电离辐射对肺癌A549细胞miR-21体内外表达的影响及意义

目的 研究miR-21在肺癌组织及血清中的表达与肺癌预后及放疗因素的关系,进而探讨电离辐射对人肺癌A549细胞体内外表达miR-21的影响。方法 收集肺癌患者病理组织及血清样本,检测不同病理类型肺癌组织及血清中的miR-21的表达水平,同时检测是否接受放疗的非小细胞肺癌患者血清中miR-21的表达水平,并进行生存分析;以2、4 Gy X射线照射体外培养的A549细胞,并以A549细胞制备裸鼠肺转移癌模型,分别检测A549细胞与裸鼠血清及肺中miR-21的表达水平。结果 肺癌组织中miR-21高表达占60.0%;肺癌血清中miR-21高表达占50.5%,腺癌与鳞癌检出率差异有统计学意义（χ²=5.766,P<0.05）;87例非小细胞肺癌中放疗患者miR-21检出率66.7%显著高于非放疗患者39.6%（χ²=6.321,P<0.05）;Kaplan-Meier法生存分析显示,miR-21高表达患者预后明显低于低表达患者,差异有统计学意义（P<0.05）;Cox回归模型分析显示,miR-21高表达、区域淋巴结转移及放疗均为影响患者预后的独立危险因素。2、4 Gy X射线照射A549细胞后不同时间点miR-21表达显著升高（t=-7.552~-1.206,P<0.05）,miR-21在裸鼠血清及肺组织中的表达水平显著升高（t=-47.845~-2.356,P<0.05）。结论 电离辐射可上调A549细胞体内外miR-21的表达水平,可能与增强A549细胞侵袭转移能力相关。     

前列腺癌患者外周血单个核细胞中miR-21表达及临床意义

目的探讨前列腺癌患者外周血单个核细胞中miR-21表达及临床意义。方法将安徽省中医药大学第一附属医院自2012年1月至2016年1月收治的87例前列腺癌患者纳入前列腺癌组,将同期随机选取的103例前列腺增生患者纳入前列腺增生组、40例健康体检者纳入健康组。采用聚合酶链反应法检测3组研究对象外周血单个核细胞中miR-21的表达量,分析其与临床病理特征的关系;采用Log-rank检验miR-21对前列腺癌预后的预测价值,受试者工作特征曲线下面积评估miR-21对前列腺癌的诊断价值。结果前列腺增生组、前列腺癌组miR-21表达量均高于健康组,且前列腺癌组表达量高于前列腺增生组,差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-21表达量与Gleason评分、TNM分期、组织分化程度、淋巴结转移密切相关(P<0.05),与年龄、前列腺特异性抗原、肿瘤大小无明显相关性(P>0.05)。Gleason评分≥7分、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移的前列腺癌患者的外周血单个核细胞中miR-21表达量高于Gleason评分<7分、TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移的患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。受试者工作特征曲线下面积为0.853,95%可信区间0.777～0.930,最佳截断值为5.340,敏感度、特异性分别为0.850、0.810,准确性为0.870。前列腺癌患者miR-21中位相对表达量为7.79,以7.79为分界点,将患者分为miR-21≤7.79组(n=39)和miR-21>7.79组(n=48)。miR-21≤7.79组患者的2年无生化复发存活率高于miR-21>7.79组,差异有统计学意义(P<0.05);两组患者的1年无生化复发存活率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 miR-21表达下调可参与前列腺癌的发生和发展,早期检测可作为临床辅助诊断前列腺癌、评估病情严重程度及判断预后的重要分子标志物。     

