谷氨酰胺对肺腺癌A549细胞增殖、迁移及TNF-α和NF-κB表达的影响

摘 要：［目的］ 探讨谷氨酰胺（glutamine,Gln）对肺腺癌A549细胞增殖、迁移及TNF-α、NF-κB表达的影响。［方法］ 体外培养肺腺癌A549细胞株,CCK-8法检测不同浓度Gln（2、4、8、16、32、64 mmol/L）对A549细胞的增殖影响,筛选适宜浓度。Transwell 实验检测细胞迁移能力,ELISA法和Western Bolt法分别检测TNF-α、NF-κB p65蛋白表达。［结果］ （1） Gln对A549细胞的作用与干预浓度有关,缺乏Gln时细胞生长受限;低浓度Gln（2、4、8mmol/L）对细胞增殖无明显抑制作用;高浓度Gln（16、32、64mmol/L）作用下抑制作用明显（P<0.01）并呈时间依赖性,且32mmol/L和64mmol/L两组作用无明显差异（P>0.05）。（2）与对照组相比,Gln组明显降低A549细胞迁移数;高浓度Gln组明显降低TNF-α、NF-κB p65蛋白的表达（P<0.01）,但32mmol/L和64mmol/L组之间无统计学差异（TNF-α分别为14.671±0.842pg/ml、14.867±1.21pg/ml,NF-κB p65分别为0.548±0.042、0.474±0.077）（P>0.05）。［结论］ Gln对肺腺癌A549细胞的作用与浓度有关,32mmol/L可能为最适抑制浓度。Gln可能通过下调TNF-α和NF-κB p65蛋白表达并抑制A549细胞的迁移发挥抗肺腺癌作用。     

RNAi抑制iASPP基因表达对大肠癌细胞凋亡的影响及机制

摘 要：［目的］ 探讨RNAi抑制iASPP基因表达对大肠癌细胞凋亡的影响。［方法］ 参照脂质体LipofectamineTM2000转染说明转染iASPP的siRNA（iASPP-siRNA组）进入人大肠癌LoVo细胞株,并设置阴性对照组（转染无义的siRNA序列）和空白对照组（仅加入脂质体）,Western bloting检测转染48h的3组细胞中iASPP的蛋白表达;CCK8法于转染的24h、48h、72h检测细胞活力;流式细胞术检测转染48h的细胞凋亡率;Western blotting检测Ki-67、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase3）、STAT3和磷酸化的信号转导与转录因子3(p-STAT3)的蛋白表达。［结果］ iASPP-siRNA组（0.108±0.013）LoVo细胞株iASPP的蛋白表达显著低于空白对照组（0.389±0.036）（P<0.05）;iASPP-siRNA组细胞在24h（0.267±0.034）、48h（0.495±0.067）和72h（0.682±0.068）的活力细胞均显著低于空白对照组（0.385±0.042、0.688±0.074、0.977±0.097）（P<0.05）,在48h的细胞凋亡率（11.18%±0.78%）显著高于空白对照组（2.13%±0.45%）（P<0.05）。Ki-67（0.126±0.018）和p-STAT3（0.110±0.012）的蛋白表达水平显著低于空白对照组（0.365±0.045、0.169±0.018）,Caspase3（0.197±0.020）表达水平高于空白对照组（0.086±0.009）（P<0.05）,3组间STAT3蛋白表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）。［结论］通过RNAi抑制iASPP基因表达可降低大肠癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,机制可能是下调STAT3信号,对细胞增殖的影响是下调Ki-67表达,凋亡的影响是上调Caspase3表达。     

