬化症转基因小鼠(ALS-SOD1~(G93A))腰髓运动神经元细胞凋亡及Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的影响,探讨夹脊电针防治ALS的作用机制。方法:将36只雄性ALS-SOD1~(G93A)小鼠随机分为模型组、手针组和电针组,每组12只,同窝12只雄性野生型小鼠作为野生组。手针组针刺腰部夹脊穴,每周2次,每次20min,连续治疗4周;电针组采用电针腰部夹脊穴治疗,电针刺激量为1mA,2Hz,疗程同手针组。转棒实验检测各组小鼠运动功能,TUNEL染色观察各组小鼠腰髓前角运动神经元细胞凋亡情况,免疫组织化学及Western Blot法检测小鼠腰髓Bax、Bcl-2、Caspase-3表达水平。结果:与野生组比较,模型组转棒时间下降(P0.05),腰髓前角凋亡细胞增加,Bax、Caspase-3阳性细胞增加,Bcl-2阳性细胞减少,腰髓组织Bax、Caspase-3表达水平升高,Bcl-2表达水平降低(P0.01);与模型组比较,手针组、电针组转棒时间显著延长(P0.05),腰髓前角凋亡细胞减少,Bax、Caspase-3阳性细减少,Bcl-2阳性细胞增加,腰髓组织Bax、Caspase-3表达水平明显降低,Bcl-2表达水平明显升高,且电针组改善程度更为显著(P0.01)。结论:夹脊电针可能通过调节ALS-SOD1~(G93A)小鼠腰髓组织Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达,影响运动神经元细胞凋亡,从而延缓ALS的进展。     

灯盏花素对肾损害小鼠肾组织细胞凋亡及相关蛋白的影响

目的:观察灯盏花素对顺铂致小鼠肾损害肾组织细胞凋亡及相关蛋白的影响。方法:将昆明种小鼠随机分为对照组、模型组、灯盏花素25,50 mg.kg-1组。除对照组外,其余各组腹腔注射顺铂8 mg.kg-1制备小鼠肾损害模型,灯盏花素组分别灌胃给药,连续7 d。给药结束后收集小鼠尿液进行尿蛋白(Upr)/尿肌酐(Ucr)及N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG-U)测定。原位末端标记法(TUNEL)检测小鼠肾脏细胞凋亡状况,免疫组化法检测肾脏相关凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果:模型组小鼠Upr/Ucr及NAG-U较对照组明显升高,肾组织的凋亡指数增加,肾组织细胞凋亡蛋白Bax及Bcl-2表达增强,Bax/Bcl-2比值升高(P<0.05,P<0.01),而2个灯盏花素实验组Upr/Ucr、NAG-U较模型组明显降低(P<0.05,P<0.01),其中灯盏花素50 mg.kg-1小鼠较模型组肾组织细胞凋亡指数、Bax表达、Bax/Bcl-2减少,Bcl-2的表达增强(P<0.05,P<0.01)。结论:Upr/Ucr与NAG-U可作为顺铂肾损害的评估指标。灯盏花素减轻顺铂肾损害的机制可能与增强凋亡相关蛋白Bcl-2的表达,降低Bax表达及Bax/Bcl-2的比值有关。     

川芎嗪注射液对重型急性胰腺炎肾损伤大鼠肾功能的保护作用及机制研究

目的探讨川芎嗪注射液对重型急性胰腺炎(SAP)大鼠肾损伤的影响及其作用机制。方法将45只雌性SD大鼠随机分为正常组、模型组、川芎嗪组,模型组、川芎嗪组大鼠均予以4%牛磺胆酸钠经腹逆行胰胆管注射制作SAP模型,川芎嗪组大鼠在造模术后10 min均经尾静脉注射0. 6%川芎嗪注射液10 m L/kg。检测3组大鼠术后12 h、24 h和48 h血清淀粉酶(AMY)、尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)水平,HE染色观察3组大鼠肾脏实质组织病理变化,TUNEL法检测肾组织细胞凋亡情况,Western Blot法检测肾组织中Bcl-2及Bax蛋白表达情况。结果模型组和川芎嗪组大鼠各时间血清AMY、BUN、Cr水平均明显高于正常组(P均0. 05),且随着时间延长,模型组和川芎嗪组大鼠血清AMY、BUN、Cr水平均显著提高(P均0. 05),但川芎嗪组均明显低于模型组(P均0. 05)。川芎嗪组各时间点肾脏组织损伤程度较模型组轻,细胞凋亡指数明显低于模型组(P均0. 05),Bcl-2/Bax值明显高于模型组(P均0. 05)。结论川芎嗪可能通过提高Bcl-2蛋白表达量、降低Bax蛋白表达量以抑制SAP大鼠肾小管上皮细胞凋亡,从而发挥对肾脏的保护作用。     

