基于MDF的岩黄连水提物在大鼠血浆、尿液、胆汁及粪便中的代谢产物研究

采用UPLC-Q-TOF/MS研究岩黄连水提物在大鼠体内的主要代谢产物,利用质量亏损过滤(MDF)进行分析,鉴定大鼠灌胃岩黄连水提物后血浆、尿液、胆汁、粪便中的代谢产物.岩黄连水提物中脱氢卡维丁、巴马汀及小檗碱在大鼠不同代谢途径中推测出原型、羟基化、去甲基化、还原、去甲基化葡萄糖醛酸化与硫酸结合等多个代谢产物.     

HPLC-MS/MS法分离鉴定罗通定在大鼠胆汁中的代谢产物（Ⅱ）

目的：采用HPLC-MS/MS法分析鉴定罗通定在大鼠胆汁中的主要代谢产物。方法：罗通定灌胃给予大鼠（120mg·kg^-1）,收集胆汁样品。色谱分离采用ZorbaxSBC18（150mm×0.5mmI.D.,5μm）;流动相：甲醇-水-三乙胺（30：70：0.07,V/V/V）;质谱分析采用（＋）ESI模式。结果：在大鼠胆汁中观察到4个罗通定代谢产物,初步推测其中2个为罗通定去甲基化后再与硫酸结合的产物。结论：去甲基化后形成硫酸结合物为罗通定在大鼠胆汁中一主要排泄形式。     

基于GC-TOF-MS代谢组学研究黄连解毒汤对大鼠粪便代谢的影响＊

目的 通过GC-TOF-MS代谢组学探讨不同剂量的黄连解毒汤对SD大鼠粪便代谢组的影响，进而为黄连解毒汤的作用机制提供参考。方法 SD大鼠45只适应性喂养7天后，随机分为5组：黄连解毒汤高剂量组、中剂量组、低剂量组、抗生素组和空白组，每组9只。中药干预组不同剂量黄连解毒汤灌胃，1 mL/次，2次/天，连续给药21天；抗生素组，1 mL/次，2次/天；空白组生理盐水灌胃，1 mL/次，2次/天，连续给药21天；末次给药后，禁食禁水12 h，处死并收集大鼠粪便。采用气相色谱-飞行时间质谱（Gas Chromatography Tandem Time-of Flight Mass Spectrometry，GC-TOF-MS）检测各组大鼠粪便，运用多元分析OPLS以及单变量统计学方法筛选差异代谢物，通过MetaboAnalyst平台进行代谢通路分析。结果 对于粪便中的内源性代谢物小分子，高剂量组的黄连解毒汤影响的主要有：核糖、硫酸、棕榈酸、花生酸、茜素等；中剂量组的黄连解毒汤影响的主要有：乌头酸、胆固醇、乳酸、棕榈油酸、茜素等；低剂量组的黄连解毒汤影响的主要有：硫酸、棉子糖；氨苄西林钠影响的主要有：蛋氨酸1、麦角固醇、正亮氨酸1、棕榈酸、硫酸、乳酸等；不同剂量的黄连解毒汤和氨苄西林钠都能够影响到半乳糖代谢及硫代谢通路。结论 黄连解毒汤可改善糖尿病和心脑血管疾病相关的代谢物小分子，不同剂量的黄连解毒汤对粪便代谢的影响不同，其中中剂量的影响最为广泛。     

MS-DAIL联合MS-FINDER鉴定中药黄酮类化合物＊

目的 分析判断MS-DAIL与MS-FINDER联合运用以鉴定中药黄酮类化合物的可行性。方法 采用UPLC-MS/MS技术检测含有20种黄酮类化合物的混合对照品溶液，利用MS-DAIL联合MS-FINDER对特征峰进行提取、数据库比对与物质鉴定。结果 MS-DAIL与MS-FINDER联合运用可以快速获取黄酮类化合物MS/MS特征谱，与数据库中图谱进行匹配，根据得分共准确鉴定出黄酮类化合物15种，鉴定错误5种，准确率为75%，其中1种无谱图信息，有4种存在MS/MS谱相似的异构体。结论 MS-DAIL与MS-FINDER的联合使用以鉴别中药黄酮类成分高效简便，是初步鉴定黄酮类化合物的可选方式。     