前列腺癌患者癌组织中miR-21表达水平及与预后的关系分析

目的 分析前列腺癌患者癌组织中miRNA-21（miR-21）表达水平及与预后的关系。方法 回顾性分析2011年1月—2012年6月四川大学华西医院76例前列腺癌行手术切除患者资料,采用特异性TaqMan探针实时定量PCR法检测患者切除前列腺癌组织及癌旁前列腺组织miR-21表达水平,分析其与患者预后的关系。结果 miR-21在前列腺癌组织中相对表达量为（2.68±0.54）,明显高于癌旁组织的（1.14±0.42）（t=19.62,P<0.05）;前列腺癌患者miR-21高表达者57例（75%）,低表达者19例（25%）,2组TNM分期、Gleason评分、复发转移比较,差异均有统计学意义（P<0.05）,而年龄、前列腺体积、血清前列腺特异抗原水平比较,差异无统计学意义（P>0.05）;miR-21表达量低组平均生存期32.5个月,miR-21表达量高组平均生存期24.8个月,经Kaplan-Meier生存分析显示,2组差异有统计学意义（P=0.019）。结论 miR-21在前列腺癌患者癌组织中具有高表达现象,对前列腺癌的诊断及预后评价具有指导意义。     

膀胱癌患者血清miR-21、miR-119a表达量与肿瘤恶性增殖及侵袭的相关性分析

目的 探讨血清miR-21和miR-119a是否可以预测膀胱肿瘤并分析其与肿瘤恶性增殖及侵袭的关系。方法 膀胱癌患者及健康体检者各48例,分为膀胱癌组和正常对照组。荧光定量PCR法检测血清和组织中miR-21和miR-119a的表达水平。蛋白质印迹法检测PTEN,PI3K,AKT,CyclinD1,TGF-β,β-Catenin,N-cadherin和E-cadherin的表达。流式细胞术检测细胞凋亡率和周期分布。Perason相关分析血清miR-21和miR-119a表达与侵袭性基因的相关性。结果 与正常对照组比较,膀胱癌组血清miR-21和miR-119a相对表达量均升高（均P<0.05）;血清miR-21和miR-119a对膀胱癌的分型具有良好的鉴别能力,其AUC分别为0.995和0.996。与癌旁正常组织比较,膀胱癌组织miR-21和miR-119a相对表达量均升高（均P<0.05）,PTEN和E-cadheri相对表达量降低（均P<0.05）,PI3K、AKT、CyclinD1、TGF-β、β-catenin和N-cadherin相对表达量均升高（均P<0.05）。与膀胱癌正常组织比较,膀胱癌组织凋亡率较低,膀胱癌组织G1期的比例低于膀胱癌正常组织,S、G2期的比例则高于膀胱癌正常组织（均P<0.05）;Pearson相关分析显示,血清miR-21和miR-119a表达水平与PI3K、AKT、CyclinD1、TGF-β、β-catenin及N-cadherin表达呈正相关（均P<0.05）,与PTEN和E-cadherin表达呈负相关（均P<0.05）。结论 血清中miR-21和miR-119a的表达水平对膀胱癌的预测具有较高的价值,膀胱癌患者血清和癌组织中miR-21、miR-119a表达水平均升高,且血清miR-21、miR-119a与增殖和侵袭相关基因相关,提示血清miR-21、miR-119a可能是膀胱癌的潜在生物标志物。     

保乳手术治疗早期乳腺癌的疗效及miR-21和miR-155表达的研究

]目的观察保乳手术对早期乳腺癌的远期治疗效果,并检测组织中miR-21和miR-155的表达,探讨其临床意义。方法选择124例早期乳腺癌患者作为研究对象,采用保乳手术为主的综合治疗62例,列为观察组,采用乳腺改良根治手术治疗62例,列为对照组。观察两组治疗方式的远期效果。术后组织应用实时荧光定量PCR法（qRT-PCR）检测观察组中miR-21和miR-155的表达,分析其临床意义。结果两组患者3年和5年随访生存率无明显差别(P>0.05)。观察组随访生活质量评分明显高于对照组(P<0.05),差异有统计学意义。观察组中miR-21和miR-155在不同组织学分级、脉管癌栓及有无坏死、钙化的分组的表达中差异有统计学意义(P<0.05)。观察组5年内复发患者miR-21和miR-155的表达明显高于非复发患者(P<0.05)。生存分析显示miR-21和miR-155的表达与生存时间相关(P<0.05)。结论早期乳腺癌患者应用保乳手术进行治疗,临床效果明显,患者生活质量高。术后检测miR-21和miR-155的表达对判断预后可能具有一定价值。     