新型硫色满酮衍生物抑制胃癌细胞生长与诱导胃癌细胞凋亡机制研究

摘 要：［目的］ 研究(顺)-3(氯代亚甲基)-5,7-二氯-硫色满-4-酮［(Z)-3( chloromethyl- ene)-5,7(dichloro)- thiochroman-4- ketone,CMDCT］对体外低、中、高分化的人胃癌细胞株生长抑制作用与诱导胃癌细胞凋亡机制研究。［方法］ MTT法测试CMDCT对3种胃癌细胞株的生长抑制;以中分化胃癌细胞(SGC-7901)为例,流式细胞术(FCM)和缺口末端核苷酸标记法(TUNEL)检测胃癌SGC-7901细胞的凋亡;ELISA法测定胃癌SGC-7901细胞内被激活的人半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的量;PCR检测Bcl-2、Bax、p53、Caspase-3基因表达;Western blot检测胃癌SGC-7901细胞中Bcl-2、Bax、p53、Caspase-3蛋白表达情况。［结果］CMDCT对3种胃癌细胞的生长具有显著抑制作用,随CMDCT浓度升高细胞生长的抑制率越高,当药物浓度为40μmol/L时,抑制率在(66．53%±2．47%)～(76．12%±1．35%)之间,和同浓度顺铂（DDP）组相比有较大差异;TUNEL检测胃癌SGC-7901细胞的凋亡指数：对照组为1．61%±0．23%;低浓度组为12．55%±1．44%;高浓度组61.15%±1．77%,加药组细胞凋亡指数明显高于对照组;流式细胞术结果显示,对照组凋亡率为4．78%±0．41%;加药组加入浓度10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L 药物后,凋亡率分别为(9．42%±1．27%),(21.07%±1．35%),(55．8%±10．03%),明显高于对照组细胞凋亡率;PCR和Western blot检测,与对照组对比,加药组的Bax、p53和Caspase-3基因和蛋白表达量均增高,均具有上调作用,Bcl-2基因和蛋白表达降低,呈下调趋势。 ［结论］ CMDCT对体外人低、中、高分化的3种胃癌细胞株均具有生长抑制作用,且可以诱导细胞凋亡,通过使具有促凋亡作用的p53、Bax、Caspase-3高表达,及抗细胞凋亡作用的Bcl-2的低表达,有效地诱导了胃癌SGC-7901细胞凋亡。     

NF-κBp65、Bcl-2、Bcl-xL蛋白在胰腺癌中的表达及其与P53和凋亡指数的关系

背景与目的:核因子κB通过调控下游bcl-2家族基因表达参入细胞凋亡调节过程,而p53除了参入细胞周期调节外也参入依赖bcl-2基因的细胞凋亡调控。在胰腺癌中NF-κBp65、Bcl-2和Bcl-xL蛋白表达与p53和凋亡的关系还不清楚。本研究系统地分析了核因子κBp65及其下游的bcl-2和bcl-xL抑凋亡基因在胰腺癌(PC)中的表达以及与P53蛋白表达和凋亡指数(AI)的关系。方法:免疫组化法检测25例胰腺导管腺癌(PC)和9例正常胰腺组织(NP)中P53蛋白表达;Western印迹法分析NF-κBp65蛋白表达;RT-PCR分析Bcl-2和Bcl-XL蛋白表达,TdT酶介导的原位缺口标记(TUNNEL)法了解胰腺癌细胞凋亡情况(AI)。结果:P53在PC组织阳性率(56%,14/25),高于NP组织阳性率(P<0.00);NF-κBp65、Bcl-2和Bcl-xL在PC组织表达相对值分别为:1.06±0.16、0.79±0.13、0.76±0.24,分别高于NP组织:0.23±0.016、0.23±0.074、0.18±0.026(分别P<0.05);14例p53阳性PC中,NF-κBp65、Bcl-2和Bcl-Xl表达相对值分别为:1.32±0.23、0.92±0.33、0.82±0.21;11例p53阴性PC中,NF-κBp65、Bcl-2和Bcl-xL表达相对值分别为:0.78±0.15、0.54±0.19、0.71±0.28(分别P<0.05,P<0.05,P>0.05);NF-κBp65和Bcl-2分别与P53表达有明显的正相关性(分别P<0.01,P<0.05),Bcl-xL与P53无相关性(P>0.05),NF-κBp65与Bcl-XL表达正相关(P<0.01),而NF-κBp65与Bcl-2表达无相关性(P>0.05);胰腺癌平均AI为(15.4±6.48)%,NF-κBp65表达与AI负相关(r=-0.297,P<0.05),而Bcl-2、Bcl-xL与AI无相关性(r=-0.203,P>0.05;r=-0.156,P>0.05)。结论:胰腺癌中抗凋亡因子表达上调,凋亡指数主要决定于NF-κBp65蛋白水平;NF-κBp65通过对下游bcl-xL基因表达的调控参与胰腺癌凋亡过程;p53在凋亡调节过程中起重要作用。     