UPLC-MS/MS法测定犬血浆中的雷公藤次碱及体内药动学研究＊

目的 建立超高效液相-串联质谱（UPLC-MS/MS）法测定犬血浆中的雷公藤次碱的浓度，并用于雷公藤次碱的体内药代动力学研究。方法 色谱柱为ACE Super C18柱（2.1 × 100 mm id，5 μm，菲罗门），以2 mM醋酸铵（0.2%甲酸）-乙腈为流动相，梯度洗脱，流速为350 μL·mL^-1，柱温30℃，进样量2 μL。以雷公藤春碱为内标，血浆样本前处理后，采用ESI-Positive-MRM模式，进样检测。将Beagle犬分为高中低剂量组（400、200、100 μg·kg^-1），给药后测定不同时间点犬血浆中雷公藤次碱的浓度，采用DAS3.0软件对雷公藤次碱药时曲线进行拟合，并计算药代动力学参数。结果 建立的UHPLC-MS/MS法在5.0-250 ng·mL^-1范围内雷公藤次碱色谱响应与浓度相关性良好，定量限为4.94 ng·mL^-1，雷公藤次碱及内标的保留时间分别为2.99、2.73 min，该方法无明显的离子抑制或增强效应，批内批间精密度及准确度RSD均小于15%，提取回收率在82.86%-112.76%之间，稳定性各项数据显示中、高浓度RSD均小于15%，低浓度RSD均小于20%，均符合要求。雷公藤次碱吸收较快，在Beagle犬体内的系统暴露随剂量的增大而增加，有呈比例增加的趋势；其消除与性别有关，与剂量无关。结论 该检测方法灵敏度高、专属性强、准确度良好，适用于犬血浆中雷公藤次碱的浓度测定及其药动学研究。     

乔松素在大鼠体内外代谢产物的UPLC-MS/MS鉴定

目的:以超高效液相质谱联用法鉴定了乔松素在大鼠体内外的代谢产物。方法:分析乔松素经大鼠肝微粒体体外代谢和大鼠口服给药后的胆汁、尿液、粪便中的代谢产物,以超高效液相质谱联用法分离鉴定代谢产物。结果:在大鼠肝微粒体和胆汁、尿液、粪便中共检测到5个代谢产物,根据裂解规律及与标准品对照,鉴定了其中3个代谢产物的结构,推测了另外2个代谢产物的结构。结论:通过大鼠体内外代谢产物的比较,发现乔松素的代谢途径主要是羟基化和葡萄糖醛酸化。其原型和柚皮素是在体内的主要作用形式,在胃肠道及肝脏中的葡萄糖醛酸化是其代谢失活的主要途径。     

黄连碱在人肝微粒体中的代谢

目的研究黄连碱在人肝微粒体中的代谢情况。方法通过酶促动力学实验计算酶促动力学参数,通过检测CYP450亚酶专属性抑制剂对黄连碱代谢的影响,推测参与黄连碱代谢的CYP酶亚型,并推断代谢产物的结构。结果黄连碱在人肝微粒体中代谢的米氏常数Km为6.802 7μmol/L,最大代谢速率Vmax为0.054 76 nmo L/(mg protein·min),肝清除率Clint为0.008 m L/(mg·min),奎宁、甲氧沙林、酮康唑均在一定程度上抑制了黄连碱的代谢,黄连碱在人肝微粒体中的代谢产物为黄连碱脱去一个亚甲基结构。结论 CYP2D6、CYP2A6、CYP3A4可能参与黄连碱的代谢,代谢产物为脱亚甲基黄连碱。     