胃癌组织中miR-21、STAT3、FOXO3a表达及临床意义

目的探讨胃癌组织中微小RNA(miR-21)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、叉头框蛋白O3a(FOXO3a)的表达及临床意义。方法选取广东省人民医院珠海医院自2015年2月至2017年10月手术切除且经病理首次确诊为胃癌的组织标本87例为观察组,另选取体检经胃镜取组织活检病理证实的正常胃黏膜组织标本53例为对照组。采用实时RT-PCR技术检测两组胃黏膜中miR-21、STAT3、FOXO3a的表达情况。结果胃癌组miR-21、STAT3相对表达量显著高于正常对照组(P <0. 05),FOXO3a相对表达量显著低于正常对照组(P <0. 05)。miR-21、STAT3、FOXO3a表达与分化程度、浸润深度、淋巴转移具有相关性(P <0. 05),与年龄、性别、Laurén分型无相关性(P> 0. 05)。Pearson分析结果显示,胃癌组织miR-21表达水平与STAT3表达水平呈正相关(r=0. 591,P <0. 05),与FOXO3a表达水平呈负相关(r=-0. 705,P <0. 05); STAT3表达水平与FOXO3a表达水平呈负相关(r=-0. 618,P <0. 05)。结论 miR-21、STAT3在胃癌组织中表达异常增高、FOXO3a表达下调可作为胃癌患者诊断的潜在生物学标志物,判断胃癌的疾病进程以及恶性程度。     

信号蛋白3A对成肌细胞功能的影响及其转录调控机制

目的 探讨信号蛋白3A（Sema3A）对成肌细胞功能的影响及其转录调控机制。方法 以1.0、0.1、0.01 μg/ml重组Sema3A蛋白作用成肌细胞,并设置对照组,采用动态活细胞成像及划痕实验检测细胞的增殖与迁移能力,RT-qPCR检测成肌分化因子的表达。对1.0 μg/ml重组Sema3A蛋白干预的成肌细胞及对照组细胞进行转录组测序,筛选差异表达基因并进行GO富集分析,对部分差异表达基因通过RT-qPCR进行转录水平验证。结果 IncuCyte细胞成像计数显示,Sema3A可促进成肌细胞增殖,其中1.0 μg/ml Sema3A组细胞计数较对照组升高17.36%（_P<0.001）。划痕实验结果显示,Sema3A可使成肌细胞迁移能力明显增强,其中1.0 μg/mlSema3A组细胞划痕愈合率较对照组升高69.66%（_P<0.001）。RT-qRCR检测结果显示,Sema3A可上调部分成肌分化基因的表达,其中1.0 μg/ml Sema3A可使_Myf5、_MyoG基因表达分别升高37.4...     

miR-633通过调节蛋白激酶B影响缺氧诱导H9C2细胞生物学功能研究

目的探讨miR-633对缺氧诱导的H9C2细胞生物学功能调节作用。方法缺氧诱导培养H9C2细胞,利用实时定量荧光PCR检测缺氧后细胞中miR-633表达情况。通过MTT实验和Transwell实验检测缺氧对细胞增殖和迁移的调节作用。在缺氧H9C2细胞中下调miR-633的表达,通过MTT实验和Transwell实验检测miR-633对缺氧后细胞增殖和迁移的调节作用。miRDB软件预测miR-633可能打靶的蛋白,荧光素酶报告基因实验分析miR-633对蛋白激酶B(AKT)的靶向调节作用。通过Western blot检测miR-633对缺氧后H9C2细胞中AKT、细胞周期素D1(Cyclin D1)、B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)与基质金属蛋白酶2(MMP2)的影响。结果缺氧诱导后H9C2细胞中miR-633表达上调,缺氧诱导抑制H9C2细胞的增殖和迁移能力。MTT和Transwell实验证明,miR-633受到抑制后能够显著促进H9C2细胞的增殖和迁移。miR-633与AKT的3′UTR区域具有结合位点,miR-633可以抑制AKT的生物学活性,下调miR-633能够促进AKT、Cyclin D1、bcl-2与MMP2蛋白的表达。结论 miR-633可以通过调节AKT的活性促进缺氧诱导的H9C2细胞的增殖与迁移。     

