参附益心颗粒对AngⅡ诱导的H9c2心肌细胞葡萄糖、脂肪酸代谢相关因子表达的影响

目的：明确参附益心颗粒对AngⅡ诱导的H9c2心肌细胞葡萄糖、脂肪酸代谢相关因子表达的影响。方法：血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导H9c2心肌细胞构建心肌细胞损伤模型,钙黄绿素标记检测细胞活性,ATP检测试剂盒检测ATP含量,电子显微镜观察线粒体超微结构,RT-PCR检测葡萄糖代谢相关因子AMPK、PDH、GLUT-4基因表达,Western Blot检测AMPK、PDH、GLUT-4蛋白表达,脂肪酸代谢相关因子FAT、MCPT-1、MCAD蛋白表达。结果：与模型组比较,参附高剂量组、氯沙坦组、辅酶Q10组H9c2细胞活性、ATP含量增加（P<0.01,P<0.05）;电子显微镜结果显示：参附益心颗粒、氯沙坦、辅酶Q10均可改善线粒体超微结构,与模型组比较,可见细胞膜表面微绒毛样突起减少,细胞膜完整,线粒体嵴丰富,包膜完整,部分细胞内质网、线粒体肿胀。RT-PCR结果显示：AngⅡ诱导下,H9c2心肌细胞AMPK、PDH基因表达增高（P<0.01）,GLUT-4基因表达降低（P<0.01）;参附高剂量组、氯沙坦组、辅酶Q10组AMPK、PDH基因表达降低（P<...     

二参颗粒对氯化钴诱导的H9C2细胞氧化应激介导的细胞凋亡的保护作用

目的:通过观察二参颗粒对氯化钴(CoCl_2)诱导的缺氧损伤和大鼠心肌细胞H9C2凋亡的影响,阐明二参颗粒对心脏的保护作用。方法:以500μmol/L的CoCl_2与H9C2细胞共同作用24 h,建立心肌细胞缺氧缺血模型。将H9C2细胞分为空白对照组、模型对照组、二参颗粒50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL组。酶联免疫法检测胞外培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量,流式细胞术检测胞内活性氧(ROS)含量、线粒体膜电位(MMP)和凋亡水平,蛋白质印迹分析法检测细胞内Bcl-2/Bax、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Cleaved PARP的表达水平。结果:与空白对照组比较,模型对照组细胞活力下降、活性氧(ROS)荧光表达值升高、线粒体膜电位JC-1单体阳性细胞显著升高以及细胞培养液中LDH含量升高,凋亡率显著升高,凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Cleaved PARP的蛋白表达上调,Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,二参颗粒能有效改善细胞活力,降低LDH的含量,显著降低胞内ROS荧光表达值,改善线粒体膜电位和凋亡水平,下调凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9和Cleaved PARP的蛋白表达,升高Bcl-2/Bax的比值(P<0.05或P<0.01)。结论:二参颗粒可以抑制CoCl_2诱导的心肌细胞ROS水平,减少氧化应激发生,进而改善氧化应激介导的心肌细胞的细胞凋亡。     

西红花酸对阿霉素诱导大鼠心肌细胞损伤的影响

目的观察西红花酸对阿霉素诱导的大鼠心肌细胞损伤的影响,从线粒体角度探讨其作用机制。方法培养H9c2大鼠心肌细胞,阿霉素诱导建立心肌细胞损伤模型。细胞分为正常组、模型组(阿霉素10μmol/L)、西红花酸高剂量组(阿霉素10μmol/L+西红花酸20μmol/L)、西红花酸低剂量组(阿霉素10μmol/L+西红花酸10μmol/L),给药6 h后CCK-8法检测细胞存活率,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,JC-1荧光探针检测线粒体膜电位,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达,免疫荧光检测Caspase-8蛋白表达。结果与正常组比较,模型组H9c2细胞存活率降低(P0.01),细胞内ROS水平升高(P0.001),线粒体膜电位降低(P0.001),细胞凋亡率升高(P0.001),cleaved Caspase-3蛋白表达升高,cleavedCaspase-3/proCaspase-3比值升高(P0.01),Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,Bcl-2/Bax比值显著降低(P0.001),Caspase-8蛋白表达明显升高(P0.001);与模型组比较,西红花酸高、低剂量组H9c2细胞存活率显著升高(P0.01,P0.05),ROS水平显著降低(P0.001),线粒体膜电位升高(P0.001),细胞凋亡率降低(P0.01),cleaved Caspase-3蛋白表达降低,cleaved Caspase-3/pro Caspase-3比值降低(P0.001,P0.05),Caspase-8蛋白表达显著降低(P0.001),西红花酸高剂量组Bcl-2蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低,Bcl-2/Bax比值显著升高(P0.01)。结论西红花酸可保护阿霉素致心肌细胞损伤,其机制可能与保护线粒体、抑制细胞凋亡相关。     