大鼠灌胃灯盏花素后血浆、胆汁、尿液以及粪便中代谢产物的鉴定

目的 对大鼠灌胃灯盏花素后收集的血浆、胆汁、尿液以及粪便中存在的灯盏乙素的代谢产物进行鉴定.方法 通过使用HPLC结合光电二极管阵列检测器(DAD),采用梯度洗脱的方法 ,对比分析给药组大鼠和空白组大鼠的血浆、胆汁、尿液以及粪便样品,并且在相同的液相色谱条件下与对照品的保留时间和紫外吸收特征进行对照来鉴定主要代谢产物.结果 从大鼠ig 20、200 mg/kg灯盏花素的血浆中鉴定了代谢产物野黄芩素-6-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(scutellarein-6-O-β-D-glucuronide,M5);从大鼠ig 20、200 mg/kg灯盏花素的胆汁中鉴定了代谢产物野黄芩素-6,7-O-β-D-二葡萄糖醛酸苷(scutellarein-6,7-di-O-β-D-glucuronide,M1)、6-O-甲基-灯盏乙素(6-O-methylscutellarin,M3)、、野黄芩素-6-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(scutellarein-6-O-β-D-glucuronide,M5)和灯盏乙素(黄芩素苷,scutellarin,M7),从大鼠ig 20 mg/kg灯盏花素的尿液中鉴定了代谢产物野黄芩素-6,7-O-β-D-二葡萄糖醛酸苷(scutellarein-6,7-di-O-β-D-glucuronide,M1),从大鼠ig 200 mg/kg灯盏花素的尿液中鉴定了代谢产物野黄芩素-6,7-O-β-D-二葡萄糖醛酸苷(scutellarein-6,7-di-O-β-D-glucuronide,M1)、野黄芩素(scutellarein,M2)和灯盏乙素(scutellarin,M7);从大鼠ig 200 mg/kg灯盏花素的粪便中鉴定了代谢产物野黄芩素(scutellarein,M2).结论 灯盏乙素在大鼠体内发生了广泛的代谢,并且主要以其代谢产物的形式存在;灯盏乙素在大鼠体内产生的代谢产物主要通过尿液和胆汁排泄.     

应用UPLC-MS/MS观测6种中药对尿酸盐体外溶解度的影响＊

目的 建立水基质溶液中尿囊素含量的测定方法，观测6种治疗痛风常用中药对尿酸盐体外溶解度的影响。方法 采用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）法定量分析9组溶液中尿酸盐溶解后产生的尿囊素含量：实验组溶剂为6种治疗痛风常用中药的超声水提取溶液，对照组溶剂为超纯水、5%碳酸氢钠溶液和尿酸酶溶液。结果 尿囊素的色谱在1.40 min出峰，在0.1-100 ng·mL^-1范围内线性关系良好（r² = 0.9995），平均加标回收率为102.36%（n = 6），RSD为2.33%。尿囊素浓度与溶液pH值无线性相关；溶解时间24 h，土茯苓、黄柏和海金沙组尿囊素浓度与超纯水组均无统计学差异（P > 0.05）；溶解时间24 h，山慈菇、苍术和大黄组尿囊素浓度均高于超纯水组（P < 0.05）；溶解时间24 h，山慈菇组尿囊素浓度高于5%碳酸氢钠组（P < 0.05）；尿酸酶组的尿囊素浓度在1 h和24 h溶解时间内均为9组中最高（P < 0.05）。通过尿酸盐溶液中分解产生的尿囊素含量估算尿酸盐的溶解度（1 h，24 h），以1h超纯水组的溶解度为100%：超纯水组（100%，121%），山慈菇组（279%，463%），土茯苓组（69%，172%），海金沙组（21%，97%），苍术组（105%，400%），大黄组（146%，311%），黄柏组（65%，74%），尿酸酶组（8247%，12454%）和5%碳酸氢钠组（63%，285%）。结论 本方法可灵敏、准确地测定尿酸盐在水基质中药溶液中溶解后产生的尿囊素含量。山慈菇、苍术和大黄对尿酸盐的体外溶解度有一定促进作用，但未能达到临床溶解痛风石的要求。土茯苓、黄柏和海金沙对MSU的溶解无促进作用。     