益气养阴活血方对2型糖尿病大鼠胰腺miR-375表达水平和胰岛功能的影响

 目的 探讨益气养阴活血方对2型糖尿病大鼠胰腺组织中miR-375表达水平的影响,并分析其与胰岛β细胞功能的相关性。方法 采用小剂量链脲佐菌素(STZ)加高脂饮食诱导2型糖尿病大鼠模型。设空白组、模型组、益气养阴活血方(自拟) 高、中、低剂量治疗组,于治疗8周后处死大鼠。分别测定大鼠体质量、空腹血糖(FBG)、餐后2 h血糖(2hBG)、胰岛素敏感指数(ISI)并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),胰岛素分泌指数(HOMA-β)光镜下观察胰岛形态学变化,通过实时荧光定量PCR技术检测胰腺组织中miR-375的表达水平。结果 经益气养阴活血方治疗后,大鼠的体质量、FBG、2hBG均不同程度降低(P<0.05);HOMA-IR均有所降低,ISI HOMA-β均有所升高(P<0.05);胰岛细胞形态有不同程度改善;胰腺组织中的 miR-375 表达量显著降低,模型组(2.29±0.91),益气养阴活血方低剂量组(0.33±0.21),中剂量组(0.43±0.32),高剂量组(0.48±0.19),治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 益气养阴活血方可改善胰岛β细胞功能。其改善的原因可能与胰腺中miR-375表达下调有关。     

富H2水对电离辐射所致认知功能损伤的保护作用

目的 探讨富H₂水对电离辐射所致大鼠认知功能损伤的保护作用。方法 将20只SD大鼠利用随机数表法分为对照组（C）、富H₂水组（HRW）、单纯照射组（IR）和富H₂水干预组（HRW+IR）4个组,每组5只。通过Morris水迷宫对各组大鼠空间记忆能力进行检测;对超氧化物歧化酶（SOD）、还原型谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）、8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）等氧化应激指标的变化进行检测;通过实时荧光定量PCR反应对凋亡相关基因表达情况进行研究。结果 大鼠逃避潜伏期4组间差异有统计学意义（F=6.003,P<0.05）,4组间的平台象限游泳距离差异具有统计学意义（F=3.850,P<0.05）。其中,与IR组相比,HRW+IR组第3、4和5天的逃避潜伏期明显缩短（P<0.05）,原平台象限游泳距离显著延长（P<0.05）。4组间的GSH、8-OHdG、MDA差异均具有统计学意义（F=6.450、5.033、4.113,P<0.05）,与IR组相比,脑组织中GSH浓度显著升高（P<0.05）,而MDA和8-OHdG浓度显著降低（P<0.05）。PCR结果显示,与IR组相比,HRW+IR组caspase-3、caspase-9基因表达水平均显著下降（t=2.956、3.087,P<0.05）,bcl-2基因表达水平显著升高（t=-3.640,P<0.05）,bax基因表达水平显著降低（t=5.246,P<0.05）。结论 富H₂水可能通过中和氧羟自由基,减少电离辐射的氧化损伤作用,从而影响细胞凋亡过程进而对大脑产生保护作用。     

A protein-mRNA feedback exists in miR-21-associated E-selectin expression

Abstract

Purpose: To study whether miR-21, an oncogene associated with lung tumorigenesis, affects immune response.

Material and methods: Cancer immune-related 786 mRNA expression was compared in lung tissue from wild-type and miR-21 knock-in mice using NanoString technology. The significantly changed genes were verified using real-time PCR. E-Selectin (Sele) was subsequently identified for further examination using immunohistochemistry (IHC) and Western blot in the same lung tissue. The mouse Sele 3’untranslated region (3’-UTR) was searched to identify a miR-21 matching sequence. The Sele level in miR-21 mimic transfected mouse lung bronchial epithelial (LBE) cells was examined.

