CaMKⅡ对多囊卵巢综合征模型小鼠颗粒细胞中Caspase-3表达的影响

目的：探讨钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在正常小鼠卵巢和多囊卵巢综合征(PCOS)小鼠卵巢组织中的差异表达,阐明CaMKⅡ对PCOS小鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响。方法：用蓖麻油溶解脱氢表雄酮(DHEA)皮下注射诱导PCOS小鼠模型(PCOS组),对照组小鼠注射等体积蓖麻油,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测2组小鼠血清中睾酮水平,阴道涂片监测2组小鼠发情周期变化,HE染色观察2组小鼠卵巢组织病理形态表现,免疫荧光染色法检测2组小鼠卵巢组织中CaMKⅡ蛋白定位和荧光强度,Western blotting法检测2组小鼠卵巢组织中CaMKⅡ和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (Caspase-3)蛋白表达水平。采用短发夹RNA (sh-RNA)-CaMKⅡ慢病毒转染人卵巢颗粒细胞(KGN细胞)建立稳转体系,分为空白对照组、 sh-CaMKⅡ-1组和sh-CaMKⅡ-2组,Western blotting法检测各组KGN细胞中CaMKⅡ和Caspase-3蛋白表达水平。结果：与对照组比较,PCOS组小鼠血清中总睾酮和游离睾酮水平明显升高(P<0.01),发情周期紊乱,停滞于发...     

川芎嗪对人皮肤恶性黑素瘤A875细胞增殖和凋亡相关蛋白表达的影响

目的探讨川芎嗪对人皮肤恶性黑素瘤A875细胞增殖和凋亡相关蛋白表达的影响。方法体外培养A875细胞,采用不同浓度(0 mg/mL、0.5 mg/mL、1 mg/mL、2 mg/mL)川芎嗪分别作用A875细胞48 h、72 h,采用四甲基偶氮唑盐法检测各组细胞存活率。采用不同浓度川芎嗪(0 mg/mL、2 mg/mL)分别作用A875细胞0 h、48 h、72 h,采用蛋白免疫印迹法检测环氧化酶-2(COX-2)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase3)蛋白相对表达水平,并分析经2 mg/mL川芎嗪干预48 h、72 h后两者表达水平的相关性。结果经川芎嗪干预48 h、72 h后,A875细胞的细胞存活率随着川芎嗪浓度的升高而降低(均P<0.05);当川芎嗪浓度为1或2 mg/mL时,A875细胞的细胞存活率随着药物作用时间延长而下降(均P<0.05)。2 mg/mL川芎嗪干预0 h、48 h、72 h,A875细胞中COX-2蛋白表达水平依次降低,Caspase3蛋白表达水平依次升高;与0 mg/mL川芎嗪干预比较,应用2 mg/mL川芎嗪干预48 h和72 ...     

三七总甙对人增生性瘢痕成纤维细胞内钙离子浓度的作用

目的：观察三七总甙对人增生性瘢痕成纤维细胞内钙离子浓度的作用。方法：体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞，分别以400μg／mL和800μg／mLPNS处理细胞，在激光共聚焦显微镜下观察细胞内钙离子浓度的变化。结果：随着给药浓度的增加，和空白对照组相比，各给药组的细胞内钙离子浓度均有所下降（P〈0．05），两给药组之间差异也具有统计学意义（P〈0．05）。结论：三七总甙能够抑制人增生性瘢痕成纤维细胞内钙离子浓度，并具有剂量依赖效应。     

内皮素-1对成纤维细胞内游离钙的影响

目的研究内皮素（ＥｎｄｏｔｈｅｌｉｎＥＴ）对成纤维细胞（ＨＬＦ）内钙离子浓度（［Ｃａ＋２］ｉ）的影响及维拉帕米（Ｖｅｒ）对ＥＴ促［Ｃａ＋２］ｉ效应的阻断作用。方法采用Ｆｕｒａ－２／ＡＭ钙荧光指示剂测定ＨＬＦ细胞内Ｃａ＋２浓度。结果ＥＴ在很短时间内即可明显提高ＨＬＦ细胞内Ｃａ＋２浓度（Ｐ＜０．０１～０．００１）。并且在细胞外液无Ｃａ＋２存在情况下，亦可提高［Ｃａ＋２］ｉ，且有明显的量效关系（Ｐ＜０．０５～０．０１）。同时，Ｖｅｒ对ＥＴ的上述作用具有显著的作用（Ｐ＜０．０５）。结论ＥＴ对Ｖｅｒ的调控作用是通过［Ｃａ＋２］ｉ转运而产生的。     