HPLC-MS/MS分析黄连碱在大鼠体内外的代谢产物

目的:探讨黄连碱的体内外代谢产物及其代谢途径。方法:体内代谢采用单次灌胃大鼠黄连碱(剂量25 mg·kg~(-1)),收集给药后0～48 h的尿液和粪便,0～24 h的胆汁以及给药0. 25,1,2 h后的血浆和脑组织样品;体外代谢采用大鼠肝微粒体及肠道菌群孵育的方法;运用高分辨HPLC-MS/MS技术对生物样品中的药物原型及代谢物进行鉴定。选用ZORBAX SB-C_(18)色谱柱(4. 6 mm×150 mm,5μm),以乙腈-0. 1%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速1. 0 mL·min~(-1),柱温25℃。质谱使用电喷雾离子源(ESI),正、负离子检测模式,扫描范围m/z 50～1 200。对各色谱峰质谱图进行分析,根据准分子离子峰判断相对分子质量,进一步根据各色谱峰的主要碎片离子、保留时间等信息,与文献数据进行比较,推测化合物的结构。结果:在大鼠尿液、粪便、胆汁、血浆、脑组织、肝微粒体温孵和肠道菌群温孵样品中发现了黄连碱的17个代谢产物,Ⅰ相代谢产物11个,Ⅱ相代谢产物6个。这17个代谢产物是黄连碱在大鼠体内羟基化、去甲基化和脱氢作用、硫酸酯化、葡糖糖醛酸化后产生的。结论:黄连碱可在大鼠体内发生Ⅰ相和Ⅱ相代谢反应,代谢物主要存在于尿液中,主要代谢部位为肝脏;黄连碱胃肠道吸收较差,代谢少,大部分经粪便以原型排泄,为黄连碱的药效学和药理学研究提供了一定的物质基础。     

Identification of Icaritin Metabolites in Rats by LC-MS/MS

Objective Icaritin is the main aglycone and also active intestinal metabolite of prenylflavonoids from the Chinese materia medica Epimedii Herba. Modern pharmacological studies have demonstrated that icaritin has a wide range of biological activities. However, its metabolites and biotransformation pathways have not yet been comprehensively investigated. The present study aims to identify icaritin metabolites in rats by using a sensitive and effective LC-MS/MS method. Methods The plasma and urine samples of rats were collected before (blank) and after oral administration of icaritin, and subjected to liquid-liquid extraction with ethyl acetate. The full-scan LC-MS chromatograms of the plasma and urine samples were compared with those of blank samples to detect the possible metabolites, which were later identified by their product ion spectra. Results A total of 23 metabolites were identified, and conjugated icaritins produced by glucuronidation, glycosylation, and sulfation were its major metabolites. Minor demethylation, hydrogenation, and oxidation metabolites were also found. Conclusion Phase II metabolism is the main metabolic pathway of icaritin.     

HPLC/MS/MS法分离鉴定罗通定在大鼠胆汁中的代谢产物

目的:研究罗通定在大鼠胆汁中的主要代谢产物。方法:灌胃给药后,收集大鼠胆汁,液液萃取,采用HPLC/MS/MS法分析鉴定罗通定的代谢产物。色谱柱Lichrospher-C18(5μm,4.6mm×250mm),流动相:甲醇-水-三乙胺(37630.063,V/V/V),冰醋酸调pH至6.3,检测波长281nm。结果:在大鼠胆汁中发现2个罗通定代谢产物,初步推测其结构为罗通定单羟基化后再与葡萄糖醛酸结合的产物。结论:罗通定在大鼠胆汁中主要以羟基化后的葡萄糖醛酸结合物形式排泄。     