Results: We unexpectedly found that the Sele mRNA level significantly increased but the protein level significantly decreased in the lung tissue of miR-21 knock-in mice compared to the mRNA/protein levels in the lung tissue of wild-type mice. The mouse Sele 3'-UTR contains the key sequence that can be targeted by miR-21. The Sele levels decreased in mouse LBE cells after miR-21 mimic transfection.

Conclusion: Sele is a potential miR-21 target. The opposing Sele levels at mRNA and protein suggest a feedback-regulation from protein to mRNA. The feedback-regulation in miR-21-suppressed gene expression indicates that we should carefully evaluate any data from mRNA array since they may not reflect real protein expression status.     

miR-9对神经纤毛蛋白-1的靶向调控及其在辐射效应中的作用

目的：构建has-miR-9表达质粒和NRP1-3’UTR荧光素酶报告质粒,探讨miR-9对 NRP1的靶向调控作用及其在A549 细胞中的辐射效应。方法：利用生物信息学方法预测has-miR-9与NRP1-3’UTR的结合位点;将miR-9序列插入载体pcDNA-DEST47中构建真核表达质粒,同时构建NRP1-3’UTR的野生型和突变型荧光素酶报告质粒,并与pcDNA-DEST-miR-9质粒共转染至A549细胞,分析miR-9对其调控作用;miR-29b作为阴性对照,观察miR-9对NRP1的靶向作用。采用Western blot方法,验证miR-9对NRP1蛋白表达的抑制作用及照射后A549细胞NRP1蛋白表达变化;采用实时定量PCR方法检测10 Gy电离辐射照射后A549细胞miR-9表达量。结果：荧光素酶活性实验结果显示,miR-9可以显著下调野生型NRP1-3’UTR质粒的荧光素酶活性（t=3.906,P<0.05）,而不影响突变型质粒的荧光素酶活性,同时证实miR-9以外的miRNA（miR-29b）不能抑制野生型NRP1-3’UTR质粒的荧光素酶活性。转染miR-9 mimic后,在A549细胞中,靶基因NRP1蛋白的表达受抑制。10 Gy照射后,A549细胞中miR-9表达量下调（t=37.319,P<0.05）,而NRP1蛋白表达升高。结论：在A549辐射效应中miR-9通过靶向结合NRP1基因3’UTR,特异性调控NRP1蛋白表达。     

miR-21在UVB照射的人角质形成细胞和人表皮鳞癌细胞中的差异表达

目的 方法 研究miR-21在紫外线B(UVB)照射的人角质形成细胞HaCaT和人表皮鳞癌细胞A431中的差异表达。方法 50 J/m² UVB照射HaCaT细胞和A431细胞后,通过实时荧光定量RT-PCR检验miR-21的表达水平;利用在线数据库PicTar等预测靶基因并用Gostat软件对靶基因基因进行功能分类。结果 miR-21在表皮鳞状细胞癌中的表达是正常角质形成细胞的4倍多;miR-21在经UVB照射后HaCaT细胞中,在2～4 h内,其表达水平是升高的,在随后的8 h,其表达水平与对照相比降低了2倍,到12 h后表达水平就不再变化;在照射后的A431细胞中,miR-21的表达水平没有明显改变。在对其靶基因预测后用Gostat进行功能分类发现,PIK3R1、BCL2、E2F3等基因参与细胞的分化及细胞的周期进程。结论 miR-21可能参与表皮鳞状细胞癌的致病机理,并可能在UVB诱导的损伤机制中发挥作用。     