稳斑汤对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3表达的影响

目的:观察稳斑汤对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化不稳定斑块凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3表达的影响。方法:选取6～8周ApoE基因敲除小鼠建立动脉粥样硬化(AS)不稳定斑块模型,随机分为空白对照组,模型组,他汀组,稳斑汤低、中、高剂量组。空白对照组和模型组分别予以生理盐水灌胃,西药组及稳斑汤低、中、高剂量组分别予以阿托伐他汀及不同剂量稳斑汤干预。取小鼠主动脉组织HE染色进行病理学观察,并采用蛋白质印迹法(免疫印迹试验)检测Bax、Bcl-2和Caspase-3的蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,模型组的Bcl-2蛋白表达水平均降低(P0.05),Bax、Caspase-3蛋白表达水平均升高(P0.05);与模型组比较,稳斑汤不同剂量组Bcl-2的蛋白表达水平均升高(P0.05),Caspase-3、Bax的蛋白表达水平均降低(P0.05);与他汀组比较,稳斑汤高剂量组Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白表达水平无明显差异(P0.05)。光镜下观察稳斑汤各剂量组和他汀组斑块面积均小于模型组。结论:稳斑汤可能通过下调ApoE基因敲除小鼠AS不稳定斑块凋亡相关蛋白Caspase-3和Bax的表达,上调其Bcl-2的表达来干预AS不稳定斑块的形成及破裂。     

补阳还五汤对阿尔茨海默病小鼠海马凋亡因子及学习记忆能力的影响

目的:探讨补阳还五汤(BYHWT)对阿尔茨海默病小鼠海马组织凋亡因子及学习记忆能力的影响。方法:40只雄性APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组,多奈哌齐组(0.001 g·kg~(-1)),BYHWT高、中、低剂量组(分别为37.06,18.53,9.26 g·kg~(-1))。C57小鼠作为空白组。连续灌胃BYHWT 30 d,进行水迷宫行为学测试后,取材。用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠海马中凋亡因子B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的变化。结果:与空白组比较,模型组小鼠学习记忆能力明显降低,海马组织中凋亡因子Bcl-2明显减少(P0.01),Bax和Caspase-3明显增加(P0.01)。与模型组比较,BYHWT高、中剂量组能明显改善小鼠学习记忆能力,凋亡因子Bcl-2明显增加(P0.01),Bax和Caspase-3明显减少(P0.01)。结论:补阳还五汤能够明显改善阿尔茨海默病小鼠的学习记忆能力,降低海马组织中Bax和Caspase-3的表达,增加Bcl-2的表达。     

冬虫夏草对顺铂肾损伤小鼠模型肾组织Caspase-3表达的影响

目的:观察顺铂肾损伤小鼠后肾组织Caspase-3的表达以及人工冬虫夏草-百令胶囊(Cordyceps sinensis,C.sinensis)干预后对其的影响,探讨C.sinensis的肾保护作用机制。方法:用腹腔注射cisplatin的方法建立顺铂肾损伤模型,C57BL/6小鼠28只随机分为空白对照组、CP组和C.sinensis低剂量、高剂量组,每组7只。72 h后处死小鼠,检测各组小鼠血尿素氮(BUN)和血肌酐(SCr),HE染色观察小鼠肾小管间质病理变化,并用肾小管间质半定量计分法分析各组小鼠病理损伤情况,免疫组织化学检测肾组织Caspase-3的表达。结果:与对照组相比,CP组和C.sinensis低、高剂量组小鼠的BUN及SCr水平增高(P0.05),肾小管病理半定量计分显示小管间质损伤均明显加重(P0.05),肾组织Caspase-3表达均明显升高(P0.05)。与CP组相比较,C.sinensis的低、高剂量组的BUN和SCr水平下降(P0.05),Caspase-3表达下调(P0.05),肾小管病理半定量计分显示C.sinensis的低、高剂量组分别较CP组小管间质损伤明显改善(P0.05)。结论:顺铂肾损伤肾组织中Caspase-3表达明显增高,提示顺铂至急性肾损伤与其诱导肾小管上皮细胞凋亡有关。C.sinensis干预后肾组织中Caspase-3的表达明显降低,提示C.sinensis可能通过抑制肾小管上皮细胞凋亡而达到肾保护作用。     