Survivin与NF-κBp65在眼睑基底细胞癌中的表达及相关性

目的：检测Survivin与NF-κBp65蛋白在眼睑基底细胞癌中的表达,与临床病理特征的关系,及在眼睑基底细胞癌发生发展中的作用及其相关性,并初步探讨Survivin与NF-κBp65的相互作用机制.方法：用免疫组织化学法检测63例眼睑基底细胞癌及28例正常眼睑组织中Survivin与NF-κBp65的表达情况并结合患者的年龄、性别、部位及有无复发等临床病理因素进行综合分析.结果：Survivin定位于胞浆或胞膜,而NF-κBp65定位于胞核或胞浆.Survivin在眼睑基底细胞癌阳性表达率为82.5%（52/63）,在正常眼睑组织中为46.4%（13/28）,差异有非常显著意义（P〈0.01）.NF-κBp 65在眼睑基底细胞癌阳性表达率为81.0%（51/63）,在正常眼睑组织中为39.3%（11/28）,差异有非常显著意义（P〈0.01）.Survivin在眼睑基底细胞癌原发组阳性表达率为74.4%（29/39）,在复发组为95.8%（23/24）,差异有显著意义（P〈0.05）.NF-κBp65在眼睑基底细胞癌中原发组阳性表达率为71.8%（28/39）,在复发组为95.8%（23/24）,差异有显著意义（P〈0.05）.Survivin与NF-κBp65表达与患者性别、年龄、肿瘤部位等因素均无关（P〉0.05）.63例眼睑基底细胞癌中Survivin和NF-κBp65共同表达阳性为46例,Survivin阳性NF-κBp65阴性6例,Sur-vivin阴性NF-κBp65阳性5例,Survivin和NF-κBp65共同表达阴性6例,经统计学分析两者有相关性（P〈0.01）.结论：Survivin与NF-κBp65在眼睑基底细胞癌复发组的表达高于原发组,提示两者可能参与眼中基底细胞癌的复发过程,有可能成为基底细胞癌复发的预测因子;Survivin与NF-κBp65在眼睑基底细胞癌中的表达呈正相关,提示两者可能在基底细胞癌中的发生、发展中起协同作用.     

TNF-α通过NF-κB信号通路调控宣威肺癌恶性生物学行为

摘 要：［目的］ 探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）通过影响核因子-κB（NF-κB）信号通路对宣威肺癌恶性生物学行为的调控。［方法］ ELISA检测临床收集宣威肺癌、非宣威肺癌及正常人血清样本中TNF-α水平。RT-qPCR、Western blot检测人支气管上皮样细胞16HBE、人肺腺癌细胞A549及宣威肺癌细胞XWLC-05中TNF-α;CCK-8检测细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期;Transwell检测细胞迁移能力;Western blot检测NF-κB经典及非经典信号通路相关蛋白水平。［结果］ TNF-α在宣威肺癌患者血清及细胞中显著性高表达,差异均有统计学意义（P<0.05）。沉默TNF-α不仅阻滞细胞周期、抑制细胞增殖及迁移,并促进凋亡（P<0.05）;也抑制NF-κB经典信号通路。XWLC-05被外源性TNF-α促进的恶性生物学行为可被NF-κB信号通路抑制剂扭转（P<0.05）。［结论］ TNF-α通过激活NF-κB经典信号通路促进宣威肺癌细胞恶性生物学行为。     

CircXPO1/miR-5195-3p/RTKN轴调控结直肠癌SW620细胞增殖和凋亡的机制研究

摘 要：［目的］ 探讨环状RNA（circRNA）circXPO1通过miR-5195-3p/RTKN轴调控结直肠癌SW620细胞增殖和凋亡的机制。［方法］ 应用实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和Western blot测定circXPO1、miR-5195-3p、RTKN mRNA和RTKN蛋白的表达。SW620细胞分为si-NC组、si-circXPO1组、miR-NC组、miR-5195-3p组、si-circXPO1+anti-miR-5195-3p组、si-circXPO1+pcDNA-RTKN组,依次转染siRNA-NC（si-NC）、siRNA-circXPO1（si-circXPO1）、mimic NC（miR-NC）、miR-5195-3p mimic、si-circXPO1、miR-5195-3p inhibitor（anti-miR-5195-3p）、si-circXPO1和pcDNA-RTKN。运用细胞计数试剂盒8（CCK-8）、流式细胞术检测SW620细胞增殖、凋亡。生物信息学分析与双荧光素酶报告实验测定circXPO1与miR-5195-3p、miR-5195-3p与RTKN的靶向关系。［结果］ 与癌旁组织比较,结直肠癌组织中circXPO1（4.55±0.30 vs 4.55±0.30）、RTKN mRNA（3.27±0.29 vs 1.00±0.04）和RTKN蛋白（0.51±0.06 vs 0.21±0.03）表达水平升高,miR-5195-3p（0.34±0.03 vs 1.00±0.06）表达水平降低,差异有统计学意义（P<0.05）。Si-circXPO1组结直肠癌SW620细胞中circXPO1表达水平、细胞活性（0.37±0.03 vs 0.72±0.05）均比si-NC组低,凋亡率（25.91%±2.51% vs 6.73%±0.65%）比si-NC组高,差异有统计学意义（P<0.05）。CircXPO1靶向调控miR-5195-3p的表达,miR-5195-3p靶向调控RTKN的表达。MiR-5195-3p组结直肠癌SW620细胞中RTKN蛋白、细胞活性（0.43±0.04 vs 0.74±0.05）比miR-NC组减少,凋亡率（21.01%±2.11% vs 7.17%±0.54%）比miR-NC组增加,差异有统计学意义（P<0.05）;si-circXPO1+anti-miR-5195-3p组和si-circXPO1+pcDNA-RTKN组RTKN蛋白表达水平、细胞活性（0.34±0.03、 0.38±0.04、0.17±0.02）均高于si-circXPO1组,凋亡率（13.83%±1.21%、10.19%±0.82%、27.53%±2.65%）均低于si-circXPO1组,差异有统计学意义（P<0.05）。 ［结论］ CircXPO1通过miR-5195-3p/RTKN轴促进结直肠癌SW620细胞增殖,和抑制其凋亡。     