参麦注射液对乳鼠心肌细胞线粒体凋亡通路的影响

目的:探讨参麦注射液对心肌细胞凋亡通路的影响。方法:原代培养心肌细胞,AngⅡ诱导凋亡。MTT法检测线粒体活性,流式细胞仪检测凋亡率及线粒体膜电位,免疫组化染色检测细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达。结果:参麦注射液明显降低细胞凋亡率,增高线粒体活性和膜电位,升高Bcl-2蛋白表达,降低Bax、Caspase-3蛋白表达。结论:参麦注射液可抑制心肌细胞凋亡,其机制与线粒体凋亡通路密切相关。     

参附益心方对缺氧条件下原代心肌细胞葡萄糖利用的作用研究

目的观察参附益心方在缺氧条件下对原代心肌细胞葡萄糖利用的作用。方法取新生1～3天的SD乳鼠,进行原代心肌细胞分离、培养、鉴定,利用缺氧条件建立原代心肌细胞模型,筛选参附益心方0.25、0.5mg/ml、辅酶Q10 1×10~(-4)mol/L进行干预,实验共设5组:正常组,模型组,参附益心方低剂量组(0.25mg/ml)、高剂量组(0.5mg/ml)和辅酶Q10组(1×10~(-4)mol/L),试剂盒检测各组ATP含量及乳酸脱氢酶(LDH)含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测AMP激活的蛋白激酶(AMPK)、丙酮酸脱氢酶(PDH)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT-4)基因表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测GLUT-4蛋白的表达。结果与正常组相比,模型组原代心肌细胞ATP含量及GLUT-4基因与蛋白表达含量明显降低, AMPK、PDH基因表达及LDH含量明显升高(P0.05,P0.01)。与模型组比较,参附益心方高剂量组可提高缺氧条件下原代心肌细胞ATP含量与GLUT-4基因和蛋白表达,降低AMPK和PDH的基因表达及LDH含量(P0.05,P0.01);参附益心方低剂量组可降低心肌细胞LDH含量,提高GLUT-4基因和蛋白表达(P0.05,P0.01)。参附益心方对心肌细胞ATP和LDH含量、AMPK和PDH基因表达,GLUT-4基因和蛋白表达作用呈剂量依赖性。结论参附益心方可通过提高缺氧条件下原代心肌细胞GLUT-4基因和蛋白表达,并降低LDH含量、回调心肌AMPK和PDH的基因表达,从而提高缺氧条件下原代心肌细胞葡萄糖的利用,改善心肌ATP储备。     

益气温阳活血利水方对AngⅡ诱导H9c2心肌细胞线粒体凋亡途径的影响

目的观察益气温阳活血利水方含药血清对AngII诱导H9c2心肌细胞线粒体凋亡途径相关Bax、Bcl-2、Caspase-9基因及蛋白的表达变化,探讨益气温阳活血利水方对AngII诱导H9c2心肌细胞凋亡的保护作用的机制。方法AngII诱导H9c2心肌细胞凋亡模型,采用血清药理学方法制备益气温阳活血利水方含药血清并进行干预,使用qRT-PCR、Western Blot、免疫组化方法检测Caspase-9 mRNA和蛋白及Bax、Bcl-2蛋白表达变化。结果益气温阳活血利水方含药血清可提高Bcl-2蛋白表达,降低Bax蛋白表达,下调Caspase-9基因及蛋白的表达水平,且含药血清高剂量组改善作用最好。结论益气温阳活血利水方含药血清对AngII诱导H9c2心肌细胞凋亡的保护作用是通过调节线粒体凋亡途径相关Bcl-2、Bax基因蛋白的表达,从而抑制Caspase-9的表达实现的。     