育肾助孕方对卵巢储备功能降低大鼠卵巢Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响

目的观察育肾助孕方对卵巢储备功能降低模型大鼠卵巢Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达的影响。方法 48只雌性SD大鼠随机分为对照组、模型组、补佳乐组及育肾助孕方低、中、高剂量组,每组8只。除对照组外,其余各组均采用雷公藤多苷药液灌胃建立卵巢储备功能降低大鼠模型。各组予相应药物干预2周。采用免疫组化及Western blot检测卵巢组织细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达情况,采用Real-time PCR检测卵巢细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达情况。结果与对照组比较,模型组Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著降低,Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达显著升高(P0.05)。与模型组比较,补佳乐组和育肾助孕方各剂量组Bcl-2蛋白表达显著升高,Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达显著降低(P0.05);补佳乐组和育肾助孕方高剂量组Bcl-2 mRNA表达显著高于模型组(P0.05)。与育肾助孕方低剂量组比较,育肾助孕方高剂量组Bcl-2 mRNA表达显著升高,育肾助孕方高中剂量组Bax蛋白表达明显降低(P0.05)。结论育肾助孕方可通过上调卵巢组织细胞中Bcl-2 mRNA及蛋白表达,下调Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达,促进卵巢颗粒细胞增殖,抑制其过度凋亡,从而改善卵巢储备功能。     

萝卜硫素介导HDAC6信号通路改善肌红蛋白诱导的肾小管上皮细胞凋亡

目的:探讨萝卜硫素对肌红蛋白诱导的肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡及组蛋白乙酰化酶6(HDAC6)表达的影响。方法:体外采用肌红蛋白诱导HK-2细胞的横纹肌溶解致急性肾损伤模型,CCK8法分析HK-2细胞增殖活性,流式细胞术检测HK-2细胞凋亡率,Western blot检测Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3和HDAC6蛋白表达水平。结果:与正常对照组比较,模型组HK-2细胞存活率及Bcl-2蛋白表达显著降低,细胞凋亡率及Bax、cleaved Caspase-3、HDAC6蛋白表达显著升高(P0.05)。与模型组比较,萝卜硫素组和HDAC6抑制剂23BB组HK-2细胞存活率及Bcl-2蛋白表达显著升高,细胞凋亡率及Bax、cleaved Caspase-3、HDAC6蛋白表达显著降低(P0.05)。结论:萝卜硫素能通过抑制HDAC6蛋白表达降低肌红蛋白诱导的HK-2细胞凋亡,对急性肾损伤具有保护作用。     

清燥救肺汤及其拆方对肺炎支原体感染小鼠Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白的影响

目的探讨清燥救肺汤(QJD)及其拆方对肺炎支原体(MP)感染小鼠肺组织Bax、Bcl-2、Caspase-3凋亡蛋白表达的影响。方法将Balb/c小鼠随机分成对照组、模型组、QJD组、QJD拆方I组、QJD拆方II组、阿奇霉素组。除对照组小鼠外,其余5组采用滴鼻法对实验Balb/c小鼠进行MP感染。透射电镜观察肺组织超微结构改变和细胞凋亡,运用免疫组织化学SP法和Western blotting法检测肺组织Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达,并采用q RT-PCR法检测Caspase-3 m RNA的表达。结果 MP感染后,小鼠肺组织出现炎症改变,肺泡壁增厚、肺泡上皮细胞破坏、细胞浸润,并发现凋亡的特征改变。MP感染后的小鼠肺组织Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达明显升高,但是Bcl-2/Bax的值明显下降;与模型组相比,QJD组、QJD拆方I组及阿奇霉素组的Bcl-2的表达升高,Bcl-2/Bax的值也明显升高,Bax、Caspase-3的表达下降;QJD拆方II组与模型组比较各蛋白表达差异不明显。Caspase-3 m RNA检测结果显示,QJD组、QJD拆方I组及阿奇霉素组表达较模型组降低,QJD拆方II组的改变不明显。结论 QJD能够抑制MP感染诱导的细胞凋亡,Bax、Bcl-2可能为其效应靶点之一,其中QJD拆方I起主要作用。     