特发性肺纤维化病人肺成纤维细胞过度表达单核细胞趋化蛋白-1

目的研究凝血酶对正常人肺成纤维细胞（normalhuman lung fibroblasts,N-LF）和特发性肺纤维化（idiopathic pulmonary fibrosis,IPF）病人肺成纤维细胞（F-LF）单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达的影响。方法 N-LF和F-LF细胞分别培养于96孔培养板内,凝血酶诱导4和24h后,收集上清液并用ELISA方法检测MCP-1蛋白水平。结果凝血酶可诱导N-LF和F-LF细胞释放MCP-1,但F-LF细胞的MCP-1分泌水平远远高于N-LF细胞。结论人肺成纤维细胞在肺纤维化过程中过度合成和释放MCP-1,凝血酶可进一步促进其过度表达MCP-1。     

β—胡萝卜素对氧化镍致人肺成纤维细胞DNA损伤作用的影响

目的 探讨β—胡萝卜素对氧化镍致人肺成纤维细胞DNA损伤作用的影响。方法 应用单细胞凝肢电泳技术(single cell gel electrophoresis,SCGE)或称彗星电泳技术(comet assay)比较研究。结果 氧化镍(Ni2O3)可引起人肺成纤维细胞DNA双链断裂损伤，Ni203与β—胡萝卜素共同处理的人肺成纤维细胞的DNA双链损伤较之Ni2O3单独处理组降低(P＜0．01)。结论 氧化镍可引起人肺成纤维细胞DNA双链损伤。β—胡萝卜素可明显降低Ni2O3对人肺成纤维细胞DNA链的损伤作用。SGGE是一种简便、快速、敏感及经济的细胞基因毒性检测方法，可应用于各级水平的环境与人类疾病(镍污染)检测与研究。     

姜黄素诱导人肺成纤维细胞凋亡的相关分子机制的初步研究

目的 观察姜黄素诱导特发性肺纤维化(IPF)患者肺成纤维细胞凋亡的作用,探讨相关分子机制.方法 体外培养开胸肺活检IPF患者的肺成纤维细胞.采用不同浓度姜黄素(5、10、20及40μmol/L)作用于肺成纤维细胞.MTT法检测姜黄素对肺成纤维细胞增殖的抑制作用,计算细胞抑制率;应用流式细胞术检测细胞凋亡以及凋亡相关基因半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspage-3)的表达.采用SPSS11.5软件进行统计学分析,多组数据间比较采用单因素方差分析,采用Pearson相关分析进行相关性检验.结果 5～40 μmol/L姜黄素作用于肺成纤维细胞不同时间(6、12、24及48 h)后,对细胞增殖具有明显抑制作用,呈剂量-时间效应关系,抑制率与浓度和时间均呈正相关(r=0.886,r=0.832,P均<0.01).流式细胞术检测到细胞凋亡,5～40 μmol/L姜黄素作用后凋亡率分别为(29.58±2.13)%、(64.36±3.92)%、(72.98±4.42)%和(83.14±2.51)%,与不加姜黄素的阴性对照组(3.84±1.88)%比较,差异均有统计学意义(P<0.01);Caspage-3蛋白表达阳性率分别为(26.24±3.64)%、(44.87±5.31)%、(57.44±4.23)%和(73.65±5.01)%,与不加姜黄素的阴性对照组(4.02±0.62)%比较,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 姜黄素可能通过激活Caspase-3,诱导IPF患者肺成纤维细胞凋亡.     

亨廷顿蛋白相关蛋白1基因对小鼠成纤维细胞增殖的影响

  目的  研究亨廷顿蛋白相关蛋白1（Huntingtin-associated protein 1,Hap1）基因对成纤维细胞增殖的影响。  方法  体外分离培养获得Hap1基因敲除（Hap1-/-）的原代成纤维细胞,鉴定后采用EdU增殖实验、细胞周期（流式细胞术）检测验证Hap1成纤维细胞增殖的改变;将野生型和Hap1-/-成纤维细胞送转录组测序筛选增殖相关基因,实时荧光定量PCR（qPCR）验证相关基因表达水平的改变。对小鼠进行皮肤损伤造模检测Hap1敲减（Hap1+/-）小鼠皮肤损伤修复情况;PCNA免疫组化染色检测损伤修复过程中成纤维细胞的增殖水平。  结果  成功培养原代Hap1-/-成纤维细胞;与野生型成纤维细胞相比,Hap1-/-成纤维细胞EdU阳性比例减少,进入S期的细胞比例减少;原代成纤维细胞转录组测序筛选出Cdc25C、E2f7、E2f8和Ccl5四个差异表达的增殖相关基因,qPCR验证发现E2f7在Hap1敲除后表达增多。小鼠皮肤损伤结果显示,Hap1+/-小鼠伤口面积较相同时间点野生型小鼠伤口面积大且愈合速度减慢,成纤维细胞增殖阳性密度低于野生型小鼠。  结论  Hap1可能通过抑制细胞周期负性调节因子E2f7的表达对成纤维细胞增殖起正向调节作用,其缺失将抑制成纤维细胞进入S期,从而减少细胞增殖,影响伤口修复。     