参附益心方对缺氧条件下大鼠原代心肌细胞线粒体DNA相关基因表达的影响＊

目的 研究参附益心方（SF）对缺氧条件下大鼠原代心肌细胞线粒体DNA相关基因表达的影响。方法 取1~3 d SD新生大鼠，分离、培养、鉴定原代心肌细胞。CCK-8检测SF、辅酶Q10（Coenzyme Q10）最适浓度。实验分为Normal（正常）组、Model（缺氧）组、SFL（参附益心方低剂量）组、SFH（参附益心方高剂量）组、Coenzyme Q10组，后三组在缺氧模型基础上分别给予SF 0.25 mg/ml、SF 0.5 mg/ml、Coenzyme Q10 10 1 × 10^-4 mol/L对细胞进行干预，收集细胞并用相关试剂盒检测ATP含量及乳酸脱氢酶（LDH）含量，RT-PCR检测ND-1、ND-2、COX、tfam基因的表达。结果 与Normal组相比，Model组心肌细胞ATP含量显著下降，LDH含量显著升高，ND-1、ND-2、COX、tfam基因表达显著降低，差异具有统计学意义(P ＜ 0.05)。与Model相比，SFL组LDH含量下降，ND-2、COX基因表达升高，差异具有统计学意义(P ＜ 0.05)；SFH组ATP含量升高，LDH含量下降，ND-1、ND-2、COX基因表达升高，差异具有统计学意义(P ＜ 0.05)。结论 参附益心方可上调原代心肌细胞线粒体DNA相关基因COX、ND1、ND2的表达，提高心肌ATP的含量，降低LDH含量，并呈剂量依赖性。     

参附益心颗粒对缺氧诱导的大鼠H_9C_2心肌细胞能量代谢的影响

目的探讨参附益心颗粒治疗慢性心力衰竭的可能作用机制。方法以不同浓度(0. 1、0. 2、0. 3、0. 4、0. 5、0. 6、0. 9、1. 2 mg/ml)的参附益心颗粒处理H_9C_2细胞24 h,MTT法检测细胞活性,筛选后续实验的药物浓度。将H_9C_2细胞分为正常组(正常培养)、模型组(缺氧6 h)、曲美他嗪组(1×10~(-4)mol/L曲美他嗪+缺氧6 h)、辅酶Q10组(1×10~(-4)mol/L辅酶Q10+缺氧6 h)及中药低剂量组(0. 25 mg/ml参附益心颗粒+缺氧6h)、中药高剂量组(0. 5 mg/ml参附益心颗粒+缺氧6h),检测各组心肌细胞ATP含量、底物代谢酶脂肪酸转运酶(FAT)、肉碱脂酰转移酶1 (MCPT-1)、中链脂酰辅酶A脱氢酶(MCAD)、磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)、丙酮酸脱氢酶(PDH)、葡萄糖转运子4 (GLUT-4)、腺苷酸转运体(ANT)、肌酸激酶(CK)蛋白表达水平;观察各组H_9C_2心肌细胞超微结构的变化。将H_9C_2细胞分为正常组、模型组、中药组(0. 5 mg/ml参附益心颗粒+缺氧6 h),JC-1染色检测线粒体膜电位变化。结果 0. 5 mg/ml参附益心组及低于此浓度组无细胞毒性,以0. 5 mg/ml参附益心颗粒用于中药组。与正常组比较,模型组H_9C_2细胞ATP含量及FAT、MCPT-1、MCAD、GLUT-4、ANT、CK蛋白含量明显降低,AMPK、PDH蛋白含量明显升高(P 0. 05)。与模型组比较,中药组和辅酶Q10组心肌细胞中ATP含量及FAT、MCPT-1、MCAD、GLUT-4、ANT、CK蛋白含量均明显升高(P 0. 05)。正常组细胞线粒体结构正常,模型组细胞膜破裂,线粒体肿胀,边界模糊不清。与模型组对比,中药组细胞损伤明显减轻,细胞膜完整,线粒体结构清晰。JC-1染色显示中药组可以改善线粒体膜电位的下降。结论参附益心颗粒可能通过升高心肌H_9C_2细胞ATP、GLUT-4、ANT、FAT、MCPT-1、MCAD、CK蛋白表达,降低AMPK、PDH蛋白表达,改善缺氧诱导H_9C_2心肌细胞线粒体膜电位,从而发挥治疗慢性心力衰竭的作用。     