UPLC-Q-TOF-MS/MS鉴定马钱苷大鼠体内代谢产物

目的采用超高效液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱仪联用技术（UPLC-Q-TOF-MS/MS）分析鉴定大鼠灌胃马钱苷后其在尿液中的代谢产物,阐明马钱苷代谢途径。方法大鼠灌胃给予马钱苷,收集给药前后的尿样,经固相萃取进行预处理,采用超高液相色谱C18色谱柱,流动相为乙腈-1%甲酸水,梯度洗脱,采用动态背景扣除（DBS）触发信息关联采集（IDA）进行MS/MS数据采集。结果经MetabolitePilot代谢物分析软件处理后,根据MS/MS给出质谱碎片信息对代谢产物进行结构推测,共鉴定马钱苷代谢物3种,并归纳了马钱苷在大鼠体内的代谢过程。结论该方法简单可靠,灵敏度高,可用于体内微量成分的分析鉴定。     

基于超高效液相色谱-串联质谱法研究宽缨酮在大鼠体内的生物利用度及代谢产物

目的建立快速、灵敏的UHPLC-MS/MS方法用于宽缨酮的生物利用度研究,并初步鉴定其在大鼠体内的代谢产物。方法将SD大鼠分为静脉注射组和灌胃组,给予相应剂量宽缨酮。以槲皮苷为内标,采用超高效液相色谱-串联质谱法(UHPLC-MS/MS)法测定不同时间点血浆中宽缨酮的浓度,并采用DAS 3.0软件计算主要药动学参数。采用UHPLC-Triple-TOF/MS鉴定大鼠灌胃给药宽缨酮后血浆、尿液及粪便样品中的代谢产物,并使用Peakview软件分析其中的代谢产物。结果方法学验证表明,宽缨酮在血浆中的定量下限为1 ng·mL^-1,在1~150 ng·mL^-1范围内有良好线性关系;日内和日间的精密度及稳定性考察的RSD值均小于10%;提取回收率在89.81%~99.95%之间,基质效应为91.15%~105.29%,满足生物样品定量分析的要求;尾静脉注射及灌胃给药宽缨酮后主要药动学参数:药时曲线下面积(AUC0-24 h)分别为(331.95±40.35)、(93.69±17.83)μg·h·L^-1;消除半衰期(t1/2)分别为(15.76±7.24)、(13.06±11.08)h;达峰浓度(Cmax)分别为(691.99±197.46)、(31.00±10.29)μg·L^-1;生物利用度为2.8%。在大鼠体内发现了包括宽缨酮原型在内的12种代谢产物,代谢途径主要涉及水解、甲基化、磷酸化和牛磺酸结合等。结论宽缨酮经灌胃给药后在大鼠体内生物利用度低,体内半衰期较长,结合代谢产物研究推测可能其原型在体内经转化后主要通过尿液排泄。     

HPLC-MS/MS研究阿奇霉素片人体药动学

 目的建立HPLC-MS/MS检测体内阿奇霉素血药浓度,并用于研究阿奇霉素片人体药动学。方法应用建立的HPLC-MS/MS方法测定人血清中阿奇霉素的浓度,并通过PKs软件进行房室模型拟合,计算主要药动学参数。结果阿奇霉素的线性范围为3.33～833μg·L^-1,方法回收率为100%～115%,日内、日间RSD值均小于6%,人po阿奇霉素500 mg后的药-时曲线均符合二房室开放模型,其主要药动学参数t_1/2α为(2.93±3.38)h,t_1/2β为(36.24±8.34)h,t_1/2ka为(0.61±0.34)h,ρ_max为(415.9±114.4)μg·L^-1,t_max为(1.812±0.650)h,AUC_0-t为(6 937±1 626)μg·h·L^-1,CL/F为(0.076±0.018 2)L·h^-1,Vd/F为(3.976±1.413)L,t_lag为(0.349±0.173)h,k₁₀为(0.110±0.039)h^-1,k₂₁为(0.067±0.025)h^-1,k₁₂为(0.223±0.109)h^-1。结论该法简便、灵敏、特异,适用于阿奇霉素片人体药动学研究。     