建中补肾消癥汤对UUO小鼠肾间质纤维化细胞凋亡的保护作用研究

目的 通过细胞凋亡途径探讨建中补肾消癥汤对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾间质纤维化(RIF)的作用机制。方法 采用UUO小鼠模型,以建中补肾消癥汤不同剂量干预、尿毒清颗粒阳性药对照,造模后第3天开始灌胃,于造模后的第14、21、28天每组随机抽取5只进行取材。采用全自动生化分析仪进行小鼠血清Scr、BUN检测,HE染色观察小鼠肾组织病理形态变化,TUNEL染色观察小鼠肾小管上皮细胞(RTECs)凋亡情况,Western blot和RT-PCR检测小鼠梗阻侧肾组织中Bcl-2、Bax和Apaf-1的表达情况。结果 与同时期UUO模型组相比,在第28天各治疗组均能够明显降低UUO小鼠Scr、BUN浓度(P<0.05,P<0.01);HE染色显示,建中补肾消癥汤能够改善UUO小鼠肾脏组织纤维化程度;TUNEL染色显示,在第28天,中药高、中剂量和尿毒清组RTECs凋亡数量均显著减少(P<0.01);Western blot和RT-PCR结果一致,中药高剂量组与UUO模型组相比,Bcl-2表达明显增加(P<0.01,P<0.05),Bax和Apaf-1表达显著下降...     

丹参提取物对铅中毒小鼠肾氧化应激的保护作用

目的丹参提取物对铅中毒小鼠肾氧化应激的保护作用。方法腹腔注射醋酸铅建立铅中毒的小鼠模型,60只雄性昆明小鼠随机分为正常对照组,模型组,阳性药组(DMSA 70 mg/kg),丹参提取物低、中、高剂量组(生药20、40、60 g/kg),灌胃给药1次/d,连续10 d。测定小鼠体质量,计算肾脏系数;采用全自动生化学检测仪测定小鼠BUN、CR水平,检测肾脏组织MDA、GSH-Px、SOD水平;采用HE染色观察小鼠肾损伤病理状态;采用qRT-PCR检测肾脏组织中Bcl-2、Bax mRNA表达。结果与模型组比较,丹参提取物可降低血清BUN、Cr水平,肾组织MDA水平及Bax mRNA表达(P<0.05),升高肾组织SOD、GSH-Px水平及Bcl-2 mRNA表达(P<0.05),改善肾组织病理状态。结论丹参提取物可通过提高铅中毒小鼠肾组织中抗氧化酶活性,抑制铅诱导细胞凋亡,从而发挥其对铅诱导的肾氧化应激的保护效应。     

商陆皂苷甲对BXSB小鼠狼疮肾炎凋亡的影响

目的通过观察商陆皂苷甲(Es A)对BXSB小鼠肾脏细胞凋亡的影响,探讨Es A对狼疮肾炎的作用机制。方法将24只18周龄雄性BXSB小鼠随机分为模型组、地塞米松组和Es A组,腹腔注射相应药物治疗4周后留取肾组织标本,采用原位末端标记法检测肾脏细胞凋亡情况,免疫组化检测组织中Bax、Bcl-2、Fas、Fas L表达情况。结果 13组间肾小球和肾小管细胞的凋亡指数差异有统计学意义(P0.05),Es A组凋亡指数最高,其次为地塞米松组。2与模型组比较,两治疗组小鼠肾组织Bcl-2光密度值显著下降(P0.05),Es A和地塞米松治疗组间无统计学差异(P0.05);3组间Bax的表达比较差异无统计学意义(P0.05);而3组间肾组织Bcl-2/Bax的比值比较差异有统计学意义(P0.05)。3与模型组比较,两治疗组BXSB小鼠的肾组织Fas、Fas L光密度值明显增加(P0.05),Es A和地塞米松治疗组间差异无统计学意义(P0.05)。结论 Es A具有诱导BXSB小鼠肾小球和肾小管细胞凋亡作用,其通过下调BXSB小鼠肾组织中Bcl-2表达及上调Fas、Fsa L表达而促进细胞凋亡的发生。     