槲皮素保护H2O2诱导的H9C2心肌细胞氧化损伤的作用机制

目的:探讨在H_2O_2诱导的氧化应激损伤中槲皮素对H9C2心肌细胞存活率、活性氧分子(ROS)、还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶、细胞凋亡等关键因子的影响,初步阐明槲皮素对心肌细胞的保护机制。方法:H_2O_2刺激H9C2心肌细胞建立氧化应激损伤模型,分为正常组、模型组、槲皮素组,采用噻唑蓝(MTT)法检测心肌细胞活力,活性氧检测试剂盒检测槲皮素处理后ROS变化,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测细胞氧化应激反应、细胞凋亡机制相关分子[NADPH氧化酶-4(NOX-4),NADPH氧化酶亚单位p22phox,B淋巴细胞瘤-2原瘤基因(Bcl-2),Bcl-2相关X基因(Bax),半胱胺酸蛋白酶-8(Caspase-8)]基因和蛋白表达水平。结果:10μmol·L-1槲皮素具有显著的抗氧化、抗凋亡作用。与模型组比较,槲皮素组细胞存活率明显提高(P0.05),ROS水平与细胞凋亡率明显降低(P0.05,P0.01)。此外,槲皮素组中Bcl-2,NOX-4基因表达上调(P0.05);p22phox,Bax,Caspase-8基因表达明显下调(P0.05)。同时槲皮素能够抑制Bax,p22phox蛋白的表达(P0.05),上调磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K),Bcl-2蛋白的表达(P0.05)。结论:10μmol·L-1槲皮素能有效减少H_2O_2介导的心肌细胞氧化损伤,进而抑制心肌细胞凋亡。该机制可能是通过调节NADPH氧化酶亚型NOX-4与p22phox,减少ROS生成,激活PI3K表达,升高Bcl-2实现。     

香青兰总黄酮对阿霉素心肌毒性的保护机制研究

目的 探讨香青兰总黄酮（TFDM）对阿霉素心脏毒性的保护作用及相关机制。方法 大鼠心肌细胞H9c2细胞随机分为对照组、模型组和TFDM治疗组（5、25、50、100 μg/mL）。药物干预后,除对照组外,其余各组细胞采用阿霉素1 μmol/L作用24 h制备心脏毒性模型。采用CCK-8法测定TFDM干预后阿霉素损伤对H9c2细胞活力的影响;采用试剂盒法测定各组细胞乳酸脱氢酶（LDH）释放情况及细胞内超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平;采用Annexin-V FITC/PI双染法通过流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;采用DCFH-DA、JC-1探针检测细胞内活性氧（ROS）和线粒体膜电位;采用Western blotting检测各组细胞中p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）通路相关蛋白表达。结果 与对照组比较,阿霉素诱导的模型组细胞活力下降,LDH、MDA水平升高,SOD活性降低,细胞凋亡率升高,ROS释放显著增多,线粒体膜电位显著下降,而TFDM则剂量依赖性地使细胞活力升高,LDH、MDA水平下降,SOD活性升高,细胞凋亡率降低,ROS释放显著减少,线粒体膜电位显著升高;Western blotting结果显示,与对照组比较,模型组细胞p-PI3K、p-Akt、p-ERK、Bcl-2蛋白表达水平降低,p-p38MAPK、Bax、Caspase-3蛋白表达水平显著升高;与模型组比较,TFDM使细胞中p-PI3K、p-Akt、p-ERK、Bcl-2蛋白表达水平升高,p-p38MAPK、Bax、Caspase-3蛋白表达水平降低。结论 TFDM能够保护心肌细胞,可能通过抗氧化应激,保护心肌细胞线粒体,调节MAPK、PI3K/Akt凋亡通路及其下游凋亡分子的表达抑制细胞凋亡。     