ADAMTS-1对小鼠肺成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白的影响

目的探讨含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶(ADAMTS-1)对小鼠肺成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白(COL1)表达的影响及可能的机制。方法应用细胞培养技术进行小鼠肺成纤维细胞培养,利用ADAMTS-1为刺激因子,将培养的细胞分为空白组、低、中、高浓度组,应用逆转录-多聚酶链反应技术(RT-PCR)观察COL1 mRNA、转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA在各组中的表达情况;采用蛋白质印迹法(Western blotting)观察各组细胞COL1、TGF-β1的变化。结果与空白组相比,低浓度组、中浓度组、高浓度组的COL1、TGF-β1表达水平下降,其中高浓度组表达水平最低(P<0.05)。结论 ADAMTS-1能降低COL1的表达,抑制TGF-β1是其抗纤维化作用的可能潜在机制。     

髓母细胞瘤Caspase-3表达与细胞凋亡的关系

目的：测定Caspase-3在髓母细胞瘤中的表达水平，探讨其在髓母细胞瘤中的作用及其与细胞凋亡的关系。方法：用免疫组化法测定在30例髓母细胞瘤以及10例正常人脑组织中的Caspase-3蛋白表达，慢性扁桃体炎和淋巴结炎标本作阳性对照，PBS作一抗为阴性对照。结果：在30例髓母细胞瘤中，24(80.00％)例不同程度表达Caspase-3蛋白，Caspase-3蛋白阳性染色见于细胞核、细胞浆，或细胞的两个部分。在正常人脑组织中未见到Caspase-3表达．结论：Caspase-3与髓母细胞瘤的形成进展、转移和凋亡有关.测定Caspase-3在评估该肿瘤的生物学行为和病人预后有临床价值.     

Caspase-3与Caspase-6蛋白在肾透明细胞癌中的表达及意义

目的 检测Caspase-3、Caspase-6蛋白在肾透明细胞癌(RCCC)、癌旁、正常肾组织中的表达,探讨两者在不同临床分期、病理分级的表达及与预后的关系,并分析两者的相关性.方法 采用免疫组化的方法 检测75例RCCC及其癌旁组织、15例正常肾组织标本中的Caspase-3和Caspase-6蛋白表达水平.结果 Caspase-3和Caspase-6蛋白在RCCC中的阳性表达率(74.67%,76.00%)低于癌旁组织(92.00%,90.67%)和正常肾组织(93.33%,86.67%),差异有统计学意义(P<0.05).Caspase-3病理G3期阳性表达率(53.58%)低于G1期(87.50%),P<0.05;临床Ⅲ、Ⅳ期阳性表达率(63.64%)低于Ⅰ期(87.97%),P<0.05;淋巴结转移阳性组中阳性表达率(55.56%)低于阴性组(80.70%).Caspase-6在不同病理分级和临床分期以及是否有淋巴结转移申阳性表率无显著性差异.两者在RCCC中的阳性表达率无相关性(C=0.0921,P>0.05).结论 Caspase-3和Caspase-6表达减少导致细胞凋亡减少、与肾细胞癌发病有密切关系,但不是肾细胞癌有价值的标记物.且两者的表达降低并不存在相关性.     