小鼠组织中龙胆苦苷含量的液相色谱-串联质谱测定

目的 建立液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)测定小鼠肝、心、脾、肺、肾组织中龙胆苦苷浓度的方法,为其组织分布研究奠定基础.方法 样品处理采用固相萃取法,内标物扑热息痛,色谱柱: Kromasil C8柱(3.5μm,2.1 mm×150 mm),流动相为甲醇-1%甲酸溶液-乙腈(60∶30∶10),流速170 μl·min-1,用ESI离子化和正离子多离子反应监测方式检测.结果 该法测定龙胆苦苷在组织中线性范围为3～3 000 ng·ml-1,检测限3 ng·ml-1,色谱峰保留时间为2.40 min,各组织方法回收率均在89.2%～107.2%,批内、批间精密度RSD值小于12%,提取回收率大于78%.结论 该方法准确、方便、快速、灵敏度高,适用于大批量组织样品中龙胆苦苷含量测定.     

液质联用技术鉴定清血八味片化学成分研究

目的:采用高效液相色谱-三重四级杆质谱(HPLC-MS/MS)测定清血八味片中的化学成分。方法:在负离子条件下采用Halo C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,2.7μm),以0.1%甲酸-10 mmol/L甲酸铵水和乙腈为流动相进行梯度洗脱,质谱采用Scan模式和MRM模式,检测清血八味片中的化学成分。结果:共鉴定出紫草中成分7种、土木香中成分3种、人工牛黄中成分4种、栀子中成分7种、瞿麦中成分7种、甘草中成分12种。结论:该方法快速可靠,操作简便,可用于清血八味片的质量控制研究,为临床药物使用提供一定的依据。     

液质联用检查15种降压类药物及数据检索库的建立

 目的为打击中药制剂及保健食品中非法添加化学药物现象,建立准确、灵敏的HPLC-MS/MS方法甄别中药制剂及保健食品中可能添加的15种化学降压药物。方法采用Waters Sunfire C₁₈色谱柱,梯度洗脱:流动相A为20 mmol·L^-1醋酸铵溶液,流动相B为甲醇-乙腈(2∶1),检测波长为230 nm,流速为1 mL·min^-1(分流比为4∶1)。选择正负离子全扫描方式检测临床常用的15种降压药,利用质谱解析软件研究了上述化合物的质谱裂解规律。通过比较样品峰与对照品峰的一级质谱、二级质谱质荷比,确定样品中是否掺杂了化学药物。结果在上述色谱及质谱条件下,15种降压药物HPLC图谱分离度良好,质谱分辨率符合鉴别要求。HPLC-MS/MS方法测定上述化学物质的最小检出量为1～80 ng。结论该方法灵敏度、准确性、重现性均可满足定性检查的要求,简便,快捷。     

超高效液相色谱-串联四级杆质谱测定肝素中硝基呋喃代谢物残留

 目的 建立超高效液相色谱-串联四级杆质谱测定动物源性药物肝素中4种硝基呋喃代谢物残留的方法。方法 样品在酸性条件下水解,经2-硝基苯甲醛(2 - NBA) 37 ℃衍生化16 h,乙酸乙酯提取后,采用电喷雾电离,正离子扫描,多反应监测模式（MRM）检测,内标法定量测定。结果 硝基呋喃代谢物线性范围分别在0.1～10.0 μg·L^-1之间;r分别在0.994～0.996之间;检出浓度分别在0.08～0.226 μg·kg^-1之间;回收率分别在82.4%～109.7%之间。结论 该方法快速、准确、灵敏,可作为肝素中4种硝基呋喃代谢物的测定。