参芎葡萄糖注射液对H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨参芎葡萄糖注射液(Shenxiong glucose injection,SGI)对过氧化氢(H2O2)诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用及其机制。方法:体外培养H9c2心肌细胞,用H2O2(300μmol·L-1)处理0.5 h,建立H9c2心肌细胞H2O2氧化损伤模型,SGI组:H9c2细胞用(100,200,400μmol·L-1)SGI处理6 h后,另设空白组与模型组,再用H2O2处理0.5 h。利用流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)和线粒体膜电位(MMP);用MTS法检测细胞存活率;用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;用蛋白质免疫印迹(Western blot)技术检测凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)的表达情况。结果:在300μmol·L-1H2O2作用细胞0.5 h的情况下,细胞存活率降低至50%左右,降低的程度合适,且实验结果重复性好,因此后续实验用该条件建立氧化损伤模型。与模型组比较,SGI预处理6 h能显著升高细胞存活率(P0.05,P0.01),减少LDH的外漏和MDA的生成(P0.05,P0.01),显著增加SOD,GSH-Px和CAT的活性(P0.01),明显减少H9c2细胞内ROS含量(P0.01),并使MMP丢失减少(P0.01),Western blot表明,SGI能显著上调Bcl-2的表达,下调Caspase-3的表达(P0.05,P0.01)。结论:参芎葡萄糖注射液能保护H9c2心肌细胞对抗H2O2诱导的氧化损伤,其作用机制可能与其提高细胞清除ROS能力和抑制细胞凋亡有关。     

北葶苈子炮制前后对H_2O_2诱导的H9c2心肌细胞损伤保护作用

目的比较北葶苈子炮制前后对H_2O_2诱导的H9c2心肌细胞损伤的保护作用。方法 H_2O_2诱导H9c2细胞建立细胞损伤模型,同时加入北葶苈子生品及炮制品(400、200、100μg/mL)处理细胞6 h。MTT法检测H9c2细胞存活率,流式细胞术检测细胞ROS、线粒体膜电位、细胞凋亡率、自噬空泡,Incell-Western法检测细胞凋亡相关蛋白,并检测细胞LDH、MDA、T-SOD、GSH-PX水平。结果与模型组比较,北葶苈子炮制前后均能降低H9c2细胞凋亡率、自噬空泡、ROS水平及凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2比值(P0.01),增加线粒体膜电位(P0.01),降低细胞培养液中LDH及细胞MDA水平(P0.01),提高细胞T-SOD、GSH-PX水平(P0.05,P0.01);北葶苈子炮制品抑制caspase-3蛋白表达(P0.05)。结论北葶苈子炮制前后均可有效改善由H_2O_2诱导的心肌细胞损伤,可能与其调节氧化应激的作用有关。     

南葶苈子抑制氧化应激与自噬通路抗H_2O_2诱导的H9c2细胞损伤作用研究

目的探究南葶苈子水提物(DS)对H_2O_2诱导的心肌H9c2细胞损伤的保护作用及潜在机制。方法使用高效液相色谱与质谱联用方法分析鉴定DS中主要成分峰。采用H_2O_2处理制备H9c2细胞损伤模型,分为对照组、模型组、普罗布考组及DS 100、200、400μg/m L组,MTT法检测H9c2细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞自噬水平、线粒体膜电位;试剂盒检测细胞氧化应激相关指标;Incell-Western法检测凋亡通路关键蛋白和自噬标志性蛋白表达水平。结果共分析鉴定了DS中含量最高的7种成分。与模型组比较,DS可以提高H9c2细胞活力(P0.05、0.01)与细胞存活率(P0.01),改善线粒体膜电位水平(P0.01),调节凋亡通路关键蛋白Caspase-3和Bax/Bcl-2蛋白表达(P0.01),抑制心肌细胞凋亡;并能极显著降低细胞自噬水平(P0.01),升高自噬标志性蛋白自噬微管相关蛋白轻链3B(LC3B)、p62表达水平(P0.01),抑制心肌细胞自噬;降低心肌活性氧(ROS)水平(P0.01),调节细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)水平(P0.01),改善心肌细胞氧化应激。结论 DS可以有效保护由H_2O_2引起的H9c2细胞损伤,其机制可能与改善细胞的氧化应激、抑制细胞凋亡和自噬有关,其物质基础可能与所含的黄酮苷类成分有关。     

黄精多糖对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用

目的:探究黄精多糖(Polygonatum sibiricum polysaccharides,PSP)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia-reoxygenation,H/R)损伤的保护作用。方法:体外无菌培养H9c2心肌细胞,制备缺氧/复氧损伤模型。应用A0-EB和Hoechst33324染色法观察心肌细胞凋亡形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用MTT法检测心肌细胞存活率,Westen Blot法检测H9c2心肌细胞Caspase-3、Bcl-2及Bax蛋白表达。结果:缺氧/复氧模型组中H9c2细胞存活率明显降低,细胞核浓染致密、固缩,细胞凋亡率明显增加,Caspase-3的表达和Bax/Bcl-2比率显著上调;与模型组比较,黄精多糖1.0、1.5、2.0mg/ml药物组中细胞存活率均明显升高,细胞核淡染,轻微缩小,细胞凋亡率降低,Bax/Bcl-2比率明显下调,Caspase-3表达水平被显著抑制。结论:黄精多糖对H/R诱导的H9c2心肌细胞具有保护作用,其作用可能与抑制心肌细胞凋亡有关。     