反义ClC-3寡核苷酸对thapsigargin触发 的Ca2+ 运动的影响

 【目的】 研究反义ClC-3寡核苷酸对Thapsigargin (TG)触发的Ca2+ 运动的影响。【方法】 在PC12 细胞中转染反义ClC-3寡核苷酸,利用生物荧光影像分析系统测定胞浆Ca2+ 技术探讨ClC-3寡核苷酸对TG触发的Ca2+ 运动的影响。【结果】 与对照组相比,反义寡核苷酸转染对TG触发的PC12细胞静息[Ca2+]i的Ratio值和Ca2+ 释放量的Ratio值无显著影响(P>0.05)?但使Ca2+ 内流量明显升高(P<0.05)?Ca2+ 池操纵性Ca2+ 通道(store-operated Ca2+ channels, SOCC)阻断剂SK&;F96365可以浓度依赖的抑制TG触发的PC12细胞Ca2+ 内流,但与随义?正义寡核苷酸转染组相比, SK&;F96365对反义转染组细胞Ca2+ 内流的抑制作用明显增强(P<0.05)。【结论】 ClC-3蛋白参与TG触发的Ca2+ 池操纵的Ca2+ 内流(store-operated Ca2+ entry,SOCE),但对细胞静息钙水平及钙释放过程没有影响。     

扁平苔藓皮损区caspase-3的表达与意义

目的:探讨凋亡基因caspase-3在扁平苔藓(Lichen planus,Lp)病变中的作用。方法:采用免疫组化法对30例扁平苔藓皮损和30例正常皮肤组织凋亡相关蛋白caspase-3的表达情况进行检测。结果:扁平苔藓组caspase-3蛋白表达率高于正常对照组的表达率,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:caspase-3作为凋亡的最终效应分子,可能在扁平苔藓病变中起到重要作用。     

胃癌caspase-3表达及其与细胞凋亡的关系研究

目的 研究caspase-3表达在胃癌发生发展中的作用.方法 采用免疫组化S-P法观察113例胃癌旁上皮细胞、原发灶癌细胞和浸润淋巴细胞以及转移灶癌细胞中caspase-3表达,TUNEL法检测上述组织的细胞凋亡,并分析原发灶癌细胞中caspase-3表达与胃癌临床病理特征的关系,并探讨caspase-3表达与细胞凋亡的关系.结果 caspase-3在50.4%(57/113)的胃癌旁上皮细胞中表达,高于原发灶癌细胞中的阳性率32.7%(37/113)(P<0.05);caspase-3在胃癌原发灶浸润淋巴细胞中的阳性率为70.8%(80/113),高于胃癌旁上皮细胞和原发灶癌细胞中阳性率(P<0.05);58.1%(25/43)的转移灶癌细胞中caspase-3表达阳性,其阳性率高于对应原发灶癌细胞(34.2%,13/38)(P<0.05);原发灶癌细胞中caspase-3表达与胃癌患者的年龄、性别以及胃癌肿瘤大小、浸润深度、转移、TNM分期、生长方式和分化程度无相关性(P>0.05).原发灶癌细胞和浸润淋巴细胞及转移灶癌细胞中细胞凋亡指数明显低于癌旁上皮细胞(P<0.01).结论胃癌原发灶癌细胞中caspase-3表达下调和浸润淋巴细胞中caspase-3表达上调与胃癌发生有关,由caspase-3介导的细胞凋亡与胃癌的发生与发展有关.     

Caspase-3和Bcl-2在骨肉瘤中的表达及意义

目的：探讨Caspase-3及Bcl-2的异常表达与骨肉瘤发生、发展的关系。方法：应用免疫组织化学方法检测骨肉瘤、骨软骨瘤中Caspase-3和Bcl-2的表达,并结合临床资料对结果进行统计学分析。结果：在41例骨肉瘤患者中,Caspase-3阳性19例,阳性率为46．3％,低于骨软骨瘤中Caspase-3的表达;其中G1期骨肉瘤表达明显高于G2期（P〈0．05）;Bcl-2阳性表达14例,阳性率为34．1％,显著高于骨软骨瘤;其中G1期组的表达明显高于G2期组（P〈0．001）。14例Bcl-2阳性的骨肉瘤病例中,Caspase-3阳性13例,两者阳性比率为92．9％;27例Bcl-2阴性的病例中,Caspase-3阴性22例,两者阴性比率为81．5％。两者有很好的相关性（P〈0．001）。结论：Bcl-2对细胞凋亡的抑制是骨肉瘤的早期分子事件,同骨肉瘤的发生关系密切,Caspase-3表达下调同骨肉瘤的发生、发展有关,在骨肉瘤中细胞凋亡的抑制是两者相互作用的结果。     