参芪蛭龙汤对膜性肾病小鼠肾组织凋亡因子Bcl-2、Bax、Caspase-3的影响

目的:探讨参芪蛭龙汤对膜性肾病小鼠肾小球足细胞凋亡的影响。方法:制备阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA),复制膜性肾病小鼠模型。将40只模型小鼠随机分为模型组、参芪蛭龙汤高、低剂量组和雷公藤多苷片组,另取10只正常小鼠作为正常组。连续给药4周后,处死小鼠,HE、Masson、PAS染色观察肾组织病理变化;RT-PCR检测肾组织Bcl-2(B淋巴细胞瘤-2)、Bax(/BCL2-相关X蛋白)、Caspase-3(半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3) mRNA表达变化;Western blot检测肾组织Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达变化。结果:HE染色发现,与模型组比较,参芪蛭龙汤高剂量组肾小球体积减小,仅有炎性细胞浸润减少;Masson染色可见,与模型组比较,各给药组可见肾小球体积减小,基底膜增厚及组织纤维化减轻;PAS染色可见,各给药组基底膜病变较模型组显著减轻,参芪蛭龙汤高剂量组并未出现明显基底膜增厚等改变。RT-PCR结果显示,与模型组比较,参芪蛭龙汤各组小鼠肾组织Bax、Caspase-3 mRNA表达减少(P<0.01),Bcl-2 mRNA表达增加(P<...     

左归饮对D-半乳糖致衰大鼠肝肾组织形态及其细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的研究左归饮对D-半乳糖致亚急性衰老模型大鼠肝、肾组织形态及其细胞凋亡相关蛋白表达的影响,初步探讨其延缓衰老作用机制。方法取健康SD大鼠72只,雌雄各半,随机分为6组,即对照组、模型组、给药组(维生素E组,左归饮高、低剂量组和六味地黄丸组)。除对照组颈背部皮下注射0.9%Na Cl溶液外,其余各组颈背部皮下分别连续注射D-半乳糖建立亚急性衰老模型。建模同时,各给药组大鼠分别灌胃给予维生素E、高剂量左归饮、低剂量左归饮及六味地黄丸药液进行干预,对照组与模型组分别给予等体积的蒸馏水。连续给药8周后,取大鼠肝、肾组织固定,利用HE染色法制作病理切片,进行显微观察;同时,采用免疫组化方法检测肝、肾组织中细胞凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、Caspase-3)阳性表达水平,统计比较IOD值。结果 (1)与对照组比较,模型组大鼠肝、肾组织病理性损伤明显;与模型组比较,左归饮能够减轻D-半乳糖致大鼠衰老过程中出现的肝、肾组织病理性损伤。(2)与对照组比较,模型组大鼠肝组织中Bax和Caspase-3的IOD值均显著升高(P0.01),Bcl-2的IOD值显著降低(P0.01);与模型组比较,左归饮高剂量组大鼠肝组织中Bax、Caspase-3的IOD值均显著降低(P0.01),Bcl-2的IOD值显著升高(P0.01)。左归饮低剂量组大鼠肝组织中Bax和Caspase-3的IOD值明显降低(P0.05),Bcl-2的IOD值略有升高,但差异无统计学意义(P0.05)。(3)与对照组比较,模型组的肾组织中Bax和Caspase-3的IOD值均显著升高(P0.01),Bcl-2的IOD值显著降低(P0.01);与模型组比较,左归饮高剂量组大鼠肾组织中Bax、Caspase-3的IOD值均明显降低(P0.01),Bcl-2的IOD值明显升高(P0.01)。左归饮低剂量组大鼠肾组织中Bax的IOD值明显降低(P0.05),但Bcl-2及Caspase-3的IOD值差异无统计学意义(P0.05)。结论左归饮对肝、肾组织具有一定的保护作用,其作用机制可能是通过与影响肝、肾组织中细胞凋亡相关蛋白表达有关。     

葛根素对创伤性脑损伤小鼠运动皮质神经元Bax,Bcl-2及Caspase-3表达水平的影响

目的:探索葛根素对创伤性脑损伤模型小鼠的神经元凋亡的影响,观察不同剂量葛根素注射液对创伤性脑损伤小鼠大脑运动皮质区的Bax,Bcl-2及Caspase-3表达的影响。方法:应用电子脑皮质挫伤撞击仪建立小鼠创伤性脑损伤模型,随机分为6组:假手术组、模型组、葛根素高剂量组、葛根素中剂量组、葛根素低剂量组、神经生长因子对照组。通过运用免疫组织化学方法,检测Bax,Bcl-2及Caspase-3阳性细胞的表达。结果:与模型组相比,高剂量葛根素能有效下调促凋亡基因Bax水平,上调抗凋亡基因Bcl-2水平,并且显著抑制Caspase-3的表达,差异均有统计学意义(P 0.01)。结论:葛根素对创伤性脑损伤模型小鼠的神经细胞具有保护作用,机制可能与其抑制神经元凋亡有关。     