丹红注射液抗H9c2细胞凋亡的作用机制研究

[目的]从线粒体损伤角度研究丹红注射对异丙肾上腺素(ISO)诱导的心肌细胞H9c2凋亡的影响。[方法]培养H9c2细胞,分为对照组、10μmol/L ISO模型组,10μmol/L ISO和20、200μL/L丹红注射液组。按相应给药时间后采用流式细胞术检测细胞凋亡,明确药物对细胞凋亡的作用。活细胞荧光成像仪检测细胞线粒体膜电位变化、激光共聚焦检测细胞内活性氧簇(ROS)的产生、Fluo-3 AM ester荧光染料染色检测细胞内钙离子浓度研究丹红注射液抗心肌细胞凋亡的相关作用机制。[结果]与对照组(1.33%±0.42%)相比,ISO显著上升细胞凋亡率(5.13%±0.15%)(P0.01);与ISO组比较,20、200μL/L丹红注射液后,细胞凋亡率分别下降为(4.23%±0.15%)和(2.37%±0.38%)。与对照组相比,给予ISO后细胞内线粒体膜电位去极化程度显著增加,为对照的(151.76%±16.01%)(P0.01),20、200μL/L丹红注射液显著抑制ISO诱导的细胞内线粒体膜去极化,分别为对照的(121.07%±11.53%)和(117.15%±12.91%)。此外,丹红注射液显著抑制ISO诱导的细胞内ROS浓度及钙离子浓度的升高,差异具有统计学意义。[结论]丹红注射液可通过抑制ISO引起的细胞内线粒体膜电位去极化、降低细胞内ROS和钙离子浓度而发挥其抗H9c2细胞凋亡作用。     

当归补血汤水提液预处理对缺氧/复氧H9c2心肌细胞线粒体损伤保护机制研究

目的探讨当归补血汤预处理对缺氧/复氧H9c2心肌细胞线粒体损伤保护机制。方法复制缺氧/复氧大鼠H9c2心肌细胞损伤模型,以始终在正常培养条件下的心肌细胞为正常对照组,将预先加入当归补血汤的细胞(当归补血汤组)在正常条件下培养24 h,与未处理细胞(模型组)同时进行缺氧/复氧培养,JC-1染色,流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧簇(ROS)水平,RT-PCR荧光相对定量检测B淋巴细胞瘤2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(Bax)、bcl-2/腺病毒E1B 19 000相互作用蛋白3(Bnip3)的mR NA表达水平,Western blot检测细胞色素C蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,模型组线粒体膜电位下降的细胞比例显著增加(P0.05),细胞内ROS水平增加明显(P0.05),细胞色素C蛋白表达显著升高(P0.05),Bcl2 mR NA表达水平明显降低(P0.05),Bax mR NA表达水平显著升高(P0.05)。当归补血汤干预后,与模型组比较,线粒体膜电位下降的细胞明显减少(P0.05),细胞色素C蛋白表达水平显著降低(P0.05),Bcl2 mR NA水平显著升高,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 H9c2心肌细胞缺氧/复氧后,线粒体膜电位明显下降,细胞色素C释放增加。当归补血汤可能通过促进Bcl2表达,减少ROS产生等机制稳定心肌细胞线粒体膜电位,减轻复氧后对线粒体功能的损伤作用。     

氧化苦参碱对高糖引起的H9C2细胞氧化应激损伤的影响

目的:研究氧化苦参碱对高糖诱导H9C2细胞氧化应激损伤的保护机制。方法:分组培养H9C2心肌细胞并分为空白组,高糖组,氧化苦参碱低、高剂量组(50,100 mg·L^-1),阳性药维生素E组(1×10^-4 mol·L^-1),甘露醇等渗组。通过乳酸脱氢酶外漏法检测细胞损伤,检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量变化,通过荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)含量和细胞线粒体功能的完整性,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组细胞内MDA,ROS含量,Bax蛋白表达水平显著升高(P<0.01),而SOD活性、线粒体膜电位和Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。与高糖组比较,氧化苦参碱显著降低乳酸脱氢酶的外泄、显著抑制细胞内ROS的产生(P<0.01),明显降低MDA的含量和Bax蛋白的表达(P<0.05),增加SOD活性、线粒体膜电位和Bcl-2蛋白的表达(P<0.01)。结论:氧化苦参碱通过改善线粒体功能来调节氧化应激从而抑制由高糖引起的H9C2心肌细胞凋亡。     