高压氧对短暂前脑缺血小鼠海马半胱天冬酶-3表达的影响

旨在通过测定缺血再灌注时半胱天冬酶 3(caspase 3)的表达以及高压氧对表达的影响 ,从细胞凋亡的角度探讨高压氧治疗脑缺血的分子生物学机制。将C5 7BL/ 6N小鼠分为假手术组 (正常对照组 )、缺血再灌注组 (I/R组 )及缺血再灌注加高压氧治疗组 (HBO组 ) ,后 2组夹闭双侧颈总动脉 2 0min后再通血流 ,建立脑缺血再灌注模型 ,分别于再灌注 6h、12h、2 4h和 4 8h取海马。采用半定量反转录 PCR及蛋白免疫印迹 (WesternBlotting)方法分别检测caspase 3在转录水平(mRNA)及翻译水平的表达变化。结果 :各I/R组及HBO组海马中caspase 3mRNA及酶原表达水平与假手术组相比均有明显升高 ,且差异有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ;各I/R组与相应时相点HBO组caspase 3mRNA及酶原表达水平相比差异均无统计学意义 (P >0 .0 5 )。提示 :脑缺血再灌注损伤诱发caspase 3转录水平增加 ,而且这是引起其酶原增加的主要原因 ;caspase 3介导的细胞凋亡参与了缺血再灌注损伤 ;本实验中所采用的HBO治疗方案对caspase 3转录及酶原水平无明显作用。     

应用组织芯片技术研究caspase-3、bcl-2在大肠腺癌中的表达及临床意义

目的探讨凋亡相关基因caspase-3和bcl-2在大肠腺瘤及大肠腺癌组织中的表达及其意义。方法采用高通量的组织芯片技术及免疫组织化学S-P法检测115例大肠腺癌组织、19例大肠腺瘤组织和12例正常大肠组织中caspase-3和bcl-2的表达。结果在正常大肠黏膜、腺瘤和大肠腺癌组织中caspase-3的阳性表达率分别为83.33%、47.37%、41.74%,bcl-2的阳性表达率分别为25%、84.21%、58.26%;正常黏膜组织caspase-3的表达高于大肠腺瘤和大肠腺癌,而bcl-2表达低于后两者,差异均有统计学意义（均P〈0.05）。caspase-3和bcl-2的阳性表达率与大肠腺癌患者的组织分化程度相关（P〈0.05）。结论组织芯片技术是大规模平行检测多基因蛋白表达的一种有效方法。caspase-3和bcl-2可能在大肠腺癌的发生、发展中起了重要作用。     

芦荟凝胶对多柔比星外渗性损伤的防治及其机制初探

目的观察芦荟凝胶对大鼠多柔比星外渗性损伤的防治作用,初步探讨芦荟凝胶促进大鼠多柔比星外渗性损伤伤口愈合的机制。方法建立SD大鼠多柔比星外渗性损伤动物模型,并随机分为正常组、多柔比星组和芦荟凝胶组（芦荟凝胶0.1、1.0 g或10.0 g/L）。测量外渗性损伤的面积以观察损伤程度,HE染色观察病理形态学改变,Western bloting检测损伤部位的皮肤及皮下组织中bcl-2和caspase-3的表达情况。结果多柔比星外渗性损伤11天后其损伤面积达最大值;芦荟凝胶能浓度依赖性地减轻多柔比星作用11天后的外渗性损伤面积（P〈0.01）。HE染色结果显示：不同浓度的芦荟凝胶组大鼠外渗性损伤处其损伤程度轻于多柔比星组。多柔比星能显著抑制皮肤及皮下组织中的bcl-2蛋白表达,芦荟凝胶能显著促进皮肤及皮下组织中的bcl-2蛋白表达,并减轻多柔比星对皮肤及皮下组织中bcl-2蛋白表达的抑制作用。多柔比星能显著促进皮肤及皮下组织中的caspase-3蛋白的表达,芦荟凝胶本身对caspase-3蛋白的表达无明显作用,但可显著抑制多柔比星对皮肤及皮下组织中caspase-3蛋白表达的上调作用。结论芦荟凝胶对大鼠多柔比星外渗性损伤有良好的防治作用,其机制可能与其促进bcl-2的表达和抑制caspase-3的表达有关。     

槲皮素对急性心肌缺血大鼠心肌caspase-3基因蛋白表达的影响

为观察槲皮素对急性心肌缺血大鼠心肌细胞半胱氨酸蛋白酶 3 (caspase 3 )基因蛋白表达的影响 ,采用大鼠急性心肌缺血模型 ,应用免疫组织化学PAP法检测caspase 3基因蛋白的表达 ,并用图像分析系统进行定量分析。发现 :大鼠急性心肌缺血后心肌细胞caspase 3基因蛋白表达明显增强 ,槲皮素预保护可降低caspase 3基因蛋白的表达。提示 :槲皮素对急性心肌缺血损伤有保护作用 ,这种保护作用可能是通过抑制心肌细胞caspase 3基因蛋白的表达实现的。