补肾壮督方对大鼠退变椎间盘细胞线粒体凋亡通路的影响

目的:观察补肾壮督方对大鼠退变椎间盘细胞凋亡的影响,探讨其改善椎间盘退变的机制。方法:100只SD雄性大鼠,采用纤维环全层针刺造模,随机分为空白组,模型组,补肾壮督方低、中、高剂量组(0. 38,0. 77,1. 53 g·kg-1),连续中药灌胃4周后,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠椎间盘组织病理学变化;原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测退变椎间盘中髓核细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测椎间盘组织中活化半胱氨酸蛋白酶-3(active Caspase-3),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),细胞色素C(cyt C)及Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠椎间盘组织病理学评分显著增加,髓核细胞凋亡率明显增加(P 0. 05),active Caspase-3,cyt C和Bax表达量均明显增加(P 0. 05),Bcl-2表达量明显下降(P 0. 05)。与模型组比较,补肾壮督方低、中、高剂量组组织病理学评分明显降低(P 0. 05),髓核细胞凋亡率明显减少(P 0. 05),active Caspase-3,cyt C及Bax表达量均明显下降(P 0. 05),Bcl-2表达量明显增加(P 0. 05)。结论:补肾壮督方可能通过减少active Caspase-3,cyt C和Bax蛋白表达,增加Bcl-2蛋白表达,抑制线粒体凋亡通路,并存在一定剂量依赖性,从而改善椎间盘退变。     

益肾降浊冲剂对慢性肾衰大鼠肾组织细胞凋亡及BAX、Bcl-2蛋白表达的影响

目的:观察益肾降浊冲剂对慢性肾功能衰竭大鼠肾细胞凋亡的影响及其机制。方法:雄性SD大鼠60只随机分为五组:假手术组、模型组、益肾降浊冲剂大、小剂量治疗组和大黄素治疗组。处理2个月后,处死大鼠并收集血清肌酐和尿素氮值,HE染色观察肾脏病理组织改变,Tunel染色检测肾细胞凋亡,免疫组织化学检测肾组织凋亡蛋白Bcl-2、BAX的表达。结果:(1)各组大鼠BUN、Scr比较:模型组大鼠BUN(18.63±2.67)、Scr(120.96±20.43)明显高于假手术组BUN(7.42±0.92)、Scr(41.56±10.80),益肾降浊冲剂大剂量组BUN(14.23±1.76)、Scr(82.40±8.35)明显低于模型组,大黄素组BUN(16.33±1.95)、Scr(95.88±10.88)明显低于模型组,益肾降浊冲剂大剂量组BUN、Scr明显低于大黄素组,差异有统计学意义(P0.05);(2)各组大鼠肾细胞凋亡比较:假手术组凋亡指数(191.60±42.69)明显低于模型组(911.40±91.81),大黄素组(487.00±77.83)及益肾降浊冲剂大剂量组凋亡指数(266.60±59.50)明显低于模型组,益肾降浊冲剂大剂量组凋亡指数明显低于大黄素组;差异有统计学意义(P0.05);(3)各组大鼠BAX、Bcl-2蛋白在肾脏组织表达的比较:模型组大鼠BAX(1 157.40±123.31)明显高于假手术组BAX(224.80±51.64),益肾降浊冲剂大剂量组BAX(505.20±14.04)明显低于模型组,大黄素组BAX (796.60±40.64)明显低于模型组,益肾降浊冲剂大剂量组BAX明显低于大黄素组;模型组大鼠Bcl-2(157.60±38.66)明显低于假手术组Bcl-2(789.00±73.23),益肾降浊冲剂大剂量组Bcl-2(559.60±73.15)明显高于模型组,大黄素组Bcl-2 (412.80±70.96)明显高于模型组,益肾降浊冲剂大剂量组Bcl-2明显高于大黄素组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:益肾降浊冲剂通过有效减少BAX表达,增加Bcl-2表达,来减少CRF大鼠肾细胞的凋亡。可能是其改善临床症状及延缓慢性肾衰的机制之一。