辐射对Jurkat细胞P21蛋白及ICR小鼠胸腺细胞p21基因表达的影响

目的 探讨电离辐射对Jurkat细胞P21蛋白和ICR小鼠胸腺细胞p21基因表达的影响.方法 采用流式细胞术(FCM),检测0、0.5、1.0、2.0、4.0及6.0 Gy X射线照射后Jurkat细胞中P21蛋白表达的变化.采用实时定量PCR技术,分别检测0、0.5、1.0、2.0、4.0及6.0 Gy X射线照射后4和24 hd'鼠胸腺及脾细胞中p21基因表达的变化.结果 不同剂量X射线照射后12和24 h,Jurkat细胞中P21蛋白表达在0.5～4.0 Gy范围内均随剂量的增大而升高(t=-24.23～-3.96,P<0.05),6 Gy时均出现表达下降(t=-11.19、-14.50,P<0.05);与假照射组相比,在0～6.0 Gy照射后4和24 h,小鼠胸腺及脾细胞中p21基因的相对表达量均随剂量增大逐渐增加(t=-29.96～8.80,P<0.05);并于6.0 Gy时达最高(t=-11.84～-3.42,P<0.05),仅胸腺细胞1 Gy照射后4 h除外(t=-3.42,P>0.05).结论 x射线能诱导P21蛋白及基因表达增加,并在一定剂量范围内存在良好的剂量-效应关系.

Abstract：

Objective To investigate the effects of ionizing radiation on the expression of P21 protein in Jurkat cell line and p21 gene in thymocytes and splenocytes of mice.Methods Flow cytometry (FCM)was used to analyze the expression of P21 protein in Jurkat cells at 12 and 24 h after irradiation to 0,0.5,1.0,2.0,4.0,and 6.0 Gy.Real-time PCR was used to detect the expression of p21 gene in thymocytes and splenocytes of mice at4 and 24 h after irradiation to 0,0.5,1.0,2.0,4.0,and 6.0 Gy.Multi-staining was used to analyze the micronucleus rates of Rct in bone marrow.Results The expressions of P21 protein were increased in a dose-dependent manner during 0.5-4.0 Gy(t=-24.23--3.96,P<0.05),but decreased at 6.0 Gy at 12 and 24 h post-irradiation(t=-11.19,-14.50,P<0.05).The expressions of p2 1 gene in both thymocytes and splenocytes of mice were increased in dose-dependent manner in the range of 0-6.0 Gy(including 6.0 Gy)(t=-29.96-8.80,P<0.05),and reached to the peak at 6.0 Gy at 4 and 24 h post-irradiation(t=-11.84--3.42,P<0.05),except thymocytes at 4 h and 1.0 Gy post-irradiation(t=-3.42,P>0.05).Conclusions The expressions of P21 protein and p21 gene could be increased by X-ray irradiation.which shows good dosedependent manners in certain range of dose.     

MiR-92a及其靶抑癌基因BCL11b在辐射诱导小鼠胸腺淋巴瘤中的作用

目的 采用电离辐射诱导的小鼠胸腺淋巴瘤动物模型,检测抑癌基因BCL11b和miR-92a的表达变化,探讨miR-92a对BCL11b基因的调控作用.方法 BALB/c小鼠采用γ射线全身照射,单次照射剂量和剂量率分别为1.75 Gy和0.382 Gy/min,每周1次,连续照射4周,计算电离辐射诱导小鼠胸腺淋巴瘤发生率.采用实时定量PCR法检测miR-92a表达变化情况,Westernblot方法检测BCL11b蛋白表达变化情况;将miR-92a序列插入载体pcDNA-DEST-47中构建真核表达质粒;构建BCL11b基因3'UTR-荧光素酶报告质粒,与pcDNA-DEST-miR-92a质粒共转染至EL-4细胞,分析miR-92a对BCL11b表达的调控作用.结果 辐射诱导的BALB/c小鼠胸腺淋巴瘤的发生率为58.51％.胸腺淋巴瘤细胞中BCL11b表达下调,而miR-92a表达上调,两者之间存在显著的负相关(r=-0.827,P＜0.05).psiCHECK 2-BCL11b和pcDNA-DEST-miR-92a两种质粒共转染组的荧光素酶表达明显低于单独转染的空载体和靶基因BCL11b组(t=3.42,P＜0.05).结论 电离辐射诱导的小鼠胸腺淋巴瘤中miR-92a与BCL11b表达的负相关,提示miR-92a可能参与了辐射诱发肿瘤中BCL11b蛋白表达的调控作用.     

辐射诱导人细胞系CEM、外周血单个核细胞DNA修复基因hHR21~(sp)的表达研究

目的　研究辐射对人T淋巴细胞白血病细胞系 (CEM)、外周血单个核细胞的hHR2 1sp基因转录表达水平的影响及意义。方法　分别对人T淋巴细胞白血病细胞系CEM和正常人外周血单核细胞在UV或γ辐射后不同时间提取细胞总RNA ,通过RT PCR与hHR2 1sp 基因特异引物杂交 ,以 β actin为内参照放射影像密度扫描检测人T淋巴细胞白血病细胞系CEM、单核细胞DNA修复基因表达。结果　在UV 辐射、γ 辐射后早期 (3～ 6h) ,人T淋巴细胞白血病细胞系CEM和淋巴细胞hHR2 1sp基因的表达水平明显增加 ,照射后 6hhHR2 1sp基因的表达水平增加最多且UV辐射更明显 ,在晚期 (9h)降低。比较人细胞系CEM和淋巴细胞两者hHR2 1sp基因的表达水平 ,γ辐射 (3Gy)后淋巴细胞对hHR2 1sp基因表达高于人细胞系CEM ,且表达增加时间较长 ,达 9h ;而人细胞系CEM受到γ辐射后早期表达增加 ,在 6～ 9h后表达降低。结论　人T淋巴细胞白血病细胞系 (CEM)和人淋巴细胞的DNA修复基因hHR2 1sp基因在一定剂量辐射 (UV、γ辐射 )范围内其表达水平随辐射剂量增加而诱导表达水平增高 ,且对UV辐射更敏感 ;提示hHR2 1sp基因在人细胞系CEM细胞和人单核细胞在照射损伤后表达增加 ,可能是促进单核细胞损伤修复的原因之一。     

电离辐射对小鼠EL-4淋巴瘤细胞P21蛋白表达的影响

目的阐明电离辐射对小鼠EL-4淋巴瘤细胞P21蛋白表达的影响。方法采用免疫细胞化学方法和流式细胞术检测X射线照射对P21蛋白表达的时程和量效变化的影响。结果时程实验结果显示，离体培养的EL-4细胞经4．0Gy X射线照射后，P21蛋白表达在2．72h（免疫细胞化学方法检测）和8—72h（流式细胞术检测）明显增高（分别为P〈0．01、P〈0．001）。量效实验结果显示，X射线照射后24h，P21蛋白表达在0．5—6．0Gy（免疫细胞化学方法检测）和1．0～4．0Gy（流式细胞术检测）明显增高（分别为P〈0．05、P〈0．01、P〈0．001）。结论X射线能诱导P21蛋白表达增高，在一定范围内存在时间和剂量依赖关系。     

Differential response of normal and transformed mammary epithelial cells to combined treatment of anti-miR-21 and radiation

Purpose: MicroRNA miR-21 has emerged as a therapeutic target in the treatment of breast cancer. This study was designed to compare the responses of breast cancer cells and non-transformed breast epithelial cells to a combined regimen of miR-21 inhibition and radiation.

Materials and methods: The MDA-MB-361 (breast cancer) and MCF-10A (non-transformed mammary epithelial) cell lines were used for the comparison in this in vitro study. The stable knockdown of miR-21 was performed by using lentiviral approach. The response of the cells was monitored 4, 24 and 48?h after the irradiation with 0.25 and 2.5?Gy, using sham-irradiated cells as controls. The response of the cells was established by performing various functional assays – cell viability and cell attachment, clonogenic survival, cell cycle analysis and 3D microtissue formation.

Results: The knockdown of miR-21 induced significant increase in apoptosis and growth delay in MDA-MB-361 cancer cells compared to non-transformed MCF-10A cells. After combined radiation and anti-miR-21 treatment, MDA-MB-361 cells show reduced cell growth and viability what is presented in their inability to form colonies. MCF-10A cells were not as sensitive to the combined treatment and that has also been confirmed with colony forming assay.

Conclusions: Cellular response to a combined treatment of anti-miR-21 and radiation is different between cancer and non-cancer cells which highly support the idea of linking miR-21 inhibitor and radiation treatment in the future therapeutic approaches for breast cancer.