心肌片对缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的:观测心肌片对缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响及可能机制。方法:H9c2细胞随机分为对照组、模型组、心肌片低中高剂量组,预给药24h后,建立心肌缺血/再灌注损伤(MI/RI)模型。检测细胞存活率,LDH释放水平,蛋白印迹法检测心肌细胞凋亡相关基因Bax,Bcl-2,Caspase-3,Cyt-C蛋白的表达以及AMPK磷酸化水平。结果:与模型组比较,心肌片提高细胞存活率,减少LDH水平,稳定线粒体膜电位,减少Bax,Caspase-3以及Cyt-C蛋白的表达,增加Bcl-2蛋白的表达,提高Bcl-2/Bax的比值(P0.05)。进一步研究发现,这些保护作用被AMPK抑制剂Compound C取消。结论:心肌片能减轻心肌缺血再灌注损伤,抑制心肌细胞凋亡,其机制可能通过激活AMPK信号通路实现的。     

抗纤益心方对去甲肾上腺素诱导H9c2心肌细胞凋亡及凋亡相关因子表达的影响

目的探讨抗纤益心方对去甲肾上腺素(NE)诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响及可能作用机制。方法采用CCK-8法筛选抗纤益心方最佳给药浓度。大鼠H9c2心肌细胞常规培养,饥饿8 h后细胞进行分组,正常组未做处理,模型组加100μmol/L的NE 100μl,抗纤益心方组加入筛选最佳浓度抗纤益心方溶液2μl+100μmol/L的NE 100μl、卡托普利组加入2×10~(-5)mol/L卡托普利5μl+100μmol/L的NE 100μl,各组设3个复孔,作用24 h。流式细胞仪检测细胞凋亡率,并检测凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA和蛋白的表达。结果最终筛选以0. 25 mg/ml的抗纤益心方为干预浓度进行实验。与正常组比较,模型组细胞凋亡率升高,Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达升高,Bcl-2 mRNA和蛋白表达降低(P 0. 01)。与模型组比较,抗纤益心方组和卡托普利组细胞凋亡率降低,Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达降低,Bcl-2 mRNA和蛋白表达升高(P 0. 05或P 0. 01)。结论抗纤益心方可抑制NE诱导的H9c2心肌细胞凋亡,其作用机制可能与调节凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达有关。     

姜黄素通过调控脂多糖诱导的炎症抑制软骨细胞凋亡

目的探讨姜黄素通过调控脂多糖(LPS)诱导的炎症抑制软骨细胞凋亡。方法取4周龄SD雌性大鼠,分离原代软骨细胞,甲苯胺蓝染色鉴定细胞。将软骨细胞分为对照组、模型组及姜黄素低、中、高剂量组,除对照组外,其他组均采用LPS诱导软骨细胞炎症模型。姜黄素低、中、高剂量组分别加入5、10、20μmol/L姜黄素干预24 h。Hoechst 33258染色观察细胞形态及凋亡情况;流式细胞术检测细胞线粒体膜电位以及ROS水平;生化测定细胞内ATP浓度;Western blot检测Bcl-2、Bax、Cyt-c、caspase-3、caspase-9表达。结果模型组软骨细胞凋亡增加,线粒体膜电位降低,ATP浓度下降,ROS水平升高,Bcl-2蛋白表达下降,而Bax、Cyt-c、caspase-3及caspase-9蛋白表达均升高(P0.05)。姜黄素干预后,细胞凋亡减少,线粒体膜电位及ATP浓度均升高,ROS水平降低,Bcl-2表达升高,Bax、Cyt-c、caspase-3及caspase-9蛋白表达降低(P0.05),呈现出剂量依赖性。结论姜黄素可改善线粒体功能故障,通过调控线粒体介导的内源性途径抑制LPS诱导的炎症软骨细胞发生凋亡。