二甲双胍对肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭能力及乳酸生成的影响

摘 要：［目的］ 探讨二甲双胍对肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭能力、乳酸生成的影响。［方法］ 应用AnnexinV/PI和API等标记,流式细胞仪对肺癌A549细胞凋亡及周期特异性的检测,运用RT-PCR的方法检测Caspase-3、Caspase-9活化情况。MTT检测细胞增殖活力;Transwell体外迁移实验检测细胞体外迁移和侵袭能力;并检测乳酸生成情况。［结果］ 二甲双胍诱导的细胞凋亡主要在细胞周期的G1期发生。采用二甲双胍凋亡诱导,对照组未做处理,结果显示观察组的Caspase-3 mRNA（1.12±0.56）、Caspase-9 mRNA（1.10±0.29）的表达值显著高于对照组（0.82±0.31,0.72±0.26）。Transwell结果显示,第7d二甲双胍组体外迁移细胞数（2.69±0.56）明显增加;二甲双胍组细胞活力（52.39%±5.96%）下降;二甲双胍组乳酸生成（12.89±1.03）明显降低。［结论］ 二甲双胍诱导的细胞凋亡与肺癌A549细胞的细胞周期相关,存在G1期细胞周期阻滞的周期特异性,且此过程中发生了caspase活化,抑制细胞活性及迁移侵袭能力,降低乳酸的生成,促进肿瘤细胞凋亡。     

ROR1-AS1调控Notch1信号通路对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡影响

摘 要：［目的］ 研究酪氨酸蛋白激酶跨膜受体 1 反义 RNA 1（tyrosine protein kinase transmembrane receptor 1 antisense RNA 1，ROR1-AS1）调控Notch1信号通路对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)的影响。［方法］ 实时荧光定量PCR方法检测乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-361细胞和正常乳腺上皮MCF10A细胞中ROR1-AS1表达变化。乳腺癌MCF-7细胞分成对照、sh-NC（转染shRNA 对照）、sh-ROR1-AS1（转染ROR1-AS1 shRNA）、sh-ROR1-AS1+Jagged1组（转染ROR1-AS1 shRNA，Notch1通路激活剂Jagged1处理）。CCK-8实验检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡，Transwell小室检测细胞迁移和侵袭，Western blot方法检测细胞中活化的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶9（cleaved cysteinyl aspartate-specific protease-9，C-Caspase-9）、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）、活化的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3（cleaved cysteinyl aspartate-specific protease-3，C-Caspase-3）、神经型钙黏蛋白（N-cadherin）、Notch1、Hes1蛋白表达。 ［结果］ 乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-361细胞中ROR1-AS1水平明显高于正常乳腺上皮MCF10A细胞（P<0.05）。与对照组、sh-NC组比较，sh-ROR1-AS1组乳腺癌MCF-7细胞存活率降低(100.00%±9.82%，99.74%±12.05%，58.91%±6.33%)，细胞凋亡率升高(4.81%±0.26%，4.93%±0.34%，20.58%±2.11%），细胞迁移数目( 225.36±12.84个，224.89±19.56个，140.89±13.64个）和侵袭数目(180.47±16.32个，177.54±16.92个，110.44±10.87个)减少，细胞中C-Caspase-9、E-cadherin、C-Caspase-3蛋白表达水平增加，N-cadherin、Notch1、Hes1蛋白表达水平降低（P<0.05）。与sh-ROR1-AS1组比较，sh-ROR1-AS1+Jagged1组乳腺癌MCF-7细胞存活率升高(100.00%±11.58% vs 147.36%±12.05%），细胞凋亡率降低(19.54%±1.74% vs 8.36%±0.75%)，细胞迁移数目(139.58±12.78个 vs 175.26±16.94个)和侵袭数目（107.45±9.35个 vs 162.04±13.67个）均升高，C-Caspase-9、E-cadherin、C-Caspase-3蛋白水平降低，N-cadherin、Notch1、Hes1蛋白水平升高（P<0.05）。［结论］ 下调ROR1-AS1通过抑制Notch1信号减弱乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移、侵袭和EMT能力，激活细胞